رنگ آمیزی رتیکولوسیت. شمارش رتیکولوسیت ها در اسمیر پس از رنگ آمیزی با رنگ های مخصوص. آماده سازی برای تجزیه و تحلیل و جمع آوری مطالب

رتیکولوسیت ها گلبول های قرمز جوانی هستند که پس از از دست دادن هسته های نرموبلاست ها تشکیل می شوند. یکی از ویژگی های رتیکولوسیت ها وجود یک ماده دانه ای رشته ای (رتیکولوم) در سیتوپلاسم آنها است که نشان دهنده ریبوزوم ها و میتوکندری های تجمع یافته است.

1.) شمارش تعداد رتیکولوسیت ها در اسمیر پس از رنگ آمیزی با رنگ های مخصوص.

این روش به دلیل ساده بودن، نسبتاً ارزان بودن و عدم نیاز به تجهیزات گران قیمت خاصی در عمل پرکاربردترین روش است و بر این اساس در هر آزمایشگاه تشخیص بالینی قابل استفاده است.

اصل روش بر اساس شناسایی ماده گرانول-شبکه رتیکولوسیت ها در هنگام رنگ آمیزی فوق حیاتی با رنگ های قلیایی (محلول اشباع شده کرسیل آبی درخشان در الکل مطلق / محلول Azur I / محلول Azur II) با شمارش بیشتر آنها در یک اسمیر خون است. رنگ آمیزی رتیکولوسیت یا روی شیشه یا در لوله آزمایش انجام می شود. شمارش با استفاده از میکروسکوپ انجام می شود: اسمیرهای تهیه شده با استفاده از یکی از روش های فوق به صورت میکروسکوپی با یک لنز غوطه ور بررسی می شوند. در اسمیر، رتیکولوسیت‌ها و گلبول‌های قرمز متمایل به زرد مایل به سبز رنگ می‌شوند، ماده دانه‌ای رشته‌ای در رتیکولوسیت‌ها آبی (هنگامی که با لاجوردی II و آبی کرسیلی درخشان رنگ می‌شود) یا بنفش مایل به آبی (در صورت رنگ‌آمیزی با لاجوردی I) است.

2.) شمارش تعداد رتیکولوسیت ها با استفاده از میکروسکوپ فلورسانس.

این روش ساده است و به زمان کمی نیاز دارد، دقت بیشتری نسبت به روش معمولی دارد، زیرا میکروسکوپ فلورسنت کوچکترین دانه‌های یک ماده رشته‌ای مشبک را نشان می‌دهد، اما تنها با میکروسکوپ فلورسنت و رنگ‌های مخصوص امکان‌پذیر است و بنابراین فقط در دسترس است. به چند آزمایشگاه .

اصل شمارش تعداد رتیکولوسیت ها با استفاده از میکروسکوپ فلورسنت بر اساس توانایی ماده رتیکولوسیتی در فلورسانس پس از درمان خون با آکریدین نارنجی است. خون با پرتقال آکریدین در لوله آزمایش یا مخلوط کن به نسبت 1 قسمت خون و 10 قسمت رنگ مخلوط می شود (این مخلوط را نمی توان بیش از 5 ساعت نگهداری کرد). مخلوط به مدت 2 دقیقه هم زده می شود، یک قطره از مخلوط روی یک اسلاید شیشه ای ریخته می شود و با یک ورقه پوششی پوشانده می شود. در این مورد، مایع نباید از پوشش پوششی فراتر رود.

میکروسکوپ با استفاده از فیلتر نور ZhS-17. در آماده سازی، گلبول های قرمز دارای خطوط سبز تیره هستند و فلورسانس نمی کنند و در رتیکولوسیت ها، ماده گرانولار مشبک قرمز روشن می درخشد و شمارش رتیکولوسیت ها را آسان می کند. در خون تثبیت شده با هپارین یا سیترات سدیم، فلورسانس رتیکولوسیت مشاهده نمی شود.

3.) شمارش خودکار رتیکولوسیت ها با استفاده از آنالایزر هماتولوژی.

در آنالایزرهای هماتولوژیک مدرن، فناوری شمارش سلول های خونی بر اساس روش هدایت سنجی ارائه شده توسط اچ. والاس و جوزف آر. کالتر در سال 1947 است. اصل این روش، شمارش تعداد و تعیین ماهیت تکانه هایی است که زمانی رخ می دهد. سلول از سوراخی با قطر کوچک (دیافراگم) عبور می کند که در دو طرف آن دو الکترود جدا شده از یکدیگر وجود دارد. هر عبور سلول از دیافراگم با ظهور یک ضربه الکتریکی همراه است که توسط یک سنسور الکترونیکی ثبت می شود. تقسیم سلول ها به دسته ها (گلبول های قرمز، لکوسیت ها، پلاکت ها، رسوب) توسط دستگاه بر اساس تجزیه و تحلیل دامنه پالس های دریافتی انجام می شود.برای تعیین غلظت سلول ها کافی است حجم مشخصی از نمونه عبور داده شود. از طریق کانال و شمارش تعداد پالس های تولید شده.

