واکنش هماگلوتیناسیون غیر مستقیم (واکنش هماگلوتیناسیون غیر مستقیم). واکنش های سرولوژیکی: انواع، استفاده از نتیجه مثبت آزمایش هماگلوتیناسیون غیر مستقیم

واکنش آگلوتیناسیون - RA(از لات آگلوتیناسیون- چسبندگی) واکنش ساده ای است که در آن آنتی بادی ها به آنتی ژن های بدن (باکتری ها، گلبول های قرمز یا سایر سلول ها، ذرات نامحلول با آنتی ژن های جذب شده روی آنها و همچنین توده های ماکرومولکولی) متصل می شوند. این در حضور الکترولیت ها رخ می دهد، به عنوان مثال، هنگامی که یک محلول کلرید سدیم ایزوتونیک اضافه می شود.

گزینه های مختلفی برای واکنش آگلوتیناسیون استفاده می شود: گسترده، نشان دهنده، غیرمستقیم و غیره. واکنش آگلوتیناسیون با تشکیل تکه ها یا رسوبات آشکار می شود.

RA برای موارد زیر استفاده می شود:

تعیین آنتی بادی در سرم خون بیماران، به عنوان مثال، مبتلا به بروسلوز (واکنش رایت، هدلسون)، تب حصبه و تب پاراتیفوئید (واکنش ویدال) و سایر بیماری های عفونی؛

تعیین پاتوژن جدا شده از بیمار؛

تعیین گروه های خونی با استفاده از آنتی بادی های مونوکلونال علیه آلوآنتی ژن های گلبول قرمز.

برای تعیین آنتی بادی در بیمار قرار دادنواکنش دقیق آگلوتیناسیون:به رقت های سرم خون بیمار اضافه کنید تشخیصی(تعلیق میکروب های کشته شده) و پس از چند ساعت انکوباسیون در دمای 37 درجه سانتی گراد، بالاترین رقت سرم (تیتر سرم) مشاهده می شود که در آن آگلوتیناسیون رخ می دهد، یعنی رسوب تشکیل می شود.

ماهیت و سرعت آگلوتیناسیون به نوع آنتی ژن و آنتی بادی ها بستگی دارد. به عنوان مثال، ویژگی های تعامل تشخیصی (آنتی ژن های O- و R) با آنتی بادی های خاص است. واکنش آگلوتیناسیون با O-diagnosticum(باکتری ها در اثر گرما کشته می شوند و در برابر حرارت پایدار می مانند آنتی ژن O)به شکل آگلوتیناسیون ریزدانه رخ می دهد. واکنش آگلوتیناسیون با H-diagnosticum (باکتری‌هایی که توسط فرمالدئید کشته می‌شوند و آنتی‌ژن H تاژک‌دار حرارت‌پذیر را حفظ می‌کنند) درشت است و سریع‌تر پیش می‌رود.

در صورت لزوم تعیین پاتوژن جدا شده از بیمار، قرار دهید واکنش نشان دهنده آگلوتیناسیون،با استفاده از آنتی بادی های تشخیصی (سرم آگلوتینه کننده)، به عنوان مثال، سروتیپ پاتوژن انجام می شود. یک واکنش نشانگر روی یک اسلاید شیشه ای انجام می شود. کشت خالص پاتوژن جدا شده از بیمار به قطره سرم آگلوتینه کننده تشخیصی با رقت 1:10 یا 1:20 اضافه می شود. یک کنترل در نزدیکی قرار داده می شود: به جای سرم، یک قطره محلول کلرید سدیم اعمال می شود. هنگامی که یک رسوب لخته در یک قطره حاوی سرم و میکروب ظاهر می شود، الف واکنش آگلوتیناسیون گستردهدر لوله های آزمایش با افزایش رقت های سرم آگلوتیناسیون که 2-3 قطره از سوسپانسیون پاتوژن به آن اضافه می شود. آگلوتیناسیون با مقدار رسوب و درجه شفافیت مایع در نظر گرفته می شود. اگر آگلوتیناسیون در رقت نزدیک به تیتر سرم تشخیصی مشاهده شود، واکنش مثبت در نظر گرفته می شود. در عین حال، کنترل ها در نظر گرفته می شوند: سرم رقیق شده با محلول کلرید سدیم ایزوتونیک باید شفاف باشد، سوسپانسیون میکروب ها در همان محلول باید به طور یکنواخت کدر و بدون رسوب باشد.

