Бактериологичните изследвания са един от най-популярните начини за изследване на различни биологични течности. Ако се има предвид хемокултура, тогава говорим за тест, който помага за идентифициране на бактериални инфекции в човешкото тяло. Резервоар за култура е необходим, когато рутинните кръвни изследвания не могат да определят наличието на бактериемия. Резервоарът за сеитба включва вземане на материал и допълнителното му поставяне в хранителна среда, която съдържа компоненти, които позволяват на бактериите да се размножават много бързо.
Бактериологичен кръвен тест предполага предварително култивиранекултури в хранителна среда. Затова лекарите наричат такива тестове културни изследвания. Когато след няколко дни бактериите започнат активно да растат, получената проба се изпраща на микроскопско изследване. След като културите са пораснали достатъчно, вече не е трудно да се определи бактериурията. Това обаче не е целият анализ. В този случай се дава само предварителна оценка. За по-точно идентифициране на бактериите се извършва следната стъпка. Това е резервоар, който инокулира проби от течни култури в плътна среда в петриево блюдо. Този тест помага за идентифициране на нарастващи бактериални колонии. С техните проби вече могат да се правят химични изследвания, което ще позволи по-точно определяне на крайния вид микроорганизъм.
Всички тези етапи са подготвителни за тестване на бактериални видове за чувствителност към различни видове антибиотици. Това е необходимо, за да се намери най-подходящото лекарство за борба с инфекцията.
Чрез правене бактериологичен анализможе да се открие кръв:
- стафилококи;
- стрептококи;
- ентеробактерии;
- дрожди гъбички.
Кръвни изследвания за бактериална инфекция V задължителенизвършва се при пациенти с намален имунитет. Например, туберкулозни бактерии често се срещат при хора с ХИВ. Такова изследване помага да се елиминират неправилните резултати.
При инфекциозни заболявания бактериите и микроорганизмите имат възможност да проникнат в кръвния поток и да навлязат в други системи на тялото, които се намират в близост до самия източник. Ако хемокултурата покаже положителен резултат, това означава, че инфекцията вече е напреднала. Това може да бъде придружено от повишаване на температурата, увеличаване на белите кръвни клетки и прекъсвания на сърдечната функция.
Характеристики на анализа
Методът на бактериологично изследване, както всеки друг тест, има своите плюсове и минуси. Сред предимствата е високата специфичност на метода. Това избягва кръстосани фалшиви реакции. Всяка биологична течност е подходяща за изследване. Може да се направи цитонамазка, изследване на урина, кръвен тест и др. Терапевтична целе да се определи чувствителността на идентифицирания микроб към определено терапевтично средство. Това ви позволява бързо да унищожите микроорганизмите, без да губите време за ненужно третиране.
Разбира се, има някои недостатъци. Сред тях може да се отбележи, че бактериалното засяване отнема време, за да завърши. Обикновено изследваният материал се съхранява в лабораторията най-малко една седмица. Съществуват сериозни изисквания за вземане на материал, важно е да се спазват всички правила за вземане на материал за бактериологично изследване. Освен това лабораторният персонал трябва да има специална квалификация.
Обикновено резултатите от бактериологичното изследване се получават от проби от всякакви човешки биологични течности: от слуз от назофаринкса до цереброспинална течност. Хемокултурата, както всяка друга течност, не изисква специална подготовка за анализ. За два или три дни се препоръчва да се откажете от мазни и пържени храни и да не пиете алкохол. Ако дарявате кръв, трябва да вземете последното си хранене поне 12 часа преди това. Тази функция на доставка се нарича строго на празен стомах. Пушенето е забранено няколко часа преди изследването.
Кръвта за посявка, когато става въпрос за стерилност, се взема няколко пъти в определен период от време. Това се дължи на факта, че не винаги е възможно да се постигне инфекция хранителна средаедна проба наведнъж, така че едно вземане на проба не се счита за ефективно. Възможно е да се каже, че определен микроорганизъм е провокатор на определена инфекция само след провеждане на серийно изследване най-малко два пъти. В резултат на повторно изследване трябва да се идентифицират предполагаемите бактерии. Възможно е едновременното изследване не само на кръв, но и на други биологични течности.
Кръвта трябва да се събира максимално висока температура. В същото време предварителни антибиотично лечениеможе да замъгли резултатите. IN в краен случай, трябва да минат поне 24 часа от последната доза антибиотик. Вземането на кръв се извършва сутрин.
След събиране, засяването се извършва в хранителна среда, която е благоприятна за растежа на бактериите. Такива проби се държат при температура 37-38 градуса в продължение на няколко дни.
В момента се извършват два вида сеитба. Това е завърху култура за определяне на чувствителността към основния антибиотичен спектър и върху култура за определяне на чувствителността към широк обхватлекарства. Обикновено отнема поне три дни, за да получите първите резултати. Понякога проучването продължава до две седмици.
Вирусна инфекция
Когато вирус навлезе в тялото, наличието или отсъствието може да се диагностицира с помощта на общ анализкръв. Обикновено дори самият пациент може да определи наличието на инфекция без никакви проблеми, след като получи резултатите от теста в ръцете си. Това обаче не означава, че трябва да изключите консултацията със специалист.
