«сенсорно-моторная реакция. двигательная реакция боксера на появление внешнего раздражителя». Цепная реакция урана и цепная реакция сенсаций

5. «СЕНСОРНО-МОТОРНАЯ РЕАКЦИЯ. ДВИГАТЕЛЬНАЯ РЕАКЦИЯ БОКСЕРА НА ПОЯВЛЕНИЕ ВНЕШНЕГО РАЗДРАЖИТЕЛЯ» В скоростном исполнении удара важная роль отводится на то, как боксер реагирует на появление внешнего раздражителя (звук, сигнал,загорание лампочки на динамометре перед

Антиген, комплемент и вспомогательная, индикаторная или гемолитическая система - гемолитическая сыворотка и эритроциты барана.

Если в первой системе образуются специфический комплекс антиген + антитело, то комплемент адсорбируется (соединяется с этим комплексом) и гемолиза во второй системе не происходит.

Для реакции требуется:

1. Испытуемая сыворотка, которая получается из крови, взятой пункцией локтевой вены больного. После свёртывания крови сыворотка отсасывается в отдельную пробирку и инакти-вируется 30 минут при 56 °С на водяной бане.

2. Антиген - взвесь убитых гонококков.

3. Эритроциты барана получают из стерильно взятой де-фибринированной крови. Их отмывают, центрифугируя 3 раза с новыми порциями физиологического раствора. В реакции используют 3 %-ю взвесь эритроцитов.

4. Гемолитическая сыворотка готовится заранее путём иммунизации кроликов эритроцитами барана. Перед употреблением производится титрование сыворотки.

5. Комплемент - свежая сыворотка морской свинки. Из сердца морской свинки шприцем насасывается кровь, после свёртывания отделяется сыворотка. Перед опытом вытитровы-вается рабочая доза комплемента. Для этого берут основное разведение комплемента 1:10 и разливают его по пробиркам от 0.1 до 0,5, после чего объем в каждой пробирке доводят физиологическим раствором до 1,5 мл.

Одновременно заготавливают гемолитическую систему -разведенная в тройном титре, гемолитическая сыворотка + 3 % взвесь эритроцитов барана. Оба ингредиента в разных объемах и выдерживают в термостате 30 минут (сенсибилизация смеси), после чего смесь добавляют по 1 мл в пробирки и помещают в термостат на 30 минут. Контролем служат 2 пробирки:

1. 1 мл гемолитической системы + 1,5 мл физиологического раствора;

2. 0,5 мл комплемента 1:10 + 0,5 мл взвеси эритроцитов + 1,5 мл физиологического раствора.

Титром комплемента называется его минимальное количество, при котором ещё происходит гемолиз. Для постановки реакции берут рабочую дозу комплемента, увеличенную против титра на 20-25 %, т.е., обычно то количество комплемента, которое имеется в предпоследней пробирке с гемолизом. Увеличение дозы комплемента необходимо потому, что в реакции активность комплемента может оказаться несколько подавленной другими ингредиентами реакции (антиген, сыворотка).
43)РСК Вассермана

Ставится для диагностики сифилиса с целью обнаружения антител, а также для определения эффективности специфической терапии. Она основана на принципе реакции связывания комплемента Борде-Жангу. Существенным отличием реакции Вассермана является неспецифичность антигена: в качестве антигена употребляют липоидные экстракты из нормальных органов животных

Для постановки реакции Вассермана необходимо иметь сыворотку больного, диагностикумыперекрестнореагирующие антигены № 1, № 2, комплемент, гемолитическую сыворотку, эритроциты барана, физиологический раствор.

Диагностикум № 1 - специфический, трепонемный.

Диагностикум № 2 - неспецифический, кардиолипиновый антиген, которые представляют собой высокоочищенные экстракты бычьего сердца, имеющие постоянный химический состав липоидов. Липоиды, по химическому составу близки к липоидам бледной трепонемы, поэтому, хотя и не являются специфическими, но фиксируют антитела против спирохеты.

Указанные антигены выпускаются централизованно и в реакцию употребляются разведёнными согласно титру, указанному на этикетке.

