시험물질에 면역혈청을 첨가하여 시험물질 내 병원체 항원을 검출하는 반응입니다. 상동항원이 존재하는 경우 항체는 결합하므로 항원에 의해 감작된 적혈구를 첨가한 후에는 응집이 일어나지 않으며 이는 양성 결과로 평가됩니다. 반응을 보다 민감하게 만들기 위해 특정 면역 혈청을 시험 물질에 최소량(2 혈구 응집 단위)으로 첨가합니다. 면역 혈청 역가는 먼저 RNGA를 사용하여 결정됩니다. 하나의 적혈구응집 단위는 적혈구가 서로 달라붙게 만드는 혈청의 최대 희석액입니다.

방법론. 1% 정상 토끼 혈청 용액 0.025ml를 폴리스티렌 플레이트 또는 응집 튜브의 웰에 첨가하고 시험 물질을 연속 2배 희석합니다. 그런 다음 0.025 ml의 면역 혈청을 모든 웰에 첨가하고 플레이트를 흔들어 37°C의 온도에서 30분 동안 또는 실온에서 1시간 동안 방치합니다. 다음으로 모든 웰에 항원 진단용 0.025ml를 첨가하고 흔들어서 2시간 동안 방치한 후 결과를 고려합니다.

이 반응을 수행할 때 특정 항원, 면역 혈청(2, 1, 0.5 혈구응집 단위) 및 감작된 적혈구 현탁액으로 구성된 면역 혈청 특이성 대조군이 RNHA 대조군에 추가됩니다.

RTNGA는 또한 특정 항체(완전 및 차단)를 검출하는 데 사용되며, 이에 대해 일정량의 항원이 시험 혈청에 추가됩니다. 항체가 포함되어 있으면 항원에 의해 결합되므로 항체에 의해 감작된 적혈구를 첨가한 후(RTNGA의 2단계) 적혈구가 서로 달라붙지 않습니다.

최소량의 항원(2회 중화 용량)을 사용하므로 반응이 매우 민감합니다. 항원 제제의 중화 투여 횟수는 RNGA를 사용하여 결정하고, 정상 토끼 혈청의 1% 용액에서 항원을 연속 2배 희석하고 항체 적혈구 진단을 웰에 첨가합니다. 항원의 중화 용량은 감작된 적혈구의 완전한 접착을 제공하는 최대 희석으로 간주됩니다.

반응 전, 시험 혈청을 1:5-1:10으로 희석하고 56°C 온도에서 30분간 불활성화합니다. 헤마글루티닌을 흡착하기 위해 포르말린화되거나 새로 세척된 양 적혈구의 50% 현탁액을 희석된 혈청 1ml당 현탁액 0.1ml의 비율로 혈청에 첨가합니다. 혼합물을 흔들어 37°C에서 30분 동안 배양하거나 실온에서 1시간 동안 배양한 후 원심분리에 의해 적혈구가 침전됩니다. 적혈구를 침전시키기 위해 다음날까지 혈청을 냉장고에 넣어 둘 수 있습니다.

실험을 수행할 때 시험물질을 마이크로타이터 패널의 웰에 있는 0.025ml의 1% 정상 토끼 혈청 용액에 희석합니다. 그런 다음 0.025ml 용량의 2중화 용량의 항원을 각 웰에 첨가합니다. 플레이트를 흔들고 37℃에서 30분 동안 또는 실온에서 1시간 동안 방치한다. 그런 다음 0.025ml의 항체 적혈구 진단을 모든 웰에 첨가합니다. 플레이트를 흔들어 실온에서 1.5~2시간 동안 배양한 후 반응 결과를 고려합니다. 회계는 다음날에도 가능합니다. 시험 혈청의 역가는 적혈구가 서로 달라붙지 않는 최대 희석도로 간주됩니다.

실험에는 다음 유형의 제어가 수반됩니다.

1) 감작된 적혈구(적혈구 + 정상 토끼 혈청 1% 용액)의 안정성;

2) 각 시험 혈청(가장 낮은 희석률의 시험 혈청 + 포르말린화된 적혈구)에서 헤마글루티닌 고갈의 완전성;

3) 항원의 최소 중화 용량을 결정하는 정확성(항원 + 항체 적혈구 진단의 2, 1 및 0.5 중화 용량).

