Протозоите са разделени на 4 класа:
При енцистиране микроорганизмът придобива кръгла форма и се покрива със защитна обвивка. Под формата на киста протозоите стават по-малко податливи на неблагоприятни фактори на околната среда.
Следното може да бъде обект на изследване:
Забележка:Има много видове диагностика, ще разгледаме тези, които са най-често срещани в клиничната лабораторна практика.
Индивидуални видове диагностика
Във всеки конкретен случай лаборантът има за задача да открие конкретен патоген, понякога заедно с основния се откриват и други.
Има 6 вида от този микроорганизъм, способен да живее в червата на човека. Клинично значение има само дизентерийната амеба, която се среща във вегетативна форма и под формата на цисти.
Освен това се използват имунологични методи:
- индиректна имунофлуоресценция;
- индиректна аглутинация (INA);
- радиална имунодифузия.
Забележка: серологичните методи не са много информативни и се използват само като допълнение към основните в съмнителни случаи.
Диагностика на ресничести (ресничести)
Патогенната форма на микроорганизмите от този род е балантидий. Това е микроб, който причинява балантидиаза, заболяване, придружено от язвен процес на дебелото черво. Патогенът се открива в нативната намазка под формата на вегетативна форма и киста. Материалът за намазката (изпражнения и слуз) се взема по време на сигмоидоскопско изследване и се засява върху специални среди.
Диагностика на камшичести (лайшмания, лямблия, трипанозома, трихомонада)
Лайшманията, трипанозомите, ламблиите и трихомонадите са опасни за хората.
Лайшмания– микробите, причиняващи лайшманиоза, се изследват в кръвни натривки, материали от костен мозък и изстъргвания от кожни инфилтрати. В някои случаи при диагностициране на лейшмания се използва култура върху хранителни среди.
Трипанозоми– причинители на сънна болест (американска/африканска трипанозомоза или болест на Шагас).
Африканският вариант се определя в началния период по време на изследването на периферната кръв. С напредване на заболяването патологични микроби се откриват в материала от пункции на лимфни възли, а в напреднал стадий - в цереброспиналната течност.
За диагностициране на трипанозоми, ако има съмнение за болест на Chagas, изследваният материал се изследва под микроскоп при ниско увеличение. В този случай петната и дебелата капка се оцветяват предварително.
Трихомонада(чревни, орални,) се откриват чрез микроскопия на материали, взети от засегнатите лигавици.
Идентифициране на спорозои (малариен плазмодий, причинител на кокцидоза и др.)
Най-често срещаният и опасен вид за хората е маларийният плазмодий, който има 4 основни вида патогени: причинител на тридневна малария, четиридневна малария, тропическа малария и овална малария.
Сексуалното развитие на плазмодия (спорогония) протича при комарите Anopheles. Безполов (тъканна и еритроцитна шизогония) – в чернодробната тъкан и еритроцитите на човека. Тези характеристики на жизнения цикъл трябва да се вземат предвид при диагностицирането на малариен плазмодий.
По този начин в кръвта на новоболен пациент могат да бъдат открити зародишни клетки от спорогониевия цикъл. Но в разгара на маларийните атаки шизонтите се появяват в големи количества в кръвта. 
Освен това в различни фази на маларийна треска се появяват различни форми на плазмодий:
- по време на студения период кръвта се изпълва с мерозоити, вид шизонт;
- при повишени температури в еритроцитите се натрупват пръстеновидни трофозоити;
- понижаването на температурата се характеризира с преобладаване на амебоподобни трофозоити;
- в периоди на нормално състояние кръвта съдържа възрастни форми на шизонти.
Изследването на причинителя на маларията (маларичен плазмодий) се извършва в намазка и в дебела капка.
Забележка:Диагнозата на малария чрез изследване на петна и дебели капки кръв понякога е погрешна. Тромбоцитите в кръвта в някои случаи могат погрешно да бъдат приписани на маларийния патоген. Също така понякога фрагменти от левкоцити и други клетки симулират плазмодий.
Основни методи за изследване на протозоите
Нека разгледаме накратко най-често срещаните методи за изследване на наличието на протозои.
Диагностика на протозои чрез нативна цитонамазка и цитонамазка, оцветена с разтвор на Лугол (в изпражнения)
Лекарството се приготвя от емулсия на изпражнения в изотоничен разтвор. Две капки натриев хлор и разтвор на Лугол се нанасят върху предметно стъкло. Тестовият материал се добавя към двата състава с дървена пръчица и след покриване със стъкло се разглежда при различни разделителни способности на микроскопа.
Намерените протозои се записват въз основа на определени характеристики. За точност пригответе 2-3 препарата от един и същи материал. В съмнителни случаи анализът се повтаря няколко пъти в продължение на 2-3 седмици.
Методът може да открие вегетативни и кистозни форми:
- ламблия;
- балантидий;
- дизентерийна амеба.
Наред с патогенните форми се идентифицират и непатогенни протозои. Също така при здрави носители има луминални и кистозни форми.
Важно:изследванията трябва да се извършват многократно, за да се избегнат неточности и грешки.
Резултатът от диагностицирането на протозои с помощта на нативния и оцветен метод на намазка трябва да съдържа описание на формата на патогена (луминал, киста, тъкан).
Изисквания за изследване:
- материалът, взет за анализ (течни изпражнения), се изследва не по-късно от 30 минути след дефекацията;
- формализираните изпражнения трябва да бъдат диагностицирани в рамките на 2 часа след дефекация;
- материалът не трябва да съдържа примеси (дезинфектанти, вода, урина);
- за работа с материала използвайте само дървени стъклени пръчки, които не са подходящи поради изплъзване на слуз;
- Пръчките трябва да се изгорят веднага след употреба.
Метод за запазване (изследване на изпражненията) за диагностициране на протозои
Изследването се извършва чрез фиксиране на протозои с консервант. Разликата между този метод и предишния е, че консервантите ви позволяват да запазите лекарството за дълъг период от време.
Използвани консерванти:
- Бароу. Съдържа консерванти: 0,7 ml натриев хлорид, 5 ml формалин, 12,5 ml 96% алкохол, 2 g фенол и 100 ml дестилирана вода. Състав на оцветителя: 0,01% разтвор на тионин (азура).
