روش اصلی تشخیص میکروبیولوژیکی و "استاندارد طلایی" میکروبیولوژی، روش باکتریولوژیک است.

هدف از روش باکتریولوژیکشامل جداسازی یک کشت خالص از پاتوژن از ماده آزمایش، جمع آوری یک کشت خالص و شناسایی این فرهنگ با مجموعه ای از خواص: مورفولوژیکی، رنگی، فرهنگی، بیوشیمیایی، آنتی ژنی، با حضور عوامل بیماری زایی، سم زایی و تعیین حساسیت آن است. به داروهای ضد میکروبی و باکتریوفاژها.

روش تحقیق باکتریولوژیک شامل:

1. تلقیح مواد مورد آزمایش در محیط های غذایی

2. جداسازی فرهنگ ناب

3. شناسایی میکروارگانیسم ها (تعیین گونه).

جداسازی و شناسایی کشت های خالص باکتری های هوازی و بی هوازی شامل مطالعات زیر است:

مرحله I (کار با مواد بومی)

هدف: به دست آوردن کلنی های ایزوله

1. میکروسکوپ اولیه یک ایده تقریبی از میکرو فلور می دهد

2. تهیه مطالب برای تحقیق

3. کاشت روی محیط های غذایی جامد برای به دست آوردن کلنی های جدا شده

4. جوجه کشی در دمای مطلوب، اغلب 37 درجه سانتیگراد، به مدت 18-24 ساعت

مرحله دوم

هدف: به دست آوردن فرهنگ ناب

1. مطالعه ماکروسکوپی کلنی ها در نور عبوری و بازتابی (ویژگی های اندازه، شکل، رنگ، شفافیت، قوام، ساختار، کانتور، سطح کلنی ها).

2. بررسی میکروسکوپی کلنی های جدا شده

3. تست تحمل هوا (برای تایید وجود بی هوازی های سخت در مواد آزمایش).

4. کاشت کلنی های مشخصه یک گونه خاص در محیط های تجمع کشت خالص یا محیط های انتخابی و جوجه کشی در شرایط بهینه.

مرحله III

هدف: شناسایی فرهنگ خالص جدا شده

1. برای شناسایی فرهنگ انتخاب شده بر اساس مجموعه ای از خواص بیولوژیکی، موارد زیر مورد مطالعه قرار می گیرد:

· مورفولوژی و خواص رنگی

· خواص فرهنگی (ویژگی رشد در محیط های غذایی)

· خواص بیوشیمیایی (فعالیت آنزیمی میکروارگانیسم ها)

خواص سرولوژیکی (آنتی ژنیک)

· خواص بیماریزا (توانایی تولید عوامل بیماری زایی: سموم، آنزیم ها، عوامل دفاعی و تهاجمی)

بیماری زایی برای حیوانات

· فاگولیس پذیری (حساسیت به باکتریوفاژهای تشخیصی)

حساسیت به آنتی بیوتیک ها

· سایر خواص فردی

مرحله چهارم (نتیجه گیری)

بر اساس ویژگی های مورد مطالعه، نتیجه گیری در مورد فرهنگ انتخاب شده انجام می شود.

مرحله اول تحقیق.بررسی مواد پاتولوژیک با میکروسکوپ شروع می شود. میکروسکوپ مواد بومی رنگ آمیزی شده این امکان را فراهم می کند که تقریباً ترکیب چشم انداز میکروبی شی مورد مطالعه و برخی از ویژگی های مورفولوژیکی میکروارگانیسم ها را ایجاد کند. نتایج میکروسکوپ مواد بومی تا حد زیادی مسیر تحقیقات بیشتر را تعیین می‌کند؛ سپس با داده‌های به‌دست‌آمده از تلقیح در محیط‌های غذایی مقایسه می‌شود.

اگر مقدار کافی از میکروارگانیسم‌های بیماری‌زا در نمونه وجود داشته باشد، تلقیح بر روی محیط‌های غذایی جامد (برای به دست آوردن کلنی‌های جدا شده) انجام می‌شود. اگر تعداد کمی باکتری در ماده آزمایش وجود داشته باشد، تلقیح بر روی محیط های غذایی غنی شده مایع انجام می شود. محیط های غذایی با توجه به نیاز میکروارگانیسم ها انتخاب می شوند.

کشت میکروارگانیسم ها تنها در صورتی امکان پذیر است که شرایط بهینه برای زندگی آنها ایجاد شود و قوانینی رعایت شود که از آلودگی (آلودگی تصادفی توسط میکروب های خارجی) مواد مورد مطالعه جلوگیری کند. شرایط مصنوعی که از آلودگی کشت توسط گونه های دیگر جلوگیری می کند را می توان در یک لوله آزمایش، فلاسک یا ظرف پتری ایجاد کرد. تمامی ظروف شیشه ای و محیط های کشت باید استریل بوده و پس از تلقیح مواد میکروبی، از آلودگی های خارجی که با استفاده از درپوش ها یا درپوش ها و درب های فلزی حاصل می شود، محافظت شود. دستکاری با مواد آزمایش باید در منطقه شعله یک لامپ الکلی انجام شود تا از آلودگی مواد از محیط خارجی و همچنین به منظور رعایت مقررات ایمنی جلوگیری شود.

تلقیح مواد روی محیط های غذایی باید حداکثر تا 2 ساعت از لحظه جمع آوری انجام شود.

مرحله دوم تحقیق.مطالعه کلنی ها و جداسازی فرهنگ های خالص. پس از یک روز جوجه کشی، کلنی ها روی ظروف رشد می کنند و در اولین ضربه رشد مداوم است و در سکته های بعدی - کلنی های ایزوله. کلنی مجموعه ای از میکروب های یک گونه است که از یک سلول رشد می کنند. از آنجایی که این ماده اغلب مخلوطی از میکروب ها است، انواع مختلفی از کلنی ها رشد می کنند. کلنی های مختلف با مداد مشخص می شوند و از پایین به صورت دایره ای مشخص می شوند و مورد مطالعه قرار می گیرند (جدول 11). اول از همه، کلنی ها با چشم غیر مسلح مورد مطالعه قرار می گیرند: علائم ماکروسکوپی. فنجان (بدون باز کردن آن) در نور عبوری از پایین مشاهده می شود، شفافیت کلنی ها مشخص می شود (شفاف، اگر نور را مسدود نکند، شفاف، اگر تا حدی نور را مسدود کند، مات، اگر نور از طریق نور عبور نکند). کلنی)، و اندازه کلنی ها (بر حسب میلی متر) اندازه گیری می شود. سپس کلنی ها را از کنار درب مطالعه می کنند، شکل (مرتب، گرد، نامنظم، مسطح، محدب)، ماهیت سطح (صاف، براق، مات، ناهموار، چروکیده، مرطوب، خشک، لزج)، رنگ را یادداشت می کنند. (بی رنگ، رنگی).

جدول 11. طرحی برای مطالعه مستعمرات

№	امضا کردن	ویژگی های احتمالی کلنی ها
1.	فرم	تخت، محدب، گنبدی، افسرده، گرد، روزت، ستاره
2.	اندازه، میلی متر	بزرگ (4-5 میلی متر)، متوسط ​​(2-4 میلی متر)، کوچک (1-2 میلی متر)، کوتوله (< 1 мм)
3.	شخصیت سطحی	صاف (S شکل)، زبر (R شکل)، لزج (M شکل)، مخطط، برآمدگی، مات، براق
4.	رنگ	بی رنگ، رنگی
5.	شفافیت	شفاف، مات، شفاف
6.	ویژگی لبه ها	صاف، دندانه دار، حاشیه دار، فیبری، دلمه دار
7.	ساختار داخلی	همگن، دانه ای، ناهمگن
8.	ثبات	چسبناک، لزج، شکننده
9.	امولسیون شدن در یک قطره آب	خوب بد

توجه: نقاط 5-7 در بزرگنمایی کم میکروسکوپ مطالعه می شوند.