باکتری‌های مرتبط مختلف را می‌توان توسط یک سرم آگلوتینه‌کننده تشخیصی آگلوتینه کرد که شناسایی آنها را دشوار می‌کند. بنابراین استفاده می کنند سرم های آگلوتینه کننده جذب شده،که آنتی بادی های واکنش متقاطع با جذب به باکتری های مرتبط از آن حذف شده اند. چنین سرم هایی آنتی بادی هایی را حفظ می کنند که فقط مختص یک باکتری خاص هستند. تولید سرم های آگلوتینه کننده تشخیصی تک گیرنده ویژه توسط A. Castellani (1902) پیشنهاد شد.

واکنش هماگلوتیناسیون غیر مستقیم (غیرفعال).(RNGA، RPGA) مبتنی بر استفاده از گلبول های قرمز با آنتی ژن ها یا آنتی بادی های جذب شده در سطح آنها است که برهمکنش آنها با آنتی بادی ها یا آنتی ژن های مربوط به سرم خون باعث می شود گلبول های قرمز به هم بچسبند و تا انتهای آزمایش بیفتند. لوله یا سلول Vبه شکل رسوب صدفی (شکل 13.2). در صورت واکنش منفی، گلبول های قرمز خون به شکل "دکمه" ته نشین می شوند. به طور معمول، آنتی‌بادی‌ها در RNGA با استفاده از یک تشخیصی آنتی ژنی گلبول قرمز، که گلبول‌های قرمز با جذب هستند، شناسایی می‌شوند. برآنها با آنتی ژن گاهی اوقات از روش های تشخیصی ضد گلبول قرمز A استفاده می شود که روی آن آنتی بادی ها جذب می شوند. به عنوان مثال، سم بوتولینوم را می توان با افزودن سم بوتولینوم آنتی بادی گلبول قرمز به آن تشخیص داد (این واکنش نامیده می شود. واکنش هماگلوتیناسیون غیرمستقیم معکوس- RONG). RNGA برای تشخیص بیماری های عفونی و تعیین هورمون گنادوتروپیک استفاده می شود Vادرار هنگام برقراری بارداری، برای شناسایی حساسیت به داروها، هورمون ها و در برخی موارد دیگر.

واکنش کامبز

(تست کومبز) - روشی برای تعیین آنتی بادی های Rh در سطح گلبول های قرمز که باعث رسوب گلوبولین ها در سرم خون می شود. این آزمایش برای تشخیص کم خونی همولیتیک در نوزادان مبتلا به ناسازگاری Rh که تخریب گلبول های قرمز خون دارند استفاده می شود.

واکنش کواگلوتیناسیون. سلول های پاتوژن با استفاده از استافیلوکوک های از قبل درمان شده با سرم تشخیصی ایمنی تعیین می شوند. استافیلوکوک های حاوی پروتئین آ،با داشتن میل ترکیبی برای قطعه Fc ایمونوگلوبولین ها، به طور غیر اختصاصی آنتی بادی های ضد میکروبی را جذب می کنند، که سپس با مراکز فعال با میکروب های مربوطه جدا شده از بیماران تعامل می کنند. در نتیجه انعقاد، پوسته های متشکل از استافیلوکوک ها، آنتی بادی های سرم تشخیصی و میکروب شناسایی شده تشکیل می شوند.

واکنش مهار هماگلوتیناسیون(RTGA) بر اساس محاصره، سرکوب آنتی ژن های ویروسی توسط آنتی بادی های سرم ایمنی است که در نتیجه ویروس ها توانایی خود را برای آگلوتیناسیون گلبول های قرمز از دست می دهند (شکل 13.3). RTGA برای تشخیص بسیاری از بیماری های ویروسی استفاده می شود که عوامل ایجاد کننده آنها (ویروس های آنفولانزا، سرخک، سرخجه، آنسفالیت منتقله از کنه و غیره) می توانند گلبول های قرمز حیوانات مختلف را آگلوتینه کنند.

1. گروهی از پزشکان سازمان جهانی بهداشت برای شناسایی بیماران مبتلا به فلج اطفال و کمک به انجام واکسیناسیون جهانی علیه فلج اطفال وارد هند شدند. در یکی از روستاهای مورد بررسی، پسری 6 ساله از خانواده پرجمعیتی که 5 روز پیش مریض شده بود، نزد پزشکان آورده شد. درجه حرارت ناگهان بالا رفت، سردرد شدید، استفراغ مکرر، درد در بازوها و پاها وجود داشت. در معاینه: درجه حرارت بالا، ضعف شدید، علائم مننژ، کاهش تون عضلانی پای راست، تضعیف شدید رفلکس‌های تاندون، افتادگی پا. در حین سوراخ شدن کانال نخاعی، مایع مغزی نخاعی تحت فشار افزایش یافته به بیرون جاری شد، تعداد لنفوسیت ها افزایش یافت و هیچ باکتری ای جدا نشد. تشخیص اولیه "شکل فلجی فلج اطفال" انجام شد. چطور ممکن است پسر مبتلا شود؟ پیشگیری فعال خاص از فلج اطفال چگونه انجام می شود؟ آیا خطر ابتلا به سایر فرزندان این خانواده وجود دارد، چه باید کرد؟

