☰

مشاهده نسخه کامل روش تشخیص زودهنگام سل حیوانی برای سلامتی 1978 مطالعات ایمونولوژیک لیز لکوسیت

به عنوان نسخه خطی

پولیاکوا اولگا نیکولاونا

بهبود تشخیص اولیه

سل حیوانی

02/06/02 – میکروبیولوژی دامپزشکی، ویروس شناسی، اپیزوتولوژی،

قارچ شناسی با قارچ شناسی و ایمونولوژی

A V T O R E F E R A T

کاندیدای علوم دامپزشکی

Novocherkassk - 2011

این کار در موسسه علمی دولتی انجام شد

دامپزشکی تحقیقات منطقه ای قفقاز شمالی

موسسه آکادمی علوم کشاورزی روسیه

مشاور علمی:دکترای علوم دامپزشکی، استاد

دوبووی بوریس لاورنتیویچ

مخالفان رسمی:دکترای علوم دامپزشکی Popov M.A.

دکترای علوم دامپزشکی،

دانشیار Khabuzov I.P.

سازمان پیشرو: موسسه علمی دولتی Pri-Caspian Zonal Science-

پژوهشکده دامپزشکی

آکادمی کشاورزی روسیه

در جلسه شورای پایان نامه D 006.106.01 در موسسه علمی دولتی موسسه تحقیقات دامپزشکی منطقه قفقاز شمالی آکادمی علوم کشاورزی روسیه.

346421، منطقه روستوف، نووچرکاسک، بزرگراه روستوف، 0

پایان نامه را می توان در کتابخانه موسسه تحقیقات علمی دامپزشکی منطقه قفقاز شمالی آکادمی کشاورزی روسیه - 346421، منطقه روستوف، نووچرکاسک، بزرگراه روستوف، 0 پیدا کرد.

دبیر علمی

شورای پایان نامه، دکترای علوم زیستی صبح. ارماکوف

شرح کلی کار

مرتبط بودن مشکلمبارزه با سل حیوانی مهمترین مشکل است. حذف سل حیوانی نه تنها اهمیت دامپزشکی، بلکه اقتصادی و اپیدمیولوژیک دارد.

مهم ترین نکته در سیستم اقدامات ضد سل، شناسایی به موقع دام های آلوده و حذف آنها از گله به عنوان منبع عامل بیماری زا سل است.

در این راستا، هنگام تشخیص سل، تمایز واکنش‌های اختصاصی و غیراختصاصی به تجویز داخل جلدی توبرکولین از اهمیت ویژه‌ای برخوردار است.

یکی از مهمترین وظایف در پیشگیری از سل در حیوانات مزرعه، بهبود تشخیص است، زیرا روش های موجود تشخیص حیوانات بیمار را در مرحله اولیه بیماری تضمین نمی کند.

مشکل بهبود تشخیص سل حیوانی با هدف یافتن راهی برای تشخیص زودهنگام بالینی بیماری و حل تعدادی از مشکلات مرتبط با تشخیص افتراقی سل، واکنش‌های توبرکولین ناشی از حساس شدن بدن توسط مایکوباکتریوم‌های آتیپیک و گونه‌های پرندگان است. . بنابراین، یک روش تشخیصی مورد نیاز است که به سرعت به شناسایی حیوان آلوده و بیمار کمک کند و از کشتار ناموجه و غیرموجه حیوانات بسیار پربار جلوگیری کند.

هدف مطالعه -توسعه روشی برای تشخیص زودهنگام سل حیوانی و تمایز واکنش های اختصاصی و غیر اختصاصی به تجویز داخل جلدی توبرکولین.

دستیابی به هدف مورد نظر با حل وظایف زیر انجام شد:

1) تعیین دوز کاری آلرژن؛

2) بررسی ویژگی و فعالیت واکنش لیز لکوسیت (LLLR) در شرایط آزمایشگاهی با آلرژن‌ها: PPD-tuberculin برای پستانداران، PPD-tuberculin برای پرندگان و CAM.

3) بررسی امکان استفاده از واکنش لیز لکوسیت خاص (SLLR) برای افتراق واکنش‌های خاص و غیراختصاصی در گاوهایی که به توبرکولین پاسخ مثبت دادند.

تازگی علمیروشی برای تشخیص زودهنگام سل ابداع شده است که امکان شناسایی حیوان آلوده را در عرض 24 ساعت پس از عفونت و افتراق واکنش‌های اختصاصی توبرکولین از واکنش‌های غیراختصاصی ممکن می‌سازد. استفاده از واکنش لیز لکوسیتی خاص با PPD-tuberculin برای پستانداران، PPD-tuberculin برای پرندگان و CAM امکان شناسایی حساسیت غیراختصاصی بدن ناشی از مایکوباکتری‌های آتیپیک را فراهم کرد.

تازگی علمی با ثبت اختراع شماره 2366454 "روش تشخیص زودهنگام سل حیوانی" تایید شده است.

مفاد اصلی ارائه شده برای دفاع:

1. تشخیص زودهنگام سل حیوانی.

2. تمایز واکنش های توبرکولین.

تایید کار.مواد اصلی پایان نامه در کنفرانس های علمی و عملی سالانه موسسه آموزشی دولتی فدرال آموزش عالی حرفه ای "دانشگاه کشاورزی دولتی دان"، موسسه تحقیقات دامپزشکی منطقه ای قفقاز شمالی آکادمی علوم کشاورزی روسیه در سال 2006 گزارش و مورد بحث قرار گرفت. -2010. و در کنفرانس های علمی و عملی همه روسی و بین المللی. ماخاچکالا، کازان، نووچرکاسک.

اجرای نتایج تحقیقات.نتایج تحقیق هنگام ارائه سخنرانی ها و برگزاری کلاس های آزمایشگاهی و عملی در مورد اپیزوتولوژی در موسسه آموزشی دولتی فدرال آموزش عالی حرفه ای "دانشگاه کشاورزی دولتی دان" استفاده می شود، در آزمایشگاه دامپزشکی منطقه ای، SBBZH Novocherkassk، SPK "Rassvet"، Matveevo آزمایش می شود. -منطقه کورگان، OJSC "Yuzhnoye"، منطقه Salsky و SEC "Sovetinsky"، منطقه Neklinovsky، منطقه روستوف.

انتشارات در مورد موضوع.بر اساس مواد کار پایان نامه، 15 مقاله علمی منتشر شده است که سه مورد از آنها در یک نشریه بررسی شده توسط کمیسیون عالی گواهی فدراسیون روسیه و یک پتنت روسی برای یک روش تشخیصی توصیه شده است.

اهمیت عملیمواد علمی به‌دست‌آمده به ما امکان می‌دهد یک حیوان آلوده را در اولین روز پس از آلودگی تشخیص دهیم و واکنش‌های مثبت توبرکولین غیراختصاصی ناشی از مایکوباکتری‌های آتیپیک و پرندگان را از موارد خاص تشخیص دهیم، که از اهمیت عملی زیادی برای حفظ حیوانات با واکنش‌های توبرکولین غیراختصاصی برخوردار است. RSLL برای استفاده در تشخیص گذشته نگر سل و تشخیص افتراقی واکنش های اختصاصی و غیراختصاصی به تجویز PPD-tuberculin برای پستانداران با آزمایش توبرکولین داخل جلدی توصیه می شود.

ساختار و محدوده کار.پایان نامه در 153 صفحه متن کامپیوتری ارائه شده است که شامل مقدمه، مرور ادبیات، تحقیق خود و بحث آن، نتیجه گیری، پیشنهادات کاربردی و فهرست منابع است. پایان نامه شامل 28 جدول می باشد. فهرست منابع شامل 264 منبع، از جمله 58 نویسنده خارجی است.

2. تحقیقات خود

مواد و روش تحقیق.این کار در بخش اپیزوتولوژی موسسه آموزشی دولتی فدرال آموزش عالی حرفه ای "دانشگاه کشاورزی دولتی دان"، در مزرعه آموزشی "دانسکویه" (دانشگاه خودمختار ایالتی دون، روستای پرشینوفسکی)، در آزمایشگاه ایالتی انجام شد. مؤسسه علمی SKZNIVI، در منطقه صنعتی شهر نووچرکاسک، در مزارع مناطق Matveevo-Kurgan، Neklinovsky و Salsky در منطقه روستوف.

حیوانات (گاو، خوک، سگ و خرگوش) که پارامترهای فیزیولوژیکی و خونی آنها در محدوده طبیعی بود برای آزمایش انتخاب شدند. پنج گروه آزمایش و یک گروه کنترل از حیوانات تشکیل شد. یک گروه کنترل برای مقایسه با گروه آزمایش برای اثبات اختصاصی بودن واکنش تشکیل شد. هر گروه آزمایش و کنترل شامل پنج حیوان بود.

در طول کار، پارامترهای خونی خون تازه (تعداد لکوسیت ها) و واکنش لیز اختصاصی لکوسیت ها در گاو، خوک، سگ و خرگوش مورد بررسی قرار گرفت.

حیوانات در گروه های آزمایشی بسته به دوز واکسن تزریق شده به پنج گروه تقسیم شدند تا شدت واکنش مشخص شود. پس از تزریق مایکوباکتری های زنده واکسن BCG به حیوانات گروه های آزمایشی و در گروه های کنترل واکسن بروسلوز pc.82، خون گرفته شد. در هر نمونه خون از حیوانات به دو نمونه آزمایش و شاهد تقسیم شد. نمونه های شاهد - خون با افزودن محلول سیترات سدیم 3.8 درصد و محلول فیزیولوژیکی، نمونه های تجربی - خون با افزودن محلول سیترات سدیم 3.8 درصد با PPD-tuberculin برای پستانداران، PPD-tuberculin برای پرندگان و CAM.

در نمونه‌های آزمایشی و شاهد، تعداد لکوسیت‌ها شمارش شد تا سپس با استفاده از فرمول، درصد لیز لکوسیت مشخص شود.

انتخاب دوز کاری از آلرژن‌ها با خون حیواناتی انجام شد که پارامترهای فیزیولوژیکی و خونی آنها در محدوده طبیعی بود، دوزی انتخاب شد که در آن درصد لیز لکوسیت بیش از 10 نباشد. جستجوی احتمالی برای یک آلرژن در دوز 0.05 تا 0.15 میلی لیتر.

برای تنظیم واکنش لیز اختصاصی لکوسیت ها، از روش موجود برای تعیین تعداد لکوسیت ها در خون استفاده کردیم. تعداد لکوسیت ها در نمونه های تجربی و شاهد شمارش شد و درصد لیز لکوسیت ها با استفاده از فرمول محاسبه شد.

0.1 میلی لیتر از خون آزمایش و دوز کاری 0.05 میلی لیتر از ماده حساسیت زا به چاه آزمایشی قرص حاوی 0.05 میلی لیتر از محلول سیترات سدیم 3.8 درصد اضافه شد. چاه کنترل با خون در همان حجم پر شد، اما به جای ماده آلرژی زا با نمک نمکی پر شد.

نمونه های خون با توبرکولین، CAM و سالین در ترموستات به مدت 2 ساعت در دمای 37+ درجه سانتیگراد انکوبه شدند و بطور دوره ای به آرامی تکان داده شدند. سپس برای از بین بردن گلبول‌های قرمز، 02/0 میلی‌لیتر خون از شاهد و سه چاهک آزمایشی گرفته شد و به چاهک‌های پلیت حاوی 4/0 میلی‌لیتر مایع ترک منتقل شد. تعداد لکوسیت ها (در اتاق گوریایف) در تمام نمونه ها شمارش شد.

سپس درصد لیز لکوسیت با استفاده از فرمول محاسبه شد:

RSLL = Lk-Lo * 100%

که در آن Lk و Lo تعداد مطلق لکوسیت‌ها در نمونه‌های خون کنترل و آزمایشی در طی یک نمونه‌گیری یک‌باره است.

RSLL زمانی مثبت در نظر گرفته شد که این نرخ 10٪ یا بیشتر بود.

هنگام مدل‌سازی فرآیند سل، برای تعیین فعالیت و ویژگی واکنش، شش گروه از حیوانات تشکیل شد: پنج آزمایش و یک کنترل.

به هر گروه تجربی دوز معینی از مایکوباکتری های زنده از واکسن BCG داده شد. به حیوانات گروه کنترل یک دوز واکسن ضد بروسلوز به صورت عددی داده شد. 82. در زمان تجویز و هر 24 ساعت، از حیوانات خون گرفته شد، به نمونه هایی با افزودن محلول سیترات سدیم 3.8 درصد و عوامل تشخیصی برای تعیین درصد لیز لکوسیت، بررسی حساسیت، فعالیت و ویژگی تقسیم شدند. از واکنش

در مزارع گاوهایی که به توبرکولین واکنش نشان دادند، خون با استفاده از واکنش لیز لکوسیت خاص مورد بررسی قرار گرفت. خون جمع آوری شده به نمونه های تجربی با افزودن PPD-tuberculin برای پستانداران، PPD-tuberculin برای پرندگان، KAM و یک نمونه شاهد با محلول نمک تقسیم شد. تعداد لکوسیت ها در تمام نمونه ها شمارش و شاخص RSLL محاسبه شد.

پس از مطالعه واکنش لیز اختصاصی لکوسیت ها، کشتار کنترلی و تشخیصی گاوهایی که به توبرکولین واکنش مثبت نشان دادند و معاینه دامپزشکی و بهداشتی پس از مرگ لاشه و اندام های داخلی برای تشخیص تغییرات پاتولوژیک مشخصه بیماری و مطالعه انجام شد. علت شناسی تست های توبرکولین باعث ایجاد واکنش های مثبت در واکنش های غیر اختصاصی می شود.

ما در نظر گرفتیم که چه نسبتی از تست‌های توبرکولین مثبت با نتایج RSLL، با تغییرات پاتولوژیک مشخصه سل همزمان است. همزمانی مثبت شدن تست های توبرکولین، RSLL و تغییرات پاتولوژیک مشخصه سل نیست؟ چند نمونه توبرکولین مثبت در RSLL با PPD-tuberculin برای پستانداران، با PPD-tuberculin برای پرندگان و KAM منطبق است. چه تعداد از تست های مثبت توبرکولین همزمان با اکینوکوکوز ایجاد شده در طی یک بررسی پاتولوژیک لاشه گاوهایی که برای اهداف تشخیصی کشته شده اند.

3. نتایج تحقیق

3.1. تعیین دوز کاری PPD–توبرکولین برای پستانداران، PPD-tuberculin برای پرندگان و KAM

دوز کاری آلرژن های تشخیصی بر روی خون سیترات شده حیواناتی که پارامترهای فیزیولوژیکی و هماتولوژیکی آنها در محدوده طبیعی بود، آزمایش شد. آلرژن در دوزهای 0.05 میلی لیتر، 0.1 میلی لیتر و 0.15 میلی لیتر استفاده شد و محلول فیزیولوژیکی در همان حجم ها گرفته شد.

دوز کاری نباید باعث تخریب لکوسیت ها و حساسیت به آلرژن، آنتی ژن و داروهای تشخیصی شود.

جدول نسبت حجمی توبرکولین ها و CAM را با خون و محلول سیترات سدیم 3.8 درصد نشان می دهد.

در نمونه‌های آزمایشی و شاهد، تعداد لکوسیت‌ها شمارش و درصد لیز لکوسیت‌ها با استفاده از فرمول محاسبه شد.

واکنش لیز لکوسیت خاص (SLLR) در تمام نمونه های خون با مواد آلرژن در گاو، خوک و خرگوش تا 3٪ و در سگ - تا 7٪ رسید. بنابراین، مقرون به صرفه تر است که از دوز 0.05 میلی لیتر از ماده حساسیت زا (توبرکولین یا CAM) به عنوان دوز کاری استفاده کنید، زیرا RSLL او کمتر از دوز 0.15 میلی لیتر بود. و ارزش آن برای PPD - توبرکولین برای پستانداران، PPD - توبرکولین برای پرندگان و KAM تقریباً یکسان بود.

دوز کاری توبرکولین ها و CAM برای RSLL 0.05 میلی لیتر بود، زیرا معلوم شد که مقرون به صرفه است و باعث تخریب لکوسیت ها نمی شود.

میز 1.

تعیین دوز کاری توبرکولین ها و CAM.


№

نمونه ها


محلول 3.8 درصد

سیترات سدیم
خون
نمونه های آزمایشی با

PPD ml., PPD pt. و KAM
نمونه ها را با محلول نمکی کنترل کنید

1

0,05
0,1
0,05
0,05

2

0,05
0,1
0,1
0,1

3

0,05
0,1
0,15
0,15

3.2. مطالعه ویژگی و فعالیت یک واکنش خاص

لیز لکوسیت

3.2.1. بررسی ویژگی و فعالیت RSLL در خون بزرگ

گاو

این آزمایش در مزرعه آموزشی Donskoye، منطقه Oktyabrsky، منطقه روستوف انجام شد.

30 راس گاو جوان چهار تا شش ماهه برای تحقیق انتخاب شدند.

پنج گروه آزمایش و یک گروه کنترل از حیوانات تشکیل شد. پنج حیوان در هر گروه قرار گرفتند.

به حیوانات در گروه‌های آزمایشی، مایکوباکتری‌های زنده سویه واکسن BCG در دوزهای واکسیناسیون: یک، سه، پنج، هفت، ده تزریق شدند. به گاوهای نر گروه کنترل یک دوز واکسن علیه بروسلوز از قطعه داده شد. 82. سپس از تمام حیوانات برای آزمایش با واکنش لیز لکوسیت خاص (SLLR) خون گرفته شد.

لکوسیت‌های حساس شده توسط مایکوباکتری‌های واکسن BCG در بدن، حساسیت بیشتری نسبت به آنتی ژن پیدا می‌کنند و هنگامی که با یک آلرژن مشابه در خارج از بدن (در شرایط آزمایشگاهی) مواجه می‌شوند، لیز می‌شوند.

در روز تجویز واکسن BCG به حیوانات، تعداد لکوسیت‌ها (به طور متوسط ​​برای گروه) در خارج از بدن در نمونه‌های خون هنگام تعامل با PPD-tuberculin برای پستانداران، PPD-tuberculin برای پرندگان و CAM تقریباً یکسان بود. که نشان دهنده عدم وجود لکوسیت های حساس شده توسط مایکوباکتریوم BCG است.

24 ساعت پس از تجویز واکسن BCG، تعداد لکوسیت‌ها (متوسط ​​گروهی) در نمونه‌های خون خارج از بدن با PPD-tuberculin برای پستانداران در نتیجه لیز آنها ناشی از تعامل سلول‌های حساس با ماده حساسیت‌زا کاهش یافت. وقتی به گاو نر یک دوز ایمنی از واکسن BCG داده شد، تعداد لکوسیت ها 9.0 10 بود. 9 /l (جدول شماره 2)، سه دوز – 8.6 10 9 /l، پنج دوز - 8.7 10 9 /l، هفت دوز - 8.6 10 9 /l، ده دوز - 7.1 10 9 /l (P
در نمونه های خون با سالین، PPD-tuberculin برای پرندگان و CAM، تعداد لکوسیت ها پس از 24 ساعت تحت تأثیر واکسن BCG بر روی بدن افزایش یافت. هنگام مطالعه نمونه های خون با محلول نمکی خارج از بدن از حیواناتی که با یک دوز واکسن BCG تزریق شده بودند، تعداد لکوسیت ها (به طور متوسط ​​برای گروه) 10.5 10 بود. 9 / لیتر، سه دوز - 10.2·10 9 /l، پنج دوز - 10.9 10 9 /l، هفت دوز - 12.0 10 9 /l، ده دوز - 12.0 10 9 /l. درصد لیز لکوسیت در نمونه های خون با PPD-tuberculin برای پرندگان و CAM وجود نداشت. این افزایش با واکنش بدن به واکسن تزریقی همراه است و با لکوسیتوز همراه است. لکوسیت های حساس شده با BCG در شرایط آزمایشگاهی با یک آلرژن نامرتبط تعامل ندارند. این ویژگی RSLL را نشان می دهد.

در تمام گروه‌های آزمایشی حیوانات، تعداد لکوسیت‌ها در نمونه‌های خون با محلول نمکی، PPD-tuberculin برای پرندگان و CAM پس از 48 ساعت به حداکثر خود رسید. تعداد لکوسیت ها (به طور متوسط ​​برای گروه) در نمونه های حاوی محلول نمک، PPD-tuberculin برای پرندگان و CAM 11.3 10 با معرفی یک دوز ایمنی BCG بود. 9 / لیتر، سه دوز - 11.6·10 9 /l، پنج دوز - 12.1·10 9 /l، هفت دوز - 13.3 10 9 / لیتر، ده دوز - 14.5 10 9 /l. و بعد از 72 ساعت به آرامی شروع به کاهش کرد.

جدول 2.

تعداد لکوسیت ها و شاخص های RSLL در خون گاوهای حساس شده با 1 دوز واکسن BCG.