هنگام مشاهده با بزرگنمایی، می توانید تفاوت بین کلنی ها را حتی بهتر ببینید. برای انجام این کار، یک فنجان بسته را با پایین به بالا روی صحنه قرار دهید، کندانسور را کمی پایین بیاورید، از بزرگنمایی جزئی لنز (x8) استفاده کنید، فنجان را حرکت دهید، ویژگی های میکروسکوپی کلنی ها را مطالعه کنید: ماهیت لبه ( صاف، مواج، ناهموار، صدف دار)، ساختار (همگن، دانه ای، فیبری، همگن یا متفاوت در مرکز و پیرامون).

در ادامه، مورفولوژی سلول های میکروبی از کلنی ها مورد مطالعه قرار می گیرد. برای این کار از قسمتی از هر یک از کلنی های مشخص شده اسمیر تهیه می شود و با گرم رنگ آمیزی می شود. هنگام گرفتن کلنی، به قوام آن توجه کنید (خشک، اگر کلنی خرد شد و برداشتن آن دشوار است، نرم، اگر به راحتی با حلقه گرفته شود، لزج، اگر کلنی توسط یک حلقه کشیده شود، سخت، اگر قسمتی از کلنی باشد. کلنی با یک حلقه گرفته نمی شود، شما فقط می توانید کل کلنی را حذف کنید).

هنگام مشاهده اسمیر، مشخص می شود که کلنی توسط یک نوع میکروب نشان داده شده است، بنابراین، کشت خالص باکتری ها را می توان جدا کرد. برای انجام این کار، کلنی های مورد مطالعه مجدداً روی آگار کج کاشته می شوند. هنگام کاشت مجدد از مستعمرات، باید دقت شود که دقیقاً کلنی های مورد نظر گرفته شود، بدون اینکه با حلقه به کلنی های مجاور برخورد کنید. لوله ها برچسب گذاری شده و در ترموستات در دمای 37 درجه سانتیگراد به مدت 24 ساعت انکوبه می شوند.

مرحله سوم تحقیق.شناسایی فرهنگ جدا شده شناسایی میکروب ها - تعیین موقعیت سیستماتیک یک فرهنگ جدا شده از یک ماده به گونه و گونه. اولین شرط برای شناسایی قابل اعتماد، خلوص بی قید و شرط فرهنگ است. برای شناسایی میکروب ها از مجموعه ای از ویژگی ها استفاده می شود: مورفولوژیکی (شکل، اندازه، وجود تاژک، کپسول، هاگ، موقعیت نسبی در اسمیر)، رنگی (ارتباط با رنگ آمیزی گرم یا روش های دیگر)، شیمیایی (نسبت گوانین + سیتوزین). که در مولکول DNA)، فرهنگی (نیازهای تغذیه‌ای، شرایط کشت، سرعت و ماهیت رشد در محیط‌های مختلف غذایی)، آنزیمی (شکاف مواد مختلف با تشکیل محصولات میانی و نهایی)، سرولوژیکی (ساختار آنتی ژنی، ویژگی)، بیولوژیکی (حادت‌زایی). برای حیوانات، سم زایی، حساسیت زایی، تأثیر آنتی بیوتیک ها و غیره).

برای تمایز بیوشیمیایی، توانایی باکتری ها در تخمیر کربوهیدرات ها با تشکیل مواد میانی و محصولات نهایی، توانایی تجزیه پروتئین ها و پپتون ها و مطالعه آنزیم های ردوکس.

برای مطالعه آنزیم‌های ساکارولیتیک، کشت‌های جدا شده در لوله‌های آزمایش با محیط‌های نیمه مایع حاوی لاکتوز، گلوکز و سایر کربوهیدرات‌ها و الکل‌های پلی‌هیدریک تلقیح می‌شوند. برای محیط های نیمه مایع، تلقیح با تزریق در عمق محیط انجام می شود. هنگام کاشت به روش تزریق، لوله آزمایش با محیط در یک زاویه نگه داشته می شود، درپوش آن برداشته می شود و لبه لوله آزمایش می سوزد. این ماده با یک حلقه استریل گرفته می شود و ستون ماده مغذی با آن تقریباً تا پایین سوراخ می شود.

برای تعیین آنزیم های پروتئولیتیک، کشت جدا شده روی پپتون واتر یا MPB تلقیح می شود. برای انجام این کار، لوله آزمایش را با تلقیح نزدیکتر در دست خود و لوله آزمایش را با محیط دورتر از خود بگیرید. هر دو لوله آزمایش به طور همزمان باز می شوند، شاخه های خود را با انگشت کوچک و لبه کف دست می گیرند، لبه های لوله های آزمایش را می سوزانند، با استفاده از یک حلقه سرد شده کلسینه، کمی کشت را گرفته و به لوله آزمایش دوم منتقل می کنند. آن را در محیط مایع روی دیواره لوله آزمایش آسیاب کرده و با محیط بشویید.

هنگام کاشت و کاشت مجدد باید به رعایت قوانین عقیمی توجه کرد تا محصولات خود را به میکرو فلور خارجی آلوده نکنند و همچنین محیط را آلوده نکنند. لوله ها برچسب گذاری شده و در یک ترموستات برای انکوباسیون در دمای 37 درجه سانتیگراد به مدت 24 ساعت قرار می گیرند.

نتیجه

حسابداری برای نتایج نتیجه گیری از مطالعه. نتایج شناسایی در نظر گرفته شده و بر اساس مجموع داده‌های به‌دست‌آمده، بر اساس طبقه‌بندی و ویژگی‌های سویه‌های معمولی شرح‌داده‌شده در کتابچه راهنما (کلید Burgee, 1994-1996)، نوع محصولات جدا شده تعیین می‌شود.

گونه ها - مجموعه ای از میکروارگانیسم ها که دارای منشا تکاملی مشترک، ژنوتیپ مشابه (درجه بالایی از همسانی ژنتیکی، معمولا بیش از 60٪) و نزدیک ترین ویژگی های فنوتیپی ممکن است. سویه یک کشت جدا شده از یک نوع معین از باکتری است ("نمونه خاصی از یک گونه معین") کلنی یک ساختار جدا شده قابل مشاهده با چشم است که در نتیجه تولیدمثل و تجمع میکروارگانیسم ها در طول دوره معینی از انکوباسیون و از یک سلول والد یا از چندین سلول یکسان.