За да определите дали инфекцията е причинена от вирус или бактерия, трябва внимателно да прочетете получените данни. Факт е, че структурният състав на кръвта се променя по различен начин в зависимост от това дали причината за инфекцията е вирус или бактерия.
Ако причината чувствам се злее станал вирус, тогава левкоцитите ще са в норма или дори малко по-ниски, в най-редките случаи има леко повишение. Лимфоцитите са представени над нормата, както и моноцитите. Вирусът има потискащ ефект върху неутрофилите, така че броят им намалява. СУЕ обикновено остава нормална или се повишава много леко.
Дори ако всичко описано съвпада с вашия анализ, важно е да вземете предвид симптомите, които сте развили. За вирусна инфекцияхарактеризиращ се с по-малки инкубационен период. Обикновено не надвишава пет дни. В същото време трябва да се изключи поставянето на независима диагноза, тъй като понякога проявата на бактерии се случва на фона на развитието на вирус и само специалист ще има проблем с определянето на тази етиология.
Различни проби
При събиране на урина за бактериологично изследване се предполага, че се събира сутрешна урина, нейната средна част. Първо се извършва тоалет на външните полови органи. Събирането се извършва в стерилен съд с обем 10-15 ml. Тестът трябва да бъде доставен в лабораторията в рамките на не повече от два часа.
Ако трябва да изследвате тампон от гърлото и носа, тогава сутрин е забранено да миете зъбите си, да изплакнете устата и носа си с дезинфекционни разтвори. Забранява се консумацията на храна и вода. Ако е необходимо да се направи бактериална култура на изпражненията, тогава изпражненията се събират от сутрешните изпражнения с помощта на стерилна шпатула в стерилен контейнер, обемът на анализа трябва да бъде 15-30 грама. Важно е в пробата да не попадне урина.
Тестът трябва да бъде доставен в рамките на пет часа. Забранено е тестът да се съхранява през нощта или да се замразява. Събирането на изпражненията с помощта на клизма и слабително също трябва да се изключи.
Ако трябва да изследвате храчки, събирането се извършва сутрин на празен стомах в стерилен контейнер по време на атака на кашлица заедно със слуз. Преди събирането е позволено да измиете зъбите си, но трябва да използвате само изплакване сварена вода. Анализът се доставя в лабораторията в рамките на един час.
колекция кърмаизвършва след предварителен хигиенни процедури. Зоната около зърната трябва да се третира с тампон, навлажнен със 70 процента етилов алкохол. Първите 15 ml не могат да се използват за донорство. От средната порция се декантират 5 мл. Доставката на анализа трябва да бъде завършена в рамките на два часа.
Ако се прави анализ на гениталното течение, тогава за жените има забрана за изследване по време на менструация, след това трябва да мине поне седмица. Ако преди това е бил прилаган антибиотичен курс, трябва да мине един месец след завършване. Първо се извършва тоалет на външните полови органи. Препоръчително е да не уринирате в продължение на два часа. Мъжете се съветват да удължат времето, през което не ходят до тоалетна, до пет часа.
Бактериологична култура– метод за изследване на биологичен материал (кръв, урина, изпражнения и др.), взет от пациент и поставен върху изкуствена хранителна среда, която насърчава растежа и размножаването на патогена. Проучването може да разкрие не само наличието на патогена, но и неговата концентрация. По този начин можете да изследвате, освен вече изброеното, цереброспинална течност (ликвор), храчки, жлъчка, секрет от гърлото, носа, очите, респираторен тракт, гениталии, рани. Тоест, микроорганизмите могат да бъдат инокулирани от почти всяка част на тялото. Такива техники са удобни за намиране и идентифициране на бактерии и гъбички, откриването на вируси по този начин е много по-трудно, което се дължи на особеностите на биологията на вирусите.
Бактериологичните култури позволяват не само да се определят видовете микроби, които провокират дадено заболяване, но и да се изберат ефективни антибиотици(определяне на чувствителността на микробите към тях), което ще помогне за възстановяване. Преди започване на антибиотична терапия трябва да се направи само проба от материала. Бактериологичната култура може да бъде предписана както в клиника (например, добре познатият тест за изпражнения за дисбактериоза), така и в болница (например за чревни инфекции, а също и ако биологичният материал е трудно достъпен, като цереброспинална течност). След като материалът се вземе от пациента, той се поставя върху специални хранителни среди и резултатите се оценяват след 3-10 дни. Специалисти от неговата микробиологична лаборатория могат да разпознаят (идентифицират) микроб чрез определяне на морфологични, културни и биохимични характеристики. Морфологията (структурата) на "вредителя" се изследва под микроскоп; свойствата на културата се характеризират с нуждите, условията и вида на растежа на микроорганизмите върху хранителни среди. Биохимични характеристикисе определят от набор от ензими, синтезирани от микроба в процеса на живот. Обърнете внимание и на пигменти, които оцветяват колонии от микроорганизми и хранителни среди, например златист пигмент форми Staphylococcus aureus.
