این واکنش برای شناسایی آنتی ژن های پاتوژن در ماده آزمایش با افزودن سرم ایمنی به آن انجام می شود. در حضور یک آنتی ژن همولوگ، آنتی بادی ها متصل می شوند، بنابراین، پس از افزودن گلبول های قرمز حساس شده توسط آنتی ژن، آگلوتیناسیون آنها اتفاق نمی افتد که به عنوان یک نتیجه مثبت ارزیابی می شود. برای حساس‌تر کردن واکنش، سرم ایمنی اختصاصی با حداقل مقدار (2 واحد هماگلوتینه‌کننده) به ماده آزمایش اضافه می‌شود. تیتر سرم ایمنی ابتدا با استفاده از RNGA تعیین می شود. یک واحد هماگلوتینه کننده حداکثر رقت سرم است که باعث می شود گلبول های قرمز به هم بچسبند.

روش شناسی. 0.025 میلی‌لیتر از محلول 1 درصد سرم خرگوش معمولی را به چاهک‌های پلی استایرن یا لوله‌های آگلوتیناسیون اضافه کنید و رقت‌های 2 برابری از مواد آزمایشی را انجام دهید. سپس 0.025 میلی لیتر سرم ایمنی به همه چاهک ها اضافه می شود، پلیت تکان داده می شود و به مدت 30 دقیقه در دمای 37 درجه سانتیگراد یا به مدت 1 ساعت در دمای اتاق قرار می گیرد. در مرحله بعد، 0.025 میلی لیتر از آنتی ژنی دیاگستیکوم را به همه چاه ها اضافه کنید، تکان دهید و بگذارید 2 ساعت بماند و پس از آن نتایج در نظر گرفته شود.

هنگام انجام این واکنش، یک کنترل اختصاصی سرم ایمنی به کنترل RNHA اضافه می شود که شامل یک آنتی ژن خاص، سرم ایمنی (2، 1، 0.5 واحد هماگلوتین کننده) و سوسپانسیون گلبول های قرمز حساس شده است.

RTNGA همچنین برای تشخیص آنتی بادی های خاص (کامل و مسدود کننده) استفاده می شود که برای آن مقدار دوز آنتی ژن به سرم آزمایش اضافه می شود. اگر حاوی آنتی بادی باشد، آنها توسط آنتی ژن متصل می شوند، بنابراین، پس از افزودن گلبول های قرمز حساس شده توسط آنتی بادی ها (مرحله دوم RTNGA)، گلبول های قرمز به هم نمی چسبند.

به لطف استفاده از حداقل مقدار آنتی ژن (2 دوز خنثی کننده)، واکنش بسیار حساس است. تعداد دوزهای خنثی کننده در آماده سازی آنتی ژن با استفاده از RNGA تعیین می شود، در حالی که رقت های سریالی 2 برابری آنتی ژن در محلول 1٪ سرم خرگوش معمولی ساخته می شود و یک آنتی بادی erythrocyte diagnosticum به چاهک ها اضافه می شود. دوز خنثی کننده آنتی ژن حداکثر رقت آن در نظر گرفته می شود که باعث چسبندگی کامل گلبول های قرمز حساس می شود.

قبل از واکنش، سرم های آزمایشی 1:5-1:10 رقیق شده و در دمای 56 درجه سانتیگراد به مدت 30 دقیقه غیرفعال می شوند. برای جذب هماگلوتینین ها، یک سوسپانسیون 50% از گلبول های قرمز فرمالین شده یا تازه شسته شده گوسفند به میزان 0.1 میلی لیتر سوسپانسیون به ازای هر 1 میلی لیتر سرم رقیق شده به سرم اضافه می شود. مخلوط را تکان داده و به مدت 30 دقیقه در دمای 37 درجه سانتیگراد یا 1 ساعت در دمای اتاق انکوبه می کنند و پس از آن گلبول های قرمز خون با سانتریفیوژ رسوب می کنند. می توانید سرم را تا روز بعد در یخچال بگذارید تا گلبول های قرمز رسوب کند.

هنگام انجام آزمایش، ماده آزمایش در محلول 1٪ سرم خرگوش معمولی در حجم 0.025 میلی لیتر در چاهک های پانل میکروتیتر رقیق می شود. سپس 2 دوز خنثی کننده آنتی ژن در حجم 0.025 میلی لیتر به هر چاهک اضافه می شود. صفحات را تکان داده و به مدت 30 دقیقه در دمای 37 درجه سانتیگراد یا به مدت 1 ساعت در دمای اتاق قرار می دهند. سپس 0.025 میلی لیتر آنتی بادی erythrocyte diagnosticum به تمام چاهک ها اضافه می شود. صفحات تکان داده می شوند و به مدت 1.5-2 ساعت در دمای اتاق انکوبه می شوند و پس از آن نتایج واکنش در نظر گرفته می شود. حسابداری روز بعد نیز قابل انجام است. تیتر سرم آزمایش حداکثر رقت آن در نظر گرفته می شود که در آن گلبول های قرمز به هم نمی چسبند.

آزمایش با انواع کنترل زیر همراه است:

1) ثبات گلبول های قرمز حساس (گلبول های قرمز + محلول 1٪ سرم خرگوش طبیعی).

2) کامل بودن کاهش هماگلوتینین در هر سرم آزمایشی (سرم آزمایش در کمترین رقت + گلبول های قرمز فرمالین شده).

3) صحت تعیین حداقل دوز خنثی کننده آنتی ژن (دوز خنثی کننده 2، 1 و 0.5 آنتی ژن + آنتی بادی erythrocyte diagnosticum).