روش های تشخیص آزمایشگاهی Ø میکروسکوپی - تشخیص m/o به طور مستقیم در مواد بالینی Ø باکتریولوژیک - تشخیص m/o با تلقیح مواد در محیط های غذایی Ø بیولوژیکی - جداسازی m/o از حیوان آزمایشگاهی قبلاً آلوده Ø سرولوژیکی - تشخیص آنتی بادی های ایمنی اختصاصی در سرم خون بیمار Ø آلرژیک – انجام تست های پوستی آلرژیک (بسیار اختصاصی – سل، تولارمی و غیره)

Ø فرهنگی - ماهیت رشد یک میکروارگانیسم در محیط های غذایی. Ø بیوشیمیایی - توانایی تخمیر سوبستراهای مختلف (کربوهیدرات ها، پروتئین ها و اسیدهای آمینه و غیره)، برای تشکیل محصولات مختلف بیوشیمیایی در فرآیند زندگی به دلیل فعالیت سیستم های آنزیمی مختلف و ویژگی های متابولیک. Ø آنتی ژنیک - عمدتاً به ترکیب شیمیایی و ساختار دیواره سلولی بستگی دارد، وجود تاژک ها، کپسول ها، با توانایی ماکرو ارگانیسم (میزبان) برای تولید آنتی بادی ها و سایر اشکال پاسخ ایمنی تشخیص داده می شود، در واکنش های ایمنی شناسایی می شود.

فیزیولوژیکی - روش های کربوهیدرات (اتوتروف ها، هتروتروف ها)، نیتروژن (آمینواتوتروف ها، آمینوهتروتروف ها) و سایر انواع تغذیه، نوع تنفس (هوازی، میکروآروفیل، بی هوازی اختیاری، بی هوازی سخت). Ø تحرک و انواع حرکت. Ø قابلیت تشکیل هاگ، ماهیت هاگ. Ø حساسیت به باکتریوفاژها، تایپ فاژ. Ø ترکیب شیمیایی دیواره سلولی - قندهای پایه و اسیدهای آمینه، ترکیب چربی و اسیدهای چرب. Ø طیف پروتئینی (پروفایل پلی پپتیدی). Ø حساسیت به آنتی بیوتیک ها و سایر داروها. Ø ژنوتیپی (استفاده از روشهای ژنوسیستماتیک).

روش باکتریولوژیک شامل تلقیح مواد بالینی بر روی محیط های مغذی مصنوعی، جداسازی کشت خالص میکروب ها و شناسایی بعدی آنها می باشد.

روش های باکتریولوژیک استفاده می شود: در تشخیص بیماری های عفونی. • در طی معاینات پیشگیرانه برای حمل باکتری های روده، باسیل دیفتری و غیره؛ Ш هنگام مطالعه وضعیت بهداشتی و بهداشتی اشیاء محیطی (آب، هوا، خاک، غذا و غیره) و بررسی آنها با توجه به نشانه های اپیدمیولوژیک برای آلودگی با گونه های بیماری زا از میکروارگانیسم ها. ش

ویژگی های فیزیولوژیکی ارتباط با دما تنفس تغذیه آنزیم ها متابولیسم پروتئین ها و اسیدهای آمینه (ژلاتیناز، کلاژناز، دکربوکسیلاز، اوره آز) سایر آنزیم ها (همولیزین ها، لیپازها، لسیتیناز، DNase) محصولات نهایی متابولیسم (کروماتوگرافی) مقاومت/حساسیت به AMP

عناصری که در درجه اول برای رشد میکروارگانیسم ها ضروری هستند و باید در محیط غذایی گنجانده شوند از ترکیب شیمیایی سلول های میکروبی تعیین می شوند که اصولاً در همه موجودات زنده یکسان است. بخش عمده ای از کل توده سلولی با آب (80-90٪) و تنها 10-20٪ ماده خشک است. بر اساس محتوای کمی آنها در ماده خشک، عناصر ماکرو و میکرو متمایز می شوند. اولی ها عبارتند از: کربن، اکسیژن، نیتروژن، هیدروژن، گوگرد، فسفر، پتاسیم، سدیم، منیزیم، کلسیم، آهن. ریز عناصر شامل منگنز، مولیبدن، روی، مس، کبالت و غیره است که بیشتر آنها به مقدار کمی مورد نیاز هستند. به همین دلیل، عناصر ریز به ترکیب بسیاری از محیط‌ها اضافه نمی‌شوند، زیرا به دلیل ناخالصی‌های موجود در نمک‌های درشت مغذی، می‌توان نیاز به آنها را برطرف کرد. علاوه بر این، همه میکروارگانیسم ها به ریز عناصر نیاز ندارند. 14

برخلاف موجودات حیوانی و گیاهی، میکروارگانیسم‌ها با انواع مختلف تغذیه‌ای مشخص می‌شوند که بر اساس سه معیار اصلی - منبع کربن، منبع انرژی و اهداکننده الکترون (هیدروژن) متمایز می‌شوند. بسته به ماهیت منبع کربن، همه میکروارگانیسم ها به 2 گروه بزرگ تقسیم می شوند - اتوتروف ها که از دی اکسید کربن استفاده می کنند و هتروتروف ها که به مواد آلی آماده برای رشد و تولید مثل نیاز دارند. با در نظر گرفتن تنوع منابع انرژی و اهداکنندگان الکترون، این گروه ها به زیر گروه هایی تقسیم می شوند که در نتیجه 8 نوع تغذیه در میکروارگانیسم ها ایجاد می شود. هر نوع تغذیه مشخصه میکروارگانیسم های خاصی است و خواص فیزیولوژیکی و بیوشیمیایی آنها را منعکس می کند. اکثر میکروارگانیسم ها، از جمله میکروارگانیسم های بیماری زا، دارای نوعی تغذیه هستند که در آن مواد آلی منبع دهنده کربن، انرژی و الکترون هستند. 16

نیازهای میکروارگانیسم ها به منابع کربن آلی بسیار متنوع است. برخی از گونه ها "همه چیزخوار" هستند و می توانند موادی با ماهیت های شیمیایی مختلف مصرف کنند، برخی دیگر انتخابی تر هستند و فقط از برخی از آنها استفاده می کنند. ویژگی مجموعه ای از ترکیبات آلی مشخصه هر نوع میکروارگانیسم در هنگام ایجاد رسانه های تشخیصی انتخابی و افتراقی که به طور گسترده در میکروبیولوژی بهداشتی و بالینی برای شناسایی سریع گروه های خاصی از میکروارگانیسم ها استفاده می شود، در نظر گرفته می شود. هنگام انتخاب یک بستر حاوی کربن، باید در نظر گرفت که قابلیت هضم مواد آلی تا حد زیادی به خواص آنها بستگی دارد - حلالیت، درجه اکسیداسیون اتم های کربن، پیکربندی فضایی و پلیمریزاسیون مولکول های آنها. میکروارگانیسم ها معمولاً ایزومرهای نوری خاصی - قندهای متعلق به سری D و اسیدهای آمینه - را به سری L جذب می کنند. تعداد بسیار کمی از میکروارگانیسم ها دارای آنزیم هایی هستند که یک ایزومر نوری را به دیگری تبدیل می کند. فقط آن دسته از میکروارگانیسم هایی که آنزیم های هیدرولیتیک خاصی را سنتز می کنند - آمیلازها، پروتئازها، لیپازها به شکل اگزونزیم ها، یعنی آنزیم هایی که توسط سلول در محیط ترشح می شوند، می توانند از بیوپلیمرهایی مانند نشاسته، پلی ساکاریدها، پروتئین ها، چربی ها استفاده کنند. 17