Видове анализи
Бактериологичен кръвен тест
Показания: подозрение за отравяне на кръвта; за дълго време повишена температура, чиято причина не може да бъде установена; подозрение за някои инфекциозни заболявания (например чревни инфекции, епидемичен менингит, стафилококов и стрептококови инфекции). Кръвта се взема в момента на максимално повишаване на температурата (през този период концентрацията на микроорганизми в кръвта е особено висока), преди приема на антибиотици (ако диагнозата все още не е установена) или след приема на антибиотици 10-14 дни по-късно (до проследяване на резултатите от лечението). Кръвта се взема до леглото на пациента или в съблекалнята и веднага се инокулира върху хранителни среди. Еднократният кръвен тест е неефективен, ако се открие условно патогени, живеещи върху човешката кожа, и кога определени условия(с намаляване защитни силиорганизъм), които могат да причинят заболяване, без повторни изследвания е трудно да се разбере истинността на резултатите. Следователно за определен период от време може да се проведе серия от 3 или повече изследвания. Да се твърди, че в в такъв случайпричинителят е всеки микроорганизъм, позволява бързо (в рамките на 48 часа) откриване на микроорганизма, повторно изолиране от кръвта или едновременно изолиране от други видове тестови материали (кръв и урина, кръв и храчки и др.), освен това, неговата откриване едновременно на различни хранителни среди.
Секреция, натривки от горните дихателни пътища
Показания: възпалителни заболяваниягорни дихателни пътища и пневмония без храчки, диагноза инфекциозни заболяваниядихателни пътища (дифтерия, магарешка кашлица, скарлатина), диагностика на бактериално носителство при менингококи, дифтерия и стафилококови инфекции. Материалът се взема от носните проходи със сух стерилен тампон, а от фаринкса с помощта на навлажнен стерилен памучен тампон. Натривки от носа и гърлото се вземат с различни тампони. Материалът от фаринкса и сливиците се взема на празен стомах преди хигиенни процедури или не по-рано от 3-4 часа след хранене. При вземане на петна от задната част на фаринкса и сливиците не трябва да докосвате езика, лигавицата на бузите или зъбите с тампона, така че родителите трябва да създадат условия, така че медицинска сестрабеше удобно да се работи с бебето - по-добре е да се каже предварително, че процедурата ще бъде много кратка, но ще бъде възможно да се хване микробът, живеещ в устата на бебето, но за това той трябва да отвори устата си и да не се движи няколко секунди (няколко броя).
Бактериологично изследване на урината
Показания: възпалителни заболявания на бъбреците и пикочния мехур и контрол след лечение, диагностика на инфекциозни заболявания (коремен тиф, лептоспироза). Преди започване на антибиотична терапия се провежда изследване на уринната флора. Средна част от свободно освободената урина (3-5 ml) се събира в стерилен контейнер. Средната част на урината е най-малко замърсена с микроби, които могат да бъдат върху външните гениталии, нейното изследване дава по-обективна картина на състоянието на бъбреците, пикочните пътища. Най-добър за използване сутрешна уринасъдържащи най-голямото числобактерии. Преди вземане на материала е необходима щателна тоалетна на външните полови органи. Момчетата трябва да разкрият главата на пениса (освен ако не са обрязани) и да отделят малко количество урина; след това изпуснете част от урината в стерилен контейнер (не събирайте последната част), затворете контейнера и го прехвърлете в лабораторията. При момичетата измийте гениталиите си с топла вода. сапунена вода, в посока отпред назад; изплакнете отново гениталиите топла водаи избършете със стерилна кърпа. Вземете средна проба от урина в стерилен контейнер (тя трябва да бъде взета от лабораторията). Урината може да се съхранява преди изследването за не повече от 1-2 часа при стайна температура и не повече от един ден в хладилник, тъй като съществува риск от развитие на бактерии и изкривяване на резултатите от изследването.
Изпускане от рана
Показания: признаци на гнойно-възпалителен процес в раната. Материалът се взема от лекар. Кожата около раната се третира с антисептик и гнойта се отстранява със стерилна салфетка. Материалът се взема със стерилен тампон. При наличие на дренажи в раната (тръби, през които изтича съдържанието на раната), секретът от тях се изсмуква със спринцовка в количество 1-2 ml и се поставя в стерилна епруветка.
Бактериологично изследване на изпражненията
Показания: диагностика на чревни инфекции, контрол при изписване на болни с остр чревни инфекции(дизентерия, салмонелоза и др.) от болница, диагностика хронични дисфункциичерва, диагностика на чревна дисбиоза, идентифициране на бактерионосители. Материалът за изследване може да бъде изпражнения, получени при естествена дефекация или с помощта на специални тампони (примки). За събиране на материал чрез естествена дефекация използвайте старателно измити и без следи. дезинфектантисъдове или саксии. На дъното на съда може да се постави лист чиста хартия, за да се предпази материала от следи от дезинфектанта. Проба от изпражненията се взема веднага след дефекация с помощта на стерилна стъклена пръчка, телена примка, дървена шпатула или специална лъжица, монтирана в капака на стерилен контейнер, която може да се получи в лабораторията. Ако има слуз, гной или други включвания, трябва да изберете области, които съдържат тези примеси, но без кръв. Получаването на материал от ректума с помощта на ректални тампони (примки) се извършва от медицинска сестра. Детето е поканено да легне настрани с бедра, изтеглени към стомаха и разтворени задните части с длани. Вкарва се примка (тампон). анусна дълбочина 5–6 cm материалът се събира в празни стерилни контейнери или епруветки с консервант. Ако не се използва консервант, тогава времето преди началото на бактериологичното изследване не трябва да надвишава 2 часа. Откриването дори на патогенни микроорганизми в изпражненията не винаги показва наличието на заболяване, а може да се дължи на бактериално носителство. Следователно оценката на резултатите трябва да се извършва, като се вземат предвид проявите на заболяването. За правилна оценка на резултатите се препоръчва да се проведат 2-3 изследвания с интервал от 1-2 дни. Диагнозата на чревната дисбиоза се извършва въз основа на оценката на качествените и количествените промени в състава на микрофлората на дебелото черво. Трябва да се отбележи, че е важно не само състоянието на чревната микробна флора в даден момент, но и промените, настъпващи в червата. Затова за по-точна оценка на състоянието чревна микрофлораизследването също трябва да се повтори няколко пъти. Надеждността на получения резултат е силно повлияна от спазването на сроковете за транспортиране на материала. В някои случаи, когато спазването на тези срокове е нереалистично, трябва или да откажете да определите броя на бактериите, или да подходите предпазливо към информацията за намаляване на броя им.