لازم به ذکر است که علاوه بر پارامتر کلاسیک رتیکولوسیت ها - محتوای نسبی (٪) رتیکولوسیت ها (RET٪ درصد رتیکولوسیت ها) که با استفاده از روش های 1 و 2 تشخیص آزمایشگاهی در ارتباط با ظهور فناوری پیشرفته تعیین می شود. آنالایزرهای هماتولوژیک (روش 3) ممکن است (به عنوان مثال، با استفاده از رنگ فلورسنت ثبت شده برای آنالایزر Sysmex-XT-2000i) پارامترهای رتیکولوسیتی اطلاعات اضافی را بدست آورید:
رتیکولوسیت ها با محتوای RNA کم، بالغ ترین (LFR٪، بخش های رتیکولوسیتی با فلورسانس کم).
رتیکولوسیت ها با محتوای RNA متوسط ​​(MFR٪، بخش های رتیکولوسیت فلورسانس متوسط) - کسری از رتیکولوسیت ها با فلورسانس متوسط).
رتیکولوسیت ها با محتوای RNA بالا (HFR٪، بخش های رتیکولوسیتی با فلورسانس بالا) - کسری از رتیکولوسیت ها با فلورسانس بالا).
کسر رتیکولوسیتی نابالغ (IRF٪، کسر رتیکولوسیتی نابالغ).

تمایز رتیکولوسیت ها، بر اساس درجه بلوغ و بر این اساس، محتوای اسیدهای نوکلئیک، بازتابی از فعالیت خون ساز مغز استخوان است.

روش شناسی (آنالایزر Sysmex -XT- 2000i). در یک سلول جریان، سلول ها از یک پرتو لیزر نیمه هادی عبور می کنند که باعث پراکندگی پرتو با زاویه بالا و پایین و تحریک یک رنگ فلورسنت می شود. این امکان تعیین مراحل مختلف بلوغ رتیکولوسیت را بر اساس محتوای RNA در سلول ها و شدت لومینسانس آنها فراهم می کند. شمارش خودکار رتیکولوسیت ها بسیار دقیق است (بیش از 30000 گلبول قرمز شمارش می شود) و قابل تکرار (ضریب تغییرات حدود 6٪ است). این فناوری شمارش دقیق رتیکولوسیت ها را حتی در غلظت های بسیار کم تضمین می کند.

صاحبان پتنت RU 2612018:

این اختراع مربوط به پزشکی، یعنی تشخیص آزمایشگاهی است، و می توان از آن برای شمارش خودکار تعداد رتیکولوسیت ها در آنالایزرهای اسمیر خون استفاده کرد. ماهیت اختراع: پس از رنگ آمیزی فوق حیاتی اولیه رتیکولوسیت ها با کرسیل آبی درخشان، اسمیرها علاوه بر این ثابت می شوند و با فیکساتور May-Grunwald به مدت 1 دقیقه رنگ می شوند، با آب جاری شسته می شوند، رتیکولوسیت ها خشک می شوند و بر روی یک آنالایزر اسمیر خونی خودکار شمارش می شوند. نتیجه فنی: افزایش دقت و شتاب شمارش رتیکولوسیت ها. 2 بیمار، 3 خ.

این اختراع مربوط به پزشکی، یعنی تشخیص آزمایشگاهی است، و می توان از آن برای شمارش خودکار تعداد رتیکولوسیت ها در آنالایزرهای اسمیر خون استفاده کرد.

کمیت و ترکیب کیفی رتیکولوسیت ها یکی از شاخص های مهمی است که کارایی خون سازی را مشخص می کند و شمارش آنها در طول معاینات پیشگیرانه انبوه به طور گسترده ای مورد استفاده قرار می گیرد و توسط تعدادی دستور تنظیم می شود. استفاده از آنالایزرهای اسمیر خون خودکار به شما امکان می دهد ارزیابی ترکیب سلولی یک اسمیر خونی را که طبق رومانوفسکی-گیمسا رنگ آمیزی شده است، خودکار کنید. با این حال، شمارش رتیکولوسیت ها در چنین اسمیرها غیرممکن است، زیرا طبق رومانوفسکی-گیمسا، ماده رتیکولوفلامنتوز هنگام رنگ آمیزی تشخیص داده نمی شود.

روش شناخته شده ای برای شمارش تعداد رتیکولوسیت ها پس از رنگ آمیزی سوپراویتال در یک اسمیر خونی تهیه شده ویژه وجود دارد [روش های تحقیق آزمایشگاهی در کلینیک: کتابچه راهنمای / Menshikov V.V., Delktorskaya L.N., Zolotnitskaya R.P. و غیره.؛ اد. V.V. منشیکوف. - م.: پزشکی، 1366، - 368 ص: بیمار، ص 118-119]. برای انجام این کار، خون جمع آوری شده با یک ماده ضد انعقاد (اتیلن دی آمید تترا استات، هپارین یا سیترات سدیم) با محلولی از رنگ کرسیل بلو درخشان (الماس کرسیل آبی) مخلوط می شود، مخلوط به مدت 30 دقیقه انکوبه می شود و یک اسمیر نازک تهیه می شود. با این حال، هنگام استفاده از آنالایزرهای اسمیر خونی خودکار، این روش رنگ آمیزی رتیکولوسیت نتایج شمارش رتیکولوسیتی نادقیق می دهد. این به این دلیل است که با این روش رنگ‌آمیزی، گلبول‌های قرمز رنگ کم‌رنگ، در سایه‌های مختلف زرد-آبی رنگ می‌شوند، که تشخیص خودکار سلول‌ها و شناسایی ماده رتیکولوفیلامنتوز را که به رنگ آبی-سبز نیز رنگ می‌شود، دشوار می‌کند. 1).

نتیجه فنی: افزایش دقت و شتاب شمارش رتیکولوسیت ها.