역간접 적혈구응집(롱가) 반응은 시험 물질에서 박테리아 및 바이러스 항원을 표시하는 데 사용되며, 다양한 감염을 신속하게 진단하는 데에도 사용됩니다.

RNGA와 달리 이 반응에서 적혈구는 항원에 의해 감작되는 것이 아니라 항원이 첨가될 때 응집이 일어나는 항체에 의해 감작됩니다.

적혈구는 포름알데히드 또는 글루타르알데히드로 미리 고정된 다음 감마 글로불린과 결합합니다. 감마 글로불린은 면역 혈청에서 분리되고 다른 혈청 단백질에서 정제됩니다. 적혈구 표면에 감마 글로불린이 결합하는 것은 염화 크롬의 도움으로 발생합니다. 이렇게 하려면 면역 혈청에서 분리된 면역글로불린 1부피, 포르말린화된 적혈구 50% 현탁액 1부피, 0.1~0.2% 염화 크롬 용액 1부피를 증류수 8부피에 추가합니다. 혼합물을 실온에서 10-15분 동안 방치한 후 적혈구를 수동 적혈구응집 반응에서처럼 처리합니다.

진단 항체의 특이성은 동종 항원에 의한 수동 적혈구응집 억제 반응에서 확인됩니다. 반응은 동종 항원에 의해 최소 16회 억제되어야 하며 이종 항원에 의해 억제되지 않아야 합니다. 자발적인 적혈구 응집이 없는지 확인하기 위해 대조군이 사용됩니다.

이 반응을 사용하여 죽은 사람과 동물의 장기, 예를 들어 뇌, 비장, 폐 간에서 채취한 물질에 병원균이 표시됩니다. 등장성 염화나트륨 용액에 이들 기관의 10% 현탁액을 준비하고 10,000rpm에서 30~60분 동안 원심분리한 후 상등액을 항원으로 사용합니다.

방법론.안정화 용액에 시험 물질(항원)을 2배 희석하여 준비합니다. 각 항원 희석액 1방울을 마이크로패널의 인접한 3개 웰에 첨가합니다(반응은 3개의 평행한 웰 행을 차지함). 첫 번째 줄의 각 웰에 안정화 용액 1방울을 추가하고, 두 번째 줄의 웰에 1:10으로 희석한 동종 면역 혈청 1방울을 추가하고, 세 번째 줄에 이종 면역 혈청 1방울을 추가합니다. 두 번째와 세 번째 행은 반응의 특이성을 제어하는 ​​역할을 합니다. 혼합물을 실온에서 20분 동안 방치한다.

모든 웰에 감작된 적혈구(적혈구 항체 진단) 1% 현탁액 1방울을 첨가하고 플레이트를 완전히 흔듭니다. 반응 결과는 30~40분 후에 고려됩니다. 특정 항원이 있는 경우 첫 번째와 세 번째 줄(이종 혈청 포함)에서 혈구응집이 관찰되고, 항원이 동종 혈청으로 미리 중화되어 있는 두 번째 줄에서는 관찰되지 않습니다.

이 반응에는 자발적인 응집을 위해 감작된 적혈구의 조절이 수반됩니다.

역간접 적혈구응집 억제 반응(RTONGA)인간과 동물의 혈청에서 항체의 존재를 확인할 수 있습니다.

방법론. 혈청을 등장성 염화나트륨 용액으로 10배 희석하고, 65℃의 온도에서 20분간 가열하여 비특이적 억제제를 파괴한 후, 안정화 용액과 작업량의 2배 희석액으로 혈청을 제조한다. 4개의 응집 단위를 포함하는 항원. 각 혈청 희석액 1방울을 마이크로패널의 웰에 첨가하고 거기에 항원 1방울을 추가합니다. 그 희석액은 작업 용량에 해당합니다. 혼합물의 성분을 실온에서 20분간 접촉시킨 후 적혈구항체진단제 1방울을 모든 웰에 첨가하고 잘 흔들어 섞는다. 실온에서 1.5-2시간 동안 배양한 후, 적혈구응집에 대한 반응 결과를 고려합니다. 혈청 역가는 가장 높은 희석률로 4개의 응집 항원 단위로 적혈구 응집 반응을 완전히 억제합니다.