- Решението на Сафарлиев. Състав: 1,65 g цинков сулфат, 10 ml формалин, 2,5 g кристален фенол, 5 ml оцетна киселина, 0,2 g метиленово синьо, 100 ml вода. Този консервант се използва в случаите, когато материалът трябва да се съхранява повече от месец.
Празните бутилки се пълнят с консервант, материалът се прехвърля в тях в съотношение 3:1, след което се добавя оцветител, ако е необходимо. Резултатите се оценяват чрез изследване на 2-3 лекарства.
Метод за обогатяване на формалин-етер (анализ за наличие на протозои в изпражненията)
Този диагностичен метод ви позволява да отделите и концентрирате протозойни кисти. За анализа са необходими следните съставки: формалин (10 ml), 0,85 g изотоничен разтвор, дестилирана вода, серен етер, разтвор на Лугол.
Сместа от биоматериал с изброените течности се смесва и центрофугира. Получената утайка на дъното на епруветката се оцветява с разтвор на Лугол и се изследва за наличие на цисти и вегетативни форми.
Метод за откриване на лайшмания (намазка от костен мозък)
За диагностициране на лейшманиоза се използват следните реактиви: смес на Никифоров (серен етер и етилов алкохол), фосфатен буфер, азур-еозин по Романовски.
Субстанцията от костен мозък се поставя много внимателно върху предметно стъкло след специална подготовка. Използва се микроскоп с имерсионна система.
По време на острия период на заболяването в пунктата се откриват голям брой лайшмании.
Забележка:Понякога кръвните клетки могат да приличат на обработена лайшмания, така че е много важно лаборантът да бъде внимателен и да има достатъчно опит, за да ги изследва самостоятелно.
Метод за откриване на лайшмания в цитонамазка от кожен инфилтрат
Необходимите реактиви са подобни на предишния анализ.
Материалът за изследване се получава от съществуващото туберкулозно или язвено съдържание. При съмнение за лайшманиоза изстъргването се прави много внимателно със скалпел, без кръв. След това препаратът се приготвя върху стъкло. За да се гарантира точността на получените резултати, няколко препарата се изследват едновременно.
При наличие на заболяването лайшмания се открива и сред макрофагите, фибробластите и лимфоидните клетки, присъстващи в тестовия материал.
Метод за изолиране на чиста култура от лейшмания, получена чрез изстъргване на патологични тъкани
С този метод за диагностициране на протозои тъканните изстъргвания се поставят в специална хранителна среда, в която Leishmania активно се размножава.
Преди да вземете остъргването, кожата се третира старателно с алкохол, след което се прави разрез на туберкула, от дъното на което се отстранява съдържанието и се поставя в епруветка със среда. Материалът се взема няколко пъти, след което се поставя в различни епруветки. След това се извършва култивиране в термостат при температура 22-24 градуса. Резултатите се оценяват под микроскоп. Този метод се използва, когато други, по-евтини и по-бързи методи за диагностициране на протозои са неефективни.
Можете да видите как тестовете за наличие на протозои с помощта на капка кръв се дешифрират на практика, като гледате видео прегледа:
Лотин Александър, медицински колумнист
Изпражненията се изследват по два метода:
1. Макроскопичен – откриване на хелминти, техните глави, сегменти, фрагменти от стробили. Малки порции изпражнения се смесват с вода в плоска тава или петриево блюдо и се разглеждат при добро осветление на тъмен фон, като се използва лупа, ако е необходимо. Всички подозрителни образувания се прехвърлят с пинсети в друга чаша с вода или върху предметно стъкло в капка разреден глицерол.
С метода защитавайкиЧастта от изпражненията, която се изследва, се смесва с вода в стъклен цилиндър и след утаяване горният слой вода се отцежда. Това се повтаря няколко пъти. Когато течността стане бистра, тя се отцежда и утайката се изследва в петриево блюдо.
2. Микроскопични – за откриване на яйца и ларви на хелминти. Има много методи за изследване.
Нативна цитонамазка – най-разпространеният и технически достъпен метод за изследване. Могат да бъдат открити яйца и ларви на всички хелминти. Въпреки това, с малък брой яйца не винаги е възможно да ги намерите. Затова се използва методът на обогатяване.
1. Метод на Фюлеборг – това е метод за обогатяване, базиран на плаване на хелминтозни яйца в наситен разтвор на NaCl (1,2 – плътност; 400 g NaCl на 1 литър вода; 40% разтвор на NaCl). Методът е по-ефективен от нативната цитонамазка. 2-5 g изпражнения се поставят в стъклени буркани и се пълнят с разтвор на NaCl, разбъркват се и след 45 минути се отстранява полученият филм с метална примка, капка глицерин се поставя върху предметно стъкло. Разгледайте под микроскоп. Недостатъкът на метода е бавното появяване на яйца от различни хелминти, тения джудже - след 15-20 минути, кръгли червеи - 1,5 часа, камшичести червеи - 2-3 часа.
2. Метод на Калантарян – също метод за обогатяване, но се използва наситен разтвор на NaNO 3 (плътност 1,38). Повечето яйца плават; не се изисква тестване на утайка. Недостатъкът е, че задържането на яйца в разтвор за дълго време води до факта, че някои яйца започват да набъбват и се утаяват на дъното, изчезвайки от повърхностния филм.
3. Метод Горячев – на принципа на отлагане на яйца, откриване на малки яйца на трематоди. Като разтвор се използва наситен разтвор на NaCl и върху него внимателно се наслояват 3-4 ml разтвор на фекалии. След 15-20 часа яйцата на трематодите се утаяват на дъното. Течността се отцежда и утайката се поставя върху предметно стъкло и под микроскоп.
4. Метод на усукване на Шулман – за откриване на ларви на хелминти в изпражненията. Изследват се само прясно отделени изпражнения. 2-3 гр. се поставят в стъклен буркан и се добавя 5-кратно количество вода, бързо се разбърква с клечка, без да се докосват стените на буркана - 20-30 минути, след което клечката бързо се отстранява и се капва капка. течността в края се прехвърля върху предметно стъкло и се микроскопира.
5. Метод на Берман – се основава на способността на ларвите на хелминтите да мигрират към топлината и служи за идентифицирането им в изпражненията.