این نتیجه با تغییر پروتکل رنگ آمیزی و استفاده از آنالایزرهای اسمیر خونی خودکار حاصل می شود.

روش در عکس ها توضیح داده شده است، جایی که عکس اول (شکل 1) نتیجه رنگ آمیزی سنتی رتیکولوسیت ها (نمونه اولیه) را نشان می دهد. گلبول های قرمز در سایه های مختلف سبز مایل به آبی رنگ می شوند که در دو تای آنها ماده شبکه ای رشته ای آبی رتیکولوسیت ها قابل توجه است. عکس دیگری نتیجه استفاده از روش پیشنهادی برای تهیه اسمیر خون را نشان می دهد: گلبول های قرمز خون به رنگ قرمز روشن رنگ می شوند که در پس زمینه آن ماده رتیکولو رشته ای رتیکولوسیت ها به رنگ آبی روشن رنگ آمیزی شده است (شکل 2).

روش به شرح زیر انجام می شود.

خون آزمودنی با یک ضد انعقاد، به عنوان مثال، نمک پتاسیم اتیلن دی آمین تتراستیک اسید گرفته می شود. رنگ آمیزی سوپراویتال رتیکولوسیت ها با استفاده از کرسیل آبی درخشان (الماس-کرسیل آبی) انجام می شود. 0.4 میلی لیتر محلول رنگ را به 0.1 میلی لیتر خون کامل اضافه کنید و به مدت 30 دقیقه انکوبه کنید. سپس یک اسمیر نازک از مخلوط به دست آمده تهیه می شود. پس از خشک شدن اسمیر، علاوه بر آن با رنگ ثابت کننده May-Grunwald ثابت و رنگ می شود. برای این کار، اسمیر خشک شده را به مدت 1 دقیقه در ظرفی با رنگ ثابت قرار دهید، سپس آن را از ظرف خارج کرده و با آب جاری بشویید. پس از خشک شدن، دارو بر روی آنالایزرهای اسمیر خون، به عنوان مثال، Vision Hema ® (FIRM MEDICA PRODUCT، روسیه) بررسی می شود. گلبول‌های قرمز رنگ‌آمیزی می‌شوند که در مقابل آن ماده رتیکولوفلامنتوز آبی به وضوح در رتیکولوسیت‌ها قابل مشاهده است (شکل 2). گلبول های قرمز خون جمع آوری و تجزیه و تحلیل می شوند، حداقل 1000 قطعه. تعداد گلبول های قرمز حاوی ماده رتیکولوفیلامنتوز نسبت به تمام گلبول های قرمز جمع آوری شده محاسبه می شود. نتیجه به صورت درصد بیان می شود.

محلول های زیر برای رنگ آمیزی اسمیر خون استفاده می شود:

1) محلولی از کرسیل آبی درخشان در الکل مطلق. برای تهیه الکل مطلق، لازم است اتانول 96 درصد را در چندین تغییر سولفات مس کلسینه خیس کنید (تا زمانی که پودر سولفات مس بی آب از رنگ آبی بازماند). برای 100 میلی لیتر الکل مطلق، 1.2 گرم رنگ مصرف کنید (تکنولوژی های آزمایشگاهی پزشکی و تشخیص: دایرکتوری. فناوری های آزمایشگاهی پزشکی / ویرایش شده توسط پروفسور A.I. Karpishchenko. - سن پترزبورگ؛ Intermedica، 2002. - 408 pp. P.284).

2) رنگ ثابت کننده May-Grunwald - 1 گرم رنگ خشک باید در 1 لیتر الکل متیل حل شود. (تکنولوژی ها و تشخیص های آزمایشگاهی پزشکی: دایرکتوری. فناوری های آزمایشگاهی پزشکی / ویرایش شده توسط پروفسور A.I. Karpishchenko. - سن پترزبورگ؛ Intermedica، 2002. - 408 pp. p. 277).

نمونه هایی از پیاده سازی خاص:

مثال 1. بیمار I.، 48 ساله. او مانند کارمند یک پالایشگاه نفت تحت بازرسی های دوره ای قرار می گرفت. خون با یک ضد انعقاد (نمک پتاسیم اتیلن دی آمین استیک اسید) از بیمار گرفته شد و 2 اسمیر تهیه شد. رتیکولوسیت ها در یک اسمیر با استفاده از روش سنتی و فقط با استفاده از کرسیل آبی درخشان رنگ آمیزی شدند. رتیکولوسیت ها در اسمیر دوم طبق روش پیشنهادی رنگ آمیزی شدند. برای انجام این کار، 0.1 میلی لیتر خون با محلول کرسیل بلو برلیانت مخلوط و به مدت 30 دقیقه انکوبه شد. سپس یک اسمیر خون نازک گرفته شد. پس از خشک شدن، اسمیر خون با فرو بردن آن در رنگ ثابت کننده May-Grunwald بیشتر ثابت و رنگ آمیزی شد. تعداد رتیکولوسیت ها در اسمیرها با استفاده از یک آنالایزر اسمیر خون Vision Hema Pro (FIRM MEDICA PRODUCT، روسیه) و به صورت دستی در زیر میکروسکوپ نوری (Meiji، ژاپن) تعیین شد.