Одновременно с основным опытом ставят 2 контроля: с заведомо отрицательной и с заведомо положительной сыворотками.

Постановка основного опыта

Вначале в 4 пробирки разливается инактивированная и разведённая 1:5 испытуемая сыворотка. Затем в 2 пробирки разливаются антигены (№ 1, № 2), в 3-ю пробирку - физиологический раствор. После этого во все пробирки добавляется рабочая доза комплемента. После смешивания ингредиентов штатив с пробирками помещается в термостат при 37 °С на 30 минут. После выдерживания в термостате во все пробирки добавляется гемолитическая система. Пробирки снова помещают в термостат на 2 часа, в затем оставляют при комнатной температуре. На следующий день отмечают результат Степень интенсивности реакции оценивается, четыре плюса (++++), три (+++) два (++) и один (+) - в зависимости от интенсивности окраски жидкости и величины осадка эритроцитов на дне. Полный гемолиз обозначается (-) минусом. При резком расхождении результатов с различными антигенами опыт повторяют с новой порцией крови.
44)РИТ-р. Иммобилизации бледной трепонемы.

Эту реакцию применяют как в диагностических целях, так и для распознавания ложноположительных результатов стандартных серологических реакций, особенно при скрытом сифилисе.

РИБТ заключается в том, что в присутствии иммобилизинов сыворотки больных сифилиса и активного комплемента бледные трепонемы теряют подвижность.

РИБТ ставят в стерильных боксах. В реакции участвуют испытуемая сыворотка, комплемент и антиген.

В РИБТ антигеном является взвесь бледных трепонем из яичка кролика в ранние сроки (7-8 суток после заражения) сифилитического орхита. Специальная среда взвеси сохраняет жизнеспособность бледных трепонем не менее суток. В РИБТ применяют комплемент морских свинок. РИБТ протекает в анаэробных условиях. Пробирки с ингредиентами помещают в микроанаэростат, из которого отсасывается атмосферный воздух и нагнетается газовая смесь (95 частей азота и 5 частей углекислого газа). Микроанаэростат с пробирками помещают в термостат (35°С) на 18-20 часов.

Параллельно с постановкой реакции производят контрольные исследования с положительной и отрицательной сывороткой крови, взятыми из предыдущего опыта.

Оценку результатов РИБТ производят после извлечения пробирок из термостата (т.е. через 18-20 часов опыта). Пастеровской пипеткой на предметное стекло наносят каплю содержимого пробирки, которую накрывают покровным стеклом и исследуют в темном поле микроскопа (объектив 40, окуляр 10). При иммобилизации до 20% бледных трепонем реакцию считают отрицательной, от 21 до 30% - сомнительной, от 31 до 50% слабоположительной, от 51 до 100% - положительной. Процент иммобилизации бледных трепонем определяют по специальной таблице.

45) Опсоно-фагоцитарная реакция

Механизм: усиление фагоцитоза микробных клеток под влиянием содружественного воздействия антител, иммунной сыворотки и комплемента.

Компоненты реакции:

1) антиген - суточная микробная культура;

3) комплемент - свежая сыворотка морской свинки;

4) фагоциты - лейкоцитарная взвесь.

Опсонины - это антитела, которые содержатся в нормальных и иммунных сыворотках и подготавливают микробы к фагоцитозу.

Реакция ставится в специальных пробирках при t=37°» минут. Затем из каждой пробирки готовят мазки, считают по, 100 фагоцитов и определяют число фагоцитированныхмикрсконтроле.

Опсонический индекс = фагоцитарный показате. сыворотки/фагоцитарный показатель нормальной сывороп

Чем выше опсонический индекс (должен быть >1), исследуемая сыворотка, и, следовательно, тем выше им! бруцеллезе).

Применяется для олределения опсонинов - антител, стимулирующих фагоцитарную активность лейкоцитов, т.е. серодиагностики инфекций, например, бруцеллёза.

Усиление фагоцитоза происходит за счёт присоединения опсонинов с активными центрами (Рав-фрагмент) к детерминантам бактерий, а затем с помощью Рс-фрагментов к Рс-рецепторам фагоцитов. В нормальной сыворотке содержится небольшое количество опсонинов, которые проявляют свое действие в присутствии комплемента. В иммунной сыворотке опсонинов больше, и их активность в меньшей степени зависит от комплемента.