زمان پس از تجویز مایکوباکتریوم زنده BCG (ساعت)

تعداد لکوسیت ها

تعداد لکوسیت ها

RSLL%

با
با PPDml
با
با
با PPDml

با PPDpt

با KAM

در لحظه حساس شدن

0.10±9.2

0.07±9.1

0.09±9.2

0.06±9.1

1
0
1

24
10.5±0.10

9.0±0.11

0.11±10.5

0.07±10.5

14
0
0

48
0.17±11.3

0.17±8.2

0.04±11.1

0.06±11.1

27
2
2

72
0.06±10.9

0.09±8.4

10.8±0.10

0.06±10.9

23
1
0

96
0.07±10.7

0.04±8.7

0.04±10.6

0.07±10.7

19
1
0

120
0.05±10.2

0.07±8.9

0.04±10.1

0.03±10.0

13
1
2

144
0.09±9.7

0.08±9.0

0.08±9.6

0.04±9.5

7
1
2

168
0.04±9.1

0.03±9.2

0.03±9.1

0.04±9.1

-1
0
0

Μ ± m – مقدار میانگین ± خطای میانگین حسابی

با افزایش دوز ایمنی BCG، تعداد لکوسیت های حساس در نمونه های خون افزایش می یابد و هنگامی که آنها در شرایط آزمایشگاهی با PPD-tuberculin برای پستانداران تعامل دارند، از بین می روند، در نتیجه درصد لیز لکوسیت ها افزایش می یابد.

پس از 48 ساعت در شرایط آزمایشگاهی، در نمونه های خون با PPD-tuberculin برای پستانداران، کاهش تعداد لکوسیت ها در نتیجه لیز رخ داد. هنگامی که یک دوز ایمنی از BCG به حیوانات داده شد، تعداد لکوسیت ها در مواجهه مکرر با آلرژن در شرایط آزمایشگاهی (به طور متوسط ​​برای گروه) 8.2 10 بود. 9 / لیتر، سه دوز - 8.0 10 9 /l، پنج دوز - 7.9 10 9 /l، هفت دوز - 7.7 10 9 /l، ده دوز - 7.5 10 9 /l. واکنش لیز اختصاصی لکوسیت ها در شرایط آزمایشگاهی برای یک دوز ایمنی برای هر حیوان - 27٪، سه دوز - 31٪، پنج دوز - 35٪، هفت دوز - 42٪، ده دوز - 48٪ تعیین شد. پس از 72 ساعت، لیز لکوسیت ها با یک دوز ایمنی برای هر حیوان به 23 درصد، با سه دوز به 28 درصد، با پنج دوز به 31 درصد، با هفت دوز به 37 درصد و با ده دوز به 41 درصد رسید.

پس از 72 ساعت، واکنش لیز اختصاصی لکوسیت ها در تمام گروه های آزمایشی حیوانات کاهش یافت.

تعداد لکوسیت ها در خون گاو در روزهای بعد (3 تا 7 روز) کاهش یافت و با تجویز یک، سه دوز در روز ششم به مقدار اولیه (که در روز واکسیناسیون با واکسن BCG ذکر شد) بازگشت. 144 ساعت)، پنج، هفت دوز - روز هفتم (168 ساعت) و ده دوز در روز هشتم (192 ساعت).

در نمونه‌های خون گاو نر حاوی PPD-tuberculin برای پرندگان و CAM، شاخص‌های RSLL در تمام روزهای آزمایش منفی بود و لیز لکوسیت‌ها وجود نداشت. نتایج نشان دهنده اختصاصی بودن واکنش است.

درصد زیادی از لیز لکوسیتی در نمونه های خون حیوانات حاوی PPD-tuberculin برای پستانداران مشاهده می شود و درصد لیز لکوسیت در نمونه های خون حاوی PPD-tuberculin برای پرندگان و CAM از 3٪ تجاوز نمی کند، یعنی زیر آستانه بود. در نظر گرفته شده است. از آنجایی که لکوسیت های حساس شده توسط مایکوباکتریوم BCG در شرایط آزمایشگاهی تحت تأثیر یک آلرژن مرتبط خاص از بین می روند.

فعالیت RSLL با این واقعیت مشخص می شود که با افزایش دوز واکسن مایکوباکتریوم زنده در قطعه. BCG از 0.05 میلی گرم به 0.50 میلی گرم برای هر حیوان، تعداد لکوسیت های حساس افزایش می یابد و درصد لیز لکوسیت افزایش می یابد.

با افزایش درصد لیز لکوسیت، بسته به دوز واکسیناسیون تجویز شده واکسن BCG، شدت و مدت واکنش لیز لکوسیتی افزایش یافته است.

مطالعات انجام شده با معرفی واکسن مایکوباکتریای زنده. BCG در گاو نر به ما اجازه داد تا ویژگی و فعالیت واکنش لیز خاص لکوسیت ها را تعیین کنیم، که برای تشخیص افتراقی واکنش های خاص به آلرژن دیگر ضروری است؛ واکنش لیز اختصاصی لکوسیت ها با PPD-tuberculin برای پستانداران، PPD- توبرکولین برای پرندگان و CAM منفی بود، زیرا تعداد لکوسیت‌ها در نمونه‌های خون تجربی با توبرکولین و CAM و همچنین در نمونه‌های شاهد با محلول نمکی تقریباً یکسان بود.

عدم وجود واکنش لیز لکوسیت در حیوانات واکسینه شده با واکسن ضد بروسلوز pc.82 با PPD-tuberculin برای پستانداران نیز نشان دهنده ویژگی واکنش لیز لکوسیت است، زیرا نمونه های خون حاوی لکوسیت هایی هستند که توسط یک آلرژن نامرتبط دیگر حساس شده اند.

3.2.2. بررسی ویژگی و فعالیت RSLL در خون خوک

با معرفی واکسن زنده مایکوباکتریوم BCG

برای این آزمایش، 30 راس خوک سه ماهه متعلق به شهروندان شهر نووچرکاسک انتخاب شدند.

خوک‌ها به پنج گروه 5 تایی تقسیم شدند که به صورت زیر جلدی واکسن BCG یک، دو، سه، چهار و پنج دوز تزریق شد.

تعداد لکوسیت ها (میانگین گروهی) در خوک ها در روز تجویز واکسن مایکوباکتریوم BCG در همه نمونه ها از 10.7 تا 10.9 متغیر بود. 9 /دروغ. در محدوده فیزیولوژیکی بود.

24 ساعت پس از تزریق واکسن، تعداد لکوسیت‌ها در نمونه‌های خون با سالین، PPD-tuberculin برای پرندگان و CAM تقریباً یکسان بود. با معرفی یک دوز ایمنی 11.8 - 11.9 10 9 ، دو دوز 13.2 10 9 ، سه دوز 14.8 - 14.9 10 9 ، چهار دوز 15.4 - 15.5 10 9 ، پنج دوز 15.8 - 15.9 10 9 ، زیرا لکوسیت های حساس با نمک نمک و آلرژن های نامرتبط واکنش نشان نمی دهند و لیز لکوسیت ها وجود ندارد.

در نمونه‌های خونی از خوک‌های واکسینه شده با BCG، علی‌رغم لکوسیتوز در بدن، در نمونه‌های خون در شرایط آزمایشگاهی هنگام تعامل با PPD-tuberculin برای پستانداران، تعداد لکوسیت‌ها پس از 24 ساعت شروع به کاهش کرد که در نتیجه لیز سلول‌های حساس پس از مواجهه با یک آلرژن مرتبط هنگامی که به خوکچه ها یک دوز ایمنی از واکسن BCG داده شد، تعداد لکوسیت ها در شرایط آزمایشگاهی (به طور متوسط ​​برای گروه) 10.5 بود. 9 /l، دو، سه، چهار دوز - 10.0 10 9 /l، پنج دوز - 9.9 10 9 /l (P
پس از 48 ساعت، تعداد لکوسیت‌ها در نمونه‌های خون با PPD-tuberculin برای پستانداران در شرایط آزمایشگاهی به حداقل مقدار رسید. سپس تعداد لکوسیت ها افزایش یافت. لیز لکوسیت ها 33، 41، 47، 52، 55 درصد بر اساس دوزهای تجویز شده بود. پس از 48 ساعت، بیشترین درصد لیز لکوسیتی در نمونه های تجربی مشاهده شد.

در نمونه های خون حاوی محلول نمکی، PPD-tuberculin برای پرندگان و CAM، تعداد لکوسیت ها افزایش یافته و 48 ساعت پس از تزریق واکسن BCG به خوکچه ها به حداکثر مقدار خود رسید. با افزایش دوز واکسن BCG تجویز شده، تعداد لکوسیت ها در نمونه های خون حاوی سالین، PPD-tuberculin برای پرندگان و CAM افزایش یافت، یعنی افزایش دوز مایکوباکتریوم BCG با افزایش لکوسیتوز همراه بود. بنابراین، تعداد لکوسیت‌ها در نمونه‌های خون با آلرژن‌های غیراختصاصی (نمونه‌های آزمایشی) و با محلول نمکی (نمونه شاهد) افزایش یافت. سپس (پس از 72 ساعت) کاهش تعداد لکوسیت ها در این نمونه های خون مشاهده شد.

در خوک‌های واکسینه شده، شاخص‌های مثبت RSLL در نمونه‌های خون با PPD-tuberculin برای پستانداران 24-120 ساعت پس از تجویز یک، دو، سه، چهار دوز و پس از 24-144 ساعت با پنج دوز واکسیناسیون واکسن BCG شناسایی شد.

در آزمایش‌هایی که روی خوک‌ها انجام شد، تعداد لکوسیت‌ها در نمونه‌های خون حاوی PPD-tuberculin برای پرندگان و CAM مشابه نمونه‌های با سالین بود. RSLL در نمونه های خون با PPD-tuberculin برای پرندگان و KAM منفی بود که ویژگی RSLL با PPD-tuberculin برای پستانداران را تایید می کند.

در خوک های واکسینه شده با واکسن بروسلوز. در سال 82، تعداد لکوسیت‌ها در نمونه‌های خون با توبرکولین و سالین تقریباً یکسان بود، بنابراین RSLL با PPD - توبرکولین برای پستانداران، PPD - توبرکولین برای پرندگان و KAM منفی بود، زیرا لکوسیت های حساس شده توسط یک آلرژن دیگر با سالین و آلرژن های نامرتبط واکنش نشان نمی دهند و لیز لکوسیت ها وجود ندارد. این نشان دهنده ویژگی واکنش است.

3.2.3. بررسی ویژگی و فعالیت RSLL در خون سگ ها

با معرفی واکسن زنده مایکوباکتریوم BCG

آزمایش ها بر روی سگ های متعلق به شهروندان شهر نووچرکاسک، منطقه روستوف انجام شد.

پنج گروه آزمایش و یک گروه کنترل از حیوانات تشکیل شد. در هر گروه 5 سگ وجود داشت.

برای انجام پژوهش، سگ‌ها با یک دوز (0.05 میلی‌لیتر)، دو (0.1 میلی‌لیتر)، سه (0.15 میلی‌لیتر)، چهار (0.2 میلی‌لیتر) و پنج (0.25 میلی‌لیتر) واکسن BCG به صورت زیر جلدی تزریق شدند. به حیوانات گروه کنترل یک دوز واکسن بر علیه بروسلوز داده شد. 82.

در روز تجویز واکسن BCG، تعداد لکوسیت ها در تمام نمونه های خون در گروه های آزمایشگاهی تقریباً یکسان بود.

24 ساعت پس از تجویز مایکوباکتریوم BCG به حیوانات در طی برهمکنش خون با محلول فیزیولوژیکی خارج از بدن، تعداد لکوسیت ها (به طور متوسط ​​برای گروه) 6.1·10 9 / L با یک دوز واکسیناسیون واکسن BCG، 6.9· بود. 10 با دو دوز 9 / L، سه دوز - 7.4 10 9 / L، چهار دوز - 7.7 10 9 / L، پنج دوز - 8.3 10 9 / L. در نمونه‌های خون با PPD-tuberculin برای پرندگان و CAM، داده‌هایی مشابه نمونه‌های خون با سالین به‌دست آمد. لکوسیتوز شناسایی شد، زیرا بدن به تجویز واکسن BCG واکنش نشان می دهد و لکوسیت های حساس شده با آنتی ژن های نامرتبط تعامل نمی کنند.

پس از مطالعه بیشتر، مشخص شد که پس از 48 ساعت، تعداد لکوسیت‌ها (به طور متوسط ​​برای گروه) در نمونه‌های خون آزمایشگاهی حاوی محلول نمکی به حداکثر سطح خود رسید، با معرفی یک دوز ایمنی واکسن - 6.2·10. 9 / l; دو دوز - 7.4·10 9 / L. سه دوز - 8.5·10 9 / L. چهار دوز - 9.5 · 10 9 / L. پنج دوز - 10.8·10 9 / l. تعداد لکوسیت ها در نمونه های خون حاوی محلول نمک دو یا چند برابر بیشتر از تعداد لکوسیت ها در روز تزریق واکسن بود. سپس تعداد گلبول های سفید شروع به افزایش کرد. انقراض واکنش با تولید آنتی بادی های طبیعی توسط سیستم ایمنی همراه است.

به طور متوسط ​​برای گروه، تعداد لکوسیت ها در نمونه های خون با PPD-tuberculin برای پستانداران کاهش می یابد و پس از 48 ساعت با معرفی یک دوز BCG - 4.6·10 9 / L به حداقل می رسد. دو دوز - 3.8·10 9 / L. سه دوز - 3.4·10 9 / L. چهار دوز - 3.3·10 9 / L. پنج دوز - 3.1·10 9 / l. لیز لکوسیت ها در نمونه های خون با PPD-tuberculin برای پستانداران بیشترین بود و با یک دوز BCG 26 درصد، با دو دوز 49 درصد، با سه دوز 60 درصد، با چهار دوز 65 درصد و با پنج دوز به 71 درصد رسید. دوزها هر چه دوز واکسن BCG تزریق شده بیشتر باشد، درصد لیز لکوسیت بیشتر است. هنگامی که دوزهای زیادی از پاتوژن به بدن وارد می شود، یک آلرژی شدید رخ می دهد و لکوسیت های حساس تر هنگامی که با یک آنتی ژن مرتبط (خاص) مواجه می شوند، از بین می روند، همانطور که از آزمایشات RSLL در خارج از بدن می توان مشاهده کرد.

مشخص شد که پس از 72 ساعت، تعداد لکوسیت ها (به طور متوسط ​​برای گروه) در نمونه های خون با PPD-tuberculin برای پستانداران افزایش و در نمونه های دارای محلول نمکی با PPD-tuberculin برای پرندگان و CAM کاهش یافت. درصد لیز لکوسیت پس از 72 ساعت در نمونه های خونی با PPD-tuberculin برای پستانداران برابر با 23 درصد با یک دوز ایمنی، 39 درصد با دو دوز، 50 درصد با سه دوز، 60 درصد با چهار دوز و 64 درصد با پنج دوز است. دوزها

شاخص‌های مثبت واکنش لیز لکوسیتی خاص (SLLR) در نمونه‌های خون حاوی PPD-tuberculin برای پستانداران با معرفی یک دوز واکسن BCG پس از 24-96 ساعت، دو دوز بعد از 24-120 ساعت، سه دوز بعد از 24 مشاهده شد. -120 ساعت، چهار دوز 24 تا 168 ساعت، پنج دوز 24 تا 240 ساعت.

فعالیت واکنش لیز خاص لکوسیت ها با این واقعیت مشخص می شود که با افزایش دوز تجویز شده واکسن مایکوباکتریوم زنده. BCG باعث افزایش شاخص RSLL و مدت زمان حساس شدن لکوسیت ها در حیوانات می شود.

واکنش لیز اختصاصی لکوسیت‌ها در نمونه‌های خونی گروه‌های آزمایشی حاوی PPD-tuberculin برای پرندگان و CAM منفی و تا 3 درصد بود.

در سگ‌هایی که با یک دوز واکسن ضد بروسلوز واکسینه شدند، واکنش لیز لکوسیتی خاص در نمونه‌های خون با PPD-tuberculin برای پستانداران، PPD-tuberculin برای پرندگان و CAM منفی بود. تعداد لکوسیت‌ها در نمونه‌های آزمایشی و شاهد با توبرکولین، CAM و سالین تقریباً یکسان بود که نشان‌دهنده ویژگی واکنش لیز لکوسیت است، زیرا در نمونه‌های خون لکوسیت‌های حساس شده با آنتی‌ژن‌های نامرتبط برهم‌کنش ندارند.

3.2.4. بررسی ویژگی و فعالیت RSLL در خون خرگوش

با معرفی واکسن زنده مایکوباکتریوم BCG

برای انجام آزمایشات رفتاری، 15 خرگوش انتخاب و به سه گروه تقسیم شدند.

پس از تزریق پنج تا ده دوز واکسن مایکوباکتریوم BCG به خرگوش های گروه آزمایش و یک دوز واکسن ضد بروسلوز . از 82 حیوان در گروه کنترل خون گرفته شد و به نمونه تقسیم شد.

این مطالعه نشان داد که در روز تجویز واکسن، تعداد لکوسیت ها در همه گروه ها 7.9-8.8·10 9 / l بود.

در نمونه‌های خون خرگوش‌های واکسینه‌شده با پنج دوز مایکوباکتری‌های زنده واکسن BCG، با محلول فیزیولوژیکی در زمان تجویز واکسن، تعداد لکوسیت‌ها به‌طور میانگین برای گروه 8.8·109/l بود. سپس تعداد لکوسیت ها افزایش می یابد و پس از 24 ساعت به 11.3·10 9 / l رسید و پس از 48 ساعت به حداکثر سطح 16.1·10 9 / l رسید. این به دلیل افزایش فعالیت عملکردی اندام های خونساز ناشی از ورود آنتی ژن به بدن - مایکوباکتریوم BCG است.

هنگامی که خون خارج از بدن با PPD-tuberculin برای پستانداران تعامل داشت، کمترین محتوای لکوسیت پس از 24 ساعت مشاهده شد. واکنش لیز اختصاصی لکوسیت ها پس از 24 ساعت 58٪، پس از 48 ساعت - 71.4٪، 72 ساعت - 70.5٪ است. حداکثر درصد لیز لکوسیتی پس از 48 ساعت ثبت شد، سپس درصد لیز لکوسیتی کاهش یافت. RSLL مثبت با PPD-tuberculin برای پستانداران پس از 24 تا 96 ساعت مشاهده شد.

تعداد لکوسیت‌ها در نمونه‌های خون با PPD-tuberculin برای پرندگان و CAM مشابه نمونه‌های خون با سالین بود. واکنش لیز اختصاصی لکوسیت ها با PPD-tuberculin برای پرندگان و CAM منفی بود (از -1٪ تا 1٪)، که نشان دهنده ویژگی واکنش است، زیرا لکوسیت های حساس با آلرژن های خارجی تعامل ندارند.

مطالعات نشان داده است که با معرفی ده دوز مایکوباکتری زنده از واکسن BCG، پس از 24 و 48 ساعت کمترین تعداد لکوسیت در شرایط آزمایشگاهی در نمونه‌های خون با PPD-tuberculin برای پستانداران بود. کاهش تعداد لکوسیت‌ها در نمونه‌های خون با آنتی ژن همگن PPD-tuberculin برای پستانداران را نمی‌توان به لکوپنی نسبت داد، زیرا اساساً لیز لکوسیت‌ها در خارج از بدن اتفاق می‌افتد و لکولیز ناشی از افزایش تخریب لکوسیت‌های حساس در هنگام قرار گرفتن در معرض یک خاص است. آلرژن

مشخص شد که هنگام تعامل خون با PPD-tuberculin برای پستانداران، درصد لیز لکوسیت پس از 24 ساعت 56٪، پس از 48 ساعت - 72٪، پس از 72 ساعت - 41٪ بود.

سپس تعداد گلبول های سفید شروع به افزایش کرد و پس از 672 ساعت به حالت عادی بازگشت.

در نمونه های خون با محلول نمکی پس از ده دوز واکسن BCG، تعداد لکوسیت ها پس از 24 ساعت شروع به افزایش کرد. بیشترین تعداد لکوسیت در شرایط آزمایشگاهی 96 ساعت پس از تجویز واکسن BCG ثبت شد. سپس تعداد گلبولهای سفید به آرامی کاهش یافت و پس از 672 ساعت به حالت عادی (تعداد گلبولهای سفید در روز تجویز واکسن) بازگشت.

هنگام افزایش دوز واکسن مایکوباکتریوم زنده BCG، تعداد لکوسیت های حساس افزایش می یابد، درصد لیز لکوسیت ها و مدت زمان واکنش افزایش می یابد، این مشخصه فعالیت واکنش لیز لکوسیت خاص است.

نتایج در نمونه‌های خون با PPD-tuberculin برای پرندگان و CAM تقریباً مشابه نمونه‌های خون حاوی سالین بود؛ بنابراین، RSLL وجود نداشت که نشان‌دهنده اختصاصی بودن واکنش است، زیرا لکوسیت‌ها با آلرژن‌های خارجی واکنش نشان نمی‌دهند.

واکسینه شده با یک دوز واکسن ضد بروسلوز، عدد. 82 خرگوش RSLL با PPD-tuberculin برای پستانداران، PPD-tuberculin برای پرندگان، CAM منفی بود، زیرا هیچ لکوسیت حساس در خون به این آلرژن های تشخیصی وجود نداشت. تعداد لکوسیت ها در نمونه های خون حاوی توبرکولین و محلول سالین در حیوانات تقریباً یکسان بود.

عدم وجود واکنش لیز لکوسیت در نمونه خون حیوانات واکسینه شده با واکسن ضد بروسلوز 82 حاوی PPD-tuberculin برای پستانداران، ویژگی واکنش را نشان می دهد، زیرا تشخیص آلرژن با لکوسیت های حساس آلرژن دیگر واکنش نشان نمی دهد.