برای اکثریت قریب به اتفاق میکروارگانیسم‌های هتروتروف، منابع اصلی کربن و انرژی که به راحتی در دسترس هستند، کربوهیدرات‌ها، اسیدهای آمینه، پروتئین‌ها و اسیدهای آلی هستند. با مشخص کردن نیاز میکروارگانیسم ها به منابع کربن آلی، باید توجه داشت که بیشترین درجه هتروتروفی ذاتی در میکروارگانیسم های بیماری زا است که با زندگی در بدن انسان و حیوانات سازگار شده اند. ترکیب محیط های غذایی برای کشت آنها بسیار پیچیده است. آنها حاوی پروتئین ها یا محصولات هیدرولیز کم عمق خود (پپتیدها)، ویتامین ها، قطعات اسیدهای نوکلئیک و غیره هستند. برای تهیه چنین محیط هایی از انواع هیدرولیزها و عصاره های گوشت، خون یا سرم، مخمر و عصاره های گیاهی و موارد دیگر استفاده می شود. . این محیط‌ها برای کشت انواع مختلف گونه‌ها مناسب هستند و به‌ویژه در مواردی که نیاز میکروب به فاکتورهای رشد ناشناخته است یا به فاکتورهای رشد زیادی نیاز دارد، کاربرد دارند. عیب چنین رسانه هایی پیچیدگی یا عدم امکان دستیابی به استانداردسازی آنها به دلیل ماهیت غیر استاندارد و کنترل محدود ترکیب و خواص مواد اولیه است. 18

متابولیسم سازنده میکروارگانیسم ها به طور کلی با هدف سنتز چهار نوع اصلی بیوپلیمر - پروتئین ها، اسیدهای نوکلئیک، پلی ساکاریدها و لیپیدها انجام می شود. برای بیوسنتز پروتئین ها و اسیدهای نوکلئیک، مهم ترین عنصر، علاوه بر کربن، نیتروژن است. در دسترس ترین منبع نیتروژن برای اکثر میکروارگانیسم ها یون های آمونیوم است که می توانند آن را از نمک های اسیدهای آلی و معدنی، اسیدهای آمینه، پروتئین ها و سایر مواد حاوی نیتروژن به دست آورند. گروه بزرگی از باکتری ها، عمدتاً بیماری زا، به مواد آلی حاوی نیتروژن به عنوان منابع نیتروژن نیاز دارند. اگر اسیدهای آمینه چنین منبع نیتروژن باشند، میکروارگانیسم‌ها می‌توانند مستقیماً از آنها برای سنتز پروتئین‌ها استفاده کنند، یا می‌توانند ابتدا آنها را دآمینه کنند و از گروه‌های آمینه آزاد شده در این فرآیند برای سنتز اسیدهای آمینه و پروتئین‌های خود استفاده کنند. 19

با این حال، رشد برخی از میکروارگانیسم ها به اسیدهای آمینه خاصی نیاز دارد که خود نمی توانند آن را سنتز کنند. میکروارگانیسم هایی که به چنین اسیدهای آمینه "ضروری" نیاز دارند عبارتند از استافیلوکوکوس اورئوس، استرپتوکوک همولیتیک، باکتری های اسید لاکتیک و برخی دیگر. بسته به ویژگی های فیزیولوژیکی میکروب ها، تعداد اسیدهای آمینه "ضروری" متفاوت است - برای استافیلوکوکوس اورئوس، فقط تریپتوفان و سیستین در محیط غذایی مورد نیاز است و برای استرپتوکوک همولیتیک - 17 اسید آمینه. پروتئین ها، به عنوان منابع نیتروژن، فقط برای آن دسته از میکروارگانیسم هایی در دسترس هستند که آنزیم های پروتئولیتیک آزاد شده در محیط را تشکیل می دهند (به عنوان مثال، به شکل خارجی). تحت تأثیر این آنزیم ها، پروتئین ها به مواد با وزن مولکولی کمتر - پپتون ها و اسیدهای آمینه تجزیه می شوند. 20

متابولیسم انرژی میکروارگانیسم ها، مانند متابولیسم سازنده، با مکانیسم های بیوشیمیایی مختلفی مشخص می شود. سه نوع اصلی این متابولیسم وجود دارد - تنفس هوازی، تنفس بی هوازی و تخمیر که رایج ترین آنها تنفس هوازی است. در این فرآیند، مواد آلی با حداکثر آزاد شدن انرژی موجود در این ماده به دی اکسید کربن و آب اکسید می شوند. بسیاری از میکروارگانیسم‌های دارای تنفس هوازی هوازی سختی هستند، اما برخی از آنها هوازی اختیاری هستند، زیرا می‌توانند در شرایط بی‌هوازی - از طریق تخمیر، ATP را تشکیل دهند. برخی از میکروارگانیسم‌ها، عمدتاً باکتری‌ها، انرژی را از طریق تنفس بی‌هوازی به دست می‌آورند، یعنی در نتیجه اکسیداسیون مواد، جایی که ترکیبات معدنی، به جای اکسیژن، به عنوان گیرنده الکترون عمل می‌کنند. بنابراین، گونه های خاصی از جنس Bacillus و E. coli تنفس بی هوازی را انجام می دهند که طی آن نیترات (NO 3) به آمونیاک کاهش می یابد. کلستریدیوم استیکوم هیدروژن مولکولی را با استفاده از دی اکسید کربن به عنوان گیرنده الکترون اکسید می کند. 21

ساده ترین نوع متابولیسم انرژی، تخمیر است. فرآیندهای تخمیر در شرایط بی هوازی رخ می دهد و با آزاد شدن انرژی همراه است. بستر اصلی تخمیر کربوهیدرات ها هستند، اما باکتری ها می توانند اسیدهای آلی از جمله اسیدهای آمینه و همچنین پورین ها و پیریمیدین ها را تخمیر کنند. تخمیر انواع زیادی دارد که هر یک توسط گروه خاصی از میکروارگانیسم ها ایجاد می شود و مطابق با مکانیسم، با تشکیل محصولات نهایی خاص همراه است. محصولات نهایی تخمیر معمولاً اسیدهای آلی مختلف - لاکتیک، استیک، سوکسینیک، سیتریک و غیره و همچنین الکل ها (اتیل، بوتیل، پروپیل)، دی اکسید کربن و هیدروژن هستند. بر اساس بازده محصول نهایی اصلی، انواع تخمیر مربوطه متمایز می شود. با توجه به اینکه در حین تخمیر، اکسیداسیون کامل زیرلایه اتفاق نمی افتد و مواد نیمه اکسید شده که هنوز حاوی انرژی هستند در محیط آزاد می شوند - اسیدهای آلی، الکل ها و غیره، بازده کل ATP در این فرآیند در هر 1 مول. سطح زیرلایه تخمیر شده قابل توجه است (30 برابر) نسبت به متابولیسم همان بستر در فرآیندهای تنفسی کمتر است. 22

یک نقش ویژه متعلق به رابرت کخ است. او با فرض نیاز به جداسازی یک فرهنگ خالص از میکروب، از این طریق نیاز به ایجاد شرایط برای حل این مشکل را تعیین کرد. مهمترین آنها محیط غذایی بود که میکروارگانیسم می توانست روی آن رشد کند. نام کوخ با معرفی مواد مغذی جامد به عمل میکروبیولوژی در سال 1881 مرتبط است. ایده استفاده از آنها زودتر به وجود آمد و متعلق به محقق آلمانی Bredfeld است. علاوه بر این، در سال 1877، شروتر باکتری‌هایی را روی برش‌های سیب‌زمینی کشت داد که می‌توان آن را به عنوان استفاده از یک محیط مغذی نیز تفسیر کرد. شایستگی کخ در رویکرد علمی عمیق او به این مشکل و استفاده گسترده از مواد مغذی در تحقیقات خود نهفته است. او همچنین اولین سخت کننده - ژلاتین را به عنوان جزئی از یک محیط متراکم پیشنهاد کرد. 25