6. Метод на Харада и Мори (метод за отглеждане на ларви) и се препоръчва за тестване за инфекции с анкилостоми. Методът се основава на факта, че при топлина и върху влажна филтрирана хартия яйцата на анкилостомите се развиват във филариформни ларви, които могат лесно да бъдат открити. В средата на лента от филтрирана хартия се нанасят 15 г изпражнения, хартията с изпражнения се поставя в буркан, така че долният край да се потопи във вода, а горният край да се закрепи със запушалка. Бурканът се държи в термостат при 28 0 С за 5-6 дни. Филариформните ларви се развиват през това време и се спускат във водата. Течността се изследва под лупа. Ако е трудно да се открие, течността се центрофугира, като първо се убиват ларвите чрез нагряване до 60 0. Лаборантът трябва да носи ръкавици.
7. Методи за ентеробиоза – идентифициране на яйца на острици и говежди тения.
а) остъргване от перианалните гънки – с памучен тампон, плътно навит на дървена пръчка и навлажнен с 50% разтвор на глицерин. В лабораторията тампонът се измива с 1-2 капки 50% воден разтвор на глицерин.
б) метод на лепкави акари (метод на Греъм)
Адхезивната лента се поставя върху перианалните гънки, след което адхезивният слой се нанася върху предметно стъкло и се изследва под микроскоп.
в) остъргване с очни пръчки (метод на Рабинович). За перианално остъргване се използват стъклени пръчки за очи, чиято широка част е покрита със специално лепило, което позволява да се задържат яйца на острици.
Изследване на кръв, жлъчка, храчки и мускули
Микроскопията на кръвта разкрива ларви на филарии.
Изследване на храчки - яйца на параганим, ларви на кръгли червеи, некатор, стронгилоид, елементи от ехинококов мехур.
Изследване на мускулите - при съмнение за трихинелоза се изследват мускулите на болния или трупа, както и месото, от което се предполага, че е причинило заразата. За целите на трихинелоскопията мускулът се нарязва на малки парчета и се поставя в компресориум, това са две широки дебели стъкла, които смачкват мускулите и се намират ларви на трихинела под формата на капсули - компресионен метод.
Метод на храносмилане - мускулите се пълнят с изкуствен стомашен сок (разтвор на солна киселина и пепсин). Мускулите се усвояват и ларвите се идентифицират лесно. Определяне на интензивността на инвазията: брой ларви до 200 на 1 g мускулна тъкан - умерена интензивност на инвазия; до 500 – интензивен; над 500 – супер интензивна инвазия.
Серологични методи
Преди провеждане на лечение и превантивни мерки за някои хелминтози на селскостопански и търговски животни е необходимо да се направи навременна точна диагноза на заболяването. Съществуват две групи методи за диагностициране на хелминтозата - прижизнени и постмортални. Освен това човек трябва да може да прави разлика между хелминтиозата и други инвазивни и инфекциозни заболявания.
Интравитална диагностика на хелминтози
Диагнозата на хелминтозата по време на живота на животните се поставя въз основа на резултатите от лабораторни методи за изследване и диагностично обезпаразитяване (директни методи), както и имунобиологични реакции (непреки методи). Поддържаща роля в диагностиката на хелминтиазите играят данните от изследвания на междинни гостоприемници (за биохелминтиаза), клинични и епизоотологични наблюдения. Основните диагностични методи са лабораторни изследвания, които често позволяват откриване на патогени на хелминтиаза или техните яйца и ларви в екскрети (изпражнения, урина, храчки), секрети (жлъчка), тъкани (кръв, мускули), органи (парчета кожа), в съдържанието на пунктати и абсцеси.
Лабораторните методи за диагностициране на хелминтиази при животни са лесни за изпълнение и доста точни, така че се използват широко в производствени условия (във ветеринарни лаборатории и други ветеринарни институции). В зависимост от предназначението лабораторните изследвания се разделят на хелминтооскопски, хелминтоларвоскопски и хелминтоскопски методи на изследване.
Хелминтоларвоскопски методиизследването се използва за откриване на ларви на хелминти (диктиокаулус, мюлерия и др.). От тази група често се използва изследването на изпражненията по методите на Берман-Орлов и Вайд.
Хелминтоскопски или макрохелминтоскопскиизследванията се използват за диагностични цели за откриване на хелминти или техни фрагменти (сегменти от гнезда), освободени навън. В практически условия този метод се използва за диагностициране на аскаридоза при прасета, дрепанидотениоза при гъски и други хелминтиази.
От лабораторните методи за диагностициране на хелминтни инфекции при животни голямо практическо значение имат следните: а) хелминтокопрологични изследвания (изследване на изпражнения); б) изследване на секрети от други органи; в) тъканно изследване.
Хелминтокопрологични изследвания
За същите цели е предложено специално устройство, състоящо се от стоманени челюсти, преходни клони и две полусферични повърхности, закрепени към клоните. Вземането на изпражнения от ректума на животните с този уред улеснява работата на ветеринарните работници и подобрява производствения стандарт на тази манипулация.
При зайци изпражненията в размер на няколко топки се отстраняват чрез натискане на коремната стена в ректалната област. Понякога е приемливо да се вземат фекални проби от пода, ако са пресни и знаете от какво животно са. От едно животно се вземат най-малко 10-20 g изпражнения. От птици, животни с ценна кожа, кучета, котки и диви хищници (в зоологическите градини) изпражненията се събират от чистия под на клетките (групови проби).
Всички фекални проби са етикетирани: по ръба на торбата или лист хартия (където няма да влезе в контакт с екскременти) номерът на пробата (понякога името на кравите) е написан с молив. Фекалните проби се придружават от опис, в който се посочва наименованието на фермата, екипа, вида, пола и възрастта на животните (за възрастни - име или инвентарен номер) и датата на вземане на пробите. Препоръчително е в придружаващия документ да се посочи целта на изследването на изпражненията (например за наблюдение на извършеното обезпаразитяване). Необходимо е да се опитате бързо да доставите фекални проби във ветеринарната лаборатория и да ги изследвате незабавно, тъй като при стайна температура, след 16-20 часа, ларвите излизат от яйцата на чревните стронгили, което усложнява диагностиката на диктиокаулоза и протостронгилидоза, т.к. както и други хелминтни инфекции.
Ако фекалните проби не са изследвани в деня на вземане, те се поставят в хладилник или сутерен при температура не по-висока от 10°. Дезинфектантите не спират развитието на ларвите в яйцата на хелминтите. Резултатите от изследването на изпражненията се записват в специален дневник.