تعداد رتیکولوسیت‌های شمارش‌شده روی آنالایزر اسمیر خون با رنگ‌آمیزی سنتی 1.5 درصد بود که از محدوده طبیعی مرجع فراتر رفت و در لام رنگ‌آمیزی شده با روش پیشنهادی، 0.9 درصد بود که با مقادیر طبیعی برای یک بزرگسال مطابقت دارد. هنگام شمارش دستی رتیکولوسیت ها، تعداد آنها در همان اسمیر به ترتیب 0.8٪ و 0.9٪ بود. این نشان دهنده افزایش دقت شمارش آنالیزورهای اسمیر خون هنگام استفاده از روش پیشنهادی تهیه اسمیر است. در همان زمان، سرعت مطالعه رتیکولوسیت ها بر روی دستگاه آنالایزر اسمیر خون 48 و 54 ثانیه بود، در حالی که شمارش دستی رتیکولوسیت ها 270 و 238 ثانیه طول کشید.

بنابراین، این مثال نشان می‌دهد که رنگ‌آمیزی رتیکولوسیتی پیشنهادی هنگام استفاده از آنالایزرهای اسمیر خون منجر به افزایش دقت نتایج و شمارش رتیکولوسیت‌ها سریع‌تر می‌شود.

مثال 2. بیمار Z. با تشخیص کم خونی آپلاستیک در بخش هماتولوژی KMSCH 1 در پرم بستری شد. به عنوان بخشی از پروتکل معاینه، شمارش رتیکولوسیت ها انجام شد. بیمار با داروی ضد انعقاد (نمک پتاسیم اتیلن دی آمین استیک اسید) خون گرفته و 2 اسمیر تهیه شد. رتیکولوسیت ها در یک اسمیر با استفاده از روش سنتی و فقط با استفاده از کرسیل آبی درخشان رنگ آمیزی شدند. رتیکولوسیت ها در اسمیر دوم طبق روش پیشنهادی رنگ آمیزی شدند. برای انجام این کار، 0.1 میلی لیتر خون با محلول کرسیل بلو برلیانت مخلوط و به مدت 30 دقیقه انکوبه شد. سپس یک اسمیر خون نازک گرفته شد. پس از خشک شدن، اسمیر خون با فرو بردن آن در رنگ ثابت کننده May-Grunwald بیشتر ثابت و رنگ آمیزی شد. تعداد رتیکولوسیت ها در اسمیرها با استفاده از یک آنالایزر اسمیر خون Vision Hema Pro (FIRM MEDICA PRODUCT، روسیه) و به صورت دستی در زیر میکروسکوپ نوری (Meiji، ژاپن) تعیین شد.

تعداد رتیکولوسیت‌های شمارش‌شده بر روی یک آنالایزر اسمیر خون در یک اسمی که به‌طور سنتی رنگ‌آمیزی می‌شد 0.3٪ بود، در یک اسمیر رنگ‌آمیزی شده با روش اصلاح‌شده - 0.2٪. هنگام شمارش دستی، نتیجه 0.2٪ و 0.2٪ است. در همان زمان، سرعت شمارش رتیکولوسیت ها در دستگاه آنالایزر اسمیر خون 58 و 52 ثانیه بود، در حالی که شمارش دستی رتیکولوسیت ها 302 و 338 ثانیه طول کشید.

در این مورد، به دلیل محتوای کم رتیکولوسیت ها، تفاوت قابل توجهی در نتایج مشاهده نشد، با این حال، نتیجه تا حدودی متورم به دست آمده بر روی دستگاه آنالایزر اسمیر خون هنگام بررسی یک اسمیر رنگ‌آمیزی شده به روش معمول قابل توجه است. درست مانند مثال قبلی، شتاب قابل توجهی (تقریبا 5 برابر شتاب در شمارش رتیکولوسیت ها) نشان داده شد.

مثال 3. بیمار K. بستری در بخش آسیب شناسی نوزادان بیمارستان بالینی شهر کودکان شماره 13 در پرم با تشخیص بیماری همولیتیک نوزادان. به عنوان بخشی از پروتکل معاینه، شمارش OAK با شمارش رتیکولوسیت انجام شد. بیمار با داروی ضد انعقاد (نمک پتاسیم اتیلن دی آمین استیک اسید) خون گرفته و 2 اسمیر تهیه شد. رتیکولوسیت ها در یک اسمیر با استفاده از روش سنتی و فقط با استفاده از کرسیل آبی درخشان رنگ آمیزی شدند. رتیکولوسیت ها در اسمیر دوم با استفاده از روش پیشنهادی رنگ آمیزی شدند. برای انجام این کار، 0.1 میلی لیتر خون با محلول برلیان کرسیل بلو مخلوط شد و به مدت 30 دقیقه انکوبه شد. سپس یک اسمیر خون نازک گرفته شد. پس از خشک شدن، اسمیر خون با فرو بردن آن در رنگ ثابت کننده May-Grunwald بیشتر ثابت و رنگ آمیزی شد. تعداد رتیکولوسیت ها در اسمیرها با استفاده از یک آنالایزر اسمیر خون Vision Hema Pro (FIRM MEDICA PRODUCT، روسیه) و به صورت دستی در زیر میکروسکوپ نوری (Meiji، ژاپن) تعیین شد.

تعداد رتیکولوسیت های شمارش شده بر روی یک آنالایزر اسمیر خون در یک اسمی که به طور سنتی رنگ آمیزی شده بود 30.3٪ بود، در یک اسمیر رنگ آمیزی شده با روش اصلاح شده - 21.2٪. هنگام شمارش دستی، نتیجه 20.6٪ و 22.4٪ است. در همان زمان، سرعت شمارش رتیکولوسیت ها در دستگاه آنالایزر اسمیر خون 52 و 51 ثانیه بود، در حالی که شمارش دستی رتیکولوسیت ها 298 و 304 ثانیه طول کشید.