이 반응에는 a) 안정화 용액; b) 정상 항원(바이러스를 포함하지 않는 물질로부터 유래); c) 시험 혈청. 이 반응의 장점은 다양성과 이를 사용하여 다양한 항원을 검출할 수 있다는 것입니다.

적혈구응집 결과의 평가. RNGA, RONGA 및 RTONGA의 결과는 적혈구 응집 정도에 따라 고려됩니다. (++++) – 완전 응집; (+++) – 덜 완전한 응집; (++) – 부분 응집; (+) - 응집 흔적; (-) – 응집이 없습니다.

응집이 완전(++++) 또는 거의 완전(+++)인 경우 반응은 양성으로 간주되며, 진단에서는 반응의 각 구성요소가 존재하는 경우 자발적인 응집을 나타내지 않으며 특이성을 제어합니다. 항원이나 항체가 양성입니다.

간접 또는 수동 적혈구응집 반응(IPHA)

이 반응은 응집반응에 대한 민감도가 뛰어나며 세균, 리케차, 원생동물 및 기타 미생물에 의한 감염의 진단에 사용됩니다.

RPGA를 사용하면 소량의 항체를 검출할 수 있습니다.

이 반응에는 항원이나 항체에 감작된 그룹 I 혈액이 포함된 무두질된 양 적혈구 또는 인간 적혈구가 포함됩니다.

검사 혈청에서 항체가 검출되면 항원에 감작된 적혈구가 사용됩니다(적혈구 진단).

시험물질 내 다양한 ​​항원을 확인해야 하는 경우에는 면역글로불린에 감작된 적혈구를 사용하는 경우도 있다.

RPGA의 결과는 적혈구 퇴적물의 특성에 따라 고려됩니다.

적혈구가 시험관 바닥 전체(역 우산)를 고르게 덮으면 반응 결과가 양성으로 간주됩니다.

음성 반응에서는 작은 원반(버튼) 형태의 적혈구가 시험관 바닥 중앙에 위치합니다.

응집 반응(RA)

특이성, 수행 용이성 및 실증성으로 인해 응집 반응은 장티푸스 및 파라티푸스(Vidal 반응), 발진티푸스(Weigl 반응) 등 많은 감염성 질환의 진단을 위한 미생물학 실습에서 널리 보급되었습니다.

응집 반응은 전체 미생물 또는 다른 세포(응집원)와 항체(응집소)의 상호작용의 특이성을 기반으로 합니다. 이러한 상호 작용의 결과로 입자가 형성됩니다(응집).

응집 반응에는 살아 있거나 죽은 박테리아, 스피로헤타, 곰팡이, 원생동물, 리케차뿐만 아니라 적혈구 및 기타 세포가 모두 포함될 수 있습니다.

반응은 두 단계로 진행됩니다: 첫 번째(보이지 않는)-특이적, 항원과 항체의 조합, 두 번째(가시)-비특이적, 항원 접착, 즉 응집체 형성.

응집체는 2가 항체의 한 활성 중심이 항원의 결정기와 결합할 때 형성됩니다.

응집 반응은 다른 혈청학적 반응과 마찬가지로 전해질이 있을 때 발생합니다.

외부적으로 긍정적인 응집 반응의 발현은 이중적인 성격을 가지고 있습니다. 체세포 O-항원만 갖고 있는 편모형 미생물에서는 미생물 세포 자체가 직접 부착됩니다. 이 응집을 세립이라고합니다. 이는 18~22시간 이내에 발생합니다.

편모 미생물에는 체세포 O 항원과 편모 H 항원이라는 두 가지 항원이 있습니다. 세포가 편모에 의해 서로 접착되면 크고 느슨한 조각이 형성되며 이러한 응집 반응을 조립 반응이라고 합니다. 2~4시간 내에 발생합니다.