Оборудване за хелминтокопрологични изследвания.Надеждността на хелминто-копрологичните изследвания до голяма степен зависи от качеството на лабораторното оборудване. През 1968 г. в Украйна е разработен набор от стандартно оборудване за масово изследване на изпражненията за хелминтни инфекции. Състои се от артикули, изработени предимно от удароустойчив полистирол в два цвята, които лесно се перат и неутрализират (издържат на кипене), а също така са удобни за транспортиране. Комплектът включва чаши с различна вместимост, фунии, конични епруветки, цедки с различни размери, стойка с пет летви (всяка за шест фунии), кювети (според размера на стойката), кутии за съхранение на съдове, както и гумени крушки, стъклени пръчки и метални примки (фиг. 1).
За разлика от използваното досега хетерогенно оборудване, новият комплект повишава ефективността на лабораторните изследвания на изпражненията и производителността на труда на ветеринарните работници, позволява по-широк спектър от количествени хелминтокопрологични изследвания с помощта на стандартизирани методи (контрол на обезпаразитяването), а също така подобрява естетиката страна на тази работа.
Има качествени и количествени методи за изследване на изпражненията.
Качествени хелминтокопрологични изследвания
Качествените методи на изследване позволяват да се определи кои хелминти са заразени животните.
Хелминтоовоскопски методи.За интравитална диагностика на хелминтни инфекции са предложени голям брой методи за хелминтовоскопия, от които ще разгледаме само тези, които се използват по-често във ветеринарната практика.
Повечето хелминтокопрологични диагностични методи се основават на разликата в специфичното тегло на яйцата, ларвите на хелминтите или техните фрагменти, от една страна, и течността, в която са суспендирани изследваните изпражнения, от друга. В зависимост от съотношението на специфичното тегло на тези компоненти се разграничават флотация, седиментация и комбинирани методи.
Флотационни методи.При флотационните (плаващи) методи се използват течности (наситени солеви разтвори), чието специфично тегло е по-голямо от теглото на яйцата на хелминтите. В лабораторната практика най-широко използваният разтвор е наситен разтвор на готварска сол (относително тегло 1,18). За да се приготви такъв разтвор, натриевият хлорид се добавя постепенно към тиган с вряща вода, като се разбърква, докато на дъното се образува малка утайка (около 400 g трапезна сол на 1 литър вода). Горещият разтвор се филтрира в бутилка през няколко слоя марля или памучна вата и се използва след охлаждане (на дъното на бутилката трябва да се образува кристална утайка).
По-рядко във ветеринарните лаборатории се използват наситени разтвори на магнезиев сулфат със специфично тегло 1,35 (920 g на 1 литър гореща вода), натриев хипосулфит със специфично тегло от 1,37 до 1,41 в зависимост от температурата на околната среда (1750 g на 1 l от гореща вода) и натриев нитрат със специфично тегло 1,4 (съотношение на нитрат към гореща вода 1:1).
Метод на Фуллеборнхарактеризиращ се с лекота на прилагане и висока ефективност при повечето нематоди и цестодиази на животни, поради което се нарежда на първо място сред другите хелминто-копрологични диагностични методи. Поставете 3-5 g изпражнения в стъклена, полистиролова или пластмасова чаша с вместимост 50-100 ml и при разбъркване със стъклена пръчка постепенно добавете наситен разтвор на готварска сол (натриев хлорид) със скорост 15- 20 части флотационна течност на една част изпражнения. Плътните овчи изпражнения могат първо да се смилат с малко количество солен разтвор в порцеланов хаван, след което суспензията се излива в чаша, като се добавя необходимото количество разтвор на натриев хлорид. Големите частици, които изплуват, незабавно се отстраняват с пръчка и е препоръчително да филтрирате фекалната суспензия в друга чаша през сито (понякога се използват цедки за мляко). След утаяване на заредената проба за 45-60 минути, три капки от повърхностния филм се отстраняват с метална примка, поставят се върху предметно стъкло и се изследват микроскопски без покривно стъкло. След всеки тест бримките се измиват в чаша вода (вместо да се изгарят в спиртна лампа, както се препоръчва в някои ръководства).
Метод на Калантарян- модифициран метод на Fulleborn. Като флотационна течност се използва наситен разтвор на натриев нитрат. Времето за утаяване на суспензията е 15-30 минути. Използва се за диагностика на акантоцефалоза.
Методи за утаяване.Методите за утаяване използват течности с по-ниско специфично тегло от специфичното тегло на яйцата.
Метод на последователно пране.Малко количество фецес (5 g) се разбърква в чаша с 10 пъти количество вода. Сместа се прецежда в голяма чаша и се добавя вода, след което филтратът се оставя да престои 5 минути. След това горният слой течност се отцежда или изсмуква със спринцовка, докато се образува утайка; добавете същото количество вода към утайката, разбъркайте и оставете отново за 5 минути. Тези манипулации се повтарят, докато горният слой течност в стъклото се избистри. Течността се отцежда за последен път, а утайката се нанася върху стъкло или в бактериологична чиния и се изследва под микроскоп. Този метод често се използва за диагностициране на повечето трематоди и акантоцефалоза.
Метод на Горшковсе основава на принципа на утаяване, последвано от концентрация на яйца от хелминти. 150-300 g конски изпражнения се поставят върху метално сито или марля в голяма стъклена фуния с диаметър 15-20 cm на върха. На нея се поставя гумена тръба с дължина 10-15 cm със скоба на края долния край на фунията. Изпражненията се разхлабват и се пълнят до горе с топла вода. Изпражненията се държат във фунията от 4 часа до един ден, след което скобата се отваря внимателно, част от течността се освобождава в центрофужни епруветки и се центрофугира в продължение на 3 минути. След това течността се отцежда и утайката се изследва под микроскоп. Този метод се използва за диагностициране на драгеиоза и хабронематоза при коне.
Комбинирани методи.Въз основа на принципа на утаяване и флотация на яйца от хелминти, те са по-ефективни в сравнение с предишни методи на изследване. Поради тяхната сложност, тези методи имат относително ограничено приложение в индустриални условия.
Метод на Дарлинг.Малко количество изпражнения (3-5 g) се разбърква в чаша с 20-30 ml вода, сместа се филтрира в центрофужни епруветки и се центрофугира за 1-2 минути, след което горният слой течност се отцежда и към утайката се добавя смес от равни части глицерин и готварска сол. Сместа в епруветките се разклаща и центрофугира втори път. Яйцата, които изплуват на повърхността, се отстраняват заедно с филма от суспензията с помощта на телена примка, изтръскват се върху предметно стъкло и се изследват под микроскоп. При липса на глицерин изпражненията могат да се смесят с наситен разтвор на натриев хлорид преди вторичното центрофугиране.