واکنش هماگلوتیناسیون غیرمستقیم معکوس (رونگا) برای نشان دادن آنتی ژن های باکتریایی و ویروسی در مواد آزمایش و همچنین برای تشخیص سریع تعدادی از عفونت ها استفاده می شود.

بر خلاف RNGA، در این واکنش، گلبول های قرمز نه توسط آنتی ژن، بلکه توسط آنتی بادی ها حساس می شوند که با افزودن آنتی ژن، آگلوتیناسیون آنها اتفاق می افتد.

گلبول های قرمز از قبل با فرمالدئید یا گلوتارآلدئید تثبیت می شوند و سپس به گاما گلوبولین متصل می شوند که از سرم های ایمنی جدا شده و از سایر پروتئین های سرم خالص می شود. اتصال گاما گلوبولین به سطح گلبول های قرمز با کمک کروم کلرید اتفاق می افتد. برای انجام این کار، 1 حجم ایمونوگلوبولین های جدا شده از سرم ایمنی، 1 حجم سوسپانسیون 50% گلبول های قرمز فرمالیزه و 1 حجم محلول 0.1-0.2% کلرید کروم را به 8 حجم آب مقطر اضافه کنید. مخلوط به مدت 10-15 دقیقه در دمای اتاق باقی می ماند، سپس گلبول های قرمز خون مانند واکنش هماگلوتیناسیون غیرفعال درمان می شوند.

ویژگی آنتی بادی تشخیصی در واکنش مهار هماگلوتیناسیون غیرفعال توسط یک آنتی ژن همولوگ بررسی می شود. واکنش باید توسط یک آنتی ژن همولوگ حداقل 16 بار مهار شود و توسط یک آنتی ژن هترولوگ مهار نشود. یک کنترل برای اطمینان از عدم وجود هماگلوتیناسیون خود به خودی استفاده می شود.

با استفاده از این واکنش، پاتوژن ها در مواد گرفته شده از اندام های افراد مرده و حیوانات، به عنوان مثال، از مغز، طحال، و کبد ریه ها نشان داده می شوند. سوسپانسیون 10% از این اندام ها را در محلول کلرید سدیم ایزوتونیک تهیه کنید، آنها را به مدت 30-60 دقیقه با دور 10000 سانتریفیوژ کنید و از مایع رویی به عنوان آنتی ژن استفاده کنید.

روش شناسی.رقت های 2 برابری از مواد مورد آزمایش (آنتی ژن) را در محلول تثبیت کننده آماده کنید. 1 قطره از هر رقت آنتی ژن را به 3 چاه مجاور میکروپنل اضافه کنید (واکنش 3 ردیف چاهک موازی را اشغال می کند). به هر چاهک ردیف اول 1 قطره محلول تثبیت کننده، به چاهک های ردیف دوم 1 قطره سرم ایمنی همولوگ رقیق شده 1:10 و به ردیف سوم 1 قطره سرم ایمنی هترولوگ اضافه کنید. ردیف دوم و سوم به عنوان کنترل برای ویژگی واکنش عمل می کنند. مخلوط به مدت 20 دقیقه در دمای اتاق باقی می ماند.

1 قطره سوسپانسیون 1% از گلبول های قرمز حساس (آنتی بادی گلبول قرمز تشخیصی) را به همه چاه ها اضافه کنید و صفحات را کاملاً تکان دهید. نتایج واکنش پس از 30-40 دقیقه در نظر گرفته می شود. در حضور یک آنتی ژن خاص، هماگلوتیناسیون در ردیف اول و سوم (با سرم هترولوگ) مشاهده می شود و در ردیف دوم وجود ندارد، جایی که آنتی ژن قبلا با سرم همولوگ خنثی شده است.

این واکنش با کنترل گلبول های قرمز حساس برای آگلوتیناسیون خود به خود همراه است.

واکنش مهار هماگلوتیناسیون غیر مستقیم معکوس (RTONGA)به شما امکان می دهد وجود آنتی بادی ها را در سرم انسان و حیوانات تعیین کنید.

روش شناسی. سرم ها 10 بار با محلول ایزوتونیک کلرید سدیم رقیق شده و به مدت 20 دقیقه در دمای 65 درجه سانتیگراد حرارت داده می شود تا مهارکننده های غیر اختصاصی از بین بروند و سپس رقت های 2 برابری از سرم ها در محلول تثبیت کننده و دوز کاری تهیه می شود. آنتی ژن حاوی 4 واحد آگلوتیناسیون. 1 قطره از هر رقت سرم را به چاهک های میکروپانل اضافه کنید و 1 قطره آنتی ژن به آنها اضافه کنید که رقت آن مطابق با دوز کار است. پس از تماس با اجزای مخلوط به مدت 20 دقیقه در دمای اتاق، 1 قطره آنتی بادی گلبول قرمز تشخیصی را به همه چاه ها اضافه کنید و کاملا تکان دهید. پس از 1.5-2 ساعت انکوباسیون در دمای اتاق، نتایج واکنش برای هماگلوتیناسیون در نظر گرفته می شود. تیتر سرم بالاترین رقت آن است که به طور کامل واکنش هماگلوتیناسیون را با چهار واحد آنتی ژن آگلوتینه کننده مهار می کند.

واکنش با کنترل گلبول های قرمز حساس برای آگلوتیناسیون خود به خود در حضور: الف) محلول تثبیت کننده همراه است. ب) آنتی ژن طبیعی (از موادی که حاوی ویروس نیستند). ج) سرم آزمایش. مزیت واکنش تطبیق پذیری آن و توانایی استفاده از آن برای تشخیص آنتی ژن های مختلف است.