3.3. بررسی امکان استفاده از RSLL برای افتراق واکنش‌های غیراختصاصی در گاوهایی که واکنش مثبت نشان دادند.

برای توبرکولین

3.3.1. مطالعه خون RSLL در گاوهایی که واکنش مثبت نشان دادند

برای توبرکولین در منطقه Matveevo-Kurgan

تشخیص سل توسط واکنش لیز لکوسیت خاص (SLLR) در شرایط تولید در مجتمع کشاورزی Rassvet در منطقه Matveevo-Kurgan، منطقه روستوف انجام شد.

در 27 نوامبر 2006، در کشتارگاه Rassvet، یک کنترل کمیسیون و کشتار تشخیصی هفت گاو که به توبرکولین واکنش نشان دادند، انجام شد و پس از آن یک معاینه دامپزشکی و بهداشتی پس از مرگ انجام شد.

قبل از کشتار، برای مطالعه واکنش لیز لکوسیت خاص (SLLR) از گاوها خون گرفته شد.

این مطالعه نشان داد که در سه گاو (43٪) واکنش لیز لکوسیت خاص با PPD-tuberculin برای پستانداران، PPD-tuberculin برای پرندگان و CAM منفی بود، یعنی. درصد لیز لکوسیت 1 تا 4 درصد بود.

در چهار گاو (57٪)، لیز لکوسیت در نمونه های خون با PPD-tuberculin برای پستانداران 27٪، 29٪، 36٪، 71٪ بود، در حالی که RSLL با PPD-tuberculin برای پرندگان و با CAM منفی بود.

در طی یک معاینه دامپزشکی و بهداشتی پس از مرگ هفت گاو در واکنش به توبرکولین، تنها چهار گاو (57٪) دارای شاخص RSLL مثبت در نمونه خون با PPD-tuberculin برای پستانداران بودند. دو (29٪) از آنها تغییراتی را در غدد لنفاوی مشخصه سل نشان دادند: یکی در زیر فکی، دومی در غدد لنفاوی فوقدارتریال. در لاشه دو گاو کشته شده (29٪) با واکنش مثبت به تست توبرکولین و شاخص های RSLL مثبت، تغییرات پاتولوژیک مشخصه سل به صورت بصری در اندام های داخلی و غدد لنفاوی تشخیص داده نشد. این به دلیل عفونت اخیر حیوانات با عامل ایجاد کننده سل است، بنابراین تغییرات پاتولوژیک هنوز زمان شکل گیری نداشته است. علاوه بر این، مشخص شد که واکنش مثبت به تزریق داخل جلدی توبرکولین با شاخص های RSLL منفی در نمونه های خونی حاوی PPD-tuberculin برای پستانداران در دو (29%) گاو عمیق آبستن (7 تا 8.5 ماه بارداری) و یک (14) گاو بود. ٪ - با اندومتریت حاد.

در هفت گاو (100%) با تست توبرکولین مثبت، RSLL در آزمایشات با PPD-tuberculin برای پرندگان و KAM منفی است، زیرا حساسیت ناشی از مایکوباکتری های پرندگان و آتیپیک نیست.

3.3.2. بررسی واکنش لیز اختصاصی لکوسیت های خون

در گاوهای منطقه سالسک که واکنش مثبتی به توبرکولین نشان دادند

تحت شرایط تولید، تشخیص RSLL سل در Yuzhnoye OJSC، منطقه Salsky، منطقه روستوف انجام شد.

در 24 آگوست 2009، در کارخانه فرآوری گوشت منطقه Peschanokopsky، یک کنترل کمیسیون و کشتار تشخیصی 32 گاو که به توبرکولین واکنش نشان دادند، انجام شد و پس از آن یک معاینه دامپزشکی و بهداشتی انجام شد.

قبل از کشتار، خون از گاوها برای آزمایش در واکنش لیز لکوسیت خاص (SLLL) گرفته شد. نتایج مطالعات بر روی تعداد لکوسیت ها و شاخص های RSLL در گاوهایی با واکنش مشخص به توبرکولین در جدول شماره 3 ارائه شده است.

از 32 گاوی که به تزریق داخل جلدی توبرکولین پاسخ دادند، تنها هشت (25٪) RSLL مثبت داشتند که نمونه های خون با PPD، توبرکولین برای پستانداران تعامل داشتند. درصد لیز در گاوها 19٪، 20٪، 23.1٪، 23.8٪، 24.5٪، 30.2٪، 31٪، 32.7٪ بود.

تحقیقات نشان داده است که در نمونه های حاوی PPD-tuberculin برای پرندگان در هشت حیوان (25%)، لیز لکوسیت 14.3٪، 15.8٪، 20.1٪، 21٪، 23.1٪، 23.8٪، 27.3٪، 34.5٪ بود.

هفت (22%) گاو RSLL مثبت با CAM داشتند. RSLL 19٪، 20٪، 23.2٪، 23.8٪، 24.6٪، 28.6٪، 33.3٪ بود.

از این تعداد، در شش گاو (19%)، RSLL مثبت با PPD-tuberculin برای پستانداران و PPD-tuberculin برای پرندگان مشاهده شد. دو گاو (6.3٪) واکنش مثبت به PPD-tuberculin برای پستانداران، PPD-tuberculin برای پرندگان و CAM داشتند. در 18 حیوان (56%) که به تزریق داخل جلدی توبرکولین پاسخ دادند، واکنش لیز لکوسیتی خاص در تمام نمونه‌های خون منفی بود.

بررسی پس از مرگ لاشه و اندام‌های داخلی 32 گاو در واکنش به توبرکولین نشان داد که از هشت (25%) گاو با شاخص RSLL مثبت در نمونه‌های خونی با PPD-tuberculin برای پستانداران، تنها یک (3%) تغییراتی در لنف رتروفارنکس داشت. گره ها، مشخصه سل، در دو (6٪) - اکینوکوک در کبد، در سه (9٪) - حاملگی، در دو (6٪) - حاملگی و اکینوکوک در کبد.

از 32 گاو که به تزریق داخل جلدی توبرکولین پاسخ دادند، 14 (44%) تاول اکینوکوکال در کبد و یک (3%) در ریه داشتند. در یک مورد (3%) آبسه چرکی در کبد مشاهده شد. 20 راس گاو (63%) آبستن بودند که از این تعداد چهار گاو (13%) مبتلا به اکینوکوکوزیس بودند و یک گاو (3%) تغییرات سلی در غدد لنفاوی خلف حلقی داشت.

جدول 3.

تعداد لکوسیت ها، شاخص های RSLL و تغییرات پاتولوژیک در گاوهای منطقه سالسک که به توبرکولین واکنش مثبت نشان دادند.


№
شماره موجودی

تعداد لکوسیت ها هنگام تعامل خون با

RSLL، %

تغییرات پاتولوژیک، بارداری

فیزیکی

راه حل


PPD - T برای میلی لیتر.

PPD - T برای جمعه.

به
PPD - T برای میلی لیتر.

PPD - T برای جمعه.

به

1
5948
5,2
3,5
5,2
5,2
32,7

0
0
7 ماهگی، تغییرات مشخصه سل در لنف رتروفارنکس. گره ها

2
5070
5,8
4,0
3,8
5,8
31,0

34,5

0
هنر 3 ماه

3
5625
6,3
4,4
5,0
6,3
30,2

20,1

0
اکینوکوکوز کبدی.

4
4533
4,9
3,7
4,9
4,9
24,5

0
0
اکینوکوکوز کبدی.

5
5926
10,5
8,0
8,0
8,0
23,8

23,8

23,8

3 ماهگی، اکینوکوکوز کبدی.

6
5602
6,5
5,0
5,0
6,5
23,1

23,1

0
هنر 8 ماه

7
5631
9,5
7,6
8,0
9,5
20

15,8

0
هنر 3 ماه

8
5563
10,5
8,5
8,3
7,5
19

21

28,6

3 ماهگی، اکینوکوکوز کبدی.

9
5916
5,5
5,0
4,0
4,4
9,1
27,3

20

اکینوکوکوز کبدی.

10
5567
5,6
5,6
5,6
4,3
0
0
23,2

6 ماهگی، اکینوکوکوز کبدی.

11
5632
6,6
6,6
6,6
4,8
0
0
24,6

اکینوکوکوز کبدی.

12
3016
4,2
4,2
3,6
4,2
0
14,3

0
اکینوکوکوز کبدی.

13
5077
4,5
4,5
4,5
3,0
0
0
33,3

هنر 6 ماه

14
5923
5,8
5,8
5,8
4,7
0
0
19

هنر 8 ماه

15
5578
6,2
6,0
6,2
6,2
3,2
0
0
اکینوکوکوز کبدی.

16
6626
5,1
5,1
5,1
5,1
0
0
0
اکینوکوکوز کبدی.

17
5573
5,3
5,0
5,3
5,3
7
0
0
7 ماهگی، اکینوکوکوز کبدی.

18
5599
6,5
5,9
6,5
6,5
9,2
0
0
اکینوکوکوز کبدی.

19
5660
4,8
4,8
4,8
4,5
0
0
6,3
اکینوکوکوز ریوی.

20
5664
6,2
6,2
6,2
6,0
0
0
3,2
اکینوکوکوز کبدی.

21
5538
5,4
4,9
5,3
5,4
9,3
1,8
0
اکینوکوکوز کبدی.

22
7406
5,5
5,5
5,5
5,5
0
1,8
0
هنر 7 ماه

23
5137
6,4
5,9
6,4
6,4
7,8
0
0
هنر 7 ماه

24
5241
15,5
15,5
15,5
15,0
0
0
3,2
هنر 5 ماه

25
5946
10,0
10,0
10,0
9,8
0
0
2
فرآیند چرکی در کبد.

26
5176
5,0
5,0
4,9
4,8
0
2
4
هنر 8 ماه

27
5668
5,0
5,0
4,8
5,0
0
4
0
هنر 8 ماه

28
4506
5,3
5,3
5,3
5,3
0
0
0
هنر 4 ماه

29
6514
7,1
7,1
7,1
7,1
0
0
0
هنر 3 ماه

30
5027
6,5
6,5
6,5
6,5
0
0
0
هنر 6 ماه

31
6063
5,5
5,5
5,5
5,5
0
0
0
هنر 6 ماه

32
4922
6,8
6,8
6,8
6,8
0
0
0
هنر 7 ماه

از هشت گاو ذبح شده که در آنها RSLL در نمونه های خون با PPD-tuberculin برای پستانداران مثبت بود، تنها یک (12.5٪) تغییراتی در غدد لنفاوی خلف حلق داشت که مشخصه سل بود. در هفت (87.5%) حیوان کشته شده با RSLL مثبت، هیچ گونه تغییر پاتولوژیک در اندام های داخلی و غدد لنفاوی مشخصه سل مشاهده نشد که احتمالاً به دلیل آلودگی اخیر این گاوها به عامل ایجاد کننده سل و تغییرات پاتولوژیک است. هنوز شکل نگرفته بود

هفت (21٪) از 32 گاو که به توبرکولین واکنش نشان دادند، در نمونه های خون با MAM واکنش مثبت داشتند که با عفونت بدن با مایکوباکتریوم آتیپیک همراه است.

یک واکنش مثبت در نمونه های خون با PPD-tuberculin برای پرندگان در هشت حیوان کشته شده (25٪) مشاهده شد، این با عفونت گاوها با مایکوباکتریوم پرندگان (M. avium) توضیح داده می شود.

حیوانات با تست توبرکولین مثبت و آلوده به چندین نوع مایکوباکتری شناسایی شدند. بنابراین، چهار گاو (12.5٪) در آزمایش با PPD-tuberculin برای پستانداران و PPD-tuberculin برای پرندگان، یک (3.1٪) - با PPD-tuberculin برای پرندگان و CAM، دو (6.3٪) - با PPD واکنش مثبت نشان دادند. توبرکولین برای پستانداران، PPD-tuberculin برای پرندگان و CAM.

از 32 گاوی که به تزریق داخل جلدی توبرکولین پاسخ مثبت دادند، 18 گاو (56%) دارای RSLL منفی در آزمایشات PPD-tuberculin برای پستانداران، PPD-tuberculin برای پرندگان و CAM بودند که با سایر بیماری ها (اکینوکوکوزیس و غیره) مرتبط است. ) و بارداری

مطالعات باکتریولوژیک نمونه برای سل نتایج منفی داد.

3.3.3. مطالعه خون RSLL گاوها در منطقه Neklinovsky،

به توبرکولین پاسخ مثبت داد

در شرایط تولید، تشخیص سل با واکنش لیز خاص لکوسیت ها در Sovetinsky SEC، منطقه Neklinovsky، منطقه روستوف انجام شد.

تست توبرکولین هشت گاو در مزرعه ای که قبلا سالم بود، مثبت شد.

6 سپتامبر 2009 کشتار کنترل و تشخیصی گاوهایی که به توبرکولین واکنش مثبت نشان دادند، انجام شد. در طول معاینه پس از مرگ، هیچ تغییر پاتولوژیک در اندام های داخلی و غدد لنفاوی از نظر بصری تشخیص داده نشد. آزمایشات باکتریولوژیک نمونه برای سل در آزمایشگاه منطقه ای روستوف نتایج منفی داد.

قبل از کشتار، خون از گاوهایی گرفته شد که به توبرکولین واکنش نشان دادند تا یک واکنش لیز لکوسیت خاص (SLLR) انجام شود.

مشخص شد که از هشت گاو با آزمایش توبرکولین مثبت، تنها دو گاو دارای RSLL مثبت بودند که نمونه‌های خونی با PPD-tuberculin برای پستانداران تعامل داشتند. درصد لیز لکوسیت در گاو 10% و 16% است.

در سه گاو، واکنش لیز لکوسیت خاص با PPD-tuberculin برای پرندگان مثبت بود. لیز لکوسیت در حیوانات 26٪، 20٪، 20٪ بود.

نتایج RSLL منفی در نمونه های خون حاوی CAM به دست آمد. درصد لیز لکوسیت از 0٪ تا 2٪ متغیر بود.

در سه گاو (5/37%) که به توبرکولین واکنش نشان دادند، RSLL در تمام نمونه ها منفی بود.

در دو گاو کشته شده (25%) با تست توبرکولین مثبت که RSLL در نمونه های خون با PPD-tuberculin برای پستانداران مثبت بود، هیچ تغییر پاتولوژیک در اندام های داخلی و غدد لنفاوی مشاهده نشد، این به دلیل عفونت اخیر است. حیوانات با عامل ایجاد کننده سل، و بنابراین تغییرات پاتولوژیک هنوز زمان تشکیل نشده است.

یک واکنش مثبت در نمونه های خون با PPD-tuberculin برای پرندگان در سه حیوان (37.5٪) مشاهده شد که به تزریق داخل جلدی توبرکولین پاسخ مثبت دادند، که در آن تغییرات پاتولوژیک مشخصه سل تشخیص داده نشد، که می تواند با عفونت گاوها توضیح داده شود. مایکوباکتری پرندگان (M. avium).

اگر حساسیت ناشی از مایکوباکتریوم سل نباشد، یعنی علت حساسیت متفاوت باشد، نتایج RSLL در نمونه خون با PPD-tuberculin برای پستانداران منفی خواهد بود.

امکان استفاده از روش تشخیص زودهنگام سل در شرایط آزمایشگاهی بر روی سلول های خونی به طور مستقیم در شرایط عملی مزارع به استفاده گسترده از آلرژن ها با طبیعت های مختلف به عنوان وسیله ای برای تشخیص افتراقی واکنش های توبرکولین خاص و غیر اختصاصی کمک می کند.

4. نتیجه گیری

1. دوز کاری برای واکنش لیز اختصاصی لکوسیت ها در نمونه 0.1 میلی لیتر خون آزمایش و 0.05 میلی لیتر از محلول سیترات سدیم 3.8٪ 0.05 میلی لیتر برای PPD-tuberculins و CAM است.

2. در حیوانات حساس با وارد کردن مایکوباکتری های زنده واکسن BCG به بدن حیوان، RSLL مثبت در خارج از بدن 24 ساعت پس از تجویز واکسن حاوی آلرژن ها - PPD-tuberculin برای پستانداران شناسایی شد.

3. افزایش دوز مایکوباکتری های زنده سویه واکسن BCG به حیوان با افزایش شاخص RSLL و مدت زمان واکنش همراه است که نشان دهنده افزایش لکوسیت های حساس شده و فعالیت واکنش لیز لکوسیتی خاص است.

4. در نمونه های خون با محلول نمکی، PPD-tuberculin برای پرندگان و CAM در حیوانات واکسینه شده با مایکوباکتری های زنده واکسن BCG و در نمونه های خون با محلول نمکی، PPD-tuberculin برای پستانداران، PPD-tuberculin برای پرندگان و CAM واکسینه شده با واکسن. از سویه 82، تعداد لکوسیت ها یکسان بود، یعنی RSLL منفی به دست آمد که نشان دهنده ویژگی واکنش است، زیرا لکوسیت های حساس شده با آلرژن های خارجی واکنش نشان نمی دهند.

5. در واکنش لیز اختصاصی لکوسیت ها می توان از بسیاری از آلرژن ها استفاده کرد که امکان افتراق واکنش های غیر اختصاصی به توبرکولین را فراهم می کند.

6. روش RSLL که ما پیشنهاد می کنیم، مجموعه تشخیص های موجود و تشخیص افتراقی سل حیوانی را تکمیل و بهبود می بخشد.

5. پیشنهادات عملی

1. واکنش لیز اختصاصی لکوسیت ها تشخیص حیوان آلوده را در روز اول پس از آلودگی ممکن می سازد، بنابراین برای تشخیص زودهنگام سل از اهمیت عملی بالایی برخوردار است.

2. ما استفاده از واکنش لیز لکوسیت اختصاصی را برای تشخیص افتراقی داخل حیاتی واکنش‌های اختصاصی و غیراختصاصی به تجویز PPD-tuberculin برای پستانداران توصیه می‌کنیم، که تشخیص سل را روشن می‌کند و از کشتار غیرموجه و غیرموجه حیوانات سالم و پربازده جلوگیری می‌کند.

1. دوبووی، بی.ال. جدید در تشخیص افتراقی سل در حیوانات مزرعه / B.L. دوبووی، O.N. سولوویوا، N.V. اولکو // مجموعه مقالات علمی "تشخیص، پیشگیری و درمان بیماری های عفونی حیوانات مزرعه." - Persianovsky، 2000.-P.8-12.

2. دوبووی، بی.ال. روش تشخیص زودرس سل در گاو RSLL/B.L. دوبووی، O.N. Polyakova // دامپزشکی حیوانات اهلی.-کازان.-شماره 3، 2006.–P. 54-56.

3. دوبووی، بی.ال. جستجو برای تشخیص زودهنگام سل حیوانی / B.L. دوبووی، O.N. پلیاکوا // کنفرانس بین المللی علمی و عملی "مشکلات اصلی، روندها و چشم اندازهای توسعه پایدار تولید کشاورزی" - ماخاچکالا. - T.2، 2006. - P.68-69.

4. دوبووی، بی.ال. بررسی ویژگی و فعالیت RSLL در تشخیص سل در گاو / B.L. دوبووی، O.N. Polyakova // مسیر نوآورانه توسعه مجتمع کشت و صنعت - جهت اصلی تحقیقات علمی برای کشاورزی. - Persianovsky. - 2007. - P. 67-69.

5. پولیاکوا، O.N. تشخیص زودهنگام سل در خوک ها / Polyakova O.N., Dubovoy B.L. // مواد کنفرانس بین منطقه ای "فناوری های فشرده در پرورش خوک: مشکلات و راه حل ها." - Persianovsky. - 2007. - P. 124-125.

6. پولیاکوا، O.N. RSLL در گاوهایی که دو بار به تست توبرکولین داخل جلدی واکنش مثبت نشان دادند / O.N. پولیاکوا، بی.ال. دوبووی، N.A. Soloviev// مواد کنفرانس علمی و عملی همه روسی "مشکلات فعلی تشخیص عملکردی و مورفوفانکشنال بیماری های حیوانات". - Novocherkassk. - 2007. - P. 179-180.

7. پولیاکوا، O.N. مطالعه تغییرات در فعالیت توبرکولین-PPD برای پستانداران RSLL / O.N. پولیاکوا، بی.ال. Dubovoy // مواد کنفرانس علمی و عملی همه روسی "مشکلات فعلی آسیب شناسی، مورفولوژی و انکولوژی حیوانات". - Novocherkassk.-2007.-P.74-75.

8. پولیاکوا، O.N. واکنش لیز اختصاصی لکوسیت ها در تشخیص سل حیوانی / O.N. Polyakova // مواد کنفرانس علمی و عملی همه روسی "مشکلات، وظایف و راه های حمایت علمی از پروژه ملی اولویت دار "توسعه مجتمع کشاورزی و صنعتی". ​​- Novocherkassk.-2008.-P.18-19.

9. پولیاکوا، O.N. بررسی واکنش های غیر اختصاصی به توبرکولین در گاو / O.N. Polyakova // بولتن دانشگاه دولتی کشاورزی ساراتوف به نام N.I. Vavilov - شماره 6، 2008. - ص 50-53.

10. دوبووی، بی.ال. تشخیص افتراقی سل در گاو با واکنش لیز اختصاصی لکوسیت ها / B.L. دوبووی، O.N. Polyakova // مواد کنفرانس علمی و عملی همه روسی "افزایش بهره وری حیوانات مزرعه و طیور بر اساس دستاوردهای نوآورانه." - Novocherkassk.-2009.-P.3-7.