پاسخ:این پسر ممکن است از طریق مدفوع-دهانی از طریق غذا، آب و همچنین از طریق قطرات معلق در هوا آلوده شده باشد. اقدام اصلی برای پیشگیری از فلج اطفال، ایمن سازی با واکسن کشت زنده از 3 سروتیپ سویه های سابین است که در روسیه از آن استفاده می شود. واکسن فلج اطفالبرای تجویز خوراکی تولید شده توسط موسسه فلج اطفال و آنسفالیت ویروسی به نام. M.P. چوماکوا. این واکسن یک آماده سازی سه ظرفیتی از سویه های ضعیف شده سابین ویروس فلج اطفال نوع 1، 2، 3 است که از کشت اولیه سلول های کلیه میمون سبز آفریقایی به دست می آید. . کودکان 3 ماهه تا 6 ساله تحت واکسیناسیون معمول فلج اطفال قرار می گیرند. واکسیناسیون با واکسن خوراکی فلج اطفال با 2 یا 4 قطره واکسن خوراکی سه بار در 3، 4، 5 و 6 ماهگی با سه بار واکسیناسیون مجدد در 18، 20 ماهگی و 14 سالگی انجام می شود. پسر بیمار باید در بیمارستان بستری شود و سایر فرزندان این خانواده باید با واکسن زنده فلج اطفال واکسینه شوند.

1. ترکیب و استفاده از واکسن آنفلوانزای مایع سه ظرفیتی پلیمر زیرواحد (آنفلوانزا)

این یک واکسن مولکولی است. ترکیب: Ag سطحی ویروس آنفلوانزا از سه زیرگروه (A/H1N1، A/H3N2، B). کاربرد: برای پیشگیری از آنفولانزا

کارت امتحانی شماره 23

واکنش های آگلوتیناسیونبر اساس تعامل یک معرف (آنتی بادی) با آنتی ژن های واقع در سطح سلول ها یا ذرات خارجی است. در نتیجه سنگدانه های بزرگی تشکیل می شود که رسوب می کنند و حتی با چشم غیر مسلح نیز قابل مشاهده هستند. به این ترتیب گروه خونی با توجه به سیستم ABO، وجود فاکتور Rh در آن و غیره تعیین می‌شود. این روش تشخیصی حساس‌تری نسبت به واکنش‌های بارشی است، زیرا حجم رسوب (آگلوتینه) بیش از حجم است. رسوب می کند.

هماگلوتیناسیون مستقیم

واکنش هماگلوتیناسیون مستقیم (DHR) برای شناسایی آنتی ژن های سطحی میکروارگانیسم ها و گلبول های قرمز و همچنین آنتی بادی های موجود در آنها استفاده می شود.
ماده آزمایش (خون) به سرم های استاندارد حاوی آنتی بادی اضافه می شود. سرعت واکنش آگلوتیناسیون مستقیم با مقدار ماده مورد آزمایش، مقدار و غلظت سرم و دمای محیط مرتبط است.

هماگلوتیناسیون غیر مستقیم

واکنش هماگلوتیناسیون غیرمستقیم برای تشخیص آنتی بادی در خون بیمار با استفاده از تشخیص گلبول قرمز انجام می شود. معرف شامل گلبول های قرمز خون است که در سطح آن آنتی ژن (پروتئین های میکروارگانیسم ها، سموم، آلرژن ها و غیره) وجود دارد.
سرم خون بیمار با محلول کلرید سدیم 9/0 درصد رقیق می شود، سپس گلبول های قرمز تشخیصی اضافه می شود و نتیجه بررسی می شود. این روش تشخیصی بسیار حساس، آنتی ژن ها را حتی در غلظت های کوچک تشخیص می دهد.

واکنش آگلوتیناسیون میکروبی مستقیم (RA). در این واکنش، آنتی بادی ها (آگلوتینین ها) به طور مستقیم آنتی ژن های بدن (آگلوتانوژن ها) را آگلوتینه می کنند. آنها معمولاً با سوسپانسیون میکروارگانیسم های غیرفعال (واکنش آگلوتیناسیون میکروبی) نشان داده می شوند. بر اساس ماهیت آگلوتینات تشکیل شده، آگلوتیناسیون دانه ای و لخته ای متمایز می شود. آگلوتیناسیون دانه ای زمانی اتفاق می افتد که میکروب های حاوی آنتی ژن O به هم بچسبند. باکتری های دارای تاژک (آنتی ژن H) آگلوتینه می شوند و پوسته های بزرگی را تشکیل می دهند.