Метод на Щербович.Техниката за изследване на изпражненията е подобна на предишния метод. Различава се от него по това, че преди вторичното центрофугиране към утайката се добавя наситен разтвор на натриев хипосулфит (за макроканторинхоза на прасета) или магнезиев сулфат (). В сравнение с метода на Дарлинг, този метод е по-ефективен.
Флотационно-седиментационен метод на Демидовпрепоръчва се за диагностика на фасциолиаза, както и други трематоди по преживни животни. Фекална проба (3 g от овца и 5 g от говеда) се поставя в чаша от 200 ml и в нея се налива до горе наситен разтвор на готварска сол и се разбърква добре със стъклена пръчица, след което суспензията се оставя да престои. престои 15-20 минути. Грубите частици, които изплуват на повърхността, се отстраняват с хартиена лъжичка, а супернатантната течност се изсмуква със спринцовка (при изследване на голям брой проби течността може да се източи), оставяйки 20-30 ml утайка на дъното . Добавете вода към утайката до пълния обем на чашата и разбъркайте добре. Сместа се прецежда в обикновена чаша през тензух или метална цедка и се оставя за 5 минути. Супернатантната течност се изсмуква, като на дъното остават 15-20 ml утайка, която се прехвърля в конична чаша, изплаква се в обикновена чаша и се излива в малка. Суспензията се оставя да се утаи в конична чаша за 3-5 минути, след което течността се изсмуква (тази процедура се повтаря). Изчистената утайка се прехвърля върху предметно стъкло и се изследва под микроскоп. Този метод е по-ефективен от метода на последователно измиване.
Хелминтоларвоскопски методи. Метод Берман-Орлов.За изследване на изпражненията използвайте апарат, състоящ се от средна фуния (пластмаса, полистирол или стъкло), гумена тръба (с дължина 10-15 см), свързана в горния край към фунията, скоба, прикрепена към долния край на гумената тръба. , метално сито или парче марля и статив (за едно или повече устройства). Монтираният апарат се напълва с топла вода (35-38°). 10-15 g пресни изпражнения се поставят върху сито или се увиват в марля и внимателно се спускат във фуния. Изпражненията от овце се държат в апарата 2-4 часа, а от телета - най-малко 6-7 часа. След това скобата на тръбата се разхлабва и изтичащата течност се събира в епруветка и се центрофугира за 2-3 минути. След това горният слой течност се отцежда чрез бързо обръщане на епруветката, а течността, останала на дъното, се прехвърля върху предметно стъкло и се изследва под микроскоп. Използването на скоби върху гумена тръба в апарата Baermann е свързано с неудобство, поради което в много ветеринарни лаборатории долните краища на гумените тръби са директно свързани с малки епруветки. Преди изследване на утайката под микроскоп, течността не се центрофугира.
Изпражненията на преживни животни могат да бъдат изследвани за белодробни нематоди (особено в експедиционни условия) с помощта на опростения метод на ларвоскопия на хелминти (без използването на фунии). За целта се използват малки полуконични чаши (50 мл). Фекалните проби се поставят в цедки или се увиват в марля и се поставят в чаши с вода. След няколко часа изпражненията се отстраняват, течността от чашата се изсмуква или изцежда, а утайката се изследва под микроскоп.
Методът на Vaid.Няколко топчета изпражнения от дребни преживни животни се поставят в бактериологична чиния или върху часовниково стъкло и се навлажняват с малко количество топла вода. След 10-20 минути изпражненията се отстраняват, а останалата течност се изследва под микроскоп с малко увеличение. Ефективността на този метод е значително по-ниска в сравнение с предишния метод, така че по-рядко се използва за диагностициране на диктиокаулоза и протостронгилоза при овцете.
Метод за диференциална диагностика на стронгилатоза на базата на инфекциозни ларви.Причинителите на повечето чревни стронгилатози имат почти същата структура на яйцата, поради което с хелминтоовоскопия може да се направи само групова диагноза (например стронгилатоза).
За да се установи по-точна (обща) диагноза, ветеринарните лаборатории понякога получават култура от инфекциозни стронгилни ларви. Около 5 g изпражнения се поставят в бактериологична чиния, затварят се с капак и се поставят в термостат при температура 25-30° за една седмица. След това изпражненията с ларви се изследват по метода на Берман-Орлов (за изолиране на инфекциозни ларви от изпражненията).
Инфекциозните ларви от различни родове чревни стронгилати се различават по размер на тялото, структура на каудалния край на капачката и по брой на чревните клетки. Например, ларвите на езофагостома са по-големи (до 1 mm дължина), нишковидният опашен край на капачката е дълъг, а червата има 20-32 клетки; Ларвите на Haemonch са със средна дължина (около 0,8 mm), с нишковидна опашка на капачката, червата имат 16 клетки.
Периодично измиване и утаяване на изпражненията се повтаря, докато горният слой се изчисти. Горният слой течност се отцежда за последен път, а утайката се изследва на малки порции в кювети с черно и бяло дъно. Откритите хелминти се събират с помощта на пинсети, дисекционни игли и четки, изследват се под микроскоп и след това се прехвърлят в консервираща течност. За идентифициране на малки нематоди утайката се изследва допълнително на части с помощта на бинокъл или триножна лупа с 10-20x увеличение.
Количествени хелминто-копрологични изследвания
Стандартизиран метод на Фулеборнпо-малко точен в сравнение с метода на Stoll, но поради лекотата на прилагане той се използва широко във ветеринарната практика за наблюдение на ефективността на обезпаразитяването на животните. По отношение на техниката стандартизираният метод наподобява други методи за качествено хелминто-овоскопско изследване. Въпреки това, той има редица характеристики, основните от които са следните: 1) количеството на изпражненията трябва да бъде равно; 2) ястия с еднакъв обем; 3) времето за утаяване на водните суспензии на изпражненията е същото; 4) бримки с еднакъв диаметър, изследване на равен брой капки.
За приближаване на интензивността на инвазията на диктиокаулоза и прогостронгилидоза при преживни животни може да се използва стандартизираният метод на Берман-Орлов. Надеждността на резултатите нараства с увеличаване на броя и честотата на изследванията.