ارزیابی نتایج هماگلوتیناسیون نتایج RNGA، RONGA و RTONGA با توجه به درجه آگلوتیناسیون گلبول های قرمز در نظر گرفته می شوند: (++++) - آگلوتیناسیون کامل. (+++) - آگلوتیناسیون کامل کمتر؛ (++) - آگلوتیناسیون جزئی؛ (+) - آثار آگلوتیناسیون؛ (–) – عدم وجود آگلوتیناسیون.

اگر آگلوتیناسیون کامل (++++) یا تقریباً کامل (+++) باشد، واکنش مثبت در نظر گرفته می‌شود، روش تشخیصی در حضور هر یک از اجزای واکنش، آگلوتیناسیون خود به خود را نشان نمی‌دهد و کنترل ویژگی آنتی ژن یا آنتی بادی مثبت است.

واکنش هماگلوتیناسیون غیر مستقیم یا غیرفعال (IPHA)

این واکنش از نظر حساسیت نسبت به واکنش آگلوتیناسیون برتری دارد و در تشخیص عفونت های ناشی از باکتری ها، ریکتزیا، تک یاخته ها و سایر میکروارگانیسم ها استفاده می شود.

RPGA به شما امکان می دهد غلظت کمی از آنتی بادی ها را تشخیص دهید.

این واکنش شامل گلبول های قرمز برنزه شده گوسفند یا گلبول های قرمز انسانی با خون گروه I است که با آنتی ژن ها یا آنتی بادی ها حساس شده اند.

اگر آنتی بادی در سرم آزمایش تشخیص داده شود، از گلبول های قرمز حساس شده با آنتی ژن ها استفاده می شود (erythrocyte diagnosticum).

در برخی موارد، در صورت نیاز به تعیین آنتی ژن های مختلف در مواد آزمایش، از گلبول های قرمز حساس به گلوبولین های ایمنی استفاده می شود.

نتایج RPGA توسط ماهیت رسوب گلبول قرمز در نظر گرفته می شود.

نتیجه یک واکنش زمانی مثبت در نظر گرفته می شود که گلبول های قرمز خون به طور مساوی تمام انتهای لوله آزمایش (چتر معکوس) را بپوشانند.

در یک واکنش منفی، گلبول های قرمز خون به شکل یک دیسک (دکمه) کوچک در مرکز پایین لوله آزمایش قرار می گیرند.

واکنش آگلوتیناسیون (RA)

واکنش آگلوتیناسیون به دلیل ویژگی، سهولت کارایی و نمایش، در عمل میکروبیولوژیکی برای تشخیص بسیاری از بیماری های عفونی رایج شده است: تب حصبه و تب پاراتیفوئید (واکنش ویدال)، تیفوس (واکنش Weigl) و غیره.

واکنش آگلوتیناسیون بر اساس ویژگی تعامل آنتی بادی ها (آگلوتینین ها) با کل میکروبی یا سایر سلول ها (آگلوتینوژن ها) است. در نتیجه این فعل و انفعال، ذرات تشکیل می شوند - آگلومراهایی که رسوب می کنند (آگلوتینه).

واکنش آگلوتیناسیون می تواند شامل باکتری های زنده و کشته شده، اسپیروکت ها، قارچ ها، تک یاخته ها، ریکتزیا و همچنین گلبول های قرمز خون و سایر سلول ها باشد.

واکنش در دو مرحله رخ می دهد: مرحله اول (نامرئی) - اختصاصی، ترکیبی از آنتی ژن و آنتی بادی ها، دوم (قابل مشاهده) - غیر اختصاصی، چسباندن آنتی ژن ها، به عنوان مثال. تشکیل آگلوتینه

یک آگلوتینات زمانی تشکیل می شود که یک مرکز فعال آنتی بادی دو ظرفیتی با گروه تعیین کننده یک آنتی ژن ترکیب شود.

واکنش آگلوتیناسیون، مانند هر واکنش سرولوژیکی، در حضور الکترولیت ها رخ می دهد.

از نظر خارجی، تظاهرات یک واکنش آگلوتیناسیون مثبت دارای ویژگی دوگانه است. در میکروب های تاژک دار که فقط آنتی ژن O سوماتیکی دارند، خود سلول های میکروبی مستقیماً می چسبند. به این آگلوتیناسیون ریزدانه می گویند. در عرض 18 تا 22 ساعت رخ می دهد.

میکروب های تاژک دار دو آنتی ژن دارند - آنتی ژن O سوماتیک و آنتی ژن H تاژک دار. اگر سلول ها توسط تاژک ها به هم بچسبند، تکه های بزرگ و شل ایجاد می شود و این واکنش آگلوتیناسیون را دانه درشت می نامند. در عرض 2 تا 4 ساعت رخ می دهد.

واکنش آگلوتیناسیون را می توان هم به منظور تعیین کمی و کیفی آنتی بادی های خاص در سرم خون بیمار و هم به منظور تعیین گونه های پاتوژن جدا شده انجام داد. هماگلوتیناسیون عفونی میکروبیولوژیکی

واکنش آگلوتیناسیون را می توان هم در یک نسخه توسعه یافته انجام داد که به شما امکان می دهد با سرم رقیق شده تا یک تیتر تشخیصی کار کنید و هم در یک نسخه واکنش نشان دهنده که در اصل به شما امکان می دهد آنتی بادی های خاص را تشخیص دهید یا گونه های پاتوژن را تعیین کنید. .