برای تعیین نوع میکروارگانیسم ها از سرم های آگلوتینه کننده تشخیصی استاندارد استفاده می شود. آنها با ایمن سازی بیش از حد حیوانات آزمایشگاهی با سوسپانسیون باکتری به دست می آیند. تیتر چنین سرمی بالاترین رقت آن است که در آن آگلوتیناسیون واضح آنتی ژن مربوطه مشاهده می شود. با این حال، به دلیل پیچیدگی ساختار آنتی ژنی باکتری‌ها، سرم‌های آگلوتینه‌شونده حاوی آنتی‌بادی‌هایی هستند که نه تنها برای گونه‌های خاص، بلکه برای آنتی‌ژن‌های گروهی نیز وجود دارد و می‌تواند باعث آگلوتیناسیون گروهی با گونه‌های مرتبط با باکتری‌ها شود. تیتر آنتی بادی به آنتی ژن های گونه خاص در سرم همیشه بالاتر از آنتی ژن های گروه است. برای حذف آنتی بادی های اختصاصی گروه، میکروارگانیسم های حاوی آنتی ژن های گروهی به ترتیب به سرم اضافه می شوند (روش کاستلانی). این روش سرم های جذب شده ای تولید می کند که حاوی آنتی بادی برای نوع خاصی از میکروب است.

روش های واکنش آگلوتیناسیونشایع ترین آنها RA لایه ای (تقریبی) و منبسط شده هستند.

صفحه RA روی شیشه قرار می گیرد. در این واکنش از سرم های کمی رقیق شده یا رقیق نشده استفاده می شود. به عنوان یک روش تسریع شده برای تشخیص آنتی بادی ها یا شناسایی میکروارگانیسم ها استفاده می شود. یک قطره سرم روی لیوان ریخته می شود که در آن یک کشت باکتریایی ناشناخته با یک حلقه وارد می شود، مخلوط می شود و پس از 2-3 دقیقه ظاهر آگلوتیناسیون ریز دانه یا پوسته پوسته مشاهده می شود. برای کنترل از یک قطره محلول نمک استفاده می شود که پس از افزودن باکتری کدورت در آن مشاهده می شود. هنگام استفاده از سرم های غیرجذب، واکنش روی شیشه فقط نشان دهنده است.

RA گسترش یافته در لوله های آزمایش یا چاه های صفحه انجام می شود. در این حالت، سرم تشخیصی تا تیتر رقیق شده و مقادیر مساوی آنتی ژن اضافه می شود. اگر نتیجه مثبت باشد، یک رسوب سست به شکل "چتر" در پایین لوله آزمایش تشکیل می شود و اگر نتیجه منفی باشد، رسوبی به شکل "دکمه" تشکیل می شود. از آنجایی که تیتر آنتی بادی های خاص گروه در سرم بسیار کمتر از تیتر آنتی بادی های خاص گونه است، واکنش های گروهی تنها در رقت های کوچک سرم مشاهده می شود. اگر آگلوتیناسیون قبل از تیتر یا تا نصف تیتر سرم اتفاق بیفتد، مخصوص گونه است.

برای تعیین آنتی بادی در سرم بیمار (تشخیص سرولوژیکی)، از یک تشخیص میکروبی استاندارد استفاده می شود که حاوی سوسپانسیونی از میکروب های شناخته شده یا آنتی ژن های آنها است. در این صورت امکان نصب RA پلیت و مستقر نیز وجود دارد.

واکنش آگلوتیناسیون مستقیم سلولی برای تعیین گروه‌های خونی، از سرم‌های خون اهداکننده استاندارد حاوی آنتی‌بادی‌های شناخته‌شده ضد A یا ضد B استفاده می‌شود. واکنش ها روی شیشه یا صفحات انجام می شود. اگر گلبول های قرمز دارای آنتی ژن A (گروه دوم خون)، B (گروه سوم خون) یا هر دو (گروه خونی 4) باشند، سرم های مربوطه گلبول های قرمز را آگلوتینه می کنند. آزمایش سازگاری خون نیز استفاده می شود، که در آن قطرات خون اهدا کننده و گیرنده با هم مخلوط شده و آگلوتیناسیون ارزیابی می شود.