Изследване на секрети от други органи
Изследването на съдържанието на конюнктивалните кухини се използва за диагностициране на thelaziosis при говеда (патоген: Thelazia rhodesi). С помощта на спринцовка конюнктивалните кухини се напояват с воден разтвор на йод; изтичащата течност се събира в кювета или бъбрековидно легенче и се проверява за наличие на тетелии. В този случай водният разтвор на йод също има лечебен ефект.
Изследването на отделянето от клоаката се извършва за интравитална диагностика. Изтичащата слуз се поставя върху предметно стъкло и се изследва под микроскоп за откриване на яйца на патогена.
Изследването на остъргвания от перианалните гънки е основният диагностичен метод. С шпатулообразна клечка или кибрит, навлажнена със смес от равни части глицерин и вода, се прави остъргване от перианалните гънки на перинеума и вътрешната повърхност на корена на опашката. Остъргването се прехвърля върху предметно стъкло в капка глицерол с вода, покрива се с покривно стъкло и се изследва под микроскоп. Откриването на оксиур яйца потвърждава клиничната диагноза.
Изследването на кожни остъргвания от „летни язви“ се препоръчва за диагностициране на кожната форма на дашейоза и хабронематоза. Взима се остъргване от прясно разязвената повърхност на кожата и се поставя в капка разредена солна киселина (1:1000). След това препаратът се разцепва с дисекционни игли, покрива се с покривно стъкло и се изследва под микроскоп за откриване на ларвите на драши или габронема.
Изследване на тъкани
Изследването на кожата на говеда (според Gnedina) се използва за диагностициране на онхоцеркоза. След подготовката на хирургичното поле върху долната коремна стена на животното се изрязва малко парче кожа с дебелина 2 mm (приблизително колкото малко овесено зърно) и раната се смазва с йодна тинктура. Във ветеринарна лаборатория това парче кожа се поставя върху предметно стъкло във физиологичен разтвор, разцепва се с дисекционни игли, след което всичко се излива в центрофужна епруветка и се поставя в термостат за няколко часа при температура 37-38 ° . След това кожните влакна се отстраняват, течността се центрофугира и седиментът се изследва под микроскоп за откриване на подвижни микроонхоцерци.
Изследване на мускулни частичесто се извършва посмъртно. Понякога се използва метод на биопсия за интравитална диагностика на трихинелоза. Чрез операция се изрязва парче мускул (например от външните мускули на ухото), от което се приготвят малки участъци (с размер на овесено зърно). Последните се поставят върху долното стъкло на компресора, покриват се с горното стъкло и се съединяват с винтове до пълното им изравняване. Срезовете се разглеждат под трихинелоскоп, микроскоп с ниско увеличение, с помощта на проекционен трихинелоскоп или проекционна камера KT-3.
Диагностично обезпаразитяване
За диагностично обезпаразитяване се избират няколко животни, изолират се от останалото поголовие и им се дава антихелминт в терапевтична доза. Изпражненията, отделени от тези животни в рамките на един до два дни, се събират и подлагат на хелминтоскопия за откриване на причинителя на заболяването. В производствени условия често се извършва диагностично обезпаразитяване за интравитална диагностика на мониезиоза при преживни животни, дрепанидотениоза при гъски, цестодоза при месоядни животни, аскаридоза при свине и аскаридоза при пилета.
Имунологични реакции
Предложени са алергични кожни реакции за интравитална диагностика на фасциолиаза по овцете, описторхиаза на месоядните и мониезиоза по овцете, хемонхиаза и диктиокаулоза по овцете, онхоцеркоза по говеда и коне и трихинелоза по свине.
Сред серологичните методи трябва да се спомене реакцията на сколексопреципитация, която позволява да се диагностицират ранните стадии на ехинококоза и реакцията на утаяване с помощта на живи ларви на Ascaris и Trichinella за идентифициране на съответните хелминтни инфекции.
Изследване на междинни гостоприемници на хелминти
Резултатите от хелминтологичното изследване на животни трябва винаги да се допълват от данни от проучвания за хелминтни инфекции на междинни гостоприемници. Те позволяват да се изясни хелминтологичната ситуация и да се предвиди появата на хелминтиази. Междинни гостоприемници на хелминти могат да бъдат мекотели (сладководни и земни), ракообразни (циклопи, дафния, амфиподи, водни магарета), земни червеи, насекоми (мухи, мушици, хапещи мушици, водни кончета, мравки, бръмбари), почвени акари.
Плътността (количественият състав) на отделните видове междинни гостоприемници има епидемиологично значение. Колкото по-високо е, толкова повече възможности има животните да се заразят с хелминтни инфекции. Наземните междинни гостоприемници се намират на различни места (в купища тор, на падоци, пасища и др.). Водните междинни гостоприемници живеят в огромни количества по бреговете на стоящи плитки водни тела и в гъсталаците на растенията. На тези места животните (особено) често се заразяват с хелминтиази.
Междинните гостоприемници трябва да се изследват за наличие на ларви на хелминти в свежо (за предпочитане живо) състояние под бинокулярна лупа или микроскоп с ниско увеличение. Ларвните стадии на хелминтите в тялото на междинните гостоприемници са на различни етапи на развитие, но най-забележими са инфекциозните ларви. В резултат на изследването се определя степента (процент) и интензивността (количеството) на заразяване на междинните гостоприемници от ларвите на определени видове хелминти.
Орибатидни или бронирани акари (с дължина до 1 mm).Те живеят в горните слоеве на почвата. Това са междинни гостоприемници на мониезии по преживни животни и други хелминти. За откриване на ларви на тения (цистицероиди) обвивката на орибатиден акар първо се разделя на парчета в капка вода върху предметно стъкло (под контрола на лупа), след това образецът се покрива с покривно стъкло и се изследва под микроскоп . Цистицеркоидите на мониезия са с кръгла форма (0,15-0,19 mm в диаметър), снабдени с четири издънки и опашен придатък. Те са много деликатни, така че компресорният тест за акари не трябва да се използва.