آگار آگار که برای میکروبیولوژیست‌های مدرن آشنا بود، بسیار دیرتر در سال 1919 توسط فراست وارد عمل روزمره شد، اگرچه منصفانه است که یادآوری کنیم که در سال 1881 محقق آلمانی هسه آگار-آگار را پیشنهاد کرد. علاوه بر این، در سال 1913، میکروبیولوژیست روسی V.L. Omelyansky، با ادای احترام به محیط های غذایی حاوی ژلاتین، خاطرنشان کرد که محیط های غذایی آگار در مواردی که میکروب ژلاتین را مایع می کند، ترجیح داده می شود. ایده ها و فعالیت های عملی کوخ در پایان قرن نوزدهم و ربع اول قرن بیستم توسعه زیادی یافت. در این دوره بود که محققان تعدادی از کشورها محیط های مغذی را برای اهداف مختلف پیشنهاد کردند که نقش آنها برای میکروبیولوژی عملی بسیار مهم بوده و هست. یک میکروبیولوژیست مدرن هر روز در کار خود نام آنها را به یاد می آورد. در این چند سال، ژاپنی الاصل Sh.Endo آگار خود را برای تمایز انتروباکتری ها، E. Lowenstein اتریشی محیطی برای مایکوباکتریوم و انگلیسی A. Mack پیشنهاد داد. Konki - محیط تشخیصی انتخابی و افتراقی برای میکروارگانیسم‌های روده، T. Kitt آلمانی و D. Tarozzi ایتالیایی - محیط برای باکتری‌های بی هوازی اجباری، فرانسوی R. Sabouraud، F. Chapek چک و A. Dox آمریکایی - محیط برای قارچ‌ها، برزیلی R. Hottinger – رسانه های عمومی بر اساس هضم گوشت و غیره 26

الزامات عمومی محتوای تمام عناصر برای ساخت یک سلول میکروبی رطوبت کافی تضمین ایزوتونی غلظت معینی از یون های هیدروژن پتانسیل اکسیداسیون-کاهش عقیمی

مراحل اصلی رشد یک فرهنگ دوره ای: اولیه (تاخیر) - 1، نمایی (یا لگاریتمی) - 2، ثابت - 3، مرگ - 4 (شکل 12) شکل. 12. مراحل اصلی رشد جمعیت میکروبی در محیط های غذایی مایع.

ماهیت رشد میکروارگانیسم ها در محیط های غذایی مایع Ø Ø Ø رشد باکتری هایی با کدورت یکنواخت محیط، که رنگ آن تغییر نمی کند یا مطابق با رنگ رنگدانه محلول در آب تشکیل شده در کشت میکروبی تغییر می کند. رشد پایین باکتری ها - تشکیل رسوب (کم یا فراوان، شکننده، همگن، فیبری و غیره). رشد جداری با حفظ شفافیت محیط غذایی؛ رشد سطحی باکتری ها - یک فیلم روی سطح محیط (نازک، ظریف، بی رنگ یا مرطوب، ضخیم، به وضوح قابل مشاهده با چشم غیر مسلح، متراکم، خشک با سطح چروکیده و گاهی اوقات زگیل). رنگ فیلم، مانند محیط غذایی، به رنگدانه تولید شده توسط کشت میکروبی در حال رشد بستگی دارد.

ماهیت رشد میکروارگانیسم ها در محیط های غذایی نیمه مایع کشت آزمایشی در ستونی از آگار نیمه مایع 0.2 - 0.5 درصد کاشته می شود. توانایی یک میکروارگانیسم برای حرکت تعیین می شود - انتشار از محل تلقیح (تزریق) به محیط توسط تزریق در مجاورت دیواره لوله آزمایش.

ترکیبات محیطی تشخیصی دیفرانسیل اندو: بیس – آگار مغذی دیفرانسیل. فاکتور - نشانگر لاکتوز - فوشین پایه، رنگ‌زدایی شده با سولفیت سدیم رشد لاکتوز + کلنی‌های قرمز رنگ با درخشندگی فلزی

محیط Ploskirev انتخابی، تشخیصی افتراقی ترکیب: باز – آگار مغذی فاکتور انتخابی – نمک های صفراوی، سبز درخشان، ید دیفرانسیل. فاکتور - شاخص لاکتوز - قرمز خنثی رشد لاکتوز + مستعمرات به رنگ لنگون

سالت آگار محیط انتخابی ترکیب: باز – آگار مغذی فاکتور انتخابی – نمک 10% شاخص – ندارد رشد کلنی های مقاوم به نمک

زرده نمک آگار (Chistovich) انتخابی، تشخیصی ترکیب: پایه – آگار مغذی عامل انتخابی – نمک 10% تفاوت. عامل - زرده تخم مرغ - عدم رشد کلنی های مقاوم به نمک + کدورت در اطراف کلنی ها به دلیل فعالیت لسیتوویتلاز

محیط کشت مولر-کافمن تتراتیونات این محیط برای غنی سازی انتخابی برای تشخیص باکتری های جنس سالمونلا در نظر گرفته شده است.

براث نمک محیط انتخابی ترکیب: پایه – براث مغذی فاکتور انتخابی – 6.5% Na. شاخص کلر – عدم رشد میکروارگانیسم های مقاوم به نمک

ماهیت رشد میکروارگانیسم ها در محیط های غذایی جامد. ویژگی های اصلی: ü اندازه - دقیق (≤ 1 میلی متر) - بزرگ (4 تا 6 میلی متر یا بیشتر). ü شکل - منظم (گرد)؛ نامنظم (آمیب شکل)، ریزوئید؛ کانتورهای لبه - صاف یا ناهموار (دوزک، مواج و غیره) ü برجستگی کلنی (گنبدی شکل، صاف محدب، مستعمرات با مرکز فرورفته و غیره. ü سطح کلنی (مات یا براق (شکل های S-R)؛ ü کلنی رنگ (تشکیل رنگدانه)؛ ü ساختار کلنی (دانه ای ریز یا درشت)، ü قوام (لزخی، مخاطی، خمیری و غیره).

رنگدانه های باکتری قرمز قهوه ای (prodigiosin) Serratia marcessens زرد-نارنجی، (کاروتنوئیدها) استافیلوکوکوس، سارسینا، M. tuberculosis جنس سیاه، قهوه ای (ملانین) B. cubtilis، قارچ از جنس Candida Blue (pyocyanin) P. aeruginosa Yellow Fluorescent -سبز (پیووردین) جنس ویبریو

جداسازی کشت های خالص: تلقیح بر روی محیط های انتخابی محیط انتخابی Bade-Parker برای استافیلوکوک ها. رشد میکروارگانیسم های مقاوم به تلوریت پتاسیم. آنها آن را به تلوریوم فلزی تبدیل می کنند و کلنی سیاه می شود

جداسازی کشت های خالص: فیلتراسیون از طریق فیلترهای غشایی میکروارگانیسم های روی فیلتر قفس های فلزی برای فیلترهای هسته ای

4. طبقه بندی باکتری ها. اصول طبقه بندی و نامگذاری مدرن، واحدهای طبقه بندی پایه. مفهوم گونه، گونه، فرهنگ، جمعیت، سویه.