کلینیک ها از واکنش آگلوتیناسیون لکوسیت ها، پلاکت ها و سایر سلول ها برای شناسایی اتوآنتی بادی ها و همچنین تعیین آنتی ژن های روی این سلول ها استفاده می کنند.

واکنش هماگلوتیناسیون بر اساس پدیده چسبندگی گلبول های قرمز است که تحت تأثیر عوامل مختلف رخ می دهد. هماگلوتیناسیون مستقیم و غیر مستقیم وجود دارد.
در واکنش هماگلوتیناسیون مستقیم، گلبول‌های قرمز زمانی که آنتی‌ژن‌های خاصی مانند ویروس‌ها روی آن‌ها جذب می‌شوند، به هم می‌چسبند.

واکنش هماگلوتیناسیون غیر مستقیم (غیرفعال) (IRHA، RPHA)مبتنی بر استفاده از گلبول های قرمز (یا لاتکس) با آنتی ژن ها یا آنتی بادی های جذب شده بر روی سطح آنها است که برهمکنش آنها با آنتی بادی ها یا آنتی ژن های مربوطه سرم خون بیماران باعث می شود گلبول های قرمز به هم بچسبند و به پایین بروند. لوله آزمایش یا سلول به شکل رسوب صدفی.

اجزاء.برای انجام RNGA می توان از گلبول های قرمز گوسفند، اسب، خرگوش، جوجه، موش، انسان و دیگران استفاده کرد که با درمان آنها با فرمالدئید یا گلوتارآلدئید برای استفاده در آینده ذخیره می شوند. ظرفیت جذب گلبول های قرمز هنگامی که آنها با محلول های تانن یا کلرید کروم درمان می شوند افزایش می یابد.

آنتی ژن های موجود در RNGA می توانند آنتی ژن های پلی ساکارید میکروارگانیسم ها، عصاره واکسن های باکتریایی، آنتی ژن های ویروس ها و ریکتزیا و همچنین سایر مواد باشند.

گلبول های قرمز حساس شده در اثر فشار خون بالا، گلبول های قرمز تشخیصی نامیده می شوند. برای تهیه اریتروسیت تشخیصی، گلبول های قرمز گوسفند که دارای فعالیت جذب بالایی هستند، بیشتر استفاده می شود.

کاربرد. RNGA برای تشخیص بیماری‌های عفونی، تعیین هورمون گنادوتروپیک در ادرار هنگام برقراری بارداری، برای شناسایی حساسیت به داروها، هورمون‌ها و در برخی موارد دیگر استفاده می‌شود.

در مطالعات سرولوژیکی، هنگامی که ویروس جدا شده از بیمار با سرم ایمنی خاص خنثی می شود و سپس با گلبول های قرمز ترکیب می شود، از واکنش مستقیم مهار هماگلوتیناسیون استفاده می شود. عدم وجود هماگلوتیناسیون نشان دهنده قوام ویروس و سرم ایمنی مورد استفاده است.

واکنش هماگلوتیناسیون غیرمستقیم (هماگلوتیناسیون غیرفعال) در مواردی مشاهده می‌شود که سرم ایمنی یا سرم بیمار حاوی آنتی‌بادی‌های مناسب به گلبول‌های قرمز خونی که قبلاً با آنتی‌ژن‌های مختلف درمان (حساس‌شده) شده‌اند اضافه می‌شود. چسباندن خاص گلبول های قرمز، هماگلوتیناسیون غیرفعال آنها رخ می دهد.

واکنش هماگلوتیناسیون غیر مستقیم یا غیرفعال از نظر حساسیت و ویژگی نسبت به سایر روش های سرولوژیکی برتر است و در تشخیص عفونت های ناشی از باکتری ها، ریکتزیا و تک یاخته ها استفاده می شود.

روش انجام واکنش هماگلوتیناسیون غیرمستقیم شامل چندین مرحله است.

· ابتدا گلبول های قرمز با محلول ایزوتونیک کلرید سدیم شسته می شوند، سپس در صورت لزوم (هنگام استفاده از آنتی ژن های پروتئینی) با محلول تانن 1:20000 درمان شده و با آنتی ژن های محلول حساس می شوند.

· پس از شستشو با محلول ایزوتونیک سدیم کلرید بافر، آنتی ژن گلبول قرمز آماده استفاده است.

· سرم های مورد آزمایش با محلول ایزوتونیک کلرید سدیم در لوله های آزمایش یا صفحات پلاستیکی مخصوص با چاهک رقیق می شوند، سپس به هر رقت سرم یک تشخیص گلبول قرمز اضافه می شود.