Компоненты:

Исследуемая сыворотка

Нормальная сыворотка

Суточная микробная культура (напр., стафилококковая)

Фагоциты - взвесь нейтрофилов

Инкубация при 37 °С в течение 30 минут. Из каждой пробирки готовят мазки, окрашивают по Романовскому-Гимзе и считают под микроскопом количество микробов, в 100 и более нейгрофилах , т.е. определяют фагоцитарный показатель.

Фагоцитарный показатель - количество микробов, поглощенных одним нейтрофилом.

Опсонический индекс фагоцитарный показатель иммунной (исследуемой) сыворотки / фагоцитарный показатель нормальной сыворотки.

Чем выше опсонический индекс (должен быть > 1), тем выше иммунитет.

Опсоно-фагоцитарный индекс - это цифровой показатель = количество фагоцитов х оценка фагоцитоза (в зависимости от количества поглощенных микробов). Максимальный показатель -75.

46) РН на мышах с целью установления экзотоксина

В основе этой реакции лежит способность специфической антитоксической сыворотки нейтрализовать экзотоксин.

Антитела иммунной сыворотки способны нейтрализовать повреждающее действие микробов или их токсинов на чувствительные клетки и ткани, что связано с блокадой микробных антигенов антителами, т. е. их нейтрализацией.

Реакцию нейтрализации (РН) проводят путем введения смеси антиген-антитело животным или в чувствительные тест-объекты (культуру клеток, эмбрионы). При отсутствии у животных и тест-объектов повреждающего действия микро­организмов или их антигенов, токсинов говорят о нейтрализующем действии иммунной сыворотки и, следовательно, о спе­цифичности взаимодействия комплекса антиген-антитело.

Для проведения реакции исследуемый материал, в котором предполагается наличие экзотоксина, смешивают с антитоксической сывороткой, выдерживают в термостате и вводят животным (морским свин­кам, мышам). Контрольным животным вводят фильтрат исследу­емого материала, не обработанный сывороткой. В том случае, если произойдет нейтрализация экзотоксина антитоксической сыво­роткой, животные опытной группы останутся живыми. Контрольные животные погибнут в результате действия экзотоксина.

Реакция нейтрализации экзотоксина происходит при его взаимодействии с антитоксической сывороткой (антитела-антитоксины). В результате образовании комплекса антиген-антитело токсин теряет свои ядовитые свойства.

Реакцию нейтрализации проводят с целью обнаружения и титрования токсинов, анатоксинов или антитоксинов.

Токсины получают путем фильтрования жидкой питательной среды или исследуемого материала, где размножались токсигенные бактерии. При обработке формалином в течение 30-45 дней при температуре 37°С токсин превращается в анатоксин, который используют для иммунизации животных с целью получения антитоксической сыворотки.

Реакция нейтрализации invivo. Для определения типа токсина его смешивают с диагностической антитоксической сывороткой и эту смесь вводят белым мышам. При нейтрализации токсина антитоксической сывороткой мыши не погибают.

Реакцию нейтрализации используют для определения антитоксического иммунитета у детей при дифтерии (проба Шика) и скарлатине (проба Дика). Для этого в область предплечья внутрикожно вводят определенное количество соответствующего токсина (1/40 DLM). При наличии в организме антитоксинов произойдет нейтрализация токсина и реакция будет отрицательной. При отсутствии антитоксинов в организме возникает воспалительная реакция на месте введения токсина.
47)РН(Реакция Нейтрализации) на мышах с целью идентификации вируса клещевого энцефалита

Вирус КЭ патогенен для ряда лабораторных и диких животных. Наибольшей чувствительностью обладают новорожденные и молодые белые мыши. После заражения в мозг, интраперитонеально, внутримышечно у этих животных развивается энцефалит, заканчивающийся гибелью животных. Из сельскохозяйственных животных наиболее восприимчивы к вирусу КЭ козы , менее восприимчивы овцы и коровы, и слабо восприимчивы лошади. Вирус КЭ обладает цитопатогенным действием (ЦПД), вызывая цитопатические изменения в первичных и перевиваемых культурах клеток почек эмбриона свиньи (СПЭВ и ПЭС) и размножается без выраженного ЦПД во многих других клеточных культурах. В мозге инфицированных мышей и культуральной жидкости зараженных культур происходит накопление вируса КЭ и специфических вирусных антигенов: комплементсвязывающих, гемагглютинирующих, преципитирующих и др.