응집 반응은 환자의 혈청 내 특정 항체의 정성적, 정량적 측정 목적과 분리된 병원체의 종을 측정하기 위한 목적으로 모두 수행될 수 있습니다. 혈구응집 미생물 감염성

응집 반응은 진단 역가로 희석된 혈청으로 작업할 수 있는 확장 버전과 원칙적으로 특정 항체를 검출하거나 병원체의 종을 결정할 수 있는 표시 반응 버전 모두에서 수행될 수 있습니다. .

수동적 적혈구응집 반응)

항원 또는 항체의 존재하에 발생하는 적혈구의 응집현상을 이용하여 항원 또는 항체를 검출하고 식별하는 방법으로, 해당 특정 항원 또는 항원이 표면에 미리 흡착되어 있는 것입니다.

1. 소형 의학 백과사전. -M.: 의학 백과사전. 1991-96 2. 응급처치. -M.: 위대한 러시아 백과사전. 1994 3. 의학용어 백과사전. -M.: 소련 백과사전. - 1982년부터 1984년까지.

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- (RNHA; 수동 적혈구응집 반응의 동의어) 항원 또는 항체가 이전에 흡착되어 있던 표면에 존재하는 경우 발생하는 적혈구의 응집 현상을 기반으로 항원 또는 항체를 검출하고 식별하는 방법입니다.... .. . 대형 의학사전

- (RPHA) 간접 적혈구응집 반응 참조... 대형 의학사전

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간접 적혈구응집 반응을 참조하세요... 대형 의학사전

간접 또는 수동 적혈구응집 테스트(IRHA 또는 RPHA)는 응집 테스트보다 더 민감하고 특이적입니다. 이 반응은 두 가지 방향으로도 사용됩니다.

1) 환자의 혈청 내 항체를 검출하기 위해 탄닌 처리된 적혈구 표면에 항원을 흡착시키는 적혈구 진단법을 사용합니다. 이 반응과 관련하여 RPHA라는 용어가 더 자주 사용됩니다.

시험 혈청을 플라스틱 플레이트의 웰에 희석하고 적혈구 진단액을 첨가합니다. 긍정적인 반응에서는 구멍 벽을 따라 "레이스 우산" 형태로 얇은 막이 나타나고 부정적인 반응에서는 "버튼" 형태의 조밀한 적혈구 침전물이 나타납니다.

2) 시험물질 중의 독소 및 세균항원을 검출하기 위해 항체를 적혈구에 흡착시켜 얻는 항체적혈구진단법을 사용한다. 이 반응과 관련하여 RNGA라는 용어가 더 자주 사용됩니다. 예를 들어, 항체 진단의 도움으로 흑사병균 항원, 디프테리아 외독소 및 보툴리눔 외독소가 검출됩니다.

쿰스 테스트(압티글로불린 테스트)

이 반응은 Rh 인자에 대한 항체와 같은 불완전한 항체를 검출하는 데 사용됩니다. Rh 인자에 대한 불완전한 항체가 존재한다고 가정되는 Rh + 적혈구에 시험 혈청을 첨가합니다. 불완전한 항체는 적혈구에 부착되어 활성 센터가 하나만 있기 때문에 응집을 일으키지 않습니다. 그런 다음 인간 글로불린에 대한 항체가 포함된 항글로불린 혈청을 첨가합니다. 불완전한 항체와 결합된 항글로불린 혈청은 적혈구의 응집을 유발합니다.

침전 반응

반응의 본질은 특정 항체의 영향으로 항원이 침전되는 것입니다. 가시적인 반응을 얻으려면 전해질이 필요합니다. 침전 반응의 항원은 분자적으로 분산된 물질입니다.

고리 침전 반응좁은 침전관에 넣는다. 면역혈청을 시험관에 붓고 그 위에 시험물질을 조심스럽게 겹칩니다. 항원이 들어 있으면 두 액체의 경계에 불투명한 침전 고리가 형성됩니다.