· نتایج واکنش هماگلوتیناسیون غیرمستقیم با توجه به ماهیت رسوب گلبول قرمز تشکیل شده در انتهای لوله آزمایش در نظر گرفته می شود.

· نتیجه واکنشی که در آن گلبول های قرمز خون به طور مساوی تمام انتهای لوله آزمایش را می پوشانند مثبت در نظر گرفته می شود. در یک واکنش منفی، گلبول های قرمز خون به شکل یک دیسک کوچک یا "دکمه" در مرکز پایین لوله آزمایش قرار دارند.

· پس از 2 ساعت انکوباسیون در دمای 37 درجه سانتیگراد، نتایج در نظر گرفته می شود و ظاهر رسوب گلبول های قرمز خون (بدون تکان دادن) ارزیابی می شود: با یک واکنش منفی، یک رسوب به شکل یک دیسک فشرده یا حلقه ظاهر می شود. کف چاه؛ با یک واکنش مثبت، یک رسوب توری مشخص از گلبول های قرمز ظاهر می شود، یک فیلم نازک با لبه های ناهموار

واکنش کواگلوتیناسیون

این واکنش بر اساس ویژگی منحصر به فرد استافیلوکوکوس اورئوس است که حاوی پروتئین A در دیواره سلولی آن است تا به قطعات Fc IgG و IgM متصل شود.

در این حالت، مراکز فعال آنتی بادی ها آزاد می مانند و می توانند با عوامل تعیین کننده خاص آنتی ژن ها تعامل داشته باشند. یک قطره از یک سوسپانسیون 2٪ از استافیلوکوک ها، حساس شده با آنتی بادی های مناسب، به یک لام شیشه ای اعمال می شود و یک قطره از یک سوسپانسیون از باکتری های مورد مطالعه اضافه می شود. اگر آنتی ژن با آنتی بادی ها مطابقت داشته باشد، آگلوتیناسیون واضح استافیلوکوک های بارگیری شده با آنتی بادی ها در عرض 30-60 ثانیه اتفاق می افتد.

الزامات برای سرم ایمنی مورد استفاده برای حساس کردن سلول‌های استافیلوکوک و انجام فرآیند حساس‌سازی. برای به دست آوردن یک معرف منعقد کننده، سوسپانسیون استافیلوکوک باید با سرم ایمنی علیه آنتی ژن مورد نظر درمان شود. سرم باید از حیوانی گرفته شود که IgG آن میل ترکیبی با پروتئین A دارد. ایمونوگلوبولین های انسان، خوک، سگ و خوکچه هندی بیشترین میل را به آن دارند، کمترین - خر و خرگوش، و IgG گوسفند، اسب، موش ها و موش ها با آن بسیار ضعیف تعامل دارند.

علاوه بر ویژگی دقیق آنتی ژن مورد نظر، سرم مورد استفاده در RCOA نباید حاوی آنتی بادی برای استافیلوکوک باشد تا از آگلوتیناسیون معرف استافیلوکوک به دلیل اثر خاص آنتی ژن و آنتی بادی ها جلوگیری شود که باید در پروتئین IgG حذف شود. یک سیستم. کنترل با مخلوط کردن یک قطره سرم و یک سوسپانسیون 10 درصدی معرف استافیلوکوک روی یک لیوان انجام می شود. اگر بعد از 3...5 دقیقه هیچ تکه آگلوتیناتی تشکیل نشد، سرم برای واکنش مناسب در نظر گرفته می شود.

اگر نمونه‌های سرم موجود به این آنتی‌ژن استافیلوکوک را آگلوتینه کنند، می‌توان آن‌ها را با سوسپانسیون سلول‌های استافیلوکوکی که پروتئین A ندارند (مثلاً سویه‌های Wood-46) جذب کرد. به این ترتیب آنتی بادی هایی که به دلیل قطعات Fab با استافیلوکوک واکنش می دهند حذف می شوند.

بنابراین، سرم مورد استفاده برای تهیه معرف منعقد کننده باید شرایط زیر را برآورده کند:

• به دست آمده از یک حیوان مولد که IgG آن میل ترکیبی با پروتئین A دارد.
• باید ویژگی آنتی ژن مورد نظر را داشته باشد.
• عاری از آنتی بادی های ضد استافیلوکوک باشد.

· تهیه تشخیص. معرف 10٪ استافیلوکوک تهیه شده با حجم مساوی از سرم ایمنی در رقت کاری بهینه از قبل تعیین شده ترکیب می شود. مخلوط به مدت 60 دقیقه در دمای 40...42 درجه سانتیگراد در دستگاه شات ژل با 90 ارتعاش در دقیقه تکان داده می شود. سپس، پس از 15 دقیقه، دو بار با PBS شسته شده، مجدداً به یک سوسپانسیون 2٪ تعلیق شده و با مرتیولات سدیم (1: 10000) نگهداری می شود.