алкохол
Показания: съмнение за менингит (възпаление на меките менинги). CSF (цереброспинална течност) се получава чрез лумбална пункция(получаване на цереброспинална течност от канала гръбначен мозък), по-рядко с пункция на страничните вентрикули на мозъка (в този случай цереброспиналната течност се получава от така наречените вентрикули на мозъка, като се прави пункция зад външния Ушния канал). Цереброспиналната течност се взема от лекар; тази процедура винаги се извършва само в болница. Ликьорът обикновено е стерилен, така че фактът на откриване на микроорганизъм може да бъде важен. При деца менингитът често е придружен от бактериемия - наличието на патоген в кръвта, поради което се извършва едновременно изследване на кръвта и цереброспиналната течност.
Резултати от бактериологични изследвания
Само лекар може да разчете правилно резултата от изследването. В някои случаи има значение не фактът на откриване на определени микроорганизми, а тяхното количество. Често количеството играе роля в прогнозата на заболяването и естеството на лечението. Така, например, в пикочен мехурОбикновено урината е стерилна, но при преминаване през долната трета на уретрата влиза в контакт с нормална микрофлора, и наличност патологичен процесте казват само когато титърът на патогена (неговото количество) е повече от 10 4 CFU / ml. Оценката на броя на микроорганизмите в раневия секрет е важна за прогнозиране на хода на процеса. Установено е, че когато нивото на микробно замърсяване на раната е над 105 клетки ( микробни клетки) на 1 g тъкан (на 1 ml изхвърляне), нагнояване се развива дори в жизнеспособни тъкани. Ако в раната има мъртва тъкан, хематоми, чужди теларазвитие гноен процесвъзможно с повече ниски нивазамърсяване. В допълнение, при нива на замърсяване на раната над 105 клетки на 1 g секрет от рана, заплахата от развитие на сепсис рязко нараства. Въз основа на резултатите от изследването режимите на лечение се променят по един или друг начин. В заключение отбелязваме, че резултатът от всеки анализ, включително бактериологичен, може да бъде погрешен, така че лекарят може да предпише потвърждаващи или изясняващи изследвания, например полимеразна верижна реакция (PCR) за определяне на ДНК на патогена и др.
Класическото бактериологично изследване е “златен” стандарт за микробиологична диагностика.
Целта на бактериологичното изследване е да се изолира чиста култура на патогена и да се идентифицира.
Алгоритъм за бактериологично изследване:
Първична микроскопия на изследвания материал (незадължителен етап, в зависимост от естеството на материала);
Първична сеитба за изолиране на чиста култура;
Натрупване на чиста култура;
Проучване на комплекса биологични свойстваизбрана култура;
Окончателна идентификация на патогена.
1-ви ден от изследването
1. Първична микроскопия
Резултатът от първичната микроскопия дава приблизителна представа за наличието на различни морфологични формимикроорганизми, а също така позволява тяхната първична идентификация по морфологични и тинкториални свойства и избор на среди за първична инокулация.
Гноен секрет - необходима е първична микроскопия.
Гръбначно-мозъчна течност- необходима е първична микроскопия на седимента.
Храчките - първичната микроскопия се извършва от разреждания 10 4 -10 5.
Натривки от гърло и нос - първична микроскопия не се прави.
Кръв - първична микроскопия не се извършва.
Фецес - първична микроскопия не се извършва.
2. Първично засяване
Материалът за изследване след първична микроскопия или без нея (изпражнения, урина, натривки от носа и гърлото, кръв) се посява върху подходящи среди за изолиране на чиста култура:
Захарен бульон, кръвен агар - за стрептококи;
Жълтъчно-солен агар, кръвен агар - за стафилококи;
Ендо среда - за бактерии от семейство Enterobacteriaceae;
MPA (месен пептонен агар) - за грам-отрицателни бактерии;
MPA (засяване по метода на Шукевич) - за изолиране на Proteus;
среда Kitta-Tarozzi - за изолиране на анаероби;
Среда на Сабуро - за изолиране на гъбички.
Сеитбата е първият етап от бактериологичното изследване (ако не е извършена първична микроскопия).