이 반응은 법의학에서 혈액 얼룩, 정액 등의 단백질 종류를 결정하는 데 사용됩니다. 탄저병(아스콜리 반응), 수막염 및 기타 감염 진단 시 항원을 확인합니다. 위생 및 위생 연구에서 - 식품의 위조를 확인합니다. 면역촉진 혈청은 동물을 해당 항원으로 면역화하여 얻습니다. 예를 들어, 인간 단백질 침전 혈청은 토끼를 인간 단백질로 면역화하여 얻는다. 침전 혈청의 역가는 반응하는 항원의 가장 높은 희석액입니다. 혈청은 일반적으로 희석하지 않거나 1:5로 희석하여 사용됩니다.

한천겔 침전반응여러 가지 방법을 사용하여 수행됩니다. 이중면역확산반응, 방사상면역확산반응, 면역전기영동반응이 그것이다.

이중 면역확산 반응(Ouchterlony에 따르면). 녹인 한천 젤을 페트리 접시에 붓고 굳힌 후 우물을 잘라냅니다. 일부 웰에는 항원을 배치하고 다른 웰에는 면역 혈청을 배치하며, 이는 한천으로 확산되어 만나는 지점에서 흰색 줄무늬 형태의 침전물을 형성합니다.

방사형 면역확산 반응(Mancini에 따르면). 녹인 한천겔에 면역혈청을 넣고 컵에 부어줍니다. 한천이 굳은 후 웰을 잘라내고 그 안에 항원을 넣고 한천으로 확산되어 웰 주위에 고리 모양의 침전 영역을 형성합니다. 항원 농도가 높을수록 링의 직경이 커집니다. 예를 들어, 이 반응은 혈액 내 다양한 ​​클래스의 면역글로불린을 결정하는 데 사용됩니다. IgG, IgM, IgA 클래스의 면역글로불린은 이 반응에서 항원으로 작용하며 이에 대한 항체는 특정 단일 수용체 혈청에 포함되어 있습니다.

면역전기영동.단백질 항원의 전기영동은 한천겔에서 수행됩니다. 침전 혈청은 단백질의 이동 방향과 평행하게 이어지는 홈에 도입됩니다. 항원과 항체는 한천으로 확산되고 이들이 만나는 곳에 침전선이 형성됩니다.

면역 용해 반응

항원(적혈구 또는 박테리아)은 특정 항체와 결합하여 보체(C1)가 부착되는 면역 복합체를 형성하고 보체는 고전적 경로를 따라 활성화됩니다. 활성화된 보체는 적혈구(용혈) 또는 박테리아(세균 분해)를 용해합니다. 세균분해 반응은 콜레라 비브리오를 식별하는 데 사용됩니다.

용혈 반응.반응의 항원은 적혈구이고, 용혈성 혈청에는 항체(용혈소)가 포함되어 있습니다. 헤모리신은 적혈구에 부착되고 보체는 활성화되어 적혈구를 용해시킵니다. 적혈구의 탁한 현탁액은 투명하고 밝은 빨간색 액체인 "래커 혈액"으로 변합니다. 용혈반응은 보체가 있는 경우에만 일어나므로 보체 검출의 지표로 사용됩니다.

겔의 국소 용혈 반응(Erne 반응) - 용혈 반응의 변형입니다. 비장과 림프절에 있는 항체 형성 세포(AFC)의 수를 결정하는 데 사용됩니다.

녹인 한천겔을 비장세포와 적혈구 현탁액과 혼합하고 한천이 굳은 후 보체를 첨가한다. 각 용혈소 생성 세포 주위에 용혈 구역이 형성됩니다. 용혈소 생성 세포의 수는 그러한 구역의 수에 따라 결정됩니다.

적혈구나 중성 합성 물질(예: 라텍스 입자)을 사용하며 그 표면에 항원(세균, 바이러스, 조직)이나 항체가 흡착되어 있습니다. 적절한 혈청이나 항원이 첨가되면 응집이 발생합니다. 항원에 감작된 적혈구를 항원성 적혈구 진단이라고 하며 항체를 검출하고 적정하는 데 사용됩니다. 항체에 감작된 적혈구. 면역글로불린 적혈구 진단이라고 하며 항원을 식별하는 데 사용됩니다.