11. Dubovoy B.L. روش تشخیص زودهنگام سل حیوانی / B.L. دوبووی، O.N. پولیاکوا، A.I. کلیمنکو، A.V. کووالنکو، ال.پی. میرونوا // اختراعات. مدل های کاربردی بولتن رسمی شماره 25، 1388.-ص.2.

12. پولیاکوا، O.N. تشخیص افتراقی واکنش های داخل جلدی به PPD-tuberculin برای پستانداران (TML) در گاو / O.N. پولیاکوا، بی.ال. دوبووی، وی. Moseychuk // مواد کنفرانس بین المللی علمی و عملی "ادغام علم، آموزش امنیت غذایی فدراسیون روسیه" - Persianovsky. - T. شماره 3، 2010. - P. 177-180.

13. دوبووی، بی.ال. تشخیص سل با تمایز واکنش های مثبت توبرکولین داخل جلدی در گاو / B.L. دوبووی، O.N. پولیاکوا، V.I. دوبرلین، وی. موسیچوک، G.V. گوریاچوا // مواد کنفرانس علمی و عملی همه روسی "مشکلات فعلی حمایت دامپزشکی از پرورش دام روسیه". - Novocherkassk. - 2010. - P. 10-13.

14. پولیاکوا، O.N. واکنش لیز اختصاصی لکوسیت ها هنگام تشخیص افتراقی سل / O.N. پولیاکوا، بی.ال. Dubovoy // مواد کنفرانس علمی و عملی همه روسی "مشکلات فعلی حمایت دامپزشکی از پرورش دام روسیه". - Novocherkassk. - 2010.- P.8-9.

15. دوبووی، بی.ال. تشخیص واکنش‌های غیراختصاصی توبرکولین ناشی از مایکوباکتری‌های آتیپیک و پرندگان / B.L. دوبووا، O.N.Polyakova // علم دامپزشکی کوبان. – کراسنودار.-شماره 1، 2011. – ص 21-23.

16. Polyakova، O.N. تعیین علل واکنش های غیر اختصاصی توبرکولین با PPD-tuberculin برای پرندگان و CAM در خارج از بدن / O.N. پولیاکوا، بی.ال. Dubovoy // علم دامپزشکی کوبان. – کراسنودار.-شماره 1، 2011. – ص 8-10.

فهرست اختصارات:


  1. BCG - واکسن خشک BCG مایکوباکتریوم توبرکلوزیس زنده از سویه واکسن BCG خشک شده است.

  2. CAM مجموعه ای از مایکوباکتری های آتیپیک است.

  3. PPD برای میلی لیتر. - مشتق خالص پروتئین برای پستانداران، یک بخش پروتئین خالص جدا شده از مایع فرهنگی پاتوژن سل است، به ترتیب، از یک گونه گاو که روی یک محیط غذایی مصنوعی رشد کرده است.

  4. PPD برای جمعه. - مشتق خالص پروتئین برای پرندگان، یک بخش پروتئین خالص جدا شده از مایع فرهنگی پاتوژن سل یک گونه پرندگان است که روی یک محیط غذایی مصنوعی رشد کرده است.

  5. RSLL - واکنش لیز اختصاصی لکوسیت ها.

پولیاکوا اولگا نیکولاونا

بهبود تشخیص اولیه سل در حیوانات.

A V T O R E F E R A T

پایان نامه برای مدرک تحصیلی

کاندیدای علوم دامپزشکی

امضا برای تمبر 01/14/11 مهر فوری

برگه چاپ استاندارد جلد 1. سفارش شماره 198/1 تیراژ 100 نسخه.

شرکت انتشارات و چاپ

LLC "MP Book", Rostov-on-Don,

بزرگراه تاگانروگ، 106

این اختراع مربوط به زمینه تشخیص آزمایشگاهی است و می تواند برای تشخیص سریع میکسوماتوز در خرگوش استفاده شود. ماهیت روش این است که یک واکنش لیز لکوسیت خاص (SLLR) با استفاده از واکسن ضد میکسوماتوز از سویه B-82 انجام می شود، شاخص RSLR محاسبه می شود و اگر مقدار آن 10٪ یا بیشتر باشد، میکسوماتوز تشخیص داده می شود. نتیجه فنی توسعه روشی است که امکان تشخیص سریع در مراحل اولیه بیماری و همچنین شناسایی دوره بدون علامت میکسوماتوز را فراهم می کند. 1 حقوق فایل ها، 2 جدول.

این اختراع مربوط به دامپزشکی است، به ویژه برای بیان روش هایی برای تشخیص میکسوماتوز.

روش‌های مختلفی برای تشخیص میکسوماتوز خرگوش وجود دارد، از جمله شناسایی آنتی‌ژن‌ها در پوست آسیب‌دیده با استفاده از آنتی‌بادی‌های فلورسنت، شناسایی آنتی‌بادی‌ها، کمپلکس‌های ایمنی در گردش با استفاده از واکنش‌های تثبیت کمپلمان، واکنش‌های ایمونودیفیوژن، واکنش‌های خنثی‌سازی و سنجش ایمنی آنزیمی (Gunenko V.V. O. et al. میکسوماتوز در خرگوش دامپزشکی، 1987، ج 12، ص 44-45). از معایب روش های شناخته شده می توان به شدت کار، وجود تجهیزات گران قیمت و ناتوانی در تعیین وجود ویروس در روزهای اول پس از عفونت اشاره کرد.

هدف از این اختراع کاهش زمان لازم برای شناسایی عامل ایجاد کننده میکسوماتوز در بدن حیوان است. تشخیص از سه تا شش ساعت پس از عفونت امکان پذیر است.

دستیابی به این هدف مبتنی بر پدیده فعال‌سازی فوری، افزایش حساسیت و فشار بیش از حد سلول‌های خونی دارای قابلیت ایمنی - لکوسیت‌ها - در معرض قرار گرفتن مکرر در خارج از بدن با همان آنتی‌ژنی است که قبلاً وارد بدن شده بود.

روش تشخیص میکسوماتوز در خرگوش به شرح زیر است. از حیوان مورد مطالعه نمونه خون گرفته می شود. در یک لوله آزمایش حاوی 0.05 میلی لیتر محلول سیترات سدیم 3.8٪، 0.1 میلی لیتر خون آزمایش و دوز کاری آنتی ژن - 0.05 میلی لیتر واکسن کشت زنده خشک علیه میکسوماتوز خرگوش از سویه "B-82" اضافه کنید. رقت یک دوز ایمن سازی در هر میلی لیتر محلول فیزیولوژیکی. لوله کنترل با همان حجم پر می شود، اما محلول فیزیولوژیکی بدون آنتی ژن پر می شود.

لوله ها در یک ترموستات به مدت دو ساعت در دمای +37 درجه سانتیگراد انکوبه می شوند و هر 30 دقیقه تکان می دهند. سپس برای از بین بردن گلبول های قرمز، 0.02 میلی لیتر خون از لوله های کنترل و آزمایش به داخل لوله های آزمایش با 0.4 میلی لیتر محلول اسید استیک 3 درصد منتقل می شود و با بنفشه جنسی رنگ آمیزی می شود. تعداد لکوسیت ها را در هر دو نمونه در محفظه گوریایف بشمارید و سرعت واکنش لیز لکوسیت خاص (بر حسب درصد) را با استفاده از فرمول محاسبه کنید:

RSLL زمانی مثبت در نظر گرفته می شود که 10% یا بالاتر باشد.

در مورد لکوسیتوز شدید، زمانی که شمارش لکوسیت‌ها مشکل است، نمونه‌های خون آزمایشی و کنترل آزمایشی علاوه بر این با محلول فیزیولوژیکی به نسبت 1:1 یا 1:2 رقیق می‌شوند.

برای تعیین دوز کاری آنتی ژن (واکسن کشت زنده خشک علیه میکسوماتوز خرگوش از سویه B-82)، ده خرگوش سالم انتخاب شدند. خون هر خرگوش به سه نمونه تقسیم شد. 0.1 میلی لیتر از خون آزمایش به سه لوله آزمایش با 0.05 میلی لیتر محلول سیترات سدیم 3 درصد اضافه شد. سپس 0.05 میلی‌لیتر واکسن کشت زنده آنتی ژن - خشک علیه میکسوماتوز خرگوش از سویه "B-82" در رقت چهار دوز ایمن سازی دارو در هر میلی لیتر محلول فیزیولوژیکی به لوله اول اضافه شد. 0.05 میلی لیتر واکسن در رقت دو دوز ایمن سازی در هر میلی لیتر محلول فیزیولوژیکی، در سوم - 0.05 میلی لیتر واکسن در رقت یک دوز ایمن سازی در هر میلی لیتر محلول فیزیولوژیکی.

لوله ها به مدت دو ساعت در دمای +37 درجه انکوبه شدند و هر 30 دقیقه تکان داده شدند. سپس برای از بین بردن گلبول‌های قرمز، 02/0 میلی‌لیتر خون از لوله‌های آزمایش و کنترل به داخل لوله‌های آزمایش با 4/0 میلی‌لیتر محلول اسید استیک 3 درصد منتقل شد و با بنفشه جنسی رنگ آمیزی شد. سپس، تعداد لکوسیت‌ها را در تمام لوله‌های آزمایش در محفظه گوریایف شمارش کردیم و سرعت واکنش لیز لکوسیت خاص (بر حسب درصد) را با استفاده از فرمول محاسبه کردیم:

که در آن Lk و Lo تعداد مطلق لکوسیت ها در نمونه های کنترل و تجربی است.

RSLL برای خرگوش های سالم باید کمتر از 10٪ باشد. نتایج در جدول ارائه شده است. 1.

همانطور که از جدول 1 مشاهده می شود، RSLL در همه نمونه ها از 10٪ تجاوز نمی کند، بنابراین، به عنوان دوز کاری آنتی ژن، منطقی تر است که واکسن را در برابر میکسوماتوز خرگوش، یک کشت زنده خشک، رقیق کنید. سویه "B-82" با سرعت یک دوز ایمن سازی در هر میلی لیتر محلول فیزیولوژیکی.

برای تشخیص گذشته نگر میکسوماتوز در یک مزرعه ناکارآمد، خون خرگوش مورد بررسی قرار گرفت.

بر اساس نتایج وضعیت بالینی خرگوش ها، 4 گروه از حیوانات 5 تایی تشکیل شد (جدول 2).

گروه اول - خرگوش های حامل ویروس با شکل نهفته میکسوماتوز - با بیماران در تماس بودند، اما بدون تغییرات بالینی. برخی مناطق بدون مو قابل توجهی داشتند که نشان دهنده سابقه ندول های میکسوم است.

گروه دوم - بیماران بالینی مبتلا به میکسوماتوز - شامل خرگوش های بیمار با تورم پلک ها، قاعده گوش، ناحیه آنوژنتیک، پشت، با تشکیلات محدود گره ای در پوست گوش، سر و پلک ها بود.

خرگوش های گروه سوم به منظور ایجاد پویایی لیز لکوسیت از لحظه ورود آنتی ژن میکسوماتوز به بدن حیوان و شناسایی ویژگی های واکنش لیز لکوسیت در افراد واکسینه شده در مقایسه با حاملان ویروس واکسینه شدند.

خرگوش های گروه چهارم از نظر بالینی سالم هستند و آلوده به ویروس میکسوماتوز نیستند، آنها به عنوان کنترل عمل می کنند.

سرعت واکنش لیز لکوسیتی خاص در حیوانات همه گروه‌ها تعیین شد. برای این منظور از حیوانات نمونه خون گرفته شد. هر نمونه به دو دسته آزمایش و کنترل تقسیم شد. در یک لوله آزمایش حاوی 0.05 میلی لیتر محلول سیترات سدیم 3.8٪، 0.1 میلی لیتر خون آزمایش و دوز کاری آنتی ژن - 0.05 میلی لیتر واکسن کشت زنده خشک علیه میکسوماتوز خرگوش از سویه "B-82" قرار گرفت. رقیق شدن یک دوز ایمن سازی در هر میلی لیتر محلول فیزیولوژیکی. لوله کنترل با همان حجم، اما محلول نمکی بدون آنتی ژن پر شد.

لوله ها به مدت دو ساعت در ترموستات در دمای +37 درجه سانتیگراد و هر 30 دقیقه تکان داده شدند. سپس برای از بین بردن گلبول‌های قرمز، 02/0 میلی‌لیتر خون از لوله‌های آزمایش و کنترل به داخل لوله‌های آزمایش با 4/0 میلی‌لیتر محلول اسید استیک 3 درصد منتقل شد و با بنفشه جنسی رنگ آمیزی شد. ما تعداد لکوسیت‌ها را در هر دو نمونه در محفظه گوریایف شمارش کردیم و سرعت واکنش لیز لکوسیت خاص (بر حسب درصد) را با استفاده از فرمول محاسبه کردیم:

که در آن Lk و Lo تعداد مطلق لکوسیت ها در نمونه های کنترل و تجربی است.

RSLL زمانی مثبت در نظر گرفته شد که میزان آن 10% یا بالاتر بود.

نتایج در جدول 2 ارائه شده است.

جدول 2

شاخص های RSLL در خرگوش های مبتلا به میکسوماتوز، واکسینه شده و سالم
گروه های خوکچه هندی RSLL، در٪مدت زمان مشاهدات بر حسب روزکاهش درصد لیز به طور متوسط ​​در روز (%)
در ابتدای مطالعهدر پایان مطالعه
1. شکل پنهان، حامل ویروس. 30-42 29-38 10 0,25
2. بیمار بالینی با میکسوماتوز62-77 60-71 10 0,40
3. واکسینه شده با واکسن آنتی میکسوماتوز 29-36 21-28 10 0,80
4. کنترل های دست نخورده4-9 4-9 10 0

همانطور که از جدول 2 مشاهده می شود، میزان کاهش درصد لیز لکوسیت در خرگوش های واکسینه شده 3.2 برابر بیشتر از خرگوش های حامل ویروس با شکل نهفته میکسوماتوز و 2 برابر بیشتر از بیماران بالینی است. در بیماران مبتلا به شکل بالینی میکسوماتوز، درصد لیز لکوسیت در کل دوره مشاهده بسیار بالا بود و به 60-77٪ رسید.

در گروه خرگوش های واکسینه شده، افزایش شدید درصد لیز لکوسیت در روز سوم مشاهده شد. این شواهدی است که نشان می دهد واکسن کشت زنده خشک علیه میکسوماتوز خرگوش از سویه B-82 باعث ایجاد حالت حساس شدن لکوسیت های خون (مسئول ایمنی) می شود تا زمانی که آنتی بادی های خاص در بدن تشکیل شود.

لیز لکوسیت ها در خرگوش های دست نخورده در طول کل دوره آزمایش از 10٪ تجاوز نکرد. در محدوده نرمال بود

مطالعه RSLL امکان تشخیص دوره بدون علامت میکسوماتوز را فراهم می کند.

مطالبه

1. روشی برای تشخیص میکسوماتوز در خرگوش، با مشخصه آن که یک واکنش لیز لکوسیتی خاص (SLLR) با استفاده از واکسن ضد میکسوماتوز از سویه B-82 انجام می‌شود، شاخص RSLR محاسبه می‌شود و میکسوماتوز زمانی که مقدار آن 10 باشد تشخیص داده می‌شود. ٪ یا بیشتر.

2. روش تشخیص میکسوماتوز در خرگوش طبق ادعای 1 که مشخصه آن این است که برای لکوسیتوز، نمونه های خون با محلول فیزیولوژیکی به نسبت 1:1 یا 1:2 قبل از شمارش لکوسیت ها رقیق می شوند.

این اختراع مربوط به حوزه بیوتکنولوژی است. این روش شامل شناسایی حیواناتی است که به توبرکولین در مزارع و حیاط‌های سالم از طریق آزمایش‌های معمول آلرژی واکنش نشان می‌دهند. از حیواناتی که به توبرکولین واکنش مثبت نشان می‌دهند، خون با استفاده از واکنش لیز لکوسیت خاص (RSLL) با استفاده از PPD برای پستانداران، PPD برای پرندگان و CAM به عنوان یک تشخیص برای توبرکولین‌ها بررسی می‌شود. این روش امکان افتراق واکنش های مثبت خاص و غیراختصاصی به آزمایش توبرکولین و تشخیص سل در مراحل اولیه بیماری را فراهم می کند. 4 حقوق فایل، 7 جدول.

این اختراع مربوط به دامپزشکی است، به ویژه برای بیان روش‌هایی برای تشخیص افتراقی سل ناشی از انواع مختلف مایکوباکتریوم.

مشخص است که در مزارع مرفه تشخیص اولیه سل به روشی پیچیده - اپیزوتولوژیک، بالینی، آلرژیک، پاتولوژیک و آزمایشگاهی ایجاد می شود (1.)

روش های تشخیصی ذکر شده در بسیاری از موارد اجازه نمی دهد که تشخیص نهایی سل در مدت زمان کوتاهی انجام شود.

برای آزمایش انبوه داخل حیاتی برای سل، از تست تشخیصی آلرژیک استفاده می شود (2). با این حال، ظهور واکنش‌های غیراختصاصی عظیم به توبرکولین در حیوانات غیر سلی اجازه نمی‌دهد که تشخیص سل در مزارع مرفه بر اساس آزمایش مثبت توبرکولین انجام شود (1؛ 2).

برای افتراق واکنش‌های غیراختصاصی توبرکولین، یک آزمایش (نمونه اولیه) همزمان با دو آلرژن انجام می‌شود - PPD برای پستانداران و آلرژن KAM، ساخته شده از چندین سویه مایکوباکتری غیر معمول (2؛ 3؛ 4).

تست آلرژی همزمان برای تشخیص اولیه سل در گاو و نشخوارکنندگان کوچک و مرغ در مزارع سالم و در مواردی که واکنش به توبرکولین توسط مایکوباکتریوم های آتیپیک و ساپروفیت های اسید فست ایجاد می شود، استفاده می شود (3).

صاحبان گاوهای پرمحصول در مورد قانونی بودن کنترل و کشتار تشخیصی حیواناتی که به آزمایش توبرکولین واکنش مثبت داده‌اند، مخالفت می‌کنند و خواستار روش‌های تشخیصی درون حیاتی برای بررسی مجدد حیوانات پربازده برای سل هستند. استفاده از روش پیشنهادی ما برای تشخیص زودهنگام سل حیوانی، این موضوع بحث‌برانگیز را روشن می‌کند، زیرا به ما اجازه می‌دهد تا ویژگی یا غیر اختصاصی بودن واکنش حیوان به تزریق داخل جلدی توبرکولین را به وضوح مشخص کنیم و در نهایت تشخیص دهیم.

علاوه بر این، آزمایش همزمان 30 روز یا بیشتر پس از آخرین سل‌سازی حیوانات مجاز است، که شرایط لازم برای تشخیص زودهنگام (پیش بالینی) سل را در یک دوره کوتاه مطالعه برآورده نمی‌کند.

بنابراین، معایب روش های شناخته شده برای تشخیص سل، شدت زایمان، زمان طولانی تحقیقات و عدم توانایی در تعیین نوع مایکوباکتریوم در روزهای اول پس از عفونت است.

این روش مبتنی بر افزایش حساسیت لکوسیت ها به تماس مکرر با یک آنتی ژن (آلرژن) در خارج از بدن است. هدف از اختراع توسعه روشی جدید است. این هدف با استفاده از واکنش لیز لکوسیت خاص (RSLL) به دست می آید.

این روش با بررسی خون RSLL از حیواناتی که به توبرکولین واکنش مثبت نشان می‌دهند، که در مزارع و محوطه‌های مرفه با آزمایش‌های معمول آلرژی شناسایی شده‌اند، با استفاده از توبرکولین‌ها به‌عنوان یک تشخیص (PPD برای پستانداران، PPD برای پرندگان و KAM) انجام می‌شود.

علاوه بر این، هنگام تشخیص سل در گاو، RSLL با PPD-tuberculin برای پستانداران، PPD-tuberculin برای پرندگان و KAM - یک آلرژن پیچیده از مایکوباکتری های غیر معمول انجام می شود.

تشخیص سل در خوک ها با PPD-tuberculin برای پستانداران و PPD-tuberculin برای پرندگان انجام می شود.

هنگام تشخیص سل در سگ ها و گوشتخواران، RSLL از PPD-tuberculin برای پستانداران استفاده می کند.

تشخیص سل در خرگوش ها و حیوانات خزدار RSLL با PPD-tuberculin برای پستانداران، PPD-tuberculin برای پرندگان و KAM انجام می شود.

سازمان تحقیقات سل RSLL

در آزمایشات روی خرگوش، سگ، خوک و گوساله، از مایکوباکتری های زنده سویه واکسن BCG-1 برای حساس کردن ارگانیسم های حیوانات در دوزهای واکسیناسیون استفاده شد: یک (0.05 میلی گرم)، دو (0.1 میلی گرم)، سه (0.15 میلی گرم)، پنج (0.25 میلی گرم) و ده (0.50 میلی گرم).

مطالعات تحت شرایط تجربی بر روی لکوسیت‌های خون حیوانات دست‌نخورده واکسینه شده با BCG و در شرایط تولید - گاوهایی که دو بار واکنش مثبتی به تجویز داخل پوستی PPD-tuberculin برای پستانداران نشان دادند، در مجتمع تولید کشاورزی Rassvet در Matveevo- انجام شد. منطقه کورگان.