واکنش هماگلوتیناسیون غیرفعال)

روشی برای تشخیص و شناسایی آنتی ژن ها یا آنتی بادی ها، بر اساس پدیده آگلوتیناسیون گلبول های قرمز که در حضور آنها رخ می دهد، که قبلاً آنتی ژن های خاص یا مربوطه در سطح آن جذب شده است.

1. دایره المعارف پزشکی کوچک. - م.: دایره المعارف پزشکی. 1991-96 2. کمک های اولیه - M.: دایره المعارف بزرگ روسیه. 1994 3. فرهنگ لغت دایره المعارف اصطلاحات پزشکی. - م.: دایره المعارف شوروی. - 1982-1984.

ببینید «واکنش هماگلوتیناسیون غیرمستقیم» در فرهنگ‌های دیگر چیست:

واکنش هماگلوتیناسیون غیر مستقیم- تست آزمایشگاهی RNGA با استفاده از تشخیص گلبول های قرمز. واژه نامه انگلیسی-روسی اصطلاحات اساسی در واکسن شناسی و ایمن سازی. سازمان بهداشت جهانی، 2009] موضوعات واکسینولوژی، ایمن سازی مترادف RNGA EN... ... راهنمای مترجم فنی

- (RNHA؛ مترادف واکنش هماگلوتیناسیون غیرفعال) روشی برای تشخیص و شناسایی آنتی ژن ها یا آنتی بادی ها، بر اساس پدیده آگلوتیناسیون گلبول های قرمز که در حضور آنها روی می دهد، که قبلاً در سطح آن جذب شده اند... .. . فرهنگ لغت بزرگ پزشکی

- (RPHA) به واکنش هماگلوتیناسیون غیر مستقیم مراجعه کنید... فرهنگ لغت بزرگ پزشکی

این صفحه یک واژه نامه است. # الف... ویکی پدیا

اختصارات اساسی که در فرهنگ لغت دایره المعارف دامپزشکی پذیرفته شده است- a., aa, artena, arteriae aa ana (به طور مساوی) آکادمی علوم پزشکی اتحاد جماهیر شوروی اتحاد جماهیر شوروی آکادمی علوم پزشکی اتحاد جماهیر شوروی اتحاد جماهیر شوروی آکادمی علوم اتحاد جماهیر شوروی سابق. باسیلوس باکت. باکتری BSSR بلاروس SSR c.، قرن ها. قرن، قرنها v.، vv. vena, venae VASKHNIL فرمان همه اتحادیه لنین و... ...

این اصطلاح معانی دیگری دارد، به طاعون مراجعه کنید. طاعون گوشتخوار (بیماری Kare's) یک بیماری ویروسی واگیردار حاد یا تحت حاد است که با تب، التهاب کاتارال غشاهای مخاطی، ضایعات پوستی، مرکزی ... ... ویکی پدیا

- (renes) اندام دفعی و غدد درون ریز جفتی که هموستاز شیمیایی بدن را از طریق عملکرد تشکیل ادرار تنظیم می کند. طرح فیزیولوژی آناتومیک کلیه ها در فضای خلفی صفاقی (فضای خلف صفاقی) در... ... دایره المعارف پزشکی

I (تریکینلوز؛ مترادف: تریچینوز، پف دار) کرمی از گروه نماتدها که با تب، میالژی، تورم صورت، بثورات پوستی، ائوزینوفیلی خون و در موارد شدید آسیب به اندام های داخلی و مرکزی مشخص می شود. . دایره المعارف پزشکی

- (نماتدوزها) کرم های کرمی ناشی از نماتدها، کرم های گرد از کلاس نماتودها. در میان سایر کرم‌های کرمی، N. بیشترین اهمیت را در پاتولوژی انسانی دارند، بیشتر آنها ژئوهلمینتیازها هستند (به هلمینتیاز مراجعه کنید). رشد تخمها یا لاروهای آنها... ... دایره المعارف پزشکی

اپیدیدیمیت عفونی- برنج. 1. بزرگ شدن بیضه چپ در گوسفند مبتلا به اپیدیدیمیت عفونی. برنج. 1. بزرگ شدن بیضه چپ در گوسفند مبتلا به اپیدیدیمیت عفونی. اپیدیدیمیت عفونی گوسفند (Epididymitis infectiosa arietum)، عفونی مزمن... ... فرهنگ لغت دایره المعارف دامپزشکی

واکنش هماگلوتیناسیون غیر مستقیم را ببینید... فرهنگ لغت بزرگ پزشکی

تست هماگلوتیناسیون غیر مستقیم یا غیر مستقیم (IRHA یا RPHA) نسبت به آزمایش آگلوتیناسیون حساس تر و اختصاصی تر است. از این واکنش در دو جهت نیز استفاده می شود.

1) برای تشخیص آنتی بادی در سرم خون بیمار، از دستگاه تشخیص گلبول قرمز استفاده می شود که در آن آنتی ژن بر روی سطح گلبول های قرمز تیمار شده با تانن جذب می شود. در رابطه با این واکنش، اصطلاح RPHA بیشتر استفاده می شود.

سرم آزمایش در چاهک های پلیت های پلاستیکی رقیق شده و گلبول های قرمز تشخیصی اضافه می شوند. با یک واکنش مثبت، یک فیلم نازک در امتداد دیواره های سوراخ به شکل یک "چتر توری" ظاهر می شود؛ با یک واکنش منفی، یک رسوب متراکم از گلبول های قرمز به شکل یک "دکمه" ظاهر می شود.