11621 0

واکنش های سرولوژیکی مطابق با پدیده های همراه با تشکیل کمپلکس آنتی ژن-آنتی بادی در طول برهمکنش اجزایی با خواص مختلف تعیین می شود. واکنش های آگلوتیناسیون، رسوب و لیز وجود دارد.

واکنش آگلوتیناسیون (RA)

واکنش آگلوتیناسیون (RA) مبتنی بر استفاده از یک آنتی ژن کورپوسکولار (تعلیق باکتری ها، گلبول های قرمز حساس، ذرات لاتکس و غیره) است که با آنتی بادی های خاص برهمکنش می کند، در نتیجه کمپلکس آنتی ژن-آنتی بادی ایجاد شده رسوب می کند. این واکنش به طور گسترده در عمل آزمایشگاهی برای تشخیص سرولوژیک عفونت های باکتریایی و برای شناسایی میکروارگانیسم های جدا شده استفاده می شود.

RA برای تشخیص بسیاری از بیماری های عفونی استفاده می شود: بروسلوز (واکنش رایت، هدلسون)، تولارمی، لپتوسپیروز (RAL - لپتوسپیرا واکنش آگلوتیناسیون و لیز)، لیستریوز، تیفوس (واکنش آگلوتیناسیون RAR - Rickettsia)، شیگلوز، یرسینیوز، پسودوتوبرکلوزیس، و غیره.

واکنش آگلوتیناسیون غیر مستقیم یا غیرفعال (RIGA یا RPGA).

برای مرحله این واکنش از گلبول های قرمز حیوانات (گوسفند، میمون، خوکچه هندی، برخی از پرندگان) حساس به آنتی بادی یا آنتی ژن استفاده می شود که با انکوباسیون سوسپانسیون گلبول های قرمز و محلول آنتی ژن یا سرم ایمنی حاصل می شود.

تشخیص به دست آمده بر اساس گلبول های قرمز حساس با آنتی ژن نامیده می شود تشخیص اریتروسیت آنتی ژن. آنها برای تعیین آنتی بادی ها در رقت های سریال سرم های خون، به عنوان مثال، گلبول های قرمز shigella diagnosticums، گلبول های قرمز سالمونلا O-diagnosticums در نظر گرفته شده است.

بر این اساس، تشخیص های مبتنی بر گلبول های قرمز حساس به ایمونوگلوبولین های خاص نامیده می شود آنتی بادی ها(ایمونوگلوبولین) تشخیصیو آنها برای شناسایی آنتی ژن ها در مواد مختلف استفاده می کنند، به عنوان مثال، ایمونوگلوبولین گلبول قرمز دیفتری تشخیصی برای RIGA، که برای تشخیص اگزوتوکسین دیفتری کورینه باکتری ها در یک محیط غذایی مایع زمانی که موادی از بینی و اوروفارنکس به آن تلقیح می شود، استفاده می شود.

واکنش هماگلوتیناسیون برای تشخیص هر دو عفونت باکتریایی (تب حصبه، تب پاراتیفوئید، اسهال خونی، بروسلوز، طاعون، وبا و غیره) و ویروسی (آنفولانزا، عفونت های آدنوویروسی، سرخک و غیره) استفاده می شود. از نظر حساسیت و ویژگی، RIGA برتر از RA است.

واکنش مهار هماگلوتیناسیون (HAI)

واکنش مهار هماگلوتیناسیون (HAI) برای تیتر کردن آنتی‌بادی‌های ضد ویروسی در سرم خون و همچنین برای تعیین نوع کشت‌های ویروسی جدا شده استفاده می‌شود. RTGA می تواند برای تشخیص آن دسته از عفونت های ویروسی که پاتوژن های آن خاصیت هماگلوتینه کنندگی دارند استفاده شود.

اصل روش این است که سرم حاوی آنتی بادی برای نوع خاصی از ویروس، فعالیت هماگلوتیناسیون آن را سرکوب می کند و گلبول های قرمز خون غیر آگلوتینه باقی می مانند.

واکنش مهاری (تاخیر) هماگلوتیناسیون غیرفعال (RPHA).

سه جزء در RTPGA دخیل هستند: سرم ایمنی، آنتی ژن (مواد آزمایش) و گلبول های قرمز حساس.

اگر ماده آزمایش حاوی آنتی ژنی باشد که به طور خاص با آنتی بادی های سرم استاندارد ایمنی واکنش نشان می دهد، آنها را متصل می کند و با افزودن بعدی گلبول های قرمز حساس شده با آنتی ژن همولوگ به سرم، هماگلوتیناسیون رخ نمی دهد.