5. روش های میکروسکوپی. روش میکروسکوپی برای تشخیص بیماری های عفونی.

6. روش های رنگ آمیزی میکروب ها و ساختارهای فردی آنها.

7. مورفولوژی و ترکیب شیمیایی باکتری ها. پروتوپلاست ها L - اشکال باکتری.

8. فراساختار باکتری ها.

9. هاگ زایی در باکتری ها. میکروب های هاگ ساز بیماری زا.

10. کپسول در باکتری. روش های تشخیص آنها

11. تاژک و آخال در باکتری. روش های تشخیص آنها

14. رشد و تولید مثل باکتری ها. سینتیک تولید مثل جمعیت باکتریایی

15. مورفولوژی و فراساختار ریکتزیا. مورفولوژی و فراساختار کلامیدیا. گونه های بیماری زا

16. مورفولوژی و فراساختار اسپیروکت ها. طبقه بندی، گونه های بیماری زا. روش های انتخاب

17. مورفولوژی و فراساختار مایکوپلاسماها. گونه های بیماری زا برای انسان

18. سیستماتیک و نامگذاری ویروس ها. اصول طبقه بندی مدرن ویروس ها.

19. تکامل و پیدایش ویروس ها. تفاوت های اصلی بین ویروس ها و باکتری ها.

20. مورفولوژی، فراساختار و ترکیب شیمیایی ویروس ها. عملکرد اجزای شیمیایی اصلی ویروس.

21. تولید مثل ویروس ها. مراحل اصلی تولید مثل ویروسی. روش های نشان دادن ویروس ها در مواد مورد مطالعه

22. روش تشخیصی ویروسی. روش های کشت ویروس

23. کشت سلولی. طبقه بندی کشت های سلولی محیط های غذایی برای کشت سلولی روش های نشان دادن ویروس ها در کشت سلولی

24. مورفولوژی، فراساختار و ترکیب شیمیایی فاژها. مراحل تولید مثل فاژ. تفاوت بین فاژهای بدخیم و معتدل

25. پراکندگی فاژها در طبیعت. روش های تشخیص و بدست آوردن فاژها استفاده عملی از فاژها

26. روش باکتریولوژیک برای تشخیص بیماریهای عفونی.

27. محیط های غذایی، طبقه بندی آنها. الزامات برای محیط های غذایی

28. آنزیم های باکتریایی، طبقه بندی آنها. اصول طراحی محیط های غذایی برای مطالعه آنزیم های باکتریایی.

29. اصول اولیه کشت باکتری. عوامل موثر بر رشد و تولید مثل باکتری ها. خواص فرهنگی باکتری ها

30. اصول و روش های جداسازی کشت های خالص باکتری های هوازی و بی هوازی.

31. میکرو فلور خاک، آب، هوا. گونه های بیماری زا که در محیط خارجی باقی می مانند و از طریق خاک، آب، غذا و هوا منتقل می شوند.

32. میکروارگانیسم های شاخص بهداشتی. اگر - تیتر، اگر - شاخص، روش های تعیین.

34. روابط بین میکروارگانیسم ها در انجمن ها. میکروب ها آنتاگونیست هستند، استفاده از آنها در تولید آنتی بیوتیک ها و سایر داروهای درمانی.

35. تأثیر عوامل فیزیکی، شیمیایی و بیولوژیکی بر میکروب ها.

36. استریل و ضد عفونی. روش های استریل کردن محیط های کشت و ظروف شیشه ای آزمایشگاهی

38. اشکال و مکانیسم های تنوع ارثی میکروارگانیسم ها. جهش، جبران، مکانیسم های آنها.

43. ژنتیک ویروس ها. تبادل درون گونه ای و بین گونه ای مواد ژنتیکی.

44. گروه های اصلی داروهای شیمی درمانی ضد میکروبی مورد استفاده در درمان و پیشگیری از بیماری های عفونی.

45. آنتی بیوتیک ها. طبقه بندی. مکانیسم اثر داروهای ضد باکتری بر روی میکروب ها.

26. روش باکتریولوژیک برای تشخیص بیماریهای عفونی.

روش باکتری شناسی شامل جداسازی یک کشت خالص از پاتوژن (جمعیتی حاوی باکتری از یک گونه) است و شناسایی این پاتوژن روش اصلی تحقیقات باکتریولوژیک است.

مطالعه خواص میکروارگانیسم ها در یک آزمایشگاه باکتری شناسی به منظور ایجاد عضویت در یک یا گروه دیگر سیستماتیک (گونه، جنس) شناسایی آنها نامیده می شود.

به طور کلی روش تحقیق باکتریولوژیک یک آزمایش باکتریولوژیک چند مرحله ای است که 18-24 ساعت طول می کشد.

با روش باکتری شناسی، کشت بی هوازی در دستگاه بی هوازی قرار می گیرد. هوا از بالون خارج می شود و با مخلوط گازی که حاوی اکسیژن نیست جایگزین می شود.

اساس روش باکتریولوژیک جداسازی یک کشت خالص از پاتوژن است که در مرحله اول مطالعه رخ می دهد. برای جداسازی یک کشت خالص از پاتوژن، مواد گرفته شده را تلقیح کنید. کاشت معمولاً روی محیط های جامد غذایی انجام می شود که بر اساس ویژگی های پاتوژن مشکوک انتخاب می شوند.

با روش باکتریولوژیک، در صورت امکان، از محیط هایی استفاده می شود که فقط نوع خاصی از باکتری روی آن رشد می کند - محیط های انتخابی، یا محیط هایی که تشخیص پاتوژن مشکوک را از سایر میکروارگانیسم ها یا به عبارت دیگر، محیط های تشخیص افتراقی ممکن می سازد.

با روش باکتری شناسی، مواد با استفاده از یک کاردک شیشه ای یا فلزی یا یک حلقه باکتریایی بر روی محیط های غذایی تلقیح می شوند به گونه ای که باکتری های موجود در ماده مورد مطالعه بر روی سطح محیط غذایی پراکنده می شوند. در نتیجه چنین پراکندگی، هر سلول باکتری به منطقه خاص خود از محیط می رسد.

اگر در نتیجه روش تحقیق باکتریولوژیک، انتظار می رود که ماده آزمایش حاوی مقدار کمی از عامل بیماری زا باشد، تلقیح بر روی یک محیط غذایی مایع برای تجمع آن انجام می شود، به اصطلاح محیط غنی سازی، که برای میکروارگانیسم داده شده سپس، بذردهی مجدد از محیط غذایی مایع روی محیط جامد ریخته شده در ظروف پتری انجام می شود. محیط تلقیح شده با پاتوژن در یک ترموستات معمولاً در دمای معینی قرار می گیرد که برای روش باکتریولوژیکی مهم است.

در مرحله دوم روش تحقیق باکتریولوژیک، کلنی های باکتریایی رشد یافته بر روی یک محیط غذایی جامد و منشاء یک سلول باکتریایی مورد مطالعه قرار می گیرند. (کلنی یک فرهنگ خالص از پاتوژن است). بررسی میکروسکوپی و ماکروسکوپی کلنی ها در نور منعکس شده و عبوری انجام می شود: با چشم غیر مسلح، زیر میکروسکوپ با بزرگنمایی کم، با استفاده از ذره بین.