Вирус КЭ длительное время сохраняется при низких температурах (оптимальный режим -60 град. С и ниже), хорошо переносит лиофилизацию, в высушенном состоянии сохраняется много лет, но быстро инактивируется при комнатной температуре. Кипячение убивает его через 2 минуты, а в горячем молоке при 60 град. С погибает через 20 минут.

Инактивирующим действием обладают также формалин, фенол, спирт и другие дезинфицирующие вещества, ультрафиолетовое излучение.

Реакция нейтрализации основана на способности специфических иммунных сывороток гасить инфекционное действие вирусов. Применяется в двух направлениях:

1) для типирования выделенных вирусов;

2) для титрования антител в сыворотках переболевших.

Постановка реакции:

1. На лабораторных животных. Критерием наличия вируса

служит гибель лабораторных животных. Высчитывается LD50

Предельное разведение вирусной суспензии, которое

вызывало гибель 50% зараженных животных. Для

идентификации вируса клещевого энцефалита проводят

внутримозговое заражение белых мышей.

2. В тканевых культурах. Учет результатов проводят

По цитопатическому действию (ЦПД)

По методу цветной пробы, основанной на изменении цвета

По гемадсорбции.

3. В Курином эмбрионе. Учет результатов проводится по

появлению оспин по хорионаллантоисной оболочке.

48)РТГА

Эта реакция применяется в вирусологической практике:

Для определения типа вируса (на стекле);

Для обнаружения в сыворотке больных (развернутая).

При постановке ориентировочной реакции торможения гемагглютинации на стекло наносят по 1 капле типоспецифических иммунных сывороток, затем добавляют по 1 капле испытуемого материала и 1 капле 5% взвеси эритроцитов.

Учет результатов: тип вируса определяют по той сыворотке, с которой реакция не произошла, так как иммунная сыворотка, специфическая для выделенного вируса, подавляет его гемагглютинирующую активность, и эритроциты не агглютинируются.
49)РИФ

В качестве метки используются светящиеся флюорохром-ные красители (изотиоционатфлюорисцеина и др.).

Существуют различные модификации РИФ. Для экспресс-диагностики инфекционных заболеваний - для выявления микробов или их антигенов в исследуемом материале применяется РИФ по Кунсу.

Выделяют два метода РИФ по Кунсу: прямой и непрямой.

Компоненты прямой РИФ:

1) исследуемый материал (испражнение, отделяемое носоглоткой и др.);

2) меченая специфическая иммунная сыворотка, содержащая АТ-ла к искомому антигену;

3) изотонический раствор хлорида натрия.

Мазок из исследуемого материала обрабатывают меченойантисывороткой.

Происходит реакция АГ-АТ. При люминесцентном микроскопическом исследовании в том участке, где локализуются комплексы АГ-АТ, обнаруживают флюоресценцию - свечение.

Компоненты непрямой РИФ:

1) исследуемый материал;

2) специфическая антисыворотка;

3) антиглобулиновая сыворотка (АТ-ла против иммуноглобулина), меченая флюорихромом;

4) Изотонический раствор хлорида натрия.

Мазок из исследуемого материала сначала обрабатывают иммунной сывороткой к искомому антигену, а затем - меченой антиглобулиновой сывороткой.

Светящиеся комплексы АГ-АТ - меченые АТ обнаруживаются при помощи люминесцентного микроскопа.

Преимущество непрямого метода состоит в том , что нет необходимости приготовления широкого набора флюоресцирующих специфических сывороток, а применяется лишь одна флюоресцирующая антиглобулиновая сыворотка.