Сеитбата се извършва по следния начин:
Засяване с жилка и изпичане на примката. Материалът се взема с калцинирана бактериологична примка и горното поле на чашката се посява плътно с щрих. След това примката отново се калцинира и се поставя в гъсто засаден сектор и се начертават 2-3 вертикални линии през цялата чаша. След това чашата се обръща, плътно засаденият сектор остава в долното поле на чашата. Примката се загрява отново и посевът се разнася в чашата с 2-3 хоризонтални удара.
Засяване с шпатула. Материалът се нанася върху повърхността на средата с шпатула или пипета и след това се разпръсква по цялата повърхност с шпатула.
Засяване с тампон. За инокулация тампон с тестовия материал се поставя в чаша и съдържанието му се втрива в хранителната среда с кръгови движения.
Сеитба по сектори. При тази сеитба дъното на чашата се изтегля на сектори, сеитбата се извършва с прекъснати движения от ръба на чашата към центъра и по секторите.
Ден 2 от изследването
1. Запишете растежа върху хранителни среди като хомогенни или хетерогенни.
2. Извършване на описание на културни ценности.
Алгоритъм за описване на колонии
В резултат на растеж върху хранителна среда се образуват колонии (потомци на една клетка). Изолираните колонии се избират и изследват - започва вторият етап от изследването, насочен към изучаване на културните свойства на бактериите. Познаването на тези свойства е необходимо за идентифициране на получената чиста култура, тъй като всеки вид микроорганизъм, когато расте върху определена хранителна среда, отговаря на определени културни свойства.
Изследване на колонии:
Макроскопски: с просто око в пропусната и отразена светлина;
Микроскопски: при малко увеличение на суха микроскопска система.
В предавана светлина те изучават:
Размерът на колониите (големи, средни, малки, джуджета);
Форма на колонията (правилна, неправилна, кръгла);
Прозрачност на колонията (прозрачна, непрозрачна).
В отразена светлина определете:
Цвят (безцветен или цветен);
Естеството на повърхността (гладка, неравна, лъскава, грапава);
Височината на колониите над повърхността на средата (потиснати, плоски, повдигнати).
Микроскопски оценете:
Ръб (гладък, неравен);
Структура (хомогенна, нехомогенна).
Изследването на колониите завършва с изготвяне на цитонамазка, оцветяване по Грам и микроскопия.
При вземане на материал от колония за приготвяне на намазка се оценява неговата консистенция (мека, лигава, суха).
Ако културата се окаже чиста при микроскопия, тогава тя се субкултивира върху наклонен агар за натрупване.
Ден 3 от изследването
1. Описание на модела на растежпод наклон на агар:
Хомогенен, разнороден;
По хода, непрекъснато, непрекъснато.
2. Проверка на чистотата на натрупаната култура. Приготвят се натривки, оцветяват се по Грам и се изследват под микроскоп. Ако е натрупана чиста култура, тя се подлага на допълнителна идентификация. Идентифицирането на бактериите по род и вид се основава на изследване на метаболитни характеристики - биохимична идентификация и антигенна структура - серологична идентификация.
3. Изследване на биохимичните свойства. Биохимични свойства - способността на бактериите да разграждат определени субстрати чрез производството на подходящи ензими. За изследване на биохимичните свойства се използват диференциални диагностични среди, съдържащи различни субстрати (разнообразни серии). Те включват среда на Hiss с въглехидрати, лакмусово мляко, желатин, среда с аминокиселини, MPB (месопептонен бульон) с индикатори за сероводород и индол.
Захаролитичните свойства се изследват върху среда на Hiss. Те съдържат пептонна вода, въглехидратен субстрат (различни моно- и полизахариди), многовалентни алкохоли и индикатор.
Ако бактериите имат ензими, които разграждат въглехидратния субстрат, те освобождават метаболитни продукти (киселина или киселина и газ). Когато се образува киселина, индикаторът променя цвета на средата; когато се образува газ, се записват прекъсвания в средата.
Протеолитичните свойства се изследват чрез култивиране върху желатин и лакмусово мляко. Ако бактериите имат протеази, желатинът се втечнява. В млякото се появява кремав съсирек, а над него течност - пептонизация на млякото (поради факта, че бактериалните протеази разграждат млечния казеин до пептон).
Пептолитични свойства. По-често бактериите са в състояние да разграждат междинните продукти от разграждането на протеините - пептони. Продуктите от този процес: амини (скатол, индол), аминокиселини, газове (сероводород, амоняк, въглероден двуокис). Те могат да бъдат открити с индикаторна хартия:
Лакмус - за откриване на амоняк;
Навлажнен с оксалооцетна киселина - за откриване на индол;
Навлажнен с оловен ацетат - за откриване на сероводород. Продуктите на дезаминиране и декарбоксилиране на аминокиселини се откриват с помощта на тест ленти, които променят цвета си при промяна на рН на средата.
Ден 4 от изследването
1. Запишете резултатите от биохимичните тестове. След като дадена култура бъде идентифицирана спрямо нейния вид, се изследват редица допълнителни характеристики, като чувствителност към антибиотици, токсигенност, наличие на вирулентни фактори, плазмиден профил и също се извършва вътревидова диференциация.
2. Резултатите от биохимичната идентификация служат като основа за серологична идентификация. Серологичната идентификация на изолираната култура се извършва в реакция на стъклена аглутинация, като се използват подходящи имуноадсорбирани серуми, изборът на които се определя от резултатите от биохимичната идентификация.