2) برای تشخیص سموم و آنتی ژن های باکتریایی در ماده آزمایش، از تشخیص آنتی بادی گلبول قرمز استفاده می شود که از طریق جذب آنتی بادی ها روی گلبول های قرمز به دست می آید. در رابطه با این واکنش، اصطلاح RNGA بیشتر استفاده می شود. به عنوان مثال، با کمک تشخیص آنتی بادی، آنتی ژن باسیل طاعون، اگزوتوکسین دیفتری و اگزوتوکسین بوتولینوم شناسایی می شود.

تست کومبز (تست آپتی گلوبولین)

این واکنش برای تشخیص آنتی بادی های ناقص، به عنوان مثال، آنتی بادی های فاکتور Rh استفاده می شود. سرم آزمایش به گلبول های قرمز + Rh اضافه می شود که در آن وجود آنتی بادی های ناقص برای فاکتور Rh فرض می شود. با چسبیدن به گلبول های قرمز، آنتی بادی های ناقص باعث آگلوتیناسیون نمی شوند، زیرا آنها فقط یک مرکز فعال دارند. سپس سرم آنتی گلوبولین حاوی آنتی بادی به گلوبولین های انسانی اضافه می شود. سرم آنتی گلوبولین با آنتی بادی های ناقص ترکیب می شود و باعث آگلوتیناسیون گلبول های قرمز می شود.

واکنش بارش

ماهیت واکنش رسوب (رسوب) آنتی ژن تحت تأثیر آنتی بادی های خاص است. برای به دست آوردن یک واکنش قابل مشاهده، وجود یک الکترولیت ضروری است. آنتی ژن در واکنش رسوب، مواد پراکنده مولکولی است.

واکنش بارش حلقه ایدر لوله های باریک بارش قرار می گیرد. سرم ایمنی درون یک لوله آزمایش ریخته می شود و مواد آزمایش به دقت روی آن قرار می گیرد. اگر آنتی ژن در آن وجود داشته باشد، یک حلقه مات از رسوب در مرز دو مایع تشکیل می شود.

این واکنش در پزشکی قانونی برای تعیین گونه های پروتئین موجود در لکه های خون، مایع منی و غیره استفاده می شود. برای تعیین آنتی ژن در تشخیص سیاه زخم (واکنش آسکولی)، مننژیت و سایر عفونت ها. در مطالعات بهداشتی و بهداشتی - برای تعیین جعل محصولات غذایی. سرم های رسوب کننده ایمنی با ایمن سازی حیوانات با آنتی ژن مربوطه به دست می آیند. به عنوان مثال، سرم رسوب دهنده پروتئین انسانی با ایمن سازی یک خرگوش با پروتئین انسانی به دست می آید. تیتر سرم رسوب دهنده بالاترین رقت آنتی ژنی است که با آن واکنش نشان می دهد. سرم معمولاً رقیق نشده یا در رقت 1:5 استفاده می شود.

واکنش رسوب ژل آگاربا استفاده از چندین روش انجام می شود. اینها واکنش ایمونودیفیوژن مضاعف، واکنش ایمونودیفیوژن شعاعی و واکنش ایمونوالکتروفورز هستند.

واکنش ایمونودیفیوژن مضاعف(طبق گفته Ouchterlony). ژل آگار ذوب شده را در ظرف پتری ریخته و پس از سفت شدن، چاه هایی در آن بریده می شود. آنتی ژن در برخی از چاهک ها و سرم های ایمنی در برخی دیگر قرار می گیرند که در آگار منتشر می شوند و در محل ملاقات رسوبی به شکل نوارهای سفید تشکیل می دهند.

واکنش ایمونودیفیوژن شعاعی(به گفته مانچینی). سرم ایمنی به ژل آگار ذوب شده اضافه می شود و در یک فنجان ریخته می شود. پس از سفت شدن آگار، چاه هایی بریده شده و آنتی ژن هایی در آنها قرار می گیرد که با انتشار در آگار، مناطق بارش حلقه ای شکل را در اطراف چاهک ها تشکیل می دهند. هر چه غلظت آنتی ژن بیشتر باشد، قطر حلقه بیشتر می شود. این واکنش، به عنوان مثال، برای تعیین ایمونوگلوبولین های کلاس های مختلف در خون استفاده می شود. ایمونوگلوبولین های کلاس های IgG، IgM، IgA به عنوان آنتی ژن در این واکنش عمل می کنند و آنتی بادی های ضد آنها در سرم های تک گیرنده اختصاصی وجود دارد.

ایمونوالکتروفورزالکتروفورز آنتی ژن های پروتئینی در ژل آگار انجام می شود. سرم رسوب دهنده به شیار وارد می شود که به موازات جهت حرکت پروتئین ها حرکت می کند. آنتی ژن ها و آنتی بادی ها در آگار منتشر می شوند و خطوط رسوب در جایی که به هم می رسند تشکیل می شوند.

واکنش های لیز ایمنی

یک آنتی ژن (گلبول های قرمز یا باکتری)، با ترکیب آنتی بادی های خاص، یک کمپلکس ایمنی را تشکیل می دهد که مکمل (C1) به آن متصل می شود و مکمل در طول مسیر کلاسیک فعال می شود. مکمل فعال گلبول های قرمز (همولیز) یا باکتری ها (باکتریولیز) را لیز می کند. از واکنش باکتریولیز برای شناسایی ویبریوکلرا استفاده می شود.