수동적 혈구응집 반응은 박테리아(장티푸스 및 파라티푸스, 이질, ​​브루셀라증, 흑사병, 콜레라 등), 원생동물(말라리아) 및 바이러스(인플루엔자, 아데노바이러스 감염, 바이러스성 B형 간염, 홍역, 진드기)로 인한 질병을 진단하는 데 사용됩니다. 뇌염, 크림 출혈열 등)뿐만 아니라 특정 호르몬을 측정하고 페니실린 및 인슐린과 같은 약물 및 호르몬에 대한 환자의 과민성을 확인합니다.

수동 적혈구응집 반응(RPHA). 수동 적혈구응집 검사는 혈청학적 진단의 민감한 방법으로 조기 및 후향적 진단뿐만 아니라 백신 접종자의 면역 결핍 상태를 결정하는 데에도 사용됩니다. 야토병 환자의 경우, 항체는 일반적으로 질병의 첫 번째 또는 두 번째 주 말에 검출됩니다. 1~1.5개월 후에 RPHA 역가는 최대 수준(1:100,000-1:20,000, 덜 자주 높음)에 도달합니다. 1:100~1:200 수준으로 감소하면 장기간 보관됩니다.

백신 접종을 받은 사람의 경우 항체는 백신 접종 후 1~1.5개월 동안 1:2000~1:5000을 초과하지 않는 낮은 역가에서 지속적으로 검출되며 수년 동안 1:20~1:80의 낮은 수준으로 유지됩니다.

RPHA 병기 결정을 위한 항원은 야토병 적혈구 진단(항원)입니다. 이 약물은 포르말린화된 양 적혈구로, 야토병 항원에 감작되었으며 액체 및 건조 형태로 제공됩니다. 액체 제제 - 10% 농도의 포름알데히드 용액에 적혈구를 10% 현탁시킨 것입니다. 건조 동결건조 제제는 방부제가 없는 진공 건조된 10% 적혈구 현탁액입니다. 사용하기 전에 라벨의 지시사항에 따라 희석합니다. 폴리스티렌 플레이트에서 반응을 설정하기 위해 두 약물 모두 2.5% 농도로 사용되며, 반응을 미세 볼륨으로 설정하는 경우 0.5% 농도로 사용됩니다.

RPGA 설정 기술. 시험 혈청을 생리용액 1:5(1:10)로 희석하고 56℃에서 30분간 가열한다. 그 후, 양 적혈구에 대한 이종 항체를 제거하기 위해 혈청을 포르말린화된 양 적혈구의 50% 현탁액으로 처리합니다. 이렇게 하려면 혈청 1ml당 적혈구를 2방울(0.05ml)의 비율로 첨가하고 잘 흔들어 섞습니다. 혈청은 적혈구가 완전히 가라앉을 때까지 방치하거나 실온에서 1시간 후에 원심분리한 후 검사할 준비가 됩니다.

희석액을 폴리스티렌 판 위의 한 줄의 웰에 0.5ml씩 붓습니다. 혈청에 대한 예비 연구 중에 플레이트의 짧은 줄(6웰)에서 반응을 설정하여 테스트하는 것이 좋습니다. 항체가 짧은 시리즈에서 검출되면 혈청은 긴 일련의 희석(12웰)을 통해 재검사됩니다. 희석액을 흘린 후 1:5로 희석된 시험 혈청 0.5ml를 각 행(짧거나 긴)의 첫 번째 웰에 추가합니다. 그런 다음 동일한 양의 혈청을 2배 희석하여 적정합니다. 따라서 혈청 희석은 1:10부터 1:320까지의 짧은 시리즈와 1:10부터 1:20480까지의 긴 시리즈에서 얻어집니다. 혈청을 적정한 후, 감작된 적혈구의 2.5% 현탁액 한 방울(0.05ml)을 각 웰에 첨가합니다. 균질한 현탁액이 얻어질 때까지 플레이트의 내용물을 완전히 흔듭니다. 플레이트를 실온의 고정된 테이블 표면에 놓아둡니다. 반응의 예비 기록은 2~3시간 후에 수행되며, 역가의 최종 결정은 웰에 적혈구가 완전히 침전된 후에 이루어집니다. 반응을 위해 다음과 같은 대조군이 제공됩니다: 1) 0.5ml의 부피로 1:10으로 희석된 시험 혈청 + 민감하지 않은 적혈구의 2.5% 현탁액 1방울; 2) 0.5ml의 희석액 + 민감하지 않은 적혈구의 2.5% 현탁액 1방울; 3) 0.5ml의 희석액 + 감작된 적혈구의 2.5% 현탁액 1방울. 모든 대조군은 명백히 부정적인 반응을 보여야 합니다.