هدف اصلی این تحقیق استفاده از نتایج RSLL برای تشخیص افتراقی و تعیین موارد زیر است:

1) حساس شدن لکوسیت های بدن حیوان توسط مایکوباکتری های واکسن BCG.

2) عفونت گاوهایی که واکنش توبرکولین مثبت مضاعف ایجاد کرد.

3) واکنش های غیر اختصاصی به توبرکولین در صورت تجویز داخل جلدی.

حیوانات دست نخورده بالینی سالم برای آزمایش انتخاب شدند و به عنوان کنترل پس زمینه خدمت کردند. گروه ها توسط حیواناتی تشکیل شدند که در آنها مقادیر پایدار پارامترهای خونی (تعداد لکوسیت ها، درصد لیز و غیره) طی بررسی 3 برابری نمونه های خون به دست آمد.

حداقل سه حیوان در هر گروه آزمایشی گرفته شدند. از هر حیوان خون گرفته شد و به دو گروه شاهد و آزمایش تقسیم شد. در نمونه شاهد، محلول فیزیولوژیکی کلرید سدیم 9/0 درصد و در نمونه های آزمایشی - توبرکولین ها - PPD برای پستانداران، PPD برای پرندگان و KAM به خون اضافه شد.

برای از بین بردن خطاهای توجه در تکنیک شمارش سلول ها و به دست آوردن مقادیر متوسط ​​قابل اعتماد شاخص های واکنش خون، هر نمونه (شاهد و تجربی) در سه تکرار مورد بررسی قرار گرفت.

روش انجام مطالعه برای سل RSLL

بررسی حیوانات برای سل ابتدا با روش سل در روش و چارچوب زمانی پیش‌بینی شده توسط «کنترل اپیزوتیک و تشخیص سل در حیوانات گونه‌های مختلف» (2) انجام می‌شود.

PPD-tuberculin برای پستانداران، PPD-tuberculin برای پرندگان و یک آلرژن پیچیده از مایکوباکتری های آتیپیک (CAM) به عنوان تشخیص استفاده می شود.

در گله ها، گروه ها و حیوانات منفرد عاری از سل، روش اصلی تحقیق، تست توبرکولین داخل جلدی است. اگر حیواناتی که به توبرکولین واکنش نشان می‌دهند شناسایی شوند، آنهایی که واکنش مثبت نشان می‌دهند جدا می‌شوند، بسته می‌شوند و از آنها خون برای آزمایش در واکنش لیز لکوسیت خاص (SLLR) با تشخیص‌های زیر گرفته می‌شود:

در گاو، خون ضد انعقاد موجود در RSLL از آن گرفته می شود

الف) محلول فیزیولوژیکی کلرید سدیم (نمونه شاهد).

د) PPD-tuberculin برای پرندگان.

در عین حال، حیواناتی که نتایج مثبتی از مطالعه RSLL با PPD-tuberculin برای پستانداران دادند، سل در نظر گرفته می شوند.

در خوک ها، خون ضد انعقاد در RSLL از آن گرفته می شود

الف) محلول فیزیولوژیکی نمک؛

ب) PPD-tuberculin برای پستانداران.

ج) PPD-tuberculin برای پرندگان.

خوک هایی که در آنها RSLL با PPD-tuberculin برای پستانداران مثبت است، سلی در نظر گرفته می شوند و حیواناتی که در آنها RSLL با PPD-tuberculin برای پرندگان مثبت است، آلوده به مایکوباکتریوم پرندگان در نظر گرفته می شوند.

در سگ ها و سایر حیوانات کوچک، RSLL از آن گرفته می شود

الف) محلول نمک؛

ب) PPD-tuberculin برای پستانداران.

در خرگوش ها، خون ضد انعقاد در RSLL از آن گرفته می شود

الف) محلول فیزیولوژیکی کلرید سدیم؛

ب) PPD-tuberculin برای پستانداران.

ج) PPD-tuberculin برای پرندگان.

در عین حال، خرگوش هایی که RSLL مثبت با PPD-tuberculin برای پستانداران داده اند، آلوده به یک نوع گاوی از پاتوژن سل، و با PPD-tuberculin برای پرندگان - آلوده به یک نوع پاتوژن پرندگان، با CAM - حساس به غیر معمول در نظر گرفته می شوند. مایکوباکتریوم غیر سلی

هدف از این اختراع کاهش زمان لازم برای تشخیص عامل ایجاد کننده سل در بدن حیوانات و تعیین نوع مایکوباکتریای است که باعث ایجاد حساسیت می شود.

دستیابی به این هدف مبتنی بر پدیده افزایش فوری حساسیت بدن پس از معرفی پاتوژن توسط سلول های ایمنی است که با قرار گرفتن مکرر لکوسیت های خون با همان آنتی ژن در خارج از بدن شناسایی می شود. حساسیت بیش از حد پس از عفونت یک پدیده سلولی است که در آن سلول‌های موثری که با توبرکولین خارج از بدن تعامل دارند، لکوسیت‌های خون حساس هستند که با حساسیت ازدیاد نوع تاخیری (DHT) بدن متفاوت است که در حیوانات 2-3 هفته پس از عفونت ایجاد می‌شود. عامل ایجاد کننده سل

روش اجرا

روشی برای تشخیص زودهنگام سل حیوانی به شرح زیر انجام می شود. 0.1 میلی لیتر خون آزمایش و دوز کاری توبرکولین در حجم 0.05 میلی لیتر (لوله های آزمایش) به چاه قرص حاوی 0.05 میلی لیتر محلول 3.8٪ سیترات سدیم (هپارین، تریلون B یا هر ضد انعقاد دیگری) اضافه می شود. . لوله های کنترل در همان حجم با محلول فیزیولوژیکی بدون توبرکولین پر می شوند. خون در چاهک های پلیت به مدت 2 ساعت در دمای T=37 درجه سانتی گراد و هر 30 دقیقه تکان داده می شود. سپس 0.02 میلی‌لیتر خون از چاه‌های شاهد و آزمایشی با 0.4 میلی‌لیتر مایع ترک (محلول اسید استیک 5-3 درصد، رنگ‌شده با چند قطره محلول متیلن بلو) به داخل چاهک منتقل می‌شود تا گلبول‌های قرمز را از بین ببرد و لکه‌ها را لکه‌دار کند. هسته های لکوسیت ها تعداد لکوسیت‌ها (در محفظه گوریایف) را در همه چاه‌ها بشمارید و سرعت واکنش لیز لکوسیت خاص (بر حسب درصد) را با استفاده از فرمول محاسبه کنید.

که در آن L k و L o تعداد مطلق لکوسیت ها در نمونه های کنترل و آزمایش هستند. RSLL زمانی مثبت در نظر گرفته می شود که 10% یا بالاتر باشد.

مثال 1. دوز کاری توبرکولین ها

طرح آزمایشات برای تعیین دوز کاری توبرکولین ها (نسبت ضد انعقاد، خون و توبرکولین)

در طرح آزمایشی برای تعیین دوز کاری توبرکولین ها، نشان داده شد که نسبت حجمی ضد انعقاد و خون در نمونه ها ثابت مانده است و دوز توبرکولین ها افزایش یافته است: 0.05; 0.1 و 0.15 میلی لیتر

میز 1
تعیین دوز کاری توبرکولین ها (به طور متوسط ​​بر اساس گروه) برای گاو و خوک در RSLL
دوز آنتی ژن گاو خوک ها
تعداد لکوسیت ها در طول تعامل "In vitro" (10 9//l) RSLL به درصد تعداد لکوسیت ها در طول تعامل "In vitro" (109/l) RSLL به درصد
راه حل فیزیکی PPD، میلی لیتر کام PPD پرندگان PPD، میلی لیتر کام PPD پرندگان فیزیک rr PPD میلی لیتر. PPD پرندگان PPD میلی لیتر. PPD پرندگان
0,05 9,5 9,6 9,4 9,5 -1% 1% 0 9,3 9,2 9,4 1% 1%
0,1 9,5 9,5 9,4 9,4 0% 1% 1 8,6 8,7 8,7 1% 1%
0,15 9,3 9,0 9,1 9,2 3% 2% 1 8,7 8,4 8,8 3% 2%

همانطور که از جداول 1 و 2 مشاهده می شود، RSLL در همه نمونه ها از 3% در گاو، خوک، 7.4% در سگ و 2% در خرگوش تجاوز نمی کند، بنابراین استفاده از دوز 0.05 میلی لیتر توبرکولین به عنوان یک دارو مقرون به صرفه تر است. دوز کاری، زیرا RSLL او کمتر از دوز 0.15 بود. و مقدار آن برای PPD پستانداران، PPD پرندگان و KAM تقریباً یکسان بود.

بنابراین، دوز کاری توبرکولین ها 0.05 میلی لیتر برای RSLL تعیین می شود.

مثال 2. ویژگی و فعالیت خون RSLL گاوهای نر واکسینه شده با BCG-1

در آزمایشات روی گاو نر 6-4 ماهه، ویژگی و فعالیت RSLL مورد بررسی قرار گرفت. بدین منظور، مایکوباکتری های زنده سویه واکسن BCG-1 در دوزهای واکسیناسیون: 0.05، 0.15، 0.25 میلی گرم و 0.50 میلی گرم (یک، سه، پنج، ده دوز) به حیوانات تزریق شد و سپس خون در RSLL بررسی شد. در روز واکسیناسیون و هر 24 ساعت به مدت 10 روز (240 ساعت).

تعداد لکوسیت ها در نمونه های خون با PPD برای پستانداران از 8.2 تا 9.1 · 10 9 / l متغیر بود. مشخص است که در نمونه های خون از گاوهای نر واکسینه شده با BCG، هنگام تعامل با PPD برای پستانداران، کاهش تعداد لکوسیت ها 48-120 ساعت پس از تجویز واکسن نسبت به نمونه های دیگر مشاهده شد، اما تعداد آنها در حد نرمال بود. دامنه.

در همان ساعات پس از معرفی مایکوباکتری‌های زنده در نمونه‌های خون با محلول فیزیولوژیکی PPD برای پرندگان و CAM، تعداد لکوسیت‌ها تقریباً یکسان بود و از 9.2 تا 11.3·10 9 / l متغیر بود. لکوسیتوز تشخیص داده شد، که هر چه قوی‌تر بود، دوز تلقیح واکسن مایکوباکتریوم بیشتر بود. BCG-1.

همانطور که از جدول 3 مشاهده می شود، در نمونه های خون با PPD برای پستانداران، RSLL مثبت 24 ساعت پس از حساس شدن گاو با واکسن BCG تشخیص داده شد؛ در نمونه های خون با DPD برای پرندگان و CAM، شاخص های RSLL منفی بود.

جدول 3
شاخص های RSLL در گاوهای حساس شده با واکسن BCG با توبرکولین: PPD برای پستانداران، PPD برای پرندگان و CAM
زمان پس از واکسیناسیون، h
یک (0.05 میلی گرم) سه (0.15 میلی گرم) پنج (0.25 میلی گرم) ده (0.50 میلی گرم)
PPD میلی لیتر. PPD pt. کام PPD میلی لیتر. PPD pt. کام PPD میلی لیتر. PPD pt. کام PPD میلی لیتر. PPD pt. کام
در روز حساس شدن 1 0 0 0 0 1 1,2 0 1 0 0 1
24 14 0 1 14,3 0 0 16,2 1 1 34,3 1 1
48 27 0 0 32,5 0 0 28,6 1 0 48,3 0 0
72 23 0 1 25,5 0 1 21,6 -1 1 41,3 -1 1
96 17 0 0 10,8 0 0 19,5 0 0 35 0 1
120 13 0 0 5 1 0 10,3 0 0 24,2 0 1
144 7 1 1 1 0 0 6,3 0 1 20 1 1
168 1 0 0 0 0 1 2,4 0 1 15,1 0 1
192       1 0 0 1,2 0 1 8,6 0 1
216       0 0 0       6 -1 1
240                   0 0 0
- PPD جمعه. - PPD برای پرندگان

نتایج تحقیق به دست آمده بیانگر ویژگی RSLL است. RSLL می تواند برای شناسایی حیوانات حساس شده توسط مایکوباکتری ها با آنتی ژن های مرتبط با توبرکولین استفاده شود.

فعالیت RSLL با این واقعیت مشخص می شود که با افزایش دوز واکسن مایکوباکتریوم زنده در قطعه. BCG-1 از 0.05 میلی گرم تا 0.50 میلی گرم در هر حیوان، شاخص RSLL را افزایش می دهد.

بنابراین، مشخص شد که هنگام واکسینه شدن با یک دوز واکسیناسیون BCG-1، بیشترین میزان RSLL با PPD برای پستانداران 48-72 ساعت پس از تزریق (27-23٪) بود.

هنگامی که گاو با سه دوز واکسیناسیون حساس می شود، شاخص های مثبت RSLL نیز در همان زمان مشاهده می شود. حداکثر درصد لیز پس از تجویز واکسن BCG به 5/32 درصد می رسد.

هنگامی که پنج دوز واکسیناسیون به حیوانات داده شد، لیز لکوسیت ها طولانی تر بود و تمایل به افزایش داشت. این روند به ویژه هنگامی که به حیوانات 10 دوز واکسیناسیون واکسن BCG داده شد، زمانی که لیز لکوسیت ها 48 ساعت پس از تزریق واکسن به 48.3٪ رسید و طولانی تر شد، به وضوح مشاهده شد. با افزایش تعداد دوزهای واکسیناسیون، درصد لکوسیت های حساس افزایش یافت و این بر شاخص های RSLL تأثیر گذاشت (جدول 3).

نتایج شاخص های RSLL بسته به تعداد دوزهای واکسیناسیون واکسن BCG-1 نشان دهنده فعالیت برجسته RSLL است.

بنابراین، میانگین نرخ روزانه RSLL با PPD برای پستانداران بیش از 120 ساعت با یک دوز واکسیناسیون مایکوباکتریوم BCG 18.8٪، سه - 20.8٪، پنج - 19.24٪ و ده - 32.2٪ بود. با ده دوز واکسیناسیون BCG، شاخص های مثبت RSLL با PPD برای پستانداران تا هفت روز افزایش می یابد.

مطالعات انجام شده با تزریق واکسن مایکوباکتریوم زنده BCG امکان تعیین ویژگی و فعالیت RSLL را فراهم می کند، که برای تشخیص افتراقی واکنش های خاص و غیر اختصاصی به توبرکولین ضروری است.

مثال 3. مطالعه برای تعیین حساسیت در خوک ها ناشی از معرفی قطعات واکسن مایکوباکتریای زنده. BCG-1

آزمایش‌ها بر روی خوک‌های سه گروهی از شیر گرفته شده انجام شد که یک، سه و پنج دوز واکسیناسیون واکسن BCG به آنها تزریق شد. تعداد لکوسیت‌ها در خوک‌هایی که با یک دوز واکسن BCG با DPD برای پستانداران حساس شدند از 7.2 تا 8.8·10 9 / L و با محلول نمکی DPD برای پرندگان از 8.7 تا 14.3·10 9 / L متغیر بود. بیشترین تعداد لکوسیت ها 48 ساعت پس از واکسیناسیون بود. همین الگو با معرفی سه و پنج دوز واکسیناسیون واکسن BCG مشاهده شد، که در آن تعداد لکوسیت‌ها با محلول نمکی و PPD برای پرندگان پس از 48 ساعت به ترتیب به 15.4 و 18.6·10 9 / L رسید. در نتیجه، میزان RSLL با PPD برای پستانداران در خوک های حساس پس از 24 ساعت با یک دوز واکسیناسیون 26.9٪، سه - 28.9٪، پنج - 38.1٪ بود. بالاترین نرخ RSLL 48-72 ساعت پس از حساس شدن بود و 46.6-49.7 درصد بود. 41.5-46.7٪; 49.7-55.4 درصد بر اساس دوزها (جدول 4).

جدول 4
شاخص های RSLL در خوک های حساس شده با واکسن BCG با توبرکولین: PPD برای پستانداران، PPD برای پرندگان
زمان پس از واکسیناسیون، h تعداد دوزهای واکسیناسیون واکسن BCG
یک (0.05 میلی گرم) سه (0.15 میلی گرم) پنج (0.25 میلی گرم)
PPD میلی لیتر. PPD پرندگان PPD میلی لیتر. PPD پرندگان PPD میلی لیتر. PPD پرندگان
در روز حساس شدن -1 0 0,9≈1 0 0 1
24 26,9 1 28,9 1 38,1 0
48 49,65 1 46,7 1 55,4 0
72 46,61 0 41,5 1 49,7 1
96 34,45 0 26,9 1 19 0
120 17,82 0 20,9 1 13 0
144 1,15 -1 7,8 0 6,4 1
168 0 0 1,8 1 1,8 -1
192         0 1
- PPD میلی لیتر. - PPD برای پستانداران
- PPD جمعه. - PPD برای پرندگان

در خوکچه های واکسینه شده، شاخص های مثبت RSLL 24-120 ساعت پس از تجویز یک، سه و پنج دوز واکسیناسیون واکسن BCG شناسایی شد.

RSLL با DPD برای پرندگان منفی بود، که ویژگی RSLL با DPD را برای پستانداران تایید می کند.

مثال 4. مطالعه برای تعیین حساسیت در سگ ها ناشی از معرفی مایکوباکتری های زنده قطعه واکسن. BCG-1

در آزمایش‌هایی که روی سگ‌ها پس از تجویز یک، سه، پنج دوز واکسیناسیون واکسن BCG انجام شد، مشخص شد که پس از 72-24 ساعت که خون با محلول فیزیولوژیکی برهم‌کنش داد، تعداد لکوسیت‌ها 2/5-2/6/109/l بود. با DPP برای پستانداران 3 .4-4.7 10 9 /l، i.e. لکوپنی مشاهده شد.

تعداد لکوسیت ها با محلول نمک دو یا چند برابر نسبت به نرمال افزایش یافت. در نتیجه، شاخص های RSLL با یک دوز 14-25٪، با سه دوز 20.8-60.6٪ و با پنج دوز 22-68٪ بود. بالاترین میزان RSLL 48 ساعت پس از واکسیناسیون بود. شاخص های مثبت RSLL با یک دوز بعد از 24-96 ساعت، با سه دوز بعد از 24-120 ساعت، با پنج دوز بعد از 24-240 ساعت مشخص شد. با افزایش دوز واکسن، مدت زمان حساس شدن لکوسیت ها افزایش یافت و فعالیت - شاخص های RSLL - افزایش یافت (جدول 5).

جدول 5
شاخص های RSLL در سگ ها و خرگوش های حساس شده با واکسن BCG
زمان پس از واکسیناسیون (ساعت) تعداد دوزهای واکسیناسیون واکسن BCG
سگ ها خرگوش
یک (0.05 میلی گرم) سه (0.15 میلی گرم) پنج (0.25 میلی گرم) پنج (0.25 میلی گرم) ده (0.50 میلی گرم)
PPD میلی لیتر. PPD میلی لیتر. PPD میلی لیتر. PPD میلی لیتر. PPD پرندگان کام PPD میلی لیتر. PPD پرندگان کام
در روز حساس شدن 1 0 0,7 1 0 1 0 0 1
24 24 45,9 60,5 58 1 0 56 1 0
48 25 60,6 68 71 0 0 72 0 0
72 23 50 63,8 71 0 1 41 1 0
96 14 43,6 62,6 36 1 0 26 1 0
120 1,9 20,8 57,4 2 0 1 30 0 1
144 1 3,4 54,9 0 1 0 25 0 0
168 1 1 41,2 0 0 0 19 0 1
192     0 0 0 0 17 1 1
216     32 0 0 1 17 0 0
240     22 0 1 0 13,7 0 0
264     0 0 1 1 16,0 1 0
288     1,4 0 0 0 0 0 1
336       1 0 1 0 0 0
408             23 1 1
672             1 0 0
- PPD میلی لیتر. - PPD برای پستانداران
- PPD جمعه. - PPD برای پرندگان

مثال 5. مطالعه برای تعیین حساسیت در خرگوش های ناشی از معرفی واکسن مایکوباکتریوم pcs زنده. BCG-1

هنگام واکسیناسیون خرگوش ها با پنج دوز واکسیناسیون واکسن BCG، کمترین میزان لکوسیت در خون در هنگام تعامل با PPD برای پستانداران پس از 24 و 72 ساعت (4.6-4.7 109/l) و با ده دوز کمترین تعداد مشاهده شد. لکوسیت ها هنگام تعامل با PPD برای پستانداران در 24 ساعت (3.8 10 9 / l) و 48 ساعت (4.7 10 9 / l) بود. یک ویژگی خاص این است که در طول تعامل خون با PPD برای پستانداران 72-264 ساعت و 408 ساعت پس از واکسیناسیون، تعداد لکوسیت ها چندین برابر بیشتر از حد طبیعی بود و به 11-28.5 109 / l رسید، یعنی . به جای لکوپنی، لکوسیتوز مشاهده شد. و در عین حال، تعداد لکوسیت‌ها در نمونه‌های دارای محلول نمکی (نمونه‌های شاهد) به‌طور معنی‌داری از تعداد آن‌ها در نمونه‌های آزمایشی فراتر رفته و به 25.0-38.7 109/l رسید. مشخص شد که در پس زمینه لکوسیتوز ناشی از تجویز دوزهای زیاد واکسن BCG، RSLL در خرگوش مثبت بود و بین 7/13 تا 72 درصد متغیر بود (جدول 5).