واکنش همولیزآنتی ژن در واکنش گلبول های قرمز است، آنتی بادی ها (همولیزین ها) در سرم همولیتیک موجود است. همولیزین ها به گلبول های قرمز خون متصل می شوند و مکمل فعال می شود که گلبول های قرمز را لیز می کند. تعلیق کدر گلبول های قرمز به یک مایع شفاف قرمز روشن تبدیل می شود - "خون لاک". از آنجایی که واکنش همولیز فقط در حضور مکمل رخ می دهد، به عنوان شاخصی برای تشخیص مکمل استفاده می شود.

واکنش همولیز موضعی در ژل(واکنش ارنه) - گونه ای از واکنش همولیز. برای تعیین تعداد سلول های تشکیل دهنده آنتی بادی (AFC) در طحال و غدد لنفاوی عمل می کند.

ژل آگار ذوب شده با سوسپانسیون سلول های طحال و گلبول های قرمز مخلوط می شود و پس از جامد شدن آگار، مکمل اضافه می شود. یک منطقه همولیز در اطراف هر سلول تولید کننده همولیزین تشکیل می شود. تعداد سلول های تولید کننده همولیزین با تعداد چنین مناطقی تعیین می شود.

از گلبول‌های قرمز خون یا مواد مصنوعی خنثی (مثلاً ذرات لاتکس) استفاده می‌کند که در سطح آن آنتی‌ژن‌ها (باکتری، ویروسی، بافتی) یا آنتی‌بادی‌ها جذب می‌شوند. آگلوتیناسیون آنها زمانی اتفاق می افتد که سرم یا آنتی ژن های مناسب اضافه شود. گلبول های قرمز حساس شده با آنتی ژن ها آنتی ژنی گلبول های قرمز تشخیصی نامیده می شوند و برای شناسایی و تیتراسیون آنتی بادی ها استفاده می شوند. گلبول های قرمز با آنتی بادی ها حساس شده اند. ایمونوگلوبولین های اریتروسیتی تشخیصی نامیده می شوند و برای تشخیص آنتی ژن ها استفاده می شوند.

واکنش هماگلوتیناسیون غیرفعال برای تشخیص بیماری های ناشی از باکتری ها (تب حصبه و پاراتیفوئید، اسهال خونی، بروسلوز، طاعون، وبا و غیره)، تک یاخته ها (مالاریا) و ویروس ها (آنفولانزا، عفونت های آدنوویروسی، هپاتیت ویروسی B، سرخک، کنه) استفاده می شود. آنسفالیت منتقله، تب خونریزی دهنده کریمه و غیره)، و همچنین تعیین برخی هورمون ها، برای شناسایی حساسیت بیش از حد بیمار به داروها و هورمون ها، مانند پنی سیلین و انسولین.

واکنش هماگلوتیناسیون غیرفعال (RPHA). تست هماگلوتیناسیون غیرفعال یک روش حساس تشخیص سرولوژیکی است و برای تشخیص زودهنگام و گذشته نگر و همچنین برای تعیین وضعیت ایمونوپوژیک افراد واکسینه شده استفاده می شود. در بیماران مبتلا به تولارمی، آنتی‌بادی‌ها معمولاً در پایان هفته اول یا دوم بیماری شناسایی می‌شوند؛ پس از 1-1.5 ماه، تیتر RPHA به حداکثر سطح می‌رسد (1: 100000-1: 20000، کمتر اغلب بیشتر)، پس از آن، تیتر RPHA به حداکثر می‌رسد. کاهش به سطح 1:100-1:200 برای مدت طولانی ذخیره می شود.

در افراد واکسینه شده، آنتی بادی ها نیز به طور مداوم شناسایی می شوند، اما در تیترهای پایین تر، 1-1.5 ماه پس از واکسیناسیون از 1:2000-1:5000 تجاوز نمی کنند و برای چندین سال در سطح پایین 1:20-1:80 باقی می مانند.

آنتی ژن برای مرحله بندی RPHA تولارمی erythrocyte diagnosticum (آنتی ژنیک) است. این دارو گلبول قرمز گوسفندی است که با آنتی ژن تولارمی حساس شده و به صورت مایع و خشک موجود است. آماده سازی مایع - یک سوسپانسیون 10٪ از گلبول های قرمز خون در محلول فرمالدئید با غلظت 10٪. آماده سازی لیوفیلیزه خشک، سوسپانسیون 10 درصدی گلبول های قرمز بدون مواد نگهدارنده در خلاء خشک شده است. قبل از استفاده، طبق دستورالعمل روی برچسب رقیق می شود. برای تنظیم واکنش در صفحات پلی استایرن، هر دو دارو در غلظت 2.5٪ و هنگام تنظیم واکنش در ریزحجم - در غلظت 0.5٪ استفاده می شود.

تکنیک راه اندازی RPGA. سرم های آزمایش با محلول فیزیولوژیکی 1:5 (1:10) رقیق شده و در دمای 56 درجه سانتیگراد به مدت 30 دقیقه حرارت داده می شود. پس از این، به منظور حذف آنتی بادی های ناهمگن به گلبول های قرمز گوسفند، سرم ها با یک سوسپانسیون 50 درصد از گلبول های قرمز فرمالین شده گوسفند درمان می شوند. برای انجام این کار، گلبول های قرمز خون را به میزان 2 قطره (0.05 میلی لیتر) در هر 1 میلی لیتر سرم اضافه کنید و با تکان دادن کاملا مخلوط کنید. سرم تا زمانی که گلبول های قرمز به طور کامل ته نشین شوند باقی می ماند یا پس از یک ساعت در دمای اتاق سانتریفیوژ می شود و پس از آن برای بررسی آماده می شود.