این مثال کاهش دقت شمارش رتیکولوسیت‌ها را بر روی آنالایزرهای اسمیر خون در لام‌های شیشه‌ای رنگ‌آمیزی شده با روش سنتی، به ویژه با محتوای بالای رتیکولوسیت نشان می‌دهد. استفاده از روش جدید رنگ آمیزی اسمیر منجر به همزمانی تقریباً کامل نتایج شمارش رتیکولوسیت ها بر روی آنالایزر خودکار و دستی شد، در حالی که سرعت شمارش رتیکولوسیت ها بیش از 5 برابر افزایش یافت.

روشی برای تهیه اسمیر خونی برای شمارش رتیکولوسیت ها با رنگ آمیزی فوق حیاتی رتیکولوسیت ها با کرسیل آبی درخشان که مشخصه آن این است که پس از رنگ آمیزی با کرسیل بلو برلیانت، اسمیرها علاوه بر آن ثابت شده و به مدت 1 دقیقه با فیکساتور May-Grunwald رنگ آمیزی می شوند و با آب جاری شسته می شوند. خشک می شود و رتیکولوسیت ها روی آنالایزر اسمیر خونی خودکار شمارش می شوند.

اختراعات مشابه:

این اختراع مربوط به تشخیص است، یعنی به روشی برای پیش بینی پیشرفت عوارض چرکی نکروز پانکراس. روشی برای پیش‌بینی ایجاد عوارض چرکی نکروز پانکراس این است که در بیمار مبتلا به نکروز استریل پانکراس، از روز پنجم شروع بیماری، فعالیت آلفا آمیلاز در خون، محتوای پروتئین کل، لنفوسیت ها، مونوسیت ها در خون، نسبت آلبومین و گلوبولین ها در سرم خون، شدت وضعیت بیمار با توجه به مقیاس های SAPS، SOFA، SIRS زیر، وجود ارتشاح پارا پانکراس، فلج دستگاه گوارش، حاد تعیین می شود. تجمع مایع در بورسا یا بافت خلفی صفاقی و محاسبه شاخص عفونت نکروز پانکراس (IPNI) با استفاده از فرمول.

گروهی از اختراعات مربوط به تعیین غلظت یک آنالیت در یک سیال بیولوژیکی بر اساس وابستگی به دست آمده از مقدار فعلی به زمان است. روشی برای تعیین غلظت آنالیت در مایع فیزیولوژیکی شامل قرار دادن یک معرف برای برهمکنش با آنالیت در سیال فیزیولوژیکی بین الکترود اول و الکترود دوم، اعمال مایع فیزیولوژیکی به معرف، تبدیل آنالیت در مایع فیزیولوژیکی و برانگیختن یک جریان غیر ساکن از هر یک از الکترودهای اول و دوم، تعیین پیک جریان غیر ساکن برای هر یک از الکترودهای اول و دوم، اندازه‌گیری مقدار جریان گذرا در زمان معینی که از پیک هر جریان گذرا جبران می‌شود. از هر یک از الکترودهای اول و دوم، که در آن جابجایی زمانی برای الکترود اول شامل یک دفع اول از پیک جریان گذرا الکترود اول است، و زمان آفست از پیک جریان گذرا الکترود دوم شامل یک آفست زمان دوم است. متفاوت از اولین بار آفست و محاسبه غلظت آنالیت بر اساس مقادیر جریان اندازه گیری شده الکترودهای اول و دوم در مرحله اندازه گیری.

این اختراع مربوط به پزشکی است و روشی برای تعیین سندرم درد ناشی از پلی نوروپاتی در بیماران مبتلا به بیماری ارتعاشی از جمله جمع آوری خون وریدی، دریافت سرم خون و تعیین مقدار کمی سروتونین در آن است.

این اختراع به پزشکی، یعنی ریه‌شناسی، مربوط می‌شود و به روشی برای انتخاب مدت درمان با سرولوپلاسمین در بیماران مبتلا به آسم برونش می‌پردازد. ماهیت روش این است که در بیماران مبتلا به آسم برونش، سوپراکسید دیسموتاز (SOD) و مالون آلدئید (MA) و نسبت MDA / SOD آنها در خون پس از درمان با سرولوپلاسمین با دوز 100 میلی گرم وریدی یک بار در روز به مدت 7 تعیین می شود. روزها.

این اختراع مربوط به ماهی شناسی و پرورش ماهی است و روشی برای آزمایش وضعیت فیزیولوژیکی ماهیان خاویاری است، از جمله مطالعه سرم خون ماهی، مشخصه آن این است که سرم خون با روش آبگیری لبه در سلول های تحلیلی و تجزیه و تحلیل مورفولوژیکی بررسی می شود. ساختارهای حاصل در حالت میکروسکوپ معمولی با بزرگنمایی‌های مختلف انجام می‌شود، در این حالت، اشکال دندریتی و انتقالی شاخص‌های هنجار هموستاز هستند و وجود ساختارهای لایه‌ای نشان‌دهنده تغییراتی است که در بدن ماهی رخ می‌دهد.

این اختراع مربوط به پزشکی، یعنی پیوند اعضا و تشخیص آزمایشگاهی بالینی است. 4-3 هفته پس از پیوند کبد، غلظت فاکتور رشد تبدیل کننده بتا 1 (TGF-β1) بر حسب ng/ml در پلاسمای خون کودکان اندازه گیری می شود.