مثال 6. مطالعه نمونه های خون از گاوهای RSLL که واکنش مثبت مضاعفی به توبرکولین داد.

تشخیص سل با واکنش‌های لیز اختصاصی لکوسیت‌های RSLL در شرایط تولید در Rassvet SEC در منطقه Matveevo-Kurgan انجام شد.

در اکتبر 2006، در مزرعه ای که قبلاً موفق بود، هفت گاو از 198 مورد آزمایش به توبرکولین واکنش مثبت نشان دادند. با تکرار سل پس از 45 روز، آنها دوباره واکنش مثبت نشان دادند. با تزریق داخل جلدی توبرکولین، تورم های منتشر با قوام خمیری ایجاد شد و چین پوستی 5-10 میلی متر ضخیم شد.

قبل از کشتار، خون از گاوها برای آزمایش در واکنش لیز لکوسیت خاص (SLLL) گرفته شد. نتایج مطالعات بر روی تعداد لکوسیت ها و شاخص های RSLL در گاوهایی با واکنش شدید به توبرکولین در جدول 6 ارائه شده است.

جدول 6
RSLL و داده های پاتولوژیک در گاوهایی که به توبرکولین واکنش مثبت نشان دادند
شماره موجودی گاو تعداد لکوسیت ها و نشانگر RSLL خون هنگام تعامل با
فیزیولوژیکی راه حل PPD برای میلی لیتر. PPD برای پرندگان کام
تعداد دریاچه ها تعداد دریاچه ها RSLL% تعداد دریاچه ها RSLL% تعداد دریاچه ها RSLL%
1 2 3 4 5 6 7 8
6827 7,7 5,5 29 7,6 1 7,55 2
071 11,0 7,1 36 11,0 0 10,5 1
4006 5,05 5,0 1 5,0 1 5,05 1
4018 9,5 2,75 71 9,35 2 9,4 1
162 5,0 4,8 4 4,9 1 4,9 1
109 5,0 4,9 2 5,0 0 4,9 1
148 5,75 4,2 27 5,7 1 5,7 1

همانطور که از جدول 6 مشاهده می شود، از هفت گاو که به تزریق داخل جلدی توبرکولین پاسخ دادند، تنها چهار گاو RSLL مثبت داشتند (موجودی شماره 6827؛ شماره 071؛ شماره 4018؛ شماره 148) در اثر متقابل نمونه های خون. با PPD-tuberculin برای پستانداران. نمونه خون با PPD-tuberculin برای پرندگان و CAM مقادیر RSLL منفی داد.

بررسی دامپزشکی کنترل و کشتار تشخیصی گاوهایی که واکنش مثبتی به توبرکولین نشان دادند، نشان داد که از چهار حیوان با شاخص RSLL مثبت، تنها دو حیوان دارای تغییرات مشخصه سل در غدد لنفاوی بودند: در یک لاشه در زیر فکی و رتروفارنژیال و در غدد لنفاوی. دوم در غدد لنفاوی مدیاستن و مزانتریک. در لاشه دو گاو با واکنش مثبت به تست توبرکولین و نشانگرهای RSLL مثبت، هیچ تغییر پاتولوژیک مشخصه سل از نظر بصری در اندام های داخلی و غدد لنفاوی تشخیص داده نشد. این احتمالاً به دلیل عفونت اخیر حیوانات با عامل ایجاد کننده سل است و تغییرات پاتولوژیک هنوز زمان شکل گیری نداشته است. علاوه بر این، طی یک کنترل پس از مرگ و معاینه تشخیصی، مشخص شد که واکنش های مثبت به تزریق داخل جلدی توبرکولین توسط دو گاو آبستن عمیق (7-8.5 ماه بارداری) و یک گاو مبتلا به اندومتریت حاد ناشی از عفونت استرپتوکوک داده شد. تغییرات پاتولوژیک در گاوهایی که به توبرکولین پاسخ مثبت دادند در جدول 7 نشان داده شده است.

جدول 7
تغییرات پاتولوژیک در گاوهایی که به توبرکولین واکنش مثبت نشان دادند
شماره گاو تغییرات پاتولوژیک
6827 هیچ تغییر پاتولوژیک در اندام های داخلی و غدد لنفاوی یافت نشد
071 غدد لنفاوی فوق شریانی پرخون است، غدد لنفاوی کبدی روی قسمت دارای کانون‌های سالو مانند است، هیچ تغییر پاتولوژیک دیگری در اندام‌های داخلی و غدد لنفاوی مشاهده نشد.
4006 اندومتریت پس از زایمان، هیچ تغییر پاتولوژیک دیگری در اندام های داخلی و غدد لنفاوی یافت نشد
4018 غدد لنفاوی سمت چپ زیر فکی روی برش دارای کانون های نکروزه به رنگ خاکستری-سفید بود؛ هیچ تغییر پاتولوژیک دیگری در اندام های داخلی و غدد لنفاوی مشاهده نشد.
162 هیچ تغییر پاتولوژیک در اندام های داخلی و غدد لنفاوی یافت نشد، بارداری 7 ماهگی
109 هیچ تغییر پاتولوژیک در اندام های داخلی و غدد لنفاوی یافت نشد، بارداری 7.5 ماه
148 هیچ تغییر پاتولوژیک در اندام های داخلی و غدد لنفاوی، بارداری 8 ماهه مشاهده نشد

کنترل و معاینه تشخیصی گاوهای ذبح شده که واکنش مثبتی به توبرکولین نشان دادند، نشان داد که در چهار مورد از هفت مورد، یک آزمایش توبرکولین مثبت با RSLL مثبت همزمان بود (B = 4: 7 = 0.57). در یک مورد (B=1:7=0.14) از سه گاو با حاملگی 8-7 ماهه. آزمایش توبرکولین مثبت همزمان با بارداری عمیق بود (8 ماه؛ B=1:3=0.33). در یک مورد - با عفونت استرپتوکوک (اندومتریت حاد؛ B = 1: 7 = 0.14).

RSLL در دو مورد از چهار شاخص مثبت با تشخیص تغییرات پاتولوژیک مشخصه سل همزمان بود (B=2:4=0.5) و در دو مورد از چهار مورد (B=2:4=0.5) داده های پاتولوژیک دیداری مشاهده نشد. مشخص شد که این نمی تواند مبنایی برای رد عفونت اولیه با مایکوباکتریوم باشد، زمانی که تغییرات پاتولوژیک هنوز شکل نگرفته است.

ادبیات

1. تشخیص بیماری سل. // V.P. Urban، M.A. Safin، A.A. Sidorchuk، M.V. Kharitonov، R.S. Sigbatulin، F.G. اکبروف // کارگاه اپیزوتولوژی و بیماری های عفونی با بهداشت دامپزشکی. کتاب درسی. مسکو: کولوس، 2003، صص 82-86.

2. کنترل اپیزوتولوژیک و تشخیص سل در حیوانات گونه های مختلف. پیشگیری و کنترل بیماری های عفونی مشترک بین انسان و حیوان. مجموعه قوانین بهداشتی و دامپزشکی. اد. رسمی کمیته دولتی نظارت بهداشتی و اپیدمیولوژیک روسیه. وزارت کشاورزی روسیه. مسکو. 1375، صص164-167.

3. دستورالعمل انجام آزمایش همزمان با استفاده از توبرکولین و آلرژن پیچیده از مایکوباکتریوم آتیپیک (AM) در تشخیص سل حیوانی. قانون دامپزشکی جلد 3. مسکو: کولوس، 1981، ص 220-224.

4. Sharov A.N. راهنمای سل "داروهای دامپزشکی" (ویرایش شده توسط D.F. Osidze، دکترای علوم زیستی). مسکو: کولوس، 1981، صص 192-201.

1. روشی برای تشخیص زودهنگام سل حیوانی، از جمله شناسایی حیواناتی که در مزارع و حیاط‌های مرفه به توبرکولین واکنش نشان می‌دهند، با آزمایش‌های آلرژیک برنامه‌ریزی‌شده، متفاوت از این که خون حیواناتی که به سل واکنش مثبت نشان می‌دهند با واکنش لیز لکوسیت خاص بررسی می‌شود. (RSLL) با استفاده از PPD tuberculins به عنوان یک تشخیص برای پستانداران، PPD برای پرندگان و KAM.

2. روش تشخیص زودهنگام سل طبق ادعای 1، مشخص می شود که هنگام تشخیص سل در گاو، RSLL با PPD-tuberculin برای پستانداران، PPD-tuberculin برای پرندگان و آلرژن KAM-complex از مایکوباکتریوم های غیر معمول انجام می شود.

3. روش تشخیص زودهنگام سل طبق ادعای 1، مشخصه آن این است که هنگام تشخیص سل در خوک ها، RSLL با PPD-tuberculin برای پستانداران و PPD-tuberculin برای پرندگان انجام می شود.

// 2341288 // 2443428

این اختراع مربوط به حوزه میکروبیولوژی دامپزشکی است

این اختراع مربوط به حوزه بیوتکنولوژی است

1.1. مسائل کلی. بهداشت، سم شناسی، بهداشت

الزامات

به اساسنامه مطالعات تجربی برای توجیه حداکثر غلظت مجاز آلرژن های شیمیایی صنعتی در هوای محل کار و جو

دستورالعمل های روش شناسی

MU 1.1.578-96

1. توسعه یافته توسط موسسه تحقیقاتی طب کار آکادمی علوم پزشکی روسیه (Dueva L.L., Alekseeva O.G.)، موسسه تحقیقاتی اکولوژی انسانی و بهداشت محیطی آکادمی علوم پزشکی روسیه (Pinigin M.A.، Tepikina L.A.)، موسسه ایمونولوژی وزارت بهداشت و صنعت پزشکی روسیه (Chernousov A.D.)، انستیتوی پوستی مرکزی وزارت بهداشت و صنعت پزشکی روسیه (Umerov Zh.G.)، موسسه تحقیقاتی بهداشت حرفه ای و بیماری های شغلی سنت پترزبورگ وزارت بهداشت و صنعت پزشکی روسیه (Sidorin G.I.، Martinson T.G.)، مؤسسه بهداشتی و بهداشتی تحقیقات علمی بلاروس (Shevlyakov V.V.)، مؤسسه تحقیقاتی بهداشت شغلی و بیماری های شغلی خارکف (Vasilenko N.M.)، آزمایشگاه تحقیقات مرکزی Latv. آکادمی پزشکی (Ivanova I.A.).

2. در 21 اکتبر 1996 توسط معاون اول رئیس کمیته دولتی نظارت بهداشتی و اپیدمیولوژیک روسیه - معاون دکتر بهداشتی دولتی فدراسیون روسیه S. V. Semenov تأیید و اجرا شد.

3. معرفی به جای توصیه های روش شناختی "سازمان تحقیقات استانداردسازی بهداشتی آلرژن های صنعتی در هوای محیط کار" (1980) و علاوه بر "راهنمای موقت برای توجیه حداکثر غلظت مجاز آلاینده ها در هوای اتمسفر". مناطق پرجمعیت» (1989).

^ 1 منطقه استفاده

این دستورالعمل ها برای سم شناسانی در نظر گرفته شده است که در زمینه اثبات استانداردهای بهداشتی برای مواد مضر موجود در هوای محیط کار و جو فعالیت دارند. این دستورالعمل ها به ایجاد استانداردهای بهداشتی برای آلرژن های شیمیایی صنعتی در هوای محل کار و جو اختصاص دارد. بیش از ده سال تمرین در اثبات استانداردهای بهداشتی (MAC و OSUV) برای آلرژن های صنعتی در محیط هوا، اثربخشی این اقدام را در جلوگیری از توسعه بیماری های آلرژیک در کارگران صنایع خطرناک آلرژیک و جمعیت مناطق صنعتی تایید کرده است. این دستورالعمل ها با در نظر گرفتن داده های انباشته شده در طول سال ها در مورد تئوری و عمل آلرژولوژی سم شناسی توسعه یافته اند. در عین حال، یک رویکرد واحد برای اثبات استانداردهای بهداشتی برای آلرژن های شیمیایی صنعتی در هوای منطقه کار و جو ارائه شده است.

ارزیابی خطر آلرژی هنگام ایجاد استانداردهای بهداشتی برای ترکیبات شیمیایی و محصولات پیچیده بر اساس آنها باید در موارد زیر انجام شود:

هنگام سهمیه بندی ترکیبات شیمیایی جدید متعلق به طبقات شیمیایی که از نظر آلرژی مورد مطالعه قرار نگرفته اند.

هنگام سهمیه بندی ترکیبات شیمیایی و محصولات پیچیده متعلق به کلاس های شیمیایی حاوی آلرژن های شناخته شده یا دارای آنالوگ های شیمیایی که دارای اثر حساس هستند.

در صورت وجود شکایات آلرژیک یا علائم بالینی ضایعات آلرژیک در افرادی که با این ترکیب شیمیایی یا محصول تماس دارند.

^ 2. طرح طرح تحقیق

تحقیق در دو مرحله انجام می شود. هدف مرحله 1 شناسایی خواص آلرژی زایی ماده مورد مطالعه است، مرحله 2 اثبات ارزش استاندارد بهداشتی است (نمودار را ببینید).

در مرحله اول تحقیق از روشهای حساس سازی سریع خوکچه هندی و موش استفاده می شود.

^ طرح طراحی تحقیق

مرحله I - شناسایی خواص آلرژی زا

مرحله دوم - توجیه ارزش استاندارد بهداشتی

الف- عادی سازی با قیاس

^ ب- جیره بندی بر اساس طرح تسریع شده و کامل

هنگام مطالعه ترکیبات شیمیایی ساده، توصیه می شود از روش حساس کردن خوکچه هندی به صورت داخل جلدی در ناحیه گوش و/یا بازتولید حساسیت نوع تاخیری (از این پس به عنوان DTH) در موش استفاده شود.

حساس شدن خوکچه هندی به عنوان حساس ترین گونه از حیوانات آزمایشگاهی به عمل آلرژن های شیمیایی، امکان ارزیابی فعالیت آلرژی زا ماده مورد مطالعه را فراهم می کند. برای این منظور، حیوانات با وارد کردن دو دوز از این ماده به ناحیه گوش حساس می شوند: 50 و 200 میکروگرم برای حیوان. تولید مثل HRT در موش ها این امکان را فراهم می کند که خواص آلرژی زایی نه تنها مواد جامد و خمیر مانند محلول، بلکه غیر محلول در آب با فعالیت آلرژی زا قوی یا متوسط ​​را شناسایی کنیم. از آنجایی که معرفی آلرژن‌های ضعیف به موش‌ها منجر به ایجاد HRT کاملاً مشخص نمی‌شود، اگر نتیجه این آزمایش روی موش منفی یا مشکوک باشد، خوکچه‌های هندی باید با دوز 200 میکروگرم در حیوان حساس شوند. در عین حال، و همچنین برای موادی با فعالیت آلرژی زا ضعیف، استفاده از دوز حساس کننده حتی بالاتر - 500 میکروگرم در حیوان - را نمی توان رد کرد. هنگام مطالعه محصولات پلیمری پیچیده و درمان نشده، حساسیت ترکیبی خوکچه هندی انجام می شود (به پوست گوش و علاوه بر این به صورت اپی جلدی) و/یا روش تولید مثل HRT در موش ها استفاده می شود.

علاوه بر این روش‌های اجباری مرحله اول تحقیق، می‌توان از روش‌های دیگر حساس‌سازی حیوانات نیز برای نشانه‌های مناسب استفاده کرد. بنابراین، هنگام مطالعه ترکیبات و محصولات شیمیایی، به ویژه انواع خمیری و چسبناک که پوست کارگران را آلوده می‌کنند، توصیه می‌شود با استفاده از روش کاربردهای مکرر اپی‌کوتانی روی خوکچه هندی، احتمال ایجاد حساسیت تماسی را بررسی کنید. برای گرد و غبارهای صنعتی نامحلول در آب، در مرحله اول مطالعه، می توان از روش حساس سازی داخل تراشه موش های سفید استفاده کرد.

اگر در مرحله اول مطالعه خواص آلرژی زایی ماده مورد مطالعه شناسایی نشود، آنگاه به عنوان یک ماده سمی عمومی استاندارد می شود. اگر حداقل یکی از تکنیک‌های حساس‌سازی، خواص آلرژی‌زایی ماده مورد مطالعه را نشان دهد، مرحله دوم تحقیق باید انجام شود.

مرحله دوم تحقیق بسته به روش استانداردسازی (بر اساس طرح قیاسی، تسریع شده یا کامل)، شامل آزمایش های سم شناسی و آلرژولوژیک زیر است.

هنگام استانداردسازی با قیاس، شدت و فراوانی حساسیت در حیوانات ناشی از معرفی یک آلرژن مرجع و ماده مورد مطالعه با استفاده از روش‌های حساس‌سازی سریع مرحله اول مقایسه می‌شود. هنگام جیره بندی گرد و غبارهای نامحلول، می توان از حساسیت داخل تراشه موش های سفید نیز استفاده کرد. برای ترکیبات شیمیایی ساده، آلرژن مرجع یک ماده استاندارد شده است که از نظر ساختار شیمیایی مشابه است و حاوی همان گروه های شیمیایی فعال است که مسئول ایجاد حساسیت هستند. آلرژن مرجع برای یک ترکیب پیچیده یک ترکیب استاندارد شده از قبل است، از نظر ترکیب مشابه و حاوی همان عنصر مسئول ایجاد حساسیت است.

در غیاب یک آلرژن مرجع، مرحله دوم تحقیق شامل تعیین تجربی آستانه های حساسیت است: با یک بار استنشاق ماده - لیم حس acبا استنشاق های مکرر - لیم حس فصل. مقایسه ارزش ها لیم حس acو لیم حس فصلبا لیم acو لیم فصلایجاد شده در آزمایشات سم شناسی بر روی اثرات یکپارچه و خاص، به ما امکان می دهد تعیین کنیم که آیا اثر حساس کننده محدود است یا خیر. با در نظر گرفتن این داده ها، ارزش استاندارد بهداشتی توجیه می شود (به بخش 6 مراجعه کنید).

هنگام جیره بندی محصولات شیمیایی پیچیده، حیوانات در هر دو مرحله مطالعه با استفاده از کل محصول حساس می شوند. هنگامی که حساسیت تشخیص داده می شود، تمام مواد اصلی به شکل خالص برای آزمایش استفاده می شود و اگر ترکیب ناشناخته باشد، از کل محصول یا عصاره ای از آن استفاده می شود (به بخش 5.3 مراجعه کنید).

^ 3. انجام تحقیقات برای شناسایی خواص آلرژی زا

3.1. حساسیت داخل پوستی خوکچه هندی

در این آزمایش از خوکچه های هندی جوان با وزن 250 تا 300 گرم استفاده شد که به 2 گروه آزمایشی و یک گروه کنترل مشترک از 8 تا 10 حیوان تقسیم شدند. حیوانات گروه های آزمایشی با تزریق یک بار در پوست سطح خارجی گوش به پایه آن 50 (گروه آزمایش اول) و 200 میکروگرم به ازای هر حیوان (گروه آزمایشی دوم) ماده مورد مطالعه در حجم 0.02 - 0.1 حساس می شوند. میلی لیتر از آب مقطر، سالین، استون، الکل، توئین-80، دی متیل سولفوکسید و غیره به عنوان حلال استفاده می شود. هنگام مطالعه محصولات روغنی، از امولسیون های آبی و برای پلیمرهای پخته شده، از عصاره استفاده می شود (به بخش 5.3 مراجعه کنید). حیوانات کنترل با همان حجم حلال، امولسیفایر یا مایع استخراج کننده تزریق می شوند.

تشخیص حساسیت (به بخش 5 مراجعه کنید) پس از 8 تا 10 روز انجام می شود. آلرژن‌های قوی در هر دو دوز باعث ایجاد حساسیت شدید در خوکچه‌های هندی می‌شوند: میانگین گروه آزمایش‌های آلرژولوژیک از نظر آماری به‌طور معنی‌داری با حیوانات کنترل متفاوت است. آلرژن های متوسط ​​تنها زمانی که در دوز 200 میکروگرم به ازای هر حیوان تجویز می شوند، حساسیت شدید ایجاد می کنند، و در صورت تجویز با دوز 50 میکروگرم برای هر حیوان - ضعیف، که در آن حساسیت در 1/3 - 1/2 حیوانات تشخیص داده می شود، و میانگین شاخص های گروه آزمایش های آلرژولوژی ممکن است با حیوانات کنترل متفاوت نباشد. آلرژن‌های ضعیف تنها زمانی باعث ایجاد حساسیت خفیف می‌شوند که این ماده با دوز 200 میکروگرم برای هر حیوان تجویز شود، و فقط آزمایش‌های سلول‌های خونی می‌تواند مثبت باشد و آزمایش‌های پوستی می‌تواند منفی باشد.

^ 3.2. حساسیت ترکیبی خوکچه هندی

محصولات پیچیده و پلیمرهای اثبات شده ممکن است بسیار ضعیف جذب شوند، در این صورت حساسیت در خوکچه هندی حتی با تزریق 200 میکروگرم بر زنده به پوست گوش ایجاد نمی شود. برای تصمیم گیری نهایی در مورد وجود خواص آلرژی زا، اگر نتایج آزمایش آلرژی روی حیوانات منفی باشد، از روز بعد کاربردهای پوستی این ماده آغاز می شود. پس از برنامه هفتم، خوکچه های هندی دوباره آزمایش می شوند.