Вътрешноспецифична диференциация - определяне дали щамът принадлежи към определен фаговар, бактериоциногеновавар, бактериоциновар, биовар, резистовар и др. Това ни позволява да идентифицираме епидемиологични връзки между щамове от един и същи вид.
Идентифицирането на изолираната култура ни позволява да направим заключение за това кой микроорганизъм служи етиологичен факторзаболявания. При изолиране условно патогенни бактериинеобходимо е да се спазват критериите за етиологично значение:
Наличие на бактерии в материала от патологичното огнище в количество най-малко 10 5 CFU ml/g;
Повтаряща се изолация от материал от същата култура;
Повишаване на титъра на антителата в кръвния серум на пациента към автощама 4 пъти или повече.
Определяне на бактериални фаги (фаготипизиране)
Идентификацията на Phagovar се извършва според епидемиологични показания за установяване на епидемиологични връзки между болни хора. За да проведете изследването, вземете петриеви панички с MPA, изсушете повърхността, начертайте дъното на квадрати и ги маркирайте. След това 3-4-часова култура в бульон се засява с морава, изсушава се и капка от съответния стандартен фаг в работно разреждане се прилага към всеки квадрат. Културите се поставят в термостат за един ден. След 24 часа се взема предвид спектърът на чувствителност на културата към определени фаги чрез литично действие.
определяне на бактериоциновар
За определяне на бактериоциновар се определя чувствителността на изследваните щамове към референтния бактериоциновар. Подобно на фаготипизирането, то се извършва по епидемиологични показания.
За провеждане на изследването съответните стандартни продуциращи култури от типични бактериоцини се засяват върху хранителни среди. Културите се поставят в термостат при 37 °C за 48 часа.
Порасналите колонии от индикаторни култури се инактивират с хлороформ, след което върху повърхността се изсипват 2-4 ml разтопен агар, в който първо се добавят 0,2 ml от изследваната 4-часова бульонна култура. След като агарът се втвърди, посевите отново се поставят в термостат за 18-24 часа. След определеното време се отчита наличието на зони на инхибиране на растежа около индикаторните култури, като по този начин се определя бактериоциноварът на изследваните бактерии.
©2015-2019 сайт
Всички права принадлежат на техните автори. Този сайт не претендира за авторство, но предоставя безплатно използване.
Дата на създаване на страницата: 2016-04-27
За получаване надежден резултатанализът трябва да се извърши най-малко 2 седмици след последната доза антибиотици и (или) антибактериални лекарства.
- Остъргване от пикочен канал Препоръчва се тестът да се направи 2 часа след последното уриниране, от фаринкса и назофаринкса – на празен стомах (4-5 часа след последното хранене, в този случай е необходимо да се изключи миенето на зъбите и изплакването на устата), за други локуси специално обучениене е задължително.
- Урина. Предмет на изследване е средна порция свободно отделена урина в количество 3-5 ml в стерилен пластмасов контейнер за еднократна употреба (контейнерът може да се получи на рецепцията) след щателна тоалетна на външните полови органи без използване на антисептици. . Времето за доставка до лабораторията при стайна температура е 1-2 часа, при температура 2-8°C – 5-6 часа.
- сперма за бактериологично изследване се събира в стерилен пластмасов контейнер за еднократна употреба с широко гърло чрез мастурбация (контейнерът може да се получи на рецепцията). Времето за доставка на материала до лабораторията при стайна температура е 1-2 часа.
- храчки Препоръчително е да се събира сутрин, на празен стомах след саниране устната кухина, в стерилен пластмасов контейнер. Времето за доставка на материала до лабораторията при стайна температура е 1-2 часа, при температура 2-8°C - 5-6 часа.
- Ограда тайна простатната жлеза извършва се от уролог след предварителен масаж на простатата (тази манипулация се извършва само в ЦУ). Преди събиране на простатен секрет се препоръчва сексуално въздържаниеза поне 2 дни.
- Бактериологично изследване кърма . Кърмата се събира само преди хранене на бебето или два часа след кърмене. Изследваната пациентка се мие отляво и отдясно млечна жлезатопла вода и сапун и избършете с чиста кърпа. Третирайте повърхността на зърната и върховете на пръстите с памучна вата, умерено навлажнена със 70% етилов алкохол. Първата порция кърма, приблизително 0,5 ml, се изхвърля. След това, без да докосва зърното с ръце, жената изцежда 0,5 - 1 ml мляко от всяка жлеза в отделен стерилен контейнер (контейнери могат да бъдат получени на рецепцията). Времето за доставка до лабораторията при стайна температура е 1-2 часа, при температура 2-8°C – 5-6 часа.
- Ограда с иновална течност за бактериологично изследване се извършва от лекар в стерилен пластмасов контейнер (контейнерът може да се получи на рецепцията). Тази процедура не се извършва в лабораторни условия. Времето за доставка на материала до лабораторията при стайна температура е 1-2 часа, при температура 2-8°C - 5-6 часа.
- Ограда отделяне от рана за бактериологично изследване се извършва от лекар, в контейнер за еднократна употреба със среда на Ames (контейнерът може да се получи на рецепцията). Времето за доставка на материала в лабораторията при стайна температура е в рамките на 6 часа, при температура 2-8°C - до 2 дни.