RPGA의 회계 및 평가. 반응은 다음 계획에 따라 평가됩니다.

1) 급격히 긍정적인 반응(++++) - 적혈구는 종종 가장자리가 부채꼴 모양으로 녹는 "우산" 형태로 균일한 층으로 구멍 바닥으로 떨어집니다.

2) 양성 반응(+++) - 적혈구가 우물 바닥의 최소 2/3를 덮습니다.

3) 약한 양성 반응(++) - 응집체가 작고 우물의 중앙에 위치합니다.

4) 의심스러운 반응 (+) - 우물 중앙의 적혈구 퇴적물 주위에 개별 응집 입자가 있습니다.

5) 음성(-) - 구멍 바닥에 적혈구가 "단추" 형태로 자리 잡거나 가장자리가 부드럽고 예리하게 정의된 작은 고리 형태로 자리잡습니다.

혈청 역가는 혈청의 마지막 희석에 따라 고려되며 이는 매우 명확한 반응을 나타냅니다(최소 3개 플러스). 1:100 이상의 희석은 진단 역가로 간주되지만 RA의 경우와 마찬가지로 증가를 모니터링해야 합니다.

야토병에 대한 RPHA는 매우 특이적이고 브루셀라병 혈청에서만 일부 교차 반응을 감지합니다. RPGA의 역가의 높이에 따라 감별진단이 가능하며, 이는 상동항원에 비해 상당히 높습니다.

마이크로볼륨으로 RPHA를 설정하는 기술. RPGA는 Takachi형 미세적정기(또는 마이크로피펫이 있는 둥근 바닥 마이크로플레이트)를 사용하여 미세량으로 수행할 수 있으며, 이를 통해 25μl 및 50μl의 부피로 물질을 적정할 수 있습니다. 반응 기술과 모든 작업 순서는 폴리스티렌 플레이트에서 연구할 때와 동일합니다. 그러나 마이크로 방식의 감도는 일반적으로 매크로 방식보다 한 희석(즉, 2배) 낮다는 점을 명심해야 합니다.

미세적정기에서 반응을 설정하기 위해 점적 피펫을 사용하여 각 웰에 희석액 50μl를 첨가합니다. 그런 다음 50 μl 헤드가 있는 적정기를 사용하여 헤드를 담가서 시험 혈청을 수집합니다. 액체가 적정기 헤드에 채워졌는지 확인하십시오. 혈청이 담긴 적정기를 첫 번째 웰로 옮기고 이를 수직 위치로 유지하면서 양방향으로 여러 차례 회전 운동을 합니다. 그런 다음 적정기를 다음 웰로 옮기고 조작을 반복합니다. 적정은 여러 행에서 동시에 수행할 수 있습니다. 전체 시리즈를 적정한 후 회전 동작을 통해 적정기를 증류수(2개 부분 교체)로 세척하고 면봉을 사용하여 헤드에서 물을 제거한 후 버너 불꽃으로 태웁니다.

적정 후 적혈구 진단액 25μl를 웰에 추가합니다. RPHA에 대한 진단 농도는 미세량으로 0.5%여야 합니다(즉, 2.5% 적혈구 현탁액을 추가로 5배 희석함). 적혈구를 첨가한 후 균일한 현탁액이 얻어질 때까지 플레이트를 약간 흔들어야 합니다. 결과는 1~1.5시간 이내에 기록될 수 있으며 이는 마이크로타이터에서 RPGA의 중요한 이점입니다. 또한 이 기술에는 소량의 모든 반응 성분과 테스트 혈청이 필요합니다.