غلظت ماده برای کاربردهای پوستی در فرآیند مطالعه اثر تحریک کننده پوست یا در یک آزمایش خاص انتخاب می شود: به 6 - 8 خوکچه هندی با وزن 250 - 300 گرم به مدت 7 - 10 روز (5 بار در هفته) 3 قطره داده می شود. از ماده مورد مطالعه و رقت های آن 1:2، 1:10 و 1:100 بر روی "پنجره های" تراشیده شده سطح جانبی بدن به ابعاد 2×2 سانتی متر استفاده از یک حلال فرار که پوست را تحریک نمی کند راحت است. (استون، الکل 70 درجه، دی متیل سولفوکسید) به عنوان یک حلال. اگر فیلم تشکیل شود، پس از 4 ساعت شسته می شود، در موارد دیگر، پوست با هیچ چیزی درمان نمی شود. پمادها از مواد نامحلول (ترجیحاً با لانولین به جای ژله نفتی) تهیه می شوند که با یک کاردک چشمی روی سطح "پنجره" پخش می شوند. برای ایجاد حساسیت، حداکثر غلظتی را انتخاب کنید که باعث ایجاد درماتیت تماسی نشود.

^ 3.3. تعیین HRT در موش

گروه‌های آزمایش و کنترل هر کدام شامل 10 موش با خط خالص (BALB/C، CA-1، DVA/2) یا 16 تا 20 موش نژاد سفید با وزن 18 تا 20 گرم بودند. حیوانات با 10 میلی‌مولار یا 100 میکروگرم موش حساس شدند. ماده آزمایش یک بار داخل جلدی در پایه دم. دوز حساس کننده این ماده در 60 میکرولیتر مخلوطی از ادجوانت کامل فروند (PAF) و محلول هنکس با pH 7.5 که به نسبت 1:1 تهیه شده است، امولسیون می شود. ترکیب PAF: 1 میلی لیتر لانولین، 3 میلی لیتر روغن وازلین، 5 میلی گرم واکسن BCG گرما کشته شده. به این حجم از PAF 50 میکرولیتر Tween-20 و 0.5 میلی لیتر آب مقطر اضافه کنید. مخلوط اتوکلاو شده است. به حیوانات شاهد 60 میکرولیتر از این مخلوط بدون افزودن ماده آزمایشی تزریق می شود.

برای تشخیص حساسیت، پس از 5 روز، همان مقدار از ماده آزمایش (10 میلی‌مولار یا 100 میکروگرم) محلول (معلق) در محلول هنکس به بالشتک پنجه عقبی موش تزریق می‌شود که در هنگام حساس‌سازی انجام می‌شود. پس از 24 ساعت، ضخامت هر دو پنجه عقب را با استفاده از میکرومتر مهندسی MK-0-25 بر حسب میلی متر اندازه گیری کنید. در مورد میزان ادم، یعنی. توسعه HRT با تفاوت در ضخامت هر دو پای عقبی (شاخص HRT) قضاوت می شود. در حیوانات شاهد معمولاً 0.04 - 0.09 میلی متر است. افزایش معنی دار آماری شاخص میانگین HRT گروهی در حیوانات آزمایشی در مقایسه با حیوانات کنترل نشان دهنده وجود خواص حساس یا متوسط ​​ترکیب مورد مطالعه است.

^ 3.4. کاربردهای متعدد پوستی در خوکچه هندی

انتخاب غلظت حساس کننده به همان روشی که برای حساس سازی ترکیبی انجام می شود (به بخش 3.2 مراجعه کنید) انجام می شود. اپیکوتنوس 5 بار در هفته به مدت 4 هفته (در مجموع 20 بار) انجام می شود. اگر در هفته دوم تا سوم آزمایش، خوکچه هندی علائمی از درماتیت تماسی را نشان داد، سپس اعمال حساسیت بر روی ناحیه دیگری از پوست ادامه می یابد. حساسیت 1 تا 2 روز پس از آخرین استفاده تشخیص داده می شود. در این حالت تست قطره پوست در طرف مقابل انجام می شود.

^ 4. انجام تحقیقات برای اثبات ارزش استانداردهای بهداشتی

4.1. حساسیت داخل تراشه موش های سفید

دو گروه از موش های سفید یک بار با 0.5 - 1.0 میلی لیتر سوسپانسیون از خرد شده ترین گرد و غبار در دوزهای 50 و 10 میلی گرم در محلول فیزیولوژیکی گرم شده تا 37 درجه سانتیگراد به نای تزریق می شوند. به حیوانات گروه کنترل 1 میلی لیتر محلول فیزیولوژیکی که تا دمای 37 درجه سانتیگراد گرم شده بود تزریق شد.

بهتر است روش تجویز بدون بیهوشی انجام شود. برای انجام این کار، موش در وضعیت عمودی ثابت می شود، یک پروب فلزی متصل به سرنگ با دوز مناسب تعلیق داخل حفره دهان قرار می گیرد، آن را در امتداد دیواره قدامی حنجره از طریق گلوت عبور می دهند (احساس انسداد ایجاد می شود) تا زمانی که در انشعاب نای متوقف شود، پروب کمی بلند شده و وارد می شود. پس از تجویز، حیوان همچنان در وضعیت عمودی برای چندین حرکت تنفسی نگه داشته می شود. در این حالت، صداهای خس خس و خس خس، نفوذ سوسپانسیون به ریه ها را تایید می کند.

حیوانات تمام گروه ها 5 روز پس از تجویز داخل تراشه آزمایش می شوند.

^ 4.2. قرار گرفتن در معرض یکبار استنشاقی

یک بار استنشاق یک ماده برای تعیین مقدار لیم حس acتوصیه می شود پس از یافتن مقدار، روی خوکچه هندی یا موش های صحرایی سفید انجام شود لیم ac. برای آلرژن‌های ضعیف و متوسط، معمولاً استنشاق ماده مورد مطالعه در غلظت‌هایی در سطح فعال، آستانه و درجه‌ای کمتر از میزان اثر سمی عمومی کافی است. هنگام مطالعه آلرژن های قوی، لازم است استنشاق در غلظت های پایین تر نیز انجام شود. مدت زمان هر استنشاق در هنگام تعیین استانداردهای هوا در محل کار 4 ساعت و برای هوای جوی 24 ساعت است. تعداد حیوانات گروه باید حداقل 10 عدد باشد.

استنشاق های منفرد باید روی موش ها انجام شود تا بتوان مقادیر را با هم مقایسه کرد لیم حس acو لیم acبه دست آمده از یک گونه جانوری با این حال، اگر یک بار استنشاق باعث ایجاد حساسیت در موش نشود، باید در خوکچه هندی تکرار شود.

حساسیت یک هفته پس از استنشاق تشخیص داده می شود.

پشت لیم حس acغلظت ماده ای را مصرف کنید که یک بار استنشاق آن باعث ایجاد حساسیت در 2 تا 5 حیوان از هر 10 حیوان می شود که با آزمایش های آزمایشگاهی مثبت و/یا آزمایش های تحریک آمیز آشکار می شود. در این مورد، مقادیر میانگین گروهی شاخص‌های حساسیت ممکن است تفاوت آماری معنی‌داری با شاخص‌های کنترل نداشته باشد.

^ 4.3. قرار گرفتن مکرر در معرض استنشاق

استنشاق های مکرر بر روی حیوانات از همان گونه ای که روی آن ایجاد شده است انجام می شود لیم حس ac. مدت زمان قرار گرفتن در معرض این است: زمانی که حداکثر غلظت مجاز در هوای محل کار مشخص شد، 4 ساعت در روز، 5 بار در هفته به مدت 2 هفته؛ برای حداکثر غلظت مجاز در هوای اتمسفر، 14 روز مداوم (گرد- ساعت) قرار گرفتن در معرض. بر این اساس، پس از 2 هفته اولین آزمایش بر روی حیوانات انجام می شود. در صورت منفی یا مشکوک بودن نتیجه، استنشاق به مدت 2 هفته دیگر در همان رژیم ادامه می یابد و آزمایش مجدد انجام می شود. هنگام تعیین حداکثر غلظت مجاز در هوای یک منطقه کار، کل مدت قرار گرفتن در معرض نباید بیش از یک ماه باشد و برای هوای جوی آزمایش را می توان تا 2 ماه ادامه داد. قرار گرفتن در معرض طولانی تر توصیه نمی شود، زیرا منجر به افزایش اثر حساسیت نمی شود. علاوه بر این، استنشاق های بعدی ممکن است منجر به تضعیف اثر به دلیل توسعه فرآیندهای ایمنی جبرانی شود و به طور قابل توجهی تعیین غلظت آستانه را پیچیده کند. بنابراین، یک آزمایش 2-4 هفته در اثر آن، در اصل، معادل یک آزمایش سم شناسی مزمن است، که امکان مقایسه مقادیر را فراهم می کند. لیم فصلو لیم حس فصل .

تعیین غلظت آستانه برای اثر حساس کننده ( لیم sens ch) طبق اصول مشابه با قرار گرفتن در معرض یک استنشاق انجام می شود.

^ 5. روش های تشخیص حساسیت

این سند روش هایی را برای شناسایی حساسیت به ترکیبات و محصولات شیمیایی که به طور گسترده در عمل سم شناسی آزمایش شده اند توصیه می کند: آزمایش های تحریک کننده پوست و آزمایش های حساسیت آزمایشگاهی خاص بر اساس واکنش سلول های خونی به یک آلرژن در شرایط آزمایشگاهی. این تست‌ها می‌توانند واکنش‌های آلرژیک را در انواع مختلف تشخیص دهند: تاخیری (تست پوستی تحریک‌کننده، نوع ریگین فوری (آزمایش با ماست سل‌ها) و همچنین با واسطه کمپلکس‌های ایمنی (لیز لکوسیت‌ها و آزمایش‌های نوتروفیل‌های خون). آزمایش‌های توصیه شده نباید ابتکار تحقیقات را محدود کند، زیرا استفاده از روش‌های دیگر، چه تشخیص آلرژی خاص و چه غیراختصاصی، مشروع است، که نشان‌دهنده ایجاد حساسیت در حیوانات آزمایشگاهی است (ایمونولوژیک، بیوشیمیایی، ایمونومورفولوژی و غیره).

^ 5.1. آزمایش چکه تحریک کننده پوست در خوکچه هندی

برای انجام آزمایش چکه پوستی (که از این پس به عنوان SP نامیده می شود)، یک انتخاب اولیه از غلظت آزمایش و ماده مورد مطالعه بر روی گروهی از خوکچه هندی دست نخورده (6 تا 8 نفر) انجام می شود. برای انجام این کار، روی سطوح جانبی بدن حیوان، موها را در 4 تا 8 ناحیه به ابعاد 1×1 سانتی متر می برند که با نوارهای پشم از هم جدا می شوند. 1-3 قطره از ماده را در غلظت معین به ناحیه مربوطه بمالید. معمولاً این ماده به شکل اصلی و رقت های دو یا ده برابری آن آزمایش می شود. آب، الکل 70 درجه، استون و دی متیل سولفوکسید به عنوان حلال (رقیق کننده) استفاده می شود. در این صورت یکی از نواحی پوست باید کنترل باشد که حلال (رقیق کننده) مناسب روی آن اعمال شود. واکنش بصری پس از 24 ساعت ارزیابی می شود.

به عنوان غلظت آزمایش، حداکثر غلظت را انتخاب کنید که استفاده از آن روی پوست خوکچه هندی دست نخورده پس از 24 ساعت باعث واکنش تحریکی (اریتم، تورم) نشود.

راه اندازی CP 1 قطره از ماده آزمایشی در غلظت آزمایشی روی پوست بدون مو کناره‌های خوکچه هندی (آزمایشی و شاهد) استفاده می‌شود. واکنش بصری پس از 24 ساعت با استفاده از مقیاس زیر ارزیابی می شود:

0 امتیاز - بدون واکنش قابل مشاهده.

1 امتیاز - اریتم صورتی خفیف در کل منطقه یا در امتداد محیط.

2 امتیاز - اریتم صورتی روشن در سراسر منطقه یا در امتداد محیط.

3 امتیاز - اریتم قرمز روشن در کل منطقه؛

4 امتیاز - تورم پوست با یا بدون اریتم.

5 امتیاز - تورم شدید، زخم های کانونی، خونریزی.

^ 5.2. تست تحریکی تورم گوش

انتخاب غلظت آزمایش برای TOU، در اصل، هیچ تفاوتی با غلظت CP ندارد: همان حلال ها (استون، الکل 70 درجه) و رقت های ماده (از 0.1 تا 20٪، کمتر 50٪ یا رقیق نشده) استفاده می شود. تولید - محصول). با این حال، تعداد کل حیوانات افزایش می یابد، زیرا تنها دو غلظت را می توان روی یک حیوان (یکی برای هر گوش) آزمایش کرد.

راه اندازی TOU: ابتدا ضخامت قسمت میانی گوش را بر حسب میلی متر با میکرومتر اندازه گیری کنید، سپس 25 میکرولیتر از ماده مورد آزمایش را در غلظت کاری بر روی هر دو سطح یک سوم میانی گوش اعمال کنید و با موچین صاف کنید. . پس از 24 ساعت، ضخامت گوش مجددا اندازه گیری می شود و شاخص TOU از تفاوت ضخامت قبل و بعد از استفاده محاسبه می شود. TOC در خوکچه هندی و موش زمانی که 0.03 میلی متر یا بیشتر باشد مثبت در نظر گرفته می شود، در موش ها - 0.01 میلی متر یا بیشتر. در خوکچه هندی، TOU را می توان در مقیاس زیر شمارش کرد:

0 امتیاز - تا 0.03 میلی متر؛

1 امتیاز - 0.03 - 0.07 میلی متر؛

2 امتیاز - 0.08 - 0.12 میلی متر؛

3 امتیاز - 0.13 - 0.17 میلی متر؛

4 امتیاز - 0.18 - 0.22 میلی متر؛

5 امتیاز - 0.23 میلی متر یا بیشتر.

^ 5.3. انتخاب دوزهای کاری ماده برای انجام تست های آلرژی خاص با سلول های خونی حیوانات

آزمایش‌های آلرژی خاص با سلول‌های خونی، به عنوان یک قاعده، با محلول‌های 0.1 - 0.01٪ (سالین) انجام می‌شود، بنابراین می‌توانند از مواد کم محلول استفاده کنند. برای موادی که حتی در چنین غلظت هایی در آب نامحلول هستند، باید یک ماده محلول در آب که دارای یک گروه تعیین کننده آنتی ژن است انتخاب شود: به عنوان مثال، برای محصولات پلیمری حاوی فرمالدئید - محلول های فرمالدئید. برای محصولات پلیمری حاوی گروه های اپوکسی - اپی کلروهیدرین. برای تمام ترکیبات کروم - CrCl 3. برای فلز Be و ترکیبات آن - سولفات بریلیم و غیره. هنگام مطالعه پلیمرهای پخت شده، از عصاره استفاده می شود: ماده مورد مطالعه و محلول فیزیولوژیکی به نسبت 1:1 برای محصولات پلیمریزاسیون و 1:10 برای محصولات پلی تراکم با انکوباسیون در دمای 37 درجه سانتیگراد به مدت 3 تا 5 روز.

توصیه می شود محلول ها را نه از محصولات فنی، بلکه از مواد شیمیایی خالص تهیه کنید. از آنجایی که یک محیط اسیدی یا قلیایی می تواند به سلول های خونی آسیب برساند، باید مطمئن شوید که pH محلول کار خنثی یا کمی قلیایی باشد (pH 7.2 - 7.4). اگر ماده ای محلول ناپایدار تشکیل دهد، برای هر آزمایش باید محلول های کاری تهیه شود. محلول های ماندگار را می توان به مدت یک ماه در یخچال نگهداری کرد، اما باید مراقب استریل بودن آنها بود و در صورت کدر شدن محلول یا تشکیل لایه لایه، نمی توان از محلول استفاده کرد.

دوزهای کاری (غلظت محلول ها) مواد مورد آزمایش با انجام آزمایش با خون حیوانات دست نخورده و با استفاده از چندین رقت انتخاب می شوند. برای شناسایی حساسیت، حداکثر غلظت محلول را انتخاب کنید که باعث افزایش لیز یا سایر تغییرات در سلول های خونی مربوط به آزمایش در مقایسه با نمونه شاهد با افزودن تنها یک ضد انعقاد نشود.

^ 5.4. واکنش لیز اختصاصی لکوسیت های خون

گزینه 1. 0.1 میلی لیتر محلول فیزیولوژیکی (نمونه شاهد) را به اولین لوله آزمایش یا چاه قرص اضافه کنید و 0.1 میلی لیتر محلول فیزیولوژیکی را به لوله دوم اضافه کنید، که قبلاً یک دوز کاری از ماده آزمایش در آن حل شده است (تست نمونه). سپس 0.1 میلی لیتر خون آزمایش به هر دو لوله اضافه می شود. سیستم های واکنش دهنده با تکان دادن مخلوط شده و به مدت 2 ساعت در دمای 37 درجه سانتی گراد انکوبه می شوند. از هر نمونه خون، 0.02 میلی لیتر به ترتیب به دو لوله آزمایش یا چاهک یک صفحه حاوی 0.4 میلی لیتر محلول آبی 3٪ اسید استیک برای از بین بردن گلبول های قرمز خون منتقل می شود.

گزینه 2. خون حیوانات آزمایشی به دو ملانژور تا نقطه 0.5 کشیده می شود، سپس محلول 5 درصد سیترات سدیم تهیه شده در محلول فیزیولوژیکی به ملانژور اول تا علامت 1 (نمونه شاهد) اضافه می شود. به همان علامت I) - محلول 5٪ سیترات سدیم، که در آن یک دوز کاری از ماده آزمایشی از قبل حل شده است (نمونه آزمایش). ملانژورها تکان داده می شوند و در دمای 37 درجه سانتی گراد به مدت 2 ساعت انکوبه می شوند. سپس یک محلول آبی 3-5٪ اسید استیک، رنگ آمیزی شده با متیلن بلو، به هر دو ملانژور تا علامت II اضافه می شود.

تعداد مطلق لکوسیت ها در محفظه شمارش خون یا روی پیکاکل شمارش می شود. هنگام استفاده از ملانژور، ابتدا 3-4 قطره قبل از پر کردن محفظه تخلیه می شود.

شاخص RSLL با استفاده از فرمول محاسبه می شود:

هنگامی که میزان لیز لکوسیت 10% یا بیشتر باشد، واکنش مثبت در نظر گرفته می شود. نشانگر RSLL بالای 20 درصد نشان دهنده سطح بالایی از حساسیت حیوانات است.

غلظت های کاری آلرژن های شیمیایی نباید باعث لیز بیش از 9٪ از لکوسیت های حیوانات دست نخورده شود و اغلب با رقت های 0.5 - 0.05٪ در محلول فیزیولوژیکی مطابقت دارد. رقت های بالاتری برای موادی که دارای اثر تحریک کننده و در نتیجه سیتوتوکسیک واضح بر سلول های خونی هستند مورد نیاز است.

^ 5.5. پاسخ آسیب خاص به نوتروفیل ها

برای آزمایش واکنش آسیب خاص به نوتروفیل ها (از این پس به عنوان آزمایش PPN نامیده می شود)، یک محلول آبی 5٪ سیترات سدیم یا یک محلول 1.5٪ EDTA (Chelaton-3) تهیه شده در محلول فیزیولوژیکی به عنوان یک ضد انعقاد استفاده می شود. pH محلول).

غلظت کاری ماده مورد مطالعه با استفاده از همان ضد انعقاد که به خون اضافه می شود تهیه می شود. غلظت کاری نباید به بیش از 4 درصد از نوتروفیل ها در حیوانات دست نخورده در نسخه اول آزمایش PPN و 7 درصد در نسخه دوم آسیب برساند.

راه اندازی تست PPN 0.1 - 0.2 میلی لیتر از محلول ماده آزمایش در غلظت کاری به اولین لوله سانتریفیوژ سیلیکونی شده (نمونه آزمایشی) اضافه می شود و همان حجم فقط ضد انعقاد به لوله دوم (نمونه شاهد) اضافه می شود. سپس همان حجم خون از حیوان مورد بررسی به هر دو لوله آزمایش اضافه می شود و پس از آن لوله های آزمایش با دقت مخلوط می شوند و به مدت 1 ساعت در دمای اتاق نگهداری می شوند.

گزینه 1. پس از پایان انکوباسیون، اسمیرهایی با ضخامت متوسط ​​از هر دو لوله بر روی یک لام شیشه ای تهیه می شود که با استفاده از روشی که برای رنگ آمیزی اسمیرها برای محاسبه فرمول لکوسیتی استفاده می شود، ثابت و رنگ آمیزی می شوند. تحت غوطه وری، 100 نوتروفیل با در نظر گرفتن تعداد سلول هایی با کروماتینولیز مشخص، پیکنوز، تکه تکه شدن هسته، هیپرکروماتوز یا کاریولیز شمارش می شود.