مایع رقیق کننده به حجم 0.5 میلی لیتر در یک ردیف چاهک روی صفحه پلی استایرن ریخته می شود. در طول مطالعه اولیه سرم ها، توصیه می شود آنها را با تنظیم واکنش در یک ردیف کوتاه از صفحه (6 چاهک) آزمایش کنید. اگر آنتی بادی ها در یک سری کوتاه شناسایی شوند، سرم ها در یک سری رقت های طولانی (12 چاهک) مجددا آزمایش می شوند. پس از ریختن مایع رقیق کننده، 0.5 میلی لیتر سرم آزمایش را با رقت 1:5 به اولین چاهک هر ردیف (کوتاه یا بلند) اضافه کنید. سپس همان حجم های سرم با رقت های دو برابر تیتر می شود. بنابراین رقت های سرم در سری کوتاه از 1:10 تا 1:320 و در سری طولانی از 1:10 تا 1:20480 بدست می آید. پس از تیتراسیون سرم، یک قطره (0.05 میلی لیتر) از یک سوسپانسیون 2.5 درصد از گلبول های قرمز حساس به هر چاه اضافه می شود. محتویات صفحات کاملاً تکان داده می شود تا یک سوسپانسیون همگن به دست آید. صفحات در دمای اتاق روی سطح میز ثابت قرار می گیرند. ثبت اولیه واکنش پس از 2-3 ساعت انجام می شود، تعیین نهایی تیتر پس از رسوب کامل گلبول های قرمز خون در چاه ها انجام می شود. کنترل های زیر برای واکنش ارائه شده است: 1) سرم آزمایشی رقیق شده 1:10 در حجم 0.5 میلی لیتر + 1 قطره از یک سوسپانسیون 2.5٪ از گلبول های قرمز غیر حساس. 2) مایع رقیق سازی در حجم 0.5 میلی لیتر + 1 قطره از یک سوسپانسیون 2.5٪ از گلبول های قرمز غیر حساس. 3) مایع رقیق سازی در حجم 0.5 میلی لیتر + 1 قطره از سوسپانسیون 2.5٪ گلبول های قرمز حساس. همه کنترل ها باید به وضوح واکنش منفی نشان دهند.

حسابداری و ارزیابی RPGA. واکنش بر اساس طرح زیر ارزیابی می شود:

1) واکنش شدید مثبت (++++) - گلبول های قرمز خون در یک لایه یکنواخت به شکل یک "چتر" به پایین سوراخ می افتند که اغلب لبه ها را ذوب می کند.

2) واکنش مثبت (+++) - گلبول های قرمز حداقل 2/3 از کف چاه را پوشش می دهند.

3) واکنش ضعیف مثبت (++) - آگلوتینات کوچک است و در مرکز چاه قرار دارد.

4) واکنش مشکوک (+) - در اطراف رسوب گلبول های قرمز در مرکز چاه دانه های جداگانه آگلوتینات وجود دارد.

5) منفی (-) - در انتهای سوراخ، گلبول های قرمز خون به شکل یک "دکمه" یا یک حلقه کوچک با لبه های صاف و واضح مشخص می شوند.

تیتر سرم بر اساس آخرین رقت سرم در نظر گرفته می شود که واکنش بسیار واضحی (حداقل سه مثبت) داد. رقت 1:100 یا بالاتر به عنوان یک تیتر تشخیصی در نظر گرفته می شود، اما همانطور که در مورد RA، نظارت بر افزایش آن ضروری است.

RPHA برای تولارمی کاملاً اختصاصی است و برخی از واکنش‌های متقاطع را فقط با سرم‌های بروسلوز تشخیص می‌دهد. تشخیص افتراقی با ارتفاع تیترها در RPGA امکان پذیر است که با آنتی ژن همولوگ به طور قابل توجهی بالاتر است.

تکنیک تنظیم RPHA در ریزحجم. RPGA را می توان با استفاده از میکروتیتراتور نوع تاکاچی (یا میکروپلیت های ته گرد با میکروپیپت ها) در ریز حجم ها انجام داد که امکان تیتراسیون مواد را در حجم های 25 میکرولیتر و 50 میکرولیتر فراهم می کند. تکنیک واکنش و توالی تمام عملیات مانند هنگام مطالعه در صفحات پلی استایرن است. با این حال، باید در نظر داشت که حساسیت میکرو متد معمولاً یک رقت (یعنی 2 برابر) کمتر از حساسیت روش ماکرو است.

برای تنظیم واکنش در میکروتیتراتور، یک مایع رقیق کننده به حجم 50 میکرولیتر با استفاده از یک پیپت قطره چکان به هر چاه اضافه می شود. سپس با استفاده از تیتراتورهایی با سر 50 میکرولیتر، سرم آزمایش با فرو بردن سر در آن جمع آوری می شود. مطمئن شوید که مایع سر تیتراتور را پر کرده است. تیتراتور با سرم به اولین چاه منتقل می شود و با نگه داشتن آن در حالت عمودی، چندین حرکت چرخشی در هر دو جهت انجام می شود. سپس تیتراتور به چاه بعدی منتقل می شود و دستکاری تکرار می شود. تیتراسیون را می توان به طور همزمان در چندین ردیف انجام داد. پس از تیتراسیون کل سری، تیتراتور با آب مقطر شسته می شود (تغییر 2 قسمت) با حرکات چرخشی، آب با استفاده از سواب از سر خارج می شود و روی شعله مشعل می سوزد.