این اختراع مربوط به حوزه پزشکی است و به روشی برای تشخیص شدت حمله در بیماران مبتلا به بیماری کرون مربوط می شود. ماهیت روش این است که میزان رسوب گلبول های قرمز (ESR)، غلظت پروتئین واکنشی C (CRP)، سطح فاکتور عروقی اندوتلیال (VEF) در سرم، تعداد سلول های اندوتلیال پوسته پوسته شده (DEC) در سرم تعیین می شود. پلاسمای خون محاسبه می شود و غلظت میکروآلبومین (MAU) در ادرار ارزیابی می شود.

این اختراع مربوط به شیرهای خاموشی است که برای محیط های گازی استفاده می شود و می توان از آنها به ویژه در ظروف نمونه برداری استفاده کرد. شیر ضد گاز حاوی پایه 1، بدنه 2، حداقل چهار حلقه آب بندی 5، 6، 7 و 8 است که از مواد پلیمری الاستیک و یک دوک 3 با قرقره 3a ساخته شده است.

شمارش رتیکولوسیت ها در اسمیر پس از رنگ آمیزی با رنگ های مخصوص

اصل روش: تشخیص ماده گرانولی-شبکه رتیکولوسیت ها در هنگام رنگ آمیزی فوق حیاتی با رنگ های قلیایی با شمارش بیشتر آنها در اسمیر خون.

می توانید از یکی از رنگ های زیر استفاده کنید: محلول آزور I؛ محلول آزور II.

روش تعیین: رنگ آمیزی یا روی شیشه یا در لوله آزمایش انجام می شود.

رنگ آمیزی رتیکولوسیت ها در لوله آزمایش با Azure II

0.05 میلی لیتر محلول رنگ آزور II و 0.2 میلی لیتر خون در یک لوله آزمایش قرار داده می شود. مخلوط کاملا مخلوط شده و 20 تا 30 دقیقه باقی می ماند. دوباره مخلوط کنید و اسمیرهای نازکی تهیه کنید.

رنگ آمیزی رتیکولوسیت ها در لوله آزمایش با Azure I

0.3-0.5 میلی لیتر محلول رنگ آزور I و 5 تا 6 قطره خون را با استفاده از یک پیپت از دستگاه پانچنکوف در یک لوله آزمایش قرار دهید. لوله آزمایش با درپوش لاستیکی بسته می شود، مخلوط کاملاً اما با دقت مخلوط می شود و 1 تا 1.5 ساعت باقی می ماند (رتیکولوسیت ها با قرار گرفتن در معرض 1.5 - 3 ساعت بهتر رنگ می شوند). اسمیرهای نازک را مخلوط کرده و آماده کنید.

اسمیرهای تهیه شده به صورت میکروسکوپی با لنز غوطه وری بررسی می شوند. در اسمیر، رتیکولوسیت ها و گلبول های قرمز متمایل به زرد مایل به سبز رنگ می شوند، ماده دانه ای رشته ای در رتیکولوسیت ها آبی (هنگامی که با لاجورد II رنگ می شود) یا آبی مایل به بنفش (زمانی که با لاجورد I رنگ می شود) است.

رتیکولوسیت ها شاخص مهمی از ظرفیت بازسازی مغز استخوان هستند. افزایش آنها در خون محیطی (رتیکولوسیتوز) در کم خونی همولیتیک، در بحران های همولیتیک، در از دست دادن حاد خون، مالاریا، در درمان کم خونی فقر آهن با آهن، در کمبود حاد اکسیژن مشاهده می شود. وجود افزایش تعداد رتیکولوسیت ها به فرد امکان می دهد به خونریزی پنهان مشکوک شود (به عنوان مثال، در بیماران مبتلا به تب حصبه، زخم معده).

کاهش در تعداد یا عدم وجود رتیکولوسیت ها (رتیکولوسیتوپنی) در کم خونی آپلاستیک و هیپوپلاستیک مولد مشاهده می شود. کم خونی ناشی از کمبود آهن، ویتامین B12، اسید فولیک؛ با متاستازهای سرطانی به استخوان؛ بیماری تشعشع؛ پرتو درمانی؛ درمان با سیتواستاتیک

تکنیک انجام تست ریوالتا.

تست ریوالتا یک آزمایش بیوشیمیایی برای افتراق ترانسودات و اگزودا است.

روش به شرح زیر است: اگزوداها حاوی سروموسین (ترکیبی با ماهیت گلوبولین) هستند که با محلول ضعیف اسید استیک تست مثبت (دناتوره شدن) می دهد. 100-150 میلی لیتر آب مقطر داخل سیلندر ریخته می شود، با 2-3 قطره اسید استیک گلاسیال اسیدی می شود و مایع آزمایش قطره قطره به آن اضافه می شود. سقوط قطره اگزودا ابری را به شکل ابری سفید تشکیل می دهد که به پایین رگ فرو می رود. یک قطره ترانسودات کدورت ایجاد نمی کند یا ناچیز است و به سرعت حل می شود. علیرغم این تفاوت‌ها بین اگزودا و ترانسودات، تمایز بین آنها در عمل همیشه آسان نیست، زیرا گاهی اوقات باید با تعدادی از مایعات انتقالی و همچنین اگزوداها که از نظر محتوای پروتئین و تراکم نسبی به ترانسودات نزدیک هستند سر و کار داشته باشید.

رتیکولوسیت ها هستندگلبول های قرمز جوان پس از از دست دادن هسته های نرموبلاست ها تشکیل می شوند.