گزینه 2. پس از پایان انکوباسیون، دوباره با دقت مخلوط کنید و 0.02 میلی لیتر از محلول آبی کاری آکریدین نارنجی (1:20000) را به هر دو لوله آزمایش اضافه کنید. این محلول بیش از 2 هفته در یخچال نگهداری نمی شود. برای تهیه آن از محلول ید آکریدین پرتقال با رقت 1:100 استفاده کنید که می توان آن را در بطری تیره تا چند ماه در یخچال نگهداری کرد. پس از 5 دقیقه، 1 قطره از محتویات هر لوله آزمایش به دو لام شیشه ای منتقل شده، با یک شیشه پوششی پوشیده شده و پس از 3 تا 5 دقیقه در LUMAM با غوطه وری بررسی می شود. 100 نوتروفیل شمارش می شود که به دلیل فراوانی دانه های یاقوت سرخ در پس زمینه درخشش سبز کم رنگ سیتوپلاسم به وضوح مشخص می شود.

نوتروفیل های سالم و دست نخورده بیضی شکل یا گرد هستند. نوتروفیل های آسیب دیده با برجستگی های آمیبوئیدی مشخص (افزایش تحرک سلول) و تغییرات مورفولوژیکی (لبه های "شکسته" ناهموار با شروع نادر شدن سیتوپلاسم در لبه های سلول، واکوئل شدن سیتوپلاسم، دگرانولاسیون، درشت شدن الگوی کروماتین تشخیص داده می شوند. هسته).

شاخص واکنش با تقسیم بر 100 اختلاف تعداد نوتروفیل های آسیب دیده در نمونه های آزمایشی و شاهد محاسبه می شود. مقدار شاخص 0.05 یا بیشتر در گزینه اول و 0.08 یا بیشتر در گزینه دوم نشان دهنده حساس شدن حیوان است.

^ 5.6. واکنش دگرانولاسیون اختصاصی ماست سل

مطالعه تحت بیهوشی یا بلافاصله پس از بریدن سر حیوان انجام می شود. برای انجام این کار، از قیچی برای باز کردن دیواره شکم در امتداد خط وسط استفاده کنید و با احتیاط (ترجیحاً با انگشتان در نوک انگشتان لاستیکی، به جای موچین) طولانی ترین حلقه روده پریستالتیک (5 سانتی متر یا کمی بیشتر) را بیرون بکشید. حلقه را روی یک اسلاید شیشه ای قرار دهید تا 3 بخش بزرگ از مزانتر نمایان شود. پس از این، قسمتی از حلقه روده از دو طرف بریده می شود که لبه های آن باید 0.5 سانتی متر روی لبه لیوان آویزان شود. سپس، 40 میکرولیتر محلول فیزیولوژیکی به هر بخش از اولین داروی کنترل، و 20 میکرولیتر اتوسرم تازه (تهیه شده در روز مطالعه از خون گرفته شده از ورید هیپوگلوسال) و 20 میکرولیتر از ماده آزمایش در محل کار اعمال می شود. غلظت به هر بخش از داروی آزمایشی دوم تهیه شده در محلول نمک اعمال می شود. هر دو آماده سازی به مدت 5 دقیقه در دمای 37 درجه سانتیگراد انکوبه می شوند، فاز مایع با صاف کردن لبه شیشه شیبدار با کاغذ صافی حذف می شود و در صورت لزوم، مزانتر دوباره با دقت صاف می شود. آماده سازی بلافاصله با پر کردن آنها با محلول 1٪ رنگ ائوزین متیلن در متیل الکل (طبق گفته May-Grunwald) به مدت 1 - 1.5 دقیقه رنگ می شود. رنگ را با شستن آماده سازی کمی کج شده با آب از یک پیپت و گذاشتن آن برای خشک شدن کامل در هوا (معمولاً 24 ساعت) پاک می کنند. با استفاده از یک نمونه خشک شده، کل قسمت روده و سپتوم بین بخش های مزانتر با چاقوی جراحی برداشته می شود.

آماده سازی با میکروسکوپ غوطه وری (بزرگنمایی 10×80)، 50 ماست سل به صورت مورب شمارش می شوند، با در نظر گرفتن اشکال آسیب دیده در بین آنها. ماست سل های آسیب دیده را باید ماست سل ها با غشای آسیب دیده و رهاسازی گرانول های فراتر از حد آن (دگرانولاسیون) و همچنین به طور کامل آسیب دیده در نظر گرفت. شاخص RDTK با استفاده از فرمول محاسبه می شود:

اگر شاخص 1.31 یا بالاتر باشد، واکنش مثبت در نظر گرفته می شود.

غلظت های کاری مواد شیمیایی برای RDTK اغلب با رقت های 0.01 - 0.001٪ در محلول فیزیولوژیکی مطابقت دارد که تحت تأثیر آن در حیوانات کنترل شاخص DTC نباید از 1.0  0.3 تجاوز کند.

^ 5.7. واکنش غیر مستقیم دگرانولاسیون ماست سل

این آزمایش (از این پس RNTDC نامیده می شود) بر اساس واکنش سلول های هدف (مست سل های موش های سفید) به قرار گرفتن در معرض آنتی بادی های آلرژیک موجود در سرم خون حیوانات آزمایشگاهی و ماده مورد مطالعه (آلرژن) است.

برای به دست آوردن مجموعه ای از ماست سل ها، موش های سفید دست نخورده تحت بیهوشی اتر به صورت داخل صفاقی با 6 تا 10 میلی لیتر محلول فیزیولوژیکی گرم شده تا دمای 37 درجه سانتیگراد، مخلوط با 0.5 میلی لیتر هپارین تزریق می شوند. پس از ماساژ سبک دیواره شکم با قیچی، یک برش به طول 1.5-2.2 سانتی متر در امتداد خط وسط شکم ایجاد کنید، لاشه را با برش به سمت پایین برگردانید و ترشحات ترشح شده از حلقه های روده را در یک لوله سانتریفیوژ مرطوب شده با هپارین جمع آوری کنید. . اگزودا به مدت 5 دقیقه سانتریفیوژ می شود. در 1500 دور در دقیقه، مایع رویی تخلیه می شود و رسوب برای به دست آوردن سوسپانسیونی از ماست سل ها مخلوط می شود.

برای انجام NDTC، 0.05 میلی لیتر از سوسپانسیون ماست سل ها و 0.05 میلی لیتر سرم حیوان مورد بررسی به 2 چاه یک صفحه یا 2 لوله آزمایش اضافه می شود. سپس 0.05 میلی‌لیتر محلول فیزیولوژیکی به نمونه اول (شاهد)، 0.05 میلی‌لیتر محلول فیزیولوژیکی به نمونه دوم (آزمایشی) که در آن دوز کاری ماده مورد مطالعه حل می‌شود (محلول‌های 01/0 تا 001/0 درصد) اضافه می‌شود. آسیب خود به خودی به بیش از 5٪ از سلول های هدف ایجاد نمی کند). سپس یک قطره از هر نمونه روی یک لام شیشه ای بدون چربی که از قبل در 2 انتهای شیشه به شکل مربع رنگ آمیزی شده است، با محلول الکلی 0.3 درصد قرمز خنثی ریخته و در دمای اتاق خشک می شود. هر قطره با یک ورقه پوششی پوشانده می شود که لبه های آن با وازلین آغشته شده و در دمای 37 درجه سانتی گراد به مدت 15 دقیقه انکوبه می شود.

آماده سازی ها به صورت میکروسکوپی با بزرگنمایی 80*20 بررسی می شوند. در هر آماده سازی 50 ماست سل شمارش می شود. محاسبه شاخص RDTC و ارزیابی آن مانند بخش 5.6 هنگام تنظیم RDTC انجام می شود.

^ 5.8. ارزیابی نتایج تشخیص حساسیت

هنگام انجام مطالعات مرحله اول، فراوانی ایجاد حساسیت و شدت آن با توجه به شاخص های میانگین گروهی همه آزمایش های تحریک کننده و خاص آلرژولوژیکی مورد استفاده ارزیابی می شود. کلاس فعالیت آلرژی زا ماده مورد مطالعه طبق جدول تعیین می شود. 1: کلاس 1 شامل آلرژن های قوی، کلاس 2 شامل آلرژن های متوسط ​​و کلاس 3 شامل آلرژن های ضعیف است. اگر اثر در فرکانس حساسیت و مقادیر شاخص های میانگین گروهی تست های مختلف تحریک آمیز و/یا خاص آلرژی متفاوت باشد، فعالیت آلرژی زایی ماده بر اساس شاخص ترین شاخص ارزیابی می شود.

میز 1

^ طبقه بندی مواد با توجه به قدرت فعالیت آلرژی زا


روش حساس سازی

کلاس های فعالیت آلرژی زا

با توجه به فراوانی ایجاد حساسیت

با توجه به پایایی تفاوت در شاخص های میانگین گروهی در گروه های آزمایش و کنترل

1
2
3
1
2
3

خوکچه هندی - 200 میکروگرم

> 5 از 10

> 5 از 10

5 پوند از 10

0.05 پوند

0.05 پوند

> 0,05

در پوست گوش 50 میکروگرم

> 5 از 10

 5 از 10

0
0.05 پوند

> 0,05
-

خوکچه هندی - ترکیبی

> 5 از 10

> 5 از 10

5 پوند از 10

0.05 پوند

0.05 پوند

> 0,05

خوکچه هندی - اسیر

> 5 از 10

> 5 از 10

5 پوند از 10

0.05 پوند

0.05 پوند

> 0,05

موش - به پوست پایه دم

در نظر گرفته نمی شوند

0.05 پوند

0.05 پوند

> 0,05

هنگام انجام آزمایش‌های استنشاقی مرحله دوم تحقیق، غلظت مؤثر غلظتی است که در آن حساسیت در بیش از نیمی از حیوانات ایجاد می‌شود و میانگین گروهی شاخص‌های آزمایش‌های آلرژولوژیک از نظر آماری به طور قابل‌توجهی با حیوانات کنترل متفاوت است. آستانه اثرات حساس کننده حاد و مزمن غلظت هایی در نظر گرفته می شود که در آن قرار گرفتن در معرض (به ترتیب یک یا چند بار) حساسیت در 2 تا 5 حیوان از هر 10 حیوان ایجاد می شود و شاخص های میانگین گروه تفاوت قابل توجهی با حیوانات کنترل ندارند.

^ 6. توجیه ارزش استانداردهای بهداشتی

توجیه ارزش استاندارد بهداشتی برای یک آلرژن شیمیایی صنعتی هنگام انجام یک طرح تحقیقاتی کامل با مقایسه آغاز می شود. لیم sens chبا لیم فصل. بسته به نسبت آنها، روش اثبات MPC و وجود علامت A (آلرژن) تعیین می شود.

هنگام تعیین حداکثر غلظت مجاز در هوای منطقه کار، آنها با مقررات زیر هدایت می شوند.

اگر معیار محدود کننده سمیت باشد، یعنی. مقادیر آستانه حساسیت بالاتر از مقادیر آستانه سمیت است، سپس این ماده به عنوان یک آلرژن عملاً هیچ خطری ندارد و به عنوان یک اثر سمی عمومی استاندارد شده است. در این مورد، علامت A (آلرژن) قرار نمی گیرد.

اگر مقادیر آستانه برای اثرات سمی و حساس کننده عمومی تفاوت قابل توجهی نداشته باشد یا برابر باشد، باید ماده را از نظر ایجاد ضایعات سمی و آلرژیک خطرناک در نظر گرفت و با توجه به اثر سمی عمومی آن، همراه با علامت A (آلرژن).

اگر ملاک محدود کننده حساسیت باشد، یعنی. مقادیر آستانه حساسیت کمتر از آستانه سمیت است، سپس این ماده به عنوان یک عامل علت شناسی بیماری های آلرژیک خطرناک است، به عنوان یک آلرژن شیمیایی صنعتی در نظر گرفته می شود و با توجه به اثر حساسیت زا با علامت A استاندارد می شود. آلرژن). در این مورد، ضریب ایمنی برای یک آلرژن شیمیایی از جدول تعیین می شود. 2.

جدول 2

^ عوامل سهام Kلیم sens chهنگام ایجاد MPC در هوای محل کار

هنگام تعیین حداکثر غلظت مجاز برای مواد مضر با اثر حساس کننده در هوای جو، معیارهای دقیق تری توصیه می شود، با در نظر گرفتن اینکه کودکان، افراد مسن و افراد مبتلا به بیماری های مختلف در معرض آن قرار دارند. در این مورد، نه تنها مقدار آستانه اثر حساس کننده مزمن در نظر گرفته می شود، بلکه منطقه اثر حساس کننده مزمن نیز با فرمول تعیین می شود:

.

علاوه بر این، مطابق با اندازه ز sens chتعیین ضریب ایمنی k لیم sens chمطابق جدول 3 مقدار MPC حاصل برای اثر حساس کننده با مقدار MPC برای سمیت عمومی مقایسه می شود و کمترین مقدار MPC به عنوان یک استاندارد بهداشتی انتخاب می شود. علامت A (آلرژن) مطابق با اصول اثبات حداکثر غلظت مجاز در هوای منطقه کار قرار می گیرد.

جدول 3

^ عوامل سهام Kلیم sens chهنگام ایجاد MPC در هوای اتمسفر

بنابراین، اگر مقادیر آستانه های مزمن، سمی و حساس منطبق و به 0.01 میلی گرم بر متر مکعب برسد، آنگاه ز sens chبرابر با 1.0 خواهد بود. در این مورد طبق جدول. 3، ضریب ایمنی برای اثرات حساس نمی تواند کمتر از 3.0 باشد و مقدار MPC 0.003 mg/m3 خواهد بود. اگر ضریب ایمنی برای سمیت روی 2.0 تنظیم شود، به عنوان مثال. حداکثر مقدار غلظت مجاز 0.005 میلی گرم بر متر مکعب خواهد بود، کمترین مقدار حداکثر غلظت مجاز توصیه می شود، یعنی. 0.003 میلی گرم بر متر مکعب. اما اگر در مثال مورد بررسی ضریب ایمنی برای سمیت باید حداقل 5.0 باشد، یعنی. مقدار تعیین شده برای این اثر حتی کوچکتر خواهد بود (0.002 mg/m 3)، سپس انتخاب می شود.

هنگام اثبات OBL با استفاده از روش تسریع شده، به عنوان مثال. منطقه اثر حساس کننده ماده با توجه به مقدار با استفاده از فرمول زیر محاسبه می شود و مقدار TBEL که از اثر سمی عمومی محاسبه می شود، به تعداد دفعات کاهش می یابد. ز سنسک .

.

بنابراین، اگر با محاسبه سمیت، مقدار ULV برابر 0.2 mg/m3 تعیین شود، و ز حس acبرابر 4 است، سپس ULV ماده آزمایش با در نظر گرفتن اثر حساس کننده 0.05 mg/m 3 (0.2:4) خواهد بود. برچسب A (آلرژن) مطابق با اصول مورد استفاده برای اثبات MPC قرار می گیرد.

هنگام استانداردسازی بر اساس قیاس، اگر فراوانی و شدت حساسیت ناشی از یک ماده با موارد ناشی از قرار گرفتن در معرض آلرژن مرجع مطابقت داشته باشد، MAC یا ULV در سطح مقدار استاندارد آلرژن مرجع با علامت A (آلرژن) تنظیم می شود. اگر انحراف قابل توجهی در فرکانس و شدت حساسیت در مقایسه با موارد ناشی از تأثیر آلرژن مرجع وجود داشته باشد، مرحله دوم تحقیق انجام می شود و از مقررات فوق برای توجیه مقدار MPC یا ULV استفاده می شود.

کلاس خطر طبق قوانین عمومی پذیرفته شده در سم شناسی پیشگیرانه تعیین می شود.

یک بررسی ایمنی بالینی و بهداشتی مقدار MPC تعیین شده در آزمایشی روی حیوانات با مقایسه شرایط کار و وضعیت سلامت کارگران با استفاده از تکنیک‌های پذیرفته شده عمومی در سم‌شناسی پیشگیرانه و همچنین بر اساس یک بررسی اپیدمیولوژیک و آلرژولوژیک انجام می‌شود. کارگران، از جمله تست‌های ایمونوآلرژولوژیک انتخابی برای شناسایی فراوانی و شدت حساسیت به یک آلرژن صنعتی خاص.

کاربرد

(آموزنده)

^ اطلاعات کتابشناختی

1. انجام تحقیق در مورد تنظیم بهداشتی آلرژن های صنعتی در هوای محل کار. توصیه های روش شناسی شماره 2121-80 مورخ 23 ژانویه 1980. وزارت بهداشت اتحاد جماهیر شوروی. ریگا، 1980.

2. دستورالعمل موقت برای اثبات حداکثر غلظت مجاز آلاینده ها در هوای جوی مناطق مسکونی به شماره 88-4681. وزارت بهداشت اتحاد جماهیر شوروی. م، 1989.

3. روش های تشخیص اختصاصی آزمایشگاهی بیماری های آلرژیک شغلی با علت شیمیایی. توصیه های روش شناسی شماره 10-8/94 مورخ 25 دسامبر 1979 وزارت بهداشت اتحاد جماهیر شوروی. م، 1980.

4. Alekseeva O.G., Dueva L.A. آلرژی به ترکیبات شیمیایی صنعتی م.: پزشکی، 1978. - 242 ص.

5. Dueva L.A., Kogan V.Yu., Suvorov S.V., Shterengarts R.Ya. آلرژن های صنعتی M. مرکز پروژه های بین المللی کمیته دولتی حفاظت از طبیعت اتحاد جماهیر شوروی. م.، 1989. - 203 ص.

18.01.2009, 17:36

سلام!
لطفا برای شرایط زیر راه حلی پیشنهاد کنید. من همیشه با درمان دندان مشکل داشتم؛ چندی پیش نیاز به برداشتن چندین دندان داشتم. سپتونست برای تسکین درد استفاده شد. پس از تجویز آن، فشار به 190 افزایش یافت و تاکی کاردی با 150 ضربه در دقیقه شروع شد. (فشار خون من 110 است) بعد از تزریق تاوگیل فشار خونم شروع به عادی شدن کرد. روز بعد، گرفتگی صدا مشاهده شد. دکتر معتقد است که داروهای بیهوشی برای من منع مصرف دارند: ubestesin، ultracaine، septonest.
از آنجایی که هنوز باید دندان هایم را درمان کنم، چه باید بکنم؟

19.01.2009, 00:06

آیا قبل از این اتفاق دندان های خود را با بیهوشی درمان کرده اید؟ آیا تزریقات قبلی داروی بی حسی نیز با چنین واکنشی همراه بوده است یا این اولین بار است؟ همچنین علاقه مند به نوع بیهوشی و غلظت آدرنالین در بیهوشی مورد استفاده و وجود بیماری های سیستم قلبی عروقی است.
چنین واکنشی ممکن است به دلیل ورود ماده بی حس کننده به رگ خونی باشد (در برخی از انواع بیهوشی احتمال ورود به رگ وجود دارد). همچنین، چنین علائمی ممکن است واکنشی به آدرنالین باشد که بخشی از بیهوشی است.
در شرکت ما، بیماران با عدم تحمل بی حسی موضعی به بخش جراحی دندانپزشکی بیمارستان ارجاع داده می شوند و در آنجا تحت بیهوشی موضعی یا بیهوشی عمومی معاینه و درمان می شوند.

19.01.2009, 09:51

از پاسخ سریعتان ممنونم! قبل از این، در طی مداخلات جزئی از لیدوکائین استفاده می شد؛ من اخیراً با استفاده از آن خال روی صورتم را برداشتم. او آن را به خوبی تحمل کرد، اما ظاهراً دوز آن کم بود.
سپتونست دوبار استفاده شد که دومی براتون توضیح دادم و اولی هم در دندانپزشکی که بعد از اون فشار خونم به 140 رسید و تا 5-6 ساعت نتونستم جلوی خونریزی دندون رو بگیرم.
در میان بیماری های قلبی عروقی آریتمی اکستراسیستولیک وجود دارد.
دکتر برای من موارد منع مصرف نوشت: محلول ubestezin 4 u، محلول اولتراکائین 2 u، محلول septonest. متأسفانه، نمی توانم در مورد غلظت آدرنالین پاسخ دهم.

18.02.2009, 18:33

سلام،
من یک آزمایش ایمونولوژیک برای بیهوشی انجام دادم که این نتایج است:

1. اولتراکائین D-S - 81 (11%)
2. Ultracaine D-S forte - 61 (32%)
3. آنرنالین - 64 (29%)
4. لیدوکائین - 58 (36%)
5. Scandonest - 76 (16%)
6. Ubestezin forte - 58 (36%)
7. Septanest با آندرنالین - 65 (28%)
بر اساس درجه فعالیت:


به نظر می رسد که این داروها را نمی توان (همه بیش از 10٪) در طول بیهوشی در دندانپزشکی استفاده کرد. خوب حالا چه کاری می توانید انجام دهید؟

18.02.2009, 21:12

من در مورد ارزش تجزیه و تحلیل به شما اشاره می کنم:

واکنش لکوسیتولیز اختصاصی تغییری در تعداد لکوسیت‌ها نسبت به کنترل 91 (100%) با داروهای زیر نشان داد:
...
4. لیدوکائین - 58 (36%)
...
لیز تا 11٪ - ضعیف مثبت
لیز تا 21٪ -40٪ - نسبتا مثبت
لیز تا 41٪ - 100٪ - به شدت مثبت است

قبل از این، در طی مداخلات جزئی از لیدوکائین استفاده می شد؛ من اخیراً با استفاده از آن خال روی صورتم را برداشتم. خوب تحمل کرد