Земните червеи от други родове (Criodrilus, Eophila) живеят във водни тела с блатисти, тинести брегове. Те са регистрирани като междинни гостоприемници на причинителите на хистрихоза и пороцекоза по патиците. Ларвата на Histrichis е много голяма (до 3 см дължина), белезникава на цвят, видима през кожата на червея под формата на вълнообразна ивица. Ларвите на Porrocecum са десет пъти по-малки от предишната ларва (2,5-3 mm); те се откриват в кръвоносните съдове при изследване с компресор на земни червеи под микроскоп.
Изследване на амфиподи.Амфиподите достигат дължина до 2 см и живеят в морски и сладководни водоеми. Те са регистрирани като междинни гостоприемници на патогени на полиморфоза. стрептокароза и тетрамероза на птици. Ларвите се откриват при компресорно изследване на тези ракообразни. Ларвите (акантелите) на полиморфуса са с овална форма, оранжеви на цвят, с дължина до 1 mm, видими макроскопски.
Изследване на водни бури.Водните магарета са с дължина от 1 до 1,5 см, живеят в сладководни водоеми и са междинни гостоприемници на причинителя на филиколозата по птиците. При изследване с компресор може да се открие ларва (акантела), която е бяла, с овална форма, с дължина 0,7 mm.
Можете също така да изследвате други междинни гостоприемници (мушици, мушици, мухи, водни кончета, бръмбари, мравки).
Флуоресцентна микроскопия
Методът на флуоресцентната микроскопия (според В. Г. Евранова) е нов метод за диагностика на хелминтиазите. Тя ви позволява да разграничите яйца от един и същи тип от различни видове хелминти, както и да разграничите жизнеспособните яйца и ларви от мъртвите. Преди това яйцата на трематоди, цестоди и нематоди се третират с разтвори на акридин оранжево и други флуорохроми. Жизнеспособните яйца и ларвите на нематодите не светят или светят слабо, докато мъртвите светят ярко и са оранжеви, жълто-зелени или жълти.
С флуоресцентна микроскопия е възможно да се разграничат яйцата на основните месоядни цестоди, яйца на патогени и хетерацидоза на пилета, които, както е известно, имат подобна структура по размер, форма и цвят, както и да се разграничат жизнеспособни и мъртви ооцисти от кокцидии.
Препаратите се разглеждат под микроскоп MUF-3 или ML-2. Техниката на флуоресцентна микроскопия е относително проста и може да се използва в индустриални условия (ветеринарни лаборатории).
От други изследвания, които са от второстепенно значение при установяване на диагнозата хелминтоза. Можете да посочите такива методи като определяне на морфологичния състав на кръвта (като се вземе предвид еозинофилията) и методът за определяне на протеиновата фракция.
Кратка характеристика на яйцата на хелминти
Яйцата на представители на различни класове се различават по размер, цвят, форма, структура на черупките и вътрешно съдържание.
Яйца на трематоди.Най-често овална форма с капачка на единия полюс. Черупката е гладка. При някои видове черупката е снабдена с нишки (процеси) и туберкули. Цветът на яйцата варира от светлосив до кафяв (обикновено жълт).
Цестодни яйца.Има два вида: тения и тения. В lentenes те приличат на трематодни яйца (овал с капачка). Яйцата на тения се различават рязко по структура от яйцата на хелминти от други класове: те често са със среден размер, кръгла форма, сив цвят, зрели (вътре в ембриона има онкосфера с три чифта ембрионални куки).
Яйца на нематоди.Те се различават от яйцата на трематодите по липсата на капак; от цестодни яйца - липса на онкосфера.
Размерите, формата, структурата и цветът на черупките на яйцата на нематодите са много разнообразни. Външната обвивка може да бъде гладка, грудкова, клетъчна: дебелината на черупките варира от тънка (при стронгила) до дебела (при трихоцефал). Повечето нематоди имат овални, симетрични яйца, някои имат полуцилиндрични яйца (в дрешките). Повечето нематоди освобождават незрели яйца на етапа преди сегментиране или няколко топки на смачкване; малцинство освобождава зрели яйца (вътре в яйцето се образува ларва).
Acanthocephalan яйца.Имат овална, елипсовидна и вретеновидна форма: размерът им е среден до голям. Яйцата, освободени във външната среда, съдържат вътре ларва - акантор с десет ембрионални куки (зрели).
Клинични наблюдения
Епизоотологични данни
При диагностицирането на много хелминтози на селскостопански животни епидемиологичните данни (неблагоприятни условия на фермата за определени заболявания, сезон на годината, възраст на болните животни, естество на пасища и водоизточници, метеорологични условия и др.) Оказват значителна помощ. Например, масово заболяване с признаци на коремна воднянка и смърт на овце през есента след дъждовно лято и използването на влажни зони в пасища за паша дава основание да се подозира остра форма на фасциолиаза. Заболяването при летните гъски с признаци на храносмилателни разстройства (диария) и нервната система (пареза) след пашата им на плитко застояло водно тяло, обилно населено с циклоп, е основата за установяване на предполагаема диагноза дрепанидотениаза. Смъртта на агнетата през пролетта (3-4 седмици след началото на пашата) трябва да предизвика съмнения за заболяването на младите овце от мониезиоза. Необходимо е също така да се вземат предвид зоналните характеристики на хелминтиазите при домашни животни, за предпочитане в комбинация с клинични наблюдения.
Първоначално ниво на знания и умения.
Ученикът трябва да знае:
1. Представители на трематодите opisthorchis, paragonima, fasciola, dicrocoelium.
2. Жизнени цикли, пътища на инфекция на трематоди, клинична картина на заболяването, срок на годност на изпражненията
Студентът трябва да може да:
1. Идентифицирайте яйцата на трематодите, като използвате снимки и таблици.
2. Формирайте превантивни мерки.
3. Изготвяне на нативна цитонамазка, голяма цитонамазка, Като цитонамазка, оценка на работата, работа с микроскоп.
4. Идентифицирайте яйцата на трематоди в препаратите, спазвайте правилата за защита на труда и спазвайте санитарните и епидемиологичните правила. режим.
Структура на урока:
Теоретична част:
Ø Микролекция.
Практическа част:
Ø Изготвяне на нативна цитонамазка, голяма цитонамазка, Като цитонамазка, оценка на ефективността, микроскопия
Микролекция.
Събиране и доставка на материал
Окончателната диагноза на хелминтозата може да се установи само като се вземат предвид резултатите от лабораторните изследвания. Основният метод за лабораторна диагностика на хелминтни инфекции е откриването на яйца или ларви на хелминти в изпражнения, урина, кръв и други биологични течности чрез микроскопско изследване. Материалите за изследване включват изпражнения, съдържимо на дванадесетопръстника, кръв, храчки, биопсична тъкан и други материали.