پس از تیتراسیون، 25 میکرولیتر مایع تشخیصی گلبول قرمز را به چاهک ها اضافه کنید. غلظت تشخیصی برای RPHA در ریزحجم ها باید 0.5٪ باشد (یعنی سوسپانسیون 2.5٪ گلبول های قرمز علاوه بر این 5 بار رقیق می شود). پس از افزودن گلبول های قرمز، صفحات باید کمی تکان داده شوند تا یک سوسپانسیون همگن به دست آید. نتایج را می توان در عرض 1-1.5 ساعت ثبت کرد که مزیت قابل توجه RPGA در میکروتیتر است. علاوه بر این، این تکنیک به مقادیر کمی از تمام اجزای واکنش و سرم های آزمایشی نیاز دارد.

واکنش طبق طرح زیر در نظر گرفته می شود:

1) "+" - هماگلوتیناسیون کامل، که در آن گلبول های قرمز خون به شکل یک "چتر" به ته چاه می افتند و حداقل 2/3 از کف را اشغال می کنند.

2) "+-" - هماگلوتیناسیون جزئی، که در آن گلبول های قرمز خون به شکل یک حلقه شل با اندازه کوچک به پایین سقوط می کنند.

3) "-" - عدم وجود هماگلوتیناسیون، هنگامی که گلبول های قرمز به شکل یک دکمه یا حلقه کوچک با لبه صاف به پایین می افتند.

ویژگی یک نتیجه مثبت به دست آمده در RPHA را می توان با استفاده از یک واکنش سه جزئی - واکنش مهار هماگلوتیناسیون غیرفعال (PHA) آزمایش کرد.

تکنیک راه اندازی RTPGA. این واکنش برای تایید اختصاصی بودن یک نتیجه مثبت RPGA در مواقعی که مشکوک است یا مورد توجه اپیدمیولوژیک خاصی است استفاده می شود. مکانیسم واکنش عبارت است از مهار ویژه هماگلوتیناسیون هنگامی که سوسپانسیون باکتری کشته شده تولارمی به سرم آزمایش اضافه می شود. سه جزء در واکنش تعامل دارند: سرم آزمایش، آنتی ژن اختصاصی تولارمی و آنتی ژنی گلبول قرمز تشخیصی RTPHA معمولاً در یک ردیف 7-8 چاهک قرار می گیرد. توصیه می شود یک RPGA مکرر را به موازات RTPGA نصب کنید. 25/0 میلی لیتر مایع رقیق کننده در دو ردیف چاهک ریخته می شود سپس سرم آزمایش در حجم 25/0 میلی لیتر به اولین چاهک های هر دو ردیف اضافه می شود و تیتراسیون انجام می شود و دو ردیف رقت سرم یکسان به دست می آید. به تمام چاهک های ردیف دوم 0.25 میلی لیتر مایع رقیق کننده و به چاه های ردیف اول 0.25 میلی لیتر سوسپانسیون باکتری تولارمی اضافه کنید. Tularemia diagnosticum (حاوی 25 میلیارد باکتری تولارمی در 1 میلی لیتر) استفاده می شود که قبلا 50 بار رقیق شده است. این سوسپانسیون حاوی 500 میلیون باکتری در 1 میلی لیتر یا 125 میلیون در حجم 0.25 میلی لیتر است. پس از افزودن آنتی ژن، پلیت به مدت 1 ساعت در دمای اتاق باقی می ماند، پس از آن یک قطره (0.05 میلی لیتر) از گلبول های قرمز تشخیصی به تمام چاهک های هر دو ردیف اضافه می شود، پلیت تکان داده می شود و روی سطح میز صاف قرار می گیرد. حسابداری بعد از 2-3 ساعت انجام می شود.

حسابداری و ارزیابی RTPGA. اگر سرم آزمایش حاوی آنتی بادی های خاص تولارمی باشد، با آنتی ژن اضافه شده خنثی می شود و هماگلوتیناسیون در ردیف اول چاهک ها رخ نمی دهد یا با تیتر سرم بالا، هماگلوتیناسیون در تعداد کمتر (2-4) مشاهده می شود. چاه نسبت به ردیف با RPHA. در این مورد، ویژگی نتایج تایید شد. اگر هماگلوتیناسیون در هر دو ردیف مشخص شود، یعنی. اگر نتایج RTPGA و RPGA منطبق باشند، این نشان دهنده عدم وجود آنتی بادی های تولارمی در سرم آزمایش است. در این مورد، نتیجه اولیه RPGA غیر اختصاصی در نظر گرفته می شود.

تکنیک مرحله بندی RTHG در میکرو حجم. RTPGA، مانند RPGA، می تواند در حجم های کوچک با استفاده از میکروتیتر نوع تاکاچی انجام شود. برای انجام این کار، 0.25 میکرولیتر مایع رقیق کننده را در چاهک های میکروپلیت در دو ردیف 7-8 چاهک اضافه کنید. سپس با استفاده از تیتراتور 0.25 میکرولیتر از سرم آزمایش اضافه شده و در هر دو ردیف تیتر می شود. پس از این، 25 میکرولیتر آنتی ژن تولارمی (که غلظت آن 500 میلیون باکتری تولارمی در 1 میلی لیتر است) به هر چاهک در ردیف اول و 25 میکرولیتر مایع رقیق کننده به ردیف دوم اضافه می شود. پلیت ها به مدت 1 ساعت در دمای اتاق قرار می گیرند و پس از آن 25 میکرولیتر آنتی ژن zritrocytic diagnosticum (غلظت 0.5٪) به همه چاهک های هر دو ردیف اضافه می شود. حسابداری و ارزیابی نتایج مشابه واکنش ها در حجم های بزرگ انجام می شود.