- Жлъчка за бактериологично изследване се събира по време на сондиране, поотделно, в части А, В и С в три стерилни епруветки или по време на операция с помощта на спринцовка в една епруветка, като се спазват правилата за асептика (тази процедура не се извършва в лабораторията). Времето за доставка на материала до лабораторията при стайна температура е 1-2 часа, при температура 2-8°C - 5-6 часа.
Бактериологичното изследване е изследване, предназначено за изолиране и изследване на техните свойства с цел поставяне на микробиологична диагноза.
Тестовият материал трябва да се вземе при асептични условия в стерилни контейнери и да се достави в лабораторията възможно най-скоро. Ако е необходимо, пробите трябва да се съхраняват в хладилник. Техниката на вземане на проби зависи от обекта, характера на заболяването и свойствата на микроорганизма. Един от често срещаните методи за бактериологично изследване е бактериоскопията.
За изследване на нефиксирани бактерии се използват два метода: смачкана капка (между предметното и покривното стъкло) и . Трябва да се помни, че препаратите от нефиксирани бактерии са инфекциозни.
За бактериоскопия на фиксирани препарати се използват намазки. За приготвянето им една капка от тестовата течност се разпределя върху повърхността на предметно стъкло и след това се изсушава. Най-често срещаният метод за фиксиране на лекарството е преминаването му през пламъка на газова горелка. В някои случаи се използват фиксиращи съединения. Фиксираните препарати обикновено се оцветяват (вижте Оцветяване на микроорганизми). Към номера основни елементиБактериологичните изследвания включват инокулации и субкултури, извършвани с бактериална бримка или пипета на Пастьор. Примката се стерилизира чрез отгряване в пламък, след което се охлажда чрез докосване на област от неинокулиран агар или чрез изплакване в стерилна течност. Когато използвате пипета на Пастьор, отчупете върха с пинсети, прекарайте пипетата през пламъка на горелката няколко пъти и я оставете да изстине. При сеитба се използват течни и твърди хранителни среди. Когато се засява върху наклонен агар, бактериалната култура се втрива с примка върху повърхността на агара. При засяване в дебелината на агар или желатинова колона, хранителната среда се пробива до дъното на епруветката с бримка или специална игла. При засяване в течна среда трябва да се внимава течността да не се разлее и да намокри краищата на епруветките и запушалките. Инокулациите и субкултивите трябва да се извършват близо до пламъка на газова горелка, епруветките не трябва да остават отворени дълго време, бримката или пипетата на Пастьор с културата не трябва да докосват нищо; Преди да затворите епруветката, краищата трябва да бъдат изгорени. Инокулираните епруветки трябва незабавно да бъдат етикетирани.
Най-важният етап от бактериологичното изследване е идентификацията - определяне на вида или вида на бактериите, получени под формата на чиста култура. При идентифициране на бактерии се изследват техните физиологични и биохимични свойства и образуването на токсини. Серологичните методи за идентифициране на бактерии (реакции и) са широко използвани. В много случаи е ефективен биологичен метод за идентифициране на микроорганизми, който се основава на заразяване на лабораторни животни с изследвания материал или получената бактериална култура и идентифициране на характерни патологични промени в животните.
За изолиране на чисти култури се използват механични и биологични методи. Пример за механичен метод: капка от тестовия материал се смила със същата стерилна шпатула или бактериална примка върху повърхността на плътна хранителна среда, последователно в първата, втората и третата. Изолирането на чиста култура се извършва от израснали индивидуални колонии и се състои в тяхното изследване и скрининг върху свежа хранителна среда. Биологичните методи за изолиране на чисти култури се основават на отчитане на едно или друго свойство на изолирания микроб, което го отличава от други микроби, открити в изследвания материал.
С биологичния метод се използват такива хранителни среди, в които се създават благоприятни условия за развитие. определен типмикроби Биологичните методи включват и заразяване на лабораторни животни, които са чувствителни към изолирания вид бактерии.
Бактериологично изследване - набор от методи за идентифициране патогенни микроорганизмив пациента, в носителя или върху предмети външна среда. Бактериологичните изследвания се използват и за откриване на опортюнистични и санитарно-показателни микроби, които характеризират степента на замърсяване на външната среда, за изследване на микробния пейзаж на определена среда (обект). Бактериологичните изследвания могат да се използват за диагностика, профилактика на инфекциозни заболявания, за санитарно-хигиенни характеристики на околната среда, за научни изследвания.
Материалът и методът на бактериологичното изследване зависят от целта на анализа, условията на околната среда, патогенезата и хода на заболяването. Ако е налице бактериемия, микробът се открива чрез хемокултура. При изразени локални лезии, патогенът трябва да се търси в изхвърлянето или секретите на засегнатия орган (дифтерия, дизентерия, гонорея и др.). И накрая, при заболявания със сложен курс, когато (както например при коремен тиф) бактериемията се заменя с лезии тънките черва, на всеки етап се използва подходящ метод за изследване: през първата седмица на заболяването се извършват хемокултури, през втората най-надеждно серологичен тест, започвайки от третата седмица, се получава положителен резултат от културата на изпражненията; Последният метод се използва и като контролно изследване за откриване на носители на бактерии сред реконвалесценти и за тяхното наблюдение.