Събирането на материал за изследване се извършва в чисти стъклени или пластмасови контейнери, които са придружени от направление, посочващо пълното име на обекта. По време на масови прегледи е разрешено събирането на изпражнения в чаши от восъчна хартия или найлонови торбички.
Изпражненията за анализ трябва да бъдат доставени в лабораторията не по-късно от един ден, а при съмнение за стронгилоидоза - веднага след екскрецията им. Ако това правило е нарушено, поставянето на диагноза поради унищожаването на яйца или ларви често става трудно или невъзможно.
За идентифициране на яйцата и ларвите на някои видове хелминти се използват специални методи: методът на Борман, перианално изстъргване, методът на намазка с помощта на лепяща лента, култивиране на ларви върху филтърна хартия (метод Харада и Мори) и др.
Практическа част:
Най-често срещаните методи за изследване на изпражненията за наличие на яйца от хелминти са нативната цитонамазка, дебелата цитонамазка под целофан и методите с голяма цитонамазка.
Когато изследвате яйцата на хелминти под микроскоп, препоръчително е да сравните видимото изображение с неговите характеристики в ръководството за яйца на хелминти.
Метод нативна цитонамазка
Оборудване:
стъклени слайдове;
широка кювета;
пластмасови пръчки;
молив;
50% воден разтвор на глицерин (смесете равни части глицерин и дестилирана вода);
съд с 0,5% разтвор на полидез;
микроскоп.
Напредък
1. Поставете предметните стъкла в кювета и ги номерирайте.
2. Нанесете 2 капки от 50% воден разтвор на глицерол с пипета на разстояние 4 cm една от друга върху предметни стъкла.
3. Вземете парче изпражнения с пръчица с размер на кибритена глава (30-50 mg), добавете го към капка глицерин и го смилайте до еднородна суспензия.
4. На всяко предметно стъкло се приготвят две нативни намазки, които не трябва да се сливат помежду си и да не достигат до краищата, за да не оцветят пръстите на лаборанта. За всеки тест се използват нови клечки.
5. Разгледайте препаратите, без да ги покривате с покривни стъкла, под микроскоп (8x обектив, 10-15x окуляр).
6. В края на изследването потопете препаратите в съд с 0,5% разтвор на полидезис.
Метод на дебело намазване под целофан.
Методът е предложен от K. Kato, M. Miur през 1954 г. Намазката е слой от неразредени изпражнения върху предметно стъкло, пресовано под лист от тънък хигроскопичен целофан, импрегниран с глицерин.
Ориз. Приготвяне на дебел намазка под целофан:
а - нативна цитонамазка; б - притискане на бучка изпражнения, покрита с целофан с гумена запушалка; c - дебело петно под целофан (според Yu.A. Berezantsev и E.G. Avtushenko, 1976)
Оборудване:
широка кювета;
22x30 mm целофанови ленти, третирани със смес Kato за 24 часа;
Kato смес (3% разтвор на малахитово зелено - 6 ml, 6% разтвор на фенол - 500 ml, глицерин - 500 ml, 3,5 ml от сместа са достатъчни за 100 ленти);
големи гумени тапи;
анатомични пинсети;
пластмасови пръчки;
молив;
микроскоп.
Напредък
1. Поставете слайдовете в кювета и номерирайте слайдовете.
2. Загребете с пръчица количество фецес колкото половин грахово зърно (50-60 mg) и го поставете върху предметно стъкло в центъра.
3. Отстранете обработената с Kato целофанова лента от буркана с пинсети и я поставете върху пробата от изпражнения върху предметно стъкло.
4. Натиснете целофана с гумена запушалка, така че изпражненията да се разпределят равномерно, без да изтичат по краищата на лентата.
5. Оставете препарата да се избистри за 60 минути и след това прегледайте под микроскоп (8-40x обектив, 10x окуляр).
6. В края на изследването поставете лекарството в съд с 0,5% разтвор на полидез.
7. Почистете работното място, измийте ръцете си.
Метод на голям удар.
Методът е предложен от Ю.А. Березанцев и Е.Г. Avtushenko през 1973 г. Същността на метода се основава на използването на бинокулярен микроскоп и нативна намазка върху стъкло 6x9 cm, което позволява едновременно да се изследват до 200-300 mg фекалии.
Оборудване:
слайдове 6х9 см и 7х10 см;
пластмасови пръчки;
50% разтвор на глицерин (глицерин и дестилирана вода в равни части);
съд с 0,5% разтвор на полидез;
микроскоп;
кювета за емайл;
молив.
Напредък
1. Поставете стъклени предметни стъкла с размери 7x10 cm в кювета и номерирайте предметните стъкла.
2. След това поставете втори слайд 6x9 см върху всеки слайд.
3. Пипетирайте 15-20 капки от 50% разтвор на глицерол върху предметно стъкло 6x9 cm.
4. Вземете от различни места с клечка парчета изпражнения с размер на средно грахово зърно (200-300 mg) и ги потопете в разтвор на 50% глицерол върху предметно стъкло.
5. Стрийте с пръчица парче изпражнения в глицерин до образуване на еднородна суспензия, така че площта, която заема да е около 33-34 см2. Не покривайте намазката с покривни стъкла.
6. Хванете голямо покривно стъкло с размери 7x10 cm за краищата заедно с голям петно върху него (за да избегнете замърсяване на пръстите си).
7. Изследвайте голямо петно при увеличение 34x (2x обектив, 17x окуляр) и 50x (4x обектив, 12,5x окуляр). В съмнителни случаи изследванията се извършват при голямо увеличение.
8. В края на изследването поставете лекарството в съд с 0,5% разтвор на полидез.
9. Почистете работното място, измийте ръцете си.
С този метод на изследване се определят големи яйца на хелминти (кръгли червеи, камшични червеи, анкилостоми, острици, тении, тениади, фасциоли). Те изглеждат малко по-различно и изискват известен опит, за да ги забележите бързо. Големи петна могат да се използват за тестване за яйца на шистозоми и ларви на змиорки. Една голяма цитонамазка съдържа 6-10 пъти повече тестов материал от нативната цитонамазка. Ефективността му е също толкова пъти по-висока.
Свързана информация.