RTPHA برای تشخیص آنتی ژن های میکروبی، برای تعیین کمی آنها و همچنین برای کنترل ویژگی RTPGA استفاده می شود.

واکنش آگلوتیناسیون لاتکس (RLA)

ذرات لاتکس به عنوان حامل آنتی بادی ها (ایمونوگلوبولین ها) استفاده می شود. RLA یک روش اکسپرس برای تشخیص بیماری های عفونی با در نظر گرفتن زمان مورد نیاز (تا 10 دقیقه) و توانایی تشخیص آنتی ژن در حجم کمی از مواد آزمایشی است.

RLA برای نشان دادن آنتی ژن های استرپتوکوک پنومونیه، هموفیلوس آنفلوآنزا نوع b، نایسریا مننژیتیدیس در مایع مغزی نخاعی، برای تشخیص استرپتوکوک های گروه A در سواب گلو، برای تشخیص سالمونلوز، یرسینیوز و سایر بیماری ها استفاده می شود. حساسیت روش 1-10 ng/ml یا 103-106 سلول باکتری در 1 میکرولیتر است.

واکنش انعقادی (CoA)

واکنش انعقادی (CoA) بر اساس توانایی پروتئین A استافیلوکوک ها برای اتصال ایمونوگلوبولین های خاص است. RCA - روشی برای تشخیص سریع - برای شناسایی آنتی ژن های پایدار در برابر حرارت محلول در ترشحات انسانی و در ترکیب کمپلکس های ایمنی در گردش (CIC) خدمت می کند. تشخیص آنتی ژن های خاص در ترکیب CEC مستلزم رسوب اولیه آنها از سرم خون است.

واکنش بارش

در واکنش رسوبی (RP)، در نتیجه برهمکنش آنتی بادی ها با آنتی ژن های محلول بسیار پراکنده (پروتئین ها، پلی ساکاریدها)، مجتمع هایی با مشارکت مکمل - رسوبات تشکیل می شوند. این یک تست حساس است که برای شناسایی و شناسایی انواع آنتی ژن ها و آنتی بادی ها استفاده می شود. ساده ترین مثال RP با کیفیت بالا، تشکیل یک نوار رسوبی مات در یک لوله آزمایش در مرز لایه بندی آنتی ژن روی سرم ایمنی است - واکنش رسوب حلقه ای. انواع RP در ژل های نیمه مایع آگار یا آگارز به طور گسترده ای مورد استفاده قرار می گیرد (روش ایمونودیفیوژن مضاعف، روش ایمونودیفیوژن شعاعی، ایمونوالکتروفورز).

واکنش تثبیت کمپلمان (CFR)

واکنش تثبیت کمپلمان (CFR) بر اساس پدیده همولیز با مشارکت مکمل است. قادر به تشخیص فقط آنتی بادی های تثبیت کننده مکمل است.

RSC به طور گسترده ای برای تشخیص بسیاری از عفونت های باکتریایی و ویروسی، عفونت های ریکتزیال، کلامیدیا، مونونوکلئوز عفونی، عفونت های تک یاخته ای و کرمی ها استفاده می شود. RSC یک واکنش سرولوژیکی پیچیده است که در آن دو سیستم درگیر است: آزمایش (سرم خون)، که توسط آنتی ژن-آنتی بادی و سیستم مکمل نشان داده می شود، و همولیتیک (گلبول های قرمز گوسفند + سرم همولیتیک). سرم همولیتیک سرم خون خرگوش غیرفعال شده با حرارت است که با گلبول های قرمز گوسفند ایمن شده است. حاوی آنتی بادی علیه گلبول های قرمز گوسفند است.

اگر سرم آزمایش حاوی آنتی بادی های همولوگ با آنتی ژن باشد، نتیجه RSC مثبت - عدم وجود همولیز - مشاهده می شود. در این حالت، کمپلکس آنتی ژن-آنتی بادی حاصل به کمپلمان متصل می شود و در صورت عدم وجود مکمل آزاد، افزودن سیستم همولیتیک با همولیز همراه نیست. اگر آنتی بادی متناظر با آنتی ژن در سرم وجود نداشته باشد، تشکیل کمپلکس آنتی ژن-آنتی بادی رخ نمی دهد، مکمل آزاد می ماند و سرم باعث همولیز گلبول های قرمز می شود، به عنوان مثال. وجود همولیز نتیجه منفی واکنش است.

یوشچوک N.D., Vengerov Yu.Ya.