Всяка от тези задачи се извършва с помощта на методи, предназначени за изолиране и определяне на микроорганизми. В зависимост от характеристиките на микроба се използва целият набор от методи или части от него.
Бактериоскопията е най-достъпната техника, базирана на микроскопско изследване на материала. При микроскопиране на пресни препарати можете да използвате някои микрохимични реакции (например оцветяване на йодофилни бактерии с разтвор на Лугол) или селективно оцветяване на различни структурни части на бактерии.
Бактериите могат да бъдат по-ясно идентифицирани в оцветен препарат. Тестовият материал се нанася върху пързалкатънък и възможно най-равномерен слой. Оставете препарата да изсъхне на въздух и го фиксирайте по един от общоприетите методи, но най-често чрез пламване, тоест бързо прекарване на препарата над пламъка на горелката два или три пъти, така че стъклото да е топло, но не горещо. Препаратът, охладен след фиксация, се оцветява с обикновено или диференциално оцветяване (виж Оцветяване на микроорганизми). За флуоресцентна микроскопия се използват както нативни, така и сухи препарати. В този случай третирането с определени багрила кара структурите на микробното тяло или целия микроб да светят в ултравиолетови или къси сини лъчи. В друга модификация микробите се третират със специфични серуми, маркирани с флуоресцентни (багрила). Бактериите, съответстващи на серума, ще светят, когато етикетираният серум се отложи върху тях. Хетероложните бактерии няма да светят.
Методът бактериоскопия се използва широко за бактериологична диагностика на някои инфекциозни заболявания (гонорея, туберкулоза, рецидивираща треска), както и при изследване на целия комплекс от микрофлора на орган (сливици, вагина), продукт или друг обект.
Методът на засяване, т.е. изолирането на чиста култура от желания микроорганизъм, е по-точен и надежден метод за бактериологична диагностика от бактериоскопията. Пресният материал се разстила върху повърхността на плътна хранителна среда, излята в петриеви панички. Първичното засяване се извършва на обикновени среди, благоприятни за даден микроб, на диференциални или селективни среди. Изборът на хранителна среда (виж), както и методът за предварителна обработка на пресен материал за сеитба зависи от степента на замърсяването му с придружаваща чужда микрофлора. За 24-48 часа. съхранявани в термостат при оптимална температура за даден микроб, чашките се изследват и подозрителните колонии се субкултивират върху среда, която насърчава пролиферацията на този патоген. По този начин се получава култура от хомогенни бактерии, които трябва да бъдат идентифицирани.
Идентифицирането на микроб започва с изучаване на неговата морфология в оцветен препарат и в натрошена капка (виж), за да се определи формата на микробите и тяхната подвижност. Следващата стъпкае изследване на ензимната способност на бактериите да разграждат въглехидрати, аминокиселини и урея в комбинации, специфични за всеки тип. При бактериите най-изследвани са захарта и протеолитичните ензими.
Идентифицирането на микроб трябва да бъде допълнено от изследване на други свойства, характерни за всеки род и тип микроорганизми. Тези свойства включват способността за селективно разтваряне на червени кръвни клетки на различни животни (хемолиза), съсирване на кръвна плазма (плазмена коагулация), разтваряне на фибринов съсирек (фибринолиза) и др. Всички тези характеристики на бактериите могат да се използват при определянето им като диференциални характеристики .
Окончателната идентификация на някои микробни видове, главно патогенни колиформни бактерии, включва серологична идентификация (вижте Микробна идентификация). Обикновено за тази цел се извършва реакция на аглутинация, т.е. открива се струпването на бактерии под въздействието на едноименния имунен серум. Аглутинацията на микроби в серума срещу определен вид показва принадлежност към този вид. Обикновено реакцията на аглутинация се извършва приблизително върху стъкло и за окончателно определяне в епруветки със серумни разреждания.
Редица микроби не могат да бъдат напълно идентифицирани по описания начин. Тогава идентификацията трябва да бъде допълнена от инфекция на лабораторни животни, тъй като някои бактерии се характеризират с патогенност или токсигенност, която се разкрива, когато животните са заразени. В някои случаи заразяването на животни също служи като метод за натрупване на патогенни микроби.
Само сравнение на всички характеристики на културата, събрани по време на изследването на нейната морфология, биохимични, серологични и, когато е необходимо, биологични свойства, може да осигури основания за идентификация. Отговорете кога положителен резултатизследването не е трудно, ако изолираният микроб е типичен. В този случай посочете рода, вида и, ако е установено, вида на бактерията. Когато се изолира микроб, който се отклонява в някои свойства от типична характеристика, се дава отговор, посочващ отклоняващата се характеристика. В този случай е полезно да се повтори изследването, ако ходът на заболяването или условията за събиране на материал го позволяват. Също така е полезно културата на атипичните микроби да се подложи на допълнително изследване, като се използват други, по-сложни методи.
Отрицателните резултати от бактериологично изследване са от относително значение и показват само, че изследваната част от материала не съдържа необходимите микроби или е нежизнеспособна. Те обаче могат да присъстват в друга порция. Ето защо, например, при изследване за бацилоносителство ( Коремен тиф, дизентерия, дифтерия) са необходими повторни изследвания.