ویژگی های فرهنگی مستعمرات ذکر شده است: شکل، اندازه، رنگ، ماهیت لبه ها و سطح، ساختار، قوام. در مرحله بعد، بخشی از هر یک از کلنی های مورد نظر برای تهیه اسمیر استفاده می شود. اسمیرها با رنگ آمیزی گرم و میکروسکوپی انجام می شوند و خواص رنگی (رابطه با رنگ) و مورفولوژیکی کشت جدا شده را تعیین می کنند و به طور همزمان خلوص آن را بررسی می کنند.

بخش باقی مانده از کلنی به منظور جمع آوری یک کشت خالص برای مطالعه کامل تر، در لوله های آزمایش با محیط بهینه برای گونه های داده شده، به عنوان مثال، آگار شیب، زیر کشت می شود. لوله ها به مدت 18 تا 24 ساعت در یک ترموستات قرار می گیرند. در مرحله دوم، علاوه بر مطالعات ذکر شده، اغلب تعداد کلنی های رشد یافته شمارش می شود.

به منظور انجام چنین مطالعه ای، رقت های متوالی از مواد آزمایشی گرفته شده تهیه می شود، که از آن ها بر روی صفحات با یک محیط مغذی کاشته می شود، تعداد کلنی های رشد یافته شمارش می شود، ضرب در رقت، که از آن محتوای میکروارگانیسم ها در مواد تعیین می شود.

شناسایی یک کشت خالص جدا شده از پاتوژن و تعیین حساسیت به آنتی بیوتیک ها و سایر داروهای شیمی درمانی برای این کشت مرحله سوم روش باکتریولوژیک است. شناسایی کشت باکتریایی جدا شده توسط خواص رنگی، مورفولوژیکی، بیوشیمیایی، فرهنگی، سمی، آنتی ژنی انجام می شود.

اولین گام این است که از کشت رشد یافته روی مایل آگار اسمیر بگیرید، مورفولوژی باکتری ها را بررسی کنید و خلوص کشت باکتری های رشد یافته را بررسی کنید. در مرحله بعد، کشت خالص جدا شده باکتری بر روی محیط کشت هیس تلقیح می شود. برای تعیین خواص بیوشیمیایی، تلقیح روی محیط های دیگر توصیه می شود.

با استفاده از واکنش خنثی سازی سم با آنتی توکسین in vivo یا in vitro، تولید سم در میکروب ها تعیین می شود. در برخی موارد، سایر عوامل بیماریزا نیز مورد مطالعه قرار می گیرند. مطالعات فوق که در آزمایشگاه باکتری شناسی انجام می شود، تعیین جنس یا نوع پاتوژن را ممکن می سازد.

روش دیسک کاغذی مبتنی بر شناسایی ناحیه سرکوب رشد باکتری در اطراف دیسک هایی است که آغشته به آنتی بیوتیک هستند. در صورت استفاده از روش رقت سریال، یک آماده سازی شیمیایی - یک آنتی بیوتیک با یک محیط غذایی مایع در لوله های آزمایش رقیق می شود و پس از آن همان تعداد باکتری به لوله های آزمایش تلقیح می شود. بر اساس عدم وجود یا وجود رشد باکتری، نتایج ثبت می شود. در نتیجه روش تحقیق باکتریولوژیک برای تعیین هویت سویه ها، آنتی بیوگرام حاصل می تواند اهداف اپیدمیولوژیک را نیز انجام دهد.

مطالعات مکرر ممکن است زمانی انجام شود که حامل باکتری تشخیص داده شود، زیرا ممکن است پاتوژن در یک قسمت از ماده شناسایی نشود.

10385 0

استفاده از روش باکتریولوژیکی امکان جداسازی پاتوژن را در محیط کشت خالص از مواد به دست آمده از بیمار و شناسایی آن بر اساس مطالعه مجموعه ای از خواص فراهم می کند. اکثر باکتری ها قابلیت کشت بر روی محیط های مختلف مغذی مصنوعی (به جز کلامیدیا و ریکتزیا) را دارند، بنابراین روش باکتریولوژیک در تشخیص بسیاری از بیماری های عفونی مهم است.

اگر نتیجه مثبت به دست آید، روش باکتریولوژیکی به فرد اجازه می دهد تا حساسیت پاتوژن جدا شده را به داروهای ضد میکروبی تعیین کند. با این حال، اثربخشی این مطالعه به پارامترهای زیادی بستگی دارد، به ویژه به شرایط جمع آوری موادو او حمل و نقلبه آزمایشگاه

به نیازهای اساسیالزامات برای انتخاب و حمل و نقل مواد برای تحقیقات باکتریولوژیکی عبارتند از:

• مصرف مواد قبل از شروع درمان اتیوتروپیک؛
• رعایت شرایط استریل هنگام جمع آوری مواد؛
• صحت فنی مجموعه مواد؛
• مقدار کافی مواد؛
• اطمینان از شرایط دمایی برای ذخیره و حمل و نقل مواد؛
• به حداقل رساندن فاصله زمانی بین جمع آوری مواد و کاشت در محیط های غذایی جامد.

انتقال مواد به آزمایشگاه باید در اسرع وقت انجام شود، اما حداکثر ظرف 1-2 ساعت پس از جمع آوری آن. نمونه های مواد باید در دمای معینی نگهداری شوند. به طور خاص، مواد استریل معمولی (خون، مایع مغزی نخاعی) در دمای 37 درجه سانتی گراد ذخیره و به آزمایشگاه تحویل داده می شوند. مواد غیر استریل (ادرار، ترشحات تنفسی و غیره) در دمای اتاق حداکثر به مدت 1-2 ساعت یا حداکثر یک روز در دمای 4 درجه سانتیگراد (شرایط یخچال خانگی) نگهداری می شوند. اگر تحویل نمونه‌ها به آزمایشگاه در بازه زمانی تنظیم‌شده غیرممکن باشد، توصیه می‌شود از رسانه‌های حمل‌ونقلی که برای حفظ حیات پاتوژن‌ها در شرایط نگهداری طراحی شده‌اند، استفاده شود.

خون برای تحقیقباید در طول دوره افزایش دمای بدن، در ابتدای شروع تب از بیمار گرفته شود. توصیه می شود 3-4 نمونه خون گرفته شده در فواصل زمانی 4-6 ساعت بررسی شود که از نظر کاهش خطر باکتریمی گذرا "از دست رفته" و افزایش توانایی تایید نقش سبب شناختی میکروفلور فرصت طلب جدا شده موجه است. از خون، اگر این میکرو فلور در چندین نمونه وریدی تشخیص داده شود. یک نمونه خون به مقدار 10 میلی لیتر برای بزرگسالان و 5 میلی لیتر برای کودکان در حداقل دو بطری با محیط میکروارگانیسم های هوازی و بی هوازی به نسبت 1:10 تلقیح می شود. مطالعه واحد خون شریانی توصیه می شود.

بگیرید مایع مغزی نخاعی(CSF) توسط پزشک در حین پونکسیون کمری به مقدار 1-2 میلی لیتر در یک لوله خشک استریل تولید می شود. نمونه بلافاصله به آزمایشگاه تحویل داده می شود و بررسی آن نیز بلافاصله آغاز می شود. اگر این امکان وجود نداشته باشد، مواد در دمای 37 درجه سانتیگراد برای چند ساعت نگهداری می شود. با تلقیح 1-2 قطره CSF به یک لوله آزمایش حاوی یک محیط نیمه مایع با گلوکز و در پتری دیش با آگار "خون" به طور قابل توجهی تعداد نتایج مثبت آزمایش باکتریولوژیک را افزایش می دهد. برای ارسال مواد، از جعبه های همدما، پدهای گرمایشی، قمقمه یا هر بسته بندی دیگری که دمای آن در حدود 37 درجه سانتیگراد حفظ می شود، استفاده کنید.