ویژگی بارز رتیکولوسیت هاوجود یک ماده مشبک دانه ای است که با رنگ آمیزی فوق حیاتی، یعنی بدون تثبیت اولیه سلول ها ظاهر می شود.

الکترون میکروسکوپی نشان داده شده استساختارهای گرانولار-شبکه ای نشان دهنده بقایای شبکه آندوپلاسمی، ریبوزوم ها و میتوکندری های حاوی RNA هستند. در رتیکولوسیت ها پروتئین (گلوبین)، هم، پورین ها، نوکلئوتیدهای پیریمیدین، فسفاتیدها و لیپیدها به مقدار کمی سنتز می شوند، اما RNA در آنها سنتز نمی شود. به مدت 2 روز، رتیکولوسیت در جریان خون باقی می ماند و پس از آن، با کاهش RNA، تبدیل به یک گلبول قرمز بالغ می شود.

در اسمیرهایی که با استفاده از روش‌های معمولی هماتولوژیک رنگ‌آمیزی می‌شوند، رتیکولوسیت‌ها به رنگ صورتی مایل به خاکستری هستند - پلی کروماتوفیلیک، یعنی. رنگ آمیزی شده با رنگ های مختلف

روش های شمارش رتیکولوسیت

در حال حاضر از روش یکپارچه برای شمارش تعداد رتیکولوسیت ها پس از رنگ آمیزی استفاده می شود

• آبی کرسیلی درخشان،
• لاجوردی من یا
• Azure II مستقیماً روی شیشه یا در یک لوله آزمایش.

1. اصل روش

تشخیص ماده گرانول-شبکه گلبول های قرمز هنگام رنگ آمیزی با رنگ های قلیایی با شمارش بیشتر آنها در اسمیر خون.

2. معرف ها:

الف) محلول اشباع شده کرزیل آبی درخشان در الکل مطلق(برای تهیه الکل مطلق، باید 96٪ اتانول را در چندین تغییر پودر سولفات مس کلسینه خیس کنید): 1.2 گرم رنگ در هر 100 میلی لیتر الکل؛

ب) محلول لاجوردی I: لاجورد I - 1 گرم، اگزالات آمونیوم - 0.4 گرم، کلرید سدیم - 0.8 گرم، اتیل الکل 96٪ - 10 میلی لیتر، آب مقطر - 90 میلی لیتر. محلول رنگ در یک بطری دربسته به مدت 2 تا 3 روز در یک ترموستات در دمای 37 درجه سانتیگراد قرار داده می شود و به شدت تکان داده می شود. سپس تا دمای اتاق خنک شده و از فیلتر کاغذی فیلتر کنید. محلول در یک ظرف شیشه ای تیره نگهداری می شود. اگر رسوب ظاهر شد، رنگ باید دوباره فیلتر شود.

ج) محلول Azur II: لاجورد II - 1 گرم، سیترات سدیم - 5 گرم، کلرید سدیم - 0.4 گرم، آب مقطر - 45 میلی لیتر. محلول به مدت 2 روز در ترموستات با دمای 37 درجه سانتیگراد باقی می‌ماند و هر از گاهی هم می‌زنیم. برای تسریع در انحلال، می توان رنگ را به مدت 15 تا 20 دقیقه روی حرارت کم گرم کرد، بدون اینکه آن را به جوش آورد. تا دمای اتاق خنک کنید و فیلتر کنید. در ظروف شیشه ای تیره نگهداری شود.

3. رنگ آمیزی

رنگ آمیزی روی شیشه:

• یک اسلاید شیشه ای که به خوبی شسته شده و چربی زدایی شده روی شعله مشعل گرم می شود. با استفاده از یک میله شیشه ای، یک قطره از یکی از رنگ ها را روی لیوان بمالید و با استفاده از شیشه آسیاب شده، لکه ای از رنگ آماده کنید. با استکلوگراف روی شیشه ای را که خط رنگ روی آن اعمال شده است علامت بزنید. در این شکل، شیشه را می توان برای استفاده در آینده آماده کرد و در مکانی خشک و تاریک نگهداری کرد.
• یک قطره خون به لیوانی که به این ترتیب تهیه شده است ریخته می شود، اسمیر نازکی ایجاد می شود و شیشه بلافاصله در یک محفظه مرطوب قرار می گیرد. برای انجام این کار، از یک ظرف پتری با درب استفاده کنید که در آن رول های گاز یا پنبه کمی مرطوب شده در اطراف لبه ها قرار می گیرد.
• اسمیرها به مدت 3 تا 5 دقیقه در یک محفظه مرطوب نگهداری می شوند و سپس در هوا خشک می شوند. ماده مشبک دانه ای رتیکولوسیت ها به رنگ آبی مایل به بنفش رنگ آمیزی شده است که به وضوح در برابر پس زمینه مایل به آبی مایل به سبز گلبول های قرمز برجسته است.