Также выделяют 4-компонентную разновидность непрямой РИФ, когда дополнительно вводится комплемент (сыворотка морской свинки). При положительной реакции образуется комплекс АГ-АТ - меченые - АТ-комплемент.

Реакция относится к серологическим реакциям с участием меченых антигенов или антител.

Проводится прямым и непрямым методами.

При прямом методе обнаруживают антиген в материале от больного. Используется диагностическая флюоресцирующая сыворотка, которая содержит иммуноглобулины, выделенные из иммунных сывороток и меченные флюорохромами.

Специфический антиген обнаруживается в виде ярко-зеленых люминесцирующих конгломератов, а фон препарата окрашивается в оранжево-красный цвет.

Компоненты реакции прямой иммунофлюоресценции:

1) исследуемый материал;

2) специфическая люминесцентная сыворотка;

3) люминесцентный микроскоп.

При диагностике гриппа проводят дифференциацию от возбудителей парагриппа и аденовирусной инфекции. Носоглоточный мазок обрабатывают флюоресцирующей гриппозной сывороткой или гриппозным иммуноглобулином.

«+» результат в виде зеленого свечения получают через 3 часа.

При непрямом методе проводят обнаружение и титрование специфических антител. Титром сыворотки называется ее максимальное разведение, при котором отмечается флюоресценция на «+ +».

Компоненты реакции непрямой иммунофлюоресценции

Для поиска антигена при экспресс-диагностике:

1) исследуемый материал (антиген);

2) специфическая сыворотка;

3) антиглобулиновая люминесцентная сыворотка

4) люминесцентный микроскоп.

/ фаза специфическая

Сывороточные антитела адсорбируются на антигене.

// фаза неспецифическая

Используется антиглобулиновая сыворотка с антителами , меченными флюорохромами. Образуется комплекс антиген+антитело (I) + антиглобулиновая сыворотка (II), который светится.

При коклюше раздражителями являются палочка Борде—Жангу и ее токсины, которые длительно вызывают постоянное раздражение нервных рецепторов на слизистой оболочке дыхательных путей, что ведет к созданию в центральной нервной системе (в дыхательном и кашлевом центрах) застойного очага возбуждения, который оказывает влияние на характер дыхания у детей.

По данным И. А. Аршавского, В. Д. Соболевой (1948), в спазматический период на высоте вдоха задерживается дыхание (инспираторное апноэ). Дыхательная мускулатура в этот момент приходит в состояние тонической судороги, которая особенно сильно выражена в диафрагме. Последняя в это время практически не участвует в акте дыхания.

Длительность инспираторной судороги — 3 — 45 с, на фоне которой происходят короткие выдыхательные толчки небольшой силы, осуществляемые за счет реберного механизма. Продолжаются они до тех пор, пока ребенок не выдыхает весь забранный воздух. Затем следует форсированный шумный вдох, сопровождающийся свистом (реприз). И все это за время приступа повторяется несколько раз. И. А. Аршавский, В. Д. Соболева (1948) считают, что в основе инспираторной судороги лежит феномен Траубе. Traube (1847), раздражая фарадическим током центральный отрезок блуждающего нерва, наблюдал остановку дыхания в фазе инспирации.

При коклюше при возрастающей раздражимости может наступить остановка дыхания в той или иной фазе (экспирации или инспирации), особенно у детей первых месяцев жизни.

Застойный очаг возбуждения в центральной нервной системе приобретает все признаки доминанты по Ухтомскому: возбудимость этого очага повышена, вследствие чего он притягивает и суммирует все раздражения и импульсы, поступающие в центральную нервную систему; возбуждение из доминантного очага иррадиирует на соседние центры — сосудистый (повышается давление), мышечный (наблюдаются судороги мышц лица и конечностей), рвотный (в конце приступа появляется рвота); очаг стойкий, держится долго и оставляет следовую реакцию.

Это хорошо подтверждается в жизни. Нередко у ребенка, перенесшего коклюш, через 2 — 6 мес появляется приступообразный кашель при других заболеваниях дыхательных путей (грипп, вирусные катары верхних дыхательных путей, пневмонии и др.).

«Руководство по воздушно-капельным инфекциям», И.К.Мусабаев