فضولاتبرای تحقیقات باکتریولوژیکی، 3-5 گرم با استفاده از کفگیرهای چوبی استریل در یک ظرف استریل با درب محکم گرفته می شود. بررسی مواد جمع آوری شده باید حداکثر تا 2 ساعت بعد شروع شود و در صورت عدم امکان شروع معاینه در این مدت باید مقدار کمی از مواد جمع آوری شده و در یک محیط حمل و نقل مناسب قرار داده شود. هنگام جمع آوری مدفوع، باید تلاش کرد تا ناخالصی های پاتولوژیک (مخاط، چرک، ذرات اپیتلیال و غیره) را برای معاینه ارسال کرد، در صورت وجود، از ورود ناخالصی های خون، که دارای خواص باکتری کشی هستند، به مواد جلوگیری کرد.

برای جمع آوری مواد می توان از سواب رکتوم (با نوک پنبه ای) استفاده کرد. سواب باید با محلول کلرید سدیم ایزوتونیک استریل یا محیط انتقال (اما نه ژل روغن) مرطوب شود. از هر رکتوم به عمق 5-6 سانتی متر وارد می شود و با چرخاندن تامپون، آن را با دقت بردارید و ظاهر رنگ مدفوع را روی تامپون نظارت کنید. اگر مطالعه مواد در عرض 2 ساعت شروع شود، سواب در یک لوله آزمایش خشک قرار می گیرد، در غیر این صورت - در یک محیط حمل و نقل.

من دارم قلقلک میدم(متوسط ​​مقدار ادرار آزاد شده) به مقدار 3-5 میلی لیتر پس از توالت کامل دستگاه تناسلی خارجی در یک ظرف استریل جمع آوری می شود. جمع آوری ادرار در صبح ترجیح داده می شود.

صفرادر طی لوله گذاری اثنی عشر در اتاق درمان به طور جداگانه در بخش های A، B و C در سه لوله استریل با رعایت قوانین آسپسیس جمع آوری می شود.

آب شستشوی معدهدر شیشه های استریل در مقادیر 20-50 میلی لیتر جمع آوری می شود. باید در نظر داشت که در این موارد، شستشوی معده فقط با محلول های بی تفاوت (بدون داشتن اثر باکتریواستاتیک یا باکتری کش بر روی میکروارگانیسم ها) - ترجیحا آب جوشانده (بدون افزودن سودا، پرمنگنات پتاسیم و غیره) انجام می شود.

خلط. خلط صبحگاهی که هنگام حمله سرفه آزاد می شود در یک شیشه استریل جمع آوری می شود. قبل از سرفه، بیمار دندان های خود را مسواک می زند و دهان خود را با آب جوشانده شستشو می دهد تا بقایای غذا، اپیتلیوم پوسته پوسته شده و میکرو فلور دهان را به صورت مکانیکی از بین ببرد.

آب شستشوی برونش. در حین برونکوسکوپی، بیش از 5 میلی لیتر محلول کلرید سدیم ایزوتونیک تزریق نمی شود و به دنبال آن ساکشن در یک لوله استریل انجام می شود.

ترشحات از حلق، دهان و بینی. مواد از حفره دهان با معده خالی یا 2 ساعت بعد از غذا با یک سواب پنبه یا قاشق استریل از غشای مخاطی و نواحی آسیب دیده آن در ورودی مجاری غدد بزاقی، سطح زبان و از زخم ها اگر فیلمی وجود دارد، آن را با موچین استریل بردارید. مواد از حفره بینی با یک سواب پنبه ای خشک استریل گرفته می شود که در عمق حفره بینی قرار می گیرد. مواد از نازوفارنکس با یک سواب پنبه ای استریل خلفی حلقی گرفته می شود که با دقت از طریق سوراخ بینی وارد نازوفارنکس می شود. اگر سرفه شروع شود، تامپون تا زمانی که سرفه تمام نشده برداشته نمی شود. برای آزمایش دیفتری، فیلم ها و مخاط بینی و گلو به طور همزمان بررسی می شوند و مواد را با سواب های مختلف می گیرند.

ماده آزمایشی با استفاده از تکنیک‌های ویژه برای به دست آوردن رشد کلنی‌های جداگانه میکروارگانیسم‌ها، روی محیط‌های غذایی جامد تلقیح می‌شود، که سپس به منظور جداسازی یک کشت خالص از پاتوژن، غربال می‌شوند.

انواع خاصی از باکتری ها با استفاده از محیط های انتخابی که رشد میکروارگانیسم های خارجی را مهار می کنند یا حاوی موادی هستند که رشد میکروب های بیماری زا خاص را تحریک می کنند، جدا می شوند.

میکروارگانیسم های جدا شده روی محیط های غذایی شناسایی، یعنی گونه یا نوع آنها را تعیین کنید. اخیراً برای شناسایی در عمل مراقبت‌های بهداشتی از سیستم‌های میکروآزمون استفاده شده است که پنل‌هایی با مجموعه‌ای از محیط‌های تشخیص افتراقی هستند که به تحقیق سرعت می‌بخشد. سیستم‌های میکروآزمایی همچنین برای تعیین حساسیت میکروارگانیسم‌ها به داروهای ضد میکروبی با رقیق کردن آنتی‌بیوتیک در یک محیط غذایی مایع استفاده می‌شوند.

هنگام ارزیابی نتایج یک مطالعه باکتریولوژیکی، پزشک باید در نظر داشته باشد که نتیجه منفی همیشه به معنای عدم وجود پاتوژن نیست و ممکن است با استفاده از داروهای ضد میکروبی، فعالیت میکروسیدی بالای خون و خطاهای فنی همراه باشد. تشخیص یک میکروب بیماری زا در مواد از یک بیمار، بدون توجه به تصویر بالینی، در مورد ناقل باکتریایی در حال نقاهت، سالم یا گذرا امکان پذیر است.

جداسازی میکروارگانیسم‌های فرصت‌طلب (استافیلوکوک اپیدرمیدیس، اشرشیاکلی) و حتی ساپروفیت‌ها از خون، با رعایت تمام قوانین آسپتیک، باید به عنوان یک تظاهرات باکتریمی در نظر گرفته شود، به خصوص اگر این میکروب‌ها در بیش از یک نمونه از مواد یا در بسترهای مختلف یافت شوند. خون، ادرار)، زیرا با کاهش واکنش ایمنی بدن، این میکروارگانیسم‌ها و سایر میکروارگانیسم‌های «غیر بیماری‌زا» می‌توانند عامل ایجاد فرآیندهای عفونی از جمله سپسیس باشند.

سختی خاصی وجود دارد تفسیر نتایج بررسی باکتریولوژیکی محیط های غیر استریل، یعنی اثبات نقش سبب شناختی میکروارگانیسم های فرصت طلب. در این مورد، شاخص هایی مانند نوع کشت های جدا شده، تعداد سلول های میکروبی از یک نوع معین در ماده، جداسازی مکرر آنها در طول بیماری، وجود تک کشت یا ارتباط یک میکروارگانیسم در نظر گرفته می شود.

یوشچوک N.D., Vengerov Yu.Ya.