رنگ آمیزی آزمایشگاهی:

• روش 1:قبل از استفاده، یک محلول کاری از کرسیل آبی درخشان در یک لوله آزمایش بر اساس یک قطره محلول اگزالات پتاسیم 1% و 4 قطره محلول رنگ 1. 40 میکرولیتر خون به رنگ اضافه کنید (دو پیپت تا علامت 0.02). این مخلوط کاملاً اما به آرامی مخلوط می شود و 30 دقیقه باقی می ماند. اسمیرهای نازک را هم بزنید و آماده کنید.
• روش 2: 0.05 میلی لیتر محلول رنگ 3 و 0.2 میلی لیتر خون در یک لوله آزمایش قرار داده می شود. مخلوط کاملا مخلوط شده و 20 تا 30 دقیقه باقی می ماند. اسمیرهای نازک را هم بزنید و آماده کنید.
• روش 3: 0.3-0.5 میلی لیتر محلول رنگ 2 و 5-6 قطره خون با استفاده از یک پیپت از دستگاه پانچنکوف در یک لوله آزمایش قرار داده می شود. لوله آزمایش با یک درپوش لاستیکی بسته می‌شود، مخلوط کاملاً اما با دقت مخلوط می‌شود و به مدت 1-1 و نیم ساعت باقی می‌ماند (رتیکولوسیت‌ها بهتر است با قرار گرفتن در معرض 1½ تا 3 ساعت رنگ‌آمیزی شوند). اسمیرهای نازک را مخلوط کرده و آماده کنید.

4. تعداد رتیکولوسیت ها

در اسمیر، گلبول های قرمز خون به رنگ زرد مایل به سبز است، ماده دانه ای رشته ای آبی یا آبی مایل به بنفش است.

• اسمیرهای تهیه شده با استفاده از یکی از روش های فوق به صورت میکروسکوپی با یک لنز غوطه ور بررسی می شوند.
• لازم است حداقل 1000 گلبول قرمز شمارش شود و در میان آنها تعداد گلبول های قرمز حاوی یک ماده دانه ای رشته ای ذکر شود. برای اسمیرهای نازک یکنواخت که گلبول های قرمز در یک ردیف قرار دارند، میدان دیدی را انتخاب کنید که مثلاً 50 گلبول قرمز در آن وجود دارد و سپس 20 میدان دید را محاسبه کنید.
• در عمل برای دقت بیشتر از چشمی مخصوص استفاده می کنند که در آن می توان میدان دید را به اندازه مورد نیاز کاهش داد. اگر چشمی آماده ندارید، می توانید به راحتی آن را با بازکردن پیچ چشمی × 7، گذاشتن کاغذی که یک مربع کوچک در آن برش داده اید تهیه کنید و آن را پیچ کنید. تعداد رتیکولوسیت های شمارش شده در هر 1000 یا در هر 100 گلبول قرمز بیان می شود.

محتوای کمی رتیکولوسیت ها

نرمال: 0.5-1.2٪ (30-70 × 109 /l)

افزایش در تعداد رتیکولوسیت ها با موارد زیر مشاهده می شود:

• از دست دادن خون (به ویژه حاد)؛
• کم خونی همولیتیک، به ویژه در طول یک بحران (تا 20-30٪).
• در پس زمینه درمان کم خونی مگالوبلاستیک با ویتامین B12 (بحران رتیکولوسیت - افزایش تعداد رتیکولوسیت ها در روز چهارم تا هشتم درمان).

کاهش تعداد رتیکولوسیت ها مشخصه موارد زیر است:

• کم خونی آپلاستیک و هیپوپلاستیک؛
• کم خونی مگالوبلاستیک درمان نشده؛
• بیماری تشعشع؛
• مصرف داروهای سیتواستاتیک

رتیکولوسیت ها نشانگر تعداد سلول ها، پیش سازهای گلبول های قرمز، تشکیل شده در مغز استخوان هستند. رتیکولوسیت ها - گلبول های قرمز جوان منعکس کننده توانایی بازسازی مغز استخوان هستند. برای ارزیابی شدت خون سازی از شمارش رتیکولوسیت استفاده می شود. این مطالعه زمانی انجام می شود که: کاهش تعداد گلبول های قرمز، مشکوک به همولیز، ارزیابی اریتروپوئیز، در درمان کم خونی با مکمل های آهن و ویتامین B12، اریتروپویتین.

رتیکولوسیت‌ها گلبول‌های قرمز نابالغ و هسته‌دار هستند که بلوغ آن‌ها در عرض 24 تا 48 ساعت پس از آزاد شدن از مغز استخوان در خون محیطی اتفاق می‌افتد. تعداد رتیکولوسیت های تشکیل شده نشان دهنده فعالیت اریتروپوئیتیک مغز استخوان است. به عبارت دیگر، محتوای رتیکولوسیت ها سرعت تشکیل گلبول های قرمز خون را نشان می دهد و به عنوان نشانگر پاسخ مغز استخوان به کم خونی عمل می کند.

علاوه بر پارامترهای پذیرفته شده رتیکولوسیت ها - محتوای مطلق و نسبی (٪) رتیکولوسیت ها، ظهور آنالیزورهای جدید هماتولوژی (رنگ آمیزی با رنگ های مخصوص اسیدهای نوکلئیک) امکان به دست آوردن پارامترهای رتیکولوسیت اضافی را فراهم کرد:

رتیکولوسیت‌ها با محتوای RNA کم، بالغ‌ترین (LFR، کسری از رتیکولوسیت‌ها با فلورسانس کم).
رتیکولوسیت ها با محتوای RNA متوسط ​​(MFR٪، کسری از رتیکولوسیت ها با فلورسانس متوسط).
رتیکولوسیت ها با محتوای RNA بالا (HFR٪، کسری از رتیکولوسیت ها با فلورسانس بالا).
کسر رتیکولوسیتی نابالغ (IRF٪، کسر رتیکولوسیتی نابالغ).

تمایز رتیکولوسیت ها، بر اساس درجه بلوغ و بر این اساس، محتوای اسیدهای نوکلئیک، بازتابی از فعالیت خون ساز مغز استخوان است.