반응은 다음 계획에 따라 고려됩니다.

1) "+" – 적혈구가 "우산" 형태의 고른 층으로 우물 바닥으로 떨어지는 완전 적혈구 응집 반응으로 바닥의 최소 2/3를 차지합니다.

2) "+-" - 적혈구가 작은 크기의 느슨한 고리 형태로 바닥으로 떨어지는 부분 적혈구응집;

3) "-" – 적혈구가 가장자리가 매끄러운 작은 단추나 고리 형태로 바닥으로 떨어지는 경우, 적혈구 응집이 없습니다.

RPHA에서 얻은 양성 결과의 특이성은 3성분 반응, 즉 수동 적혈구응집 억제 반응(PHA)을 사용하여 테스트할 수 있습니다.

RTPGA 설정 기술. 이 반응은 의심스럽거나 특히 역학적으로 관심이 있는 경우 양성 RPGA 결과의 특이성을 확인하는 데 사용됩니다. 반응 메커니즘은 죽은 야토병 박테리아 현탁액을 시험 혈청에 첨가할 때 적혈구 응집이 특이적으로 억제되는 것으로 구성됩니다. 세 가지 구성 요소가 반응에서 상호 작용합니다. 테스트 혈청, 특정 야토병 항원 및 항원성 적혈구 진단 RTPHA는 일반적으로 7-8개의 웰에 일렬로 배치됩니다. RTPGA와 병렬로 반복되는 RPGA를 설치하는 것이 좋습니다. 0.25ml의 희석액을 두 줄의 웰에 붓고, 0.25ml의 시험 혈청을 두 줄의 첫 번째 웰에 첨가하고 적정을 수행하여 두 줄의 혈청 희석액을 얻습니다. 두 번째 줄의 모든 웰에 희석액 0.25ml를 추가하고, 첫 번째 줄의 웰에 야토병 박테리아 현탁액 0.25ml를 추가합니다. 이전에 50배로 희석한 야토병 진단(1ml에 250억 개의 야토병 박테리아 함유)이 사용됩니다. 이 현탁액에는 1ml에 5억 개의 박테리아 또는 0.25ml의 부피에 1억 2천5백만 개의 박테리아가 들어 있습니다. 항원을 첨가한 후 플레이트를 실온에서 1시간 동안 방치한 후 진단적혈구 1방울(0.05ml)을 양쪽 행의 모든 ​​웰에 첨가하고 플레이트를 흔들어 평평한 테이블 표면에 방치한다. 회계는 2~3시간 후에 수행됩니다.

RTPGA의 회계 및 평가. 테스트 혈청에 특정 야토병 항체가 포함된 경우, 추가된 항원에 의해 중화되어 웰의 첫 번째 줄에서 혈구응집이 발생하지 않거나, 혈청 역가가 높을 경우 더 적은 수(2-4)의 웰에서 혈구응집이 관찰됩니다. RPHA가 있는 행보다 우물입니다. 이 경우 결과의 특이성이 확인되었습니다. 두 줄 모두에 적혈구응집이 나타나는 경우, 즉 RTPGA와 RPGA의 결과가 일치하면 이는 시험 혈청에 야토병 항체가 없음을 나타냅니다. 이 경우 RPGA의 주요 결과는 비특이적인 것으로 간주됩니다.

마이크로볼륨으로 RTHG를 준비하는 기술입니다. RPGA와 마찬가지로 RTPGA는 Takachi 유형 마이크로타이터를 사용하여 마이크로볼륨으로 수행할 수 있습니다. 이렇게 하려면 각각 7-8개의 웰로 구성된 두 줄의 마이크로플레이트 웰에 희석 액체 0.25 μl를 추가합니다. 그런 다음 적정기를 사용하여 시험 혈청 0.25μl를 첨가하고 두 줄에 적정합니다. 그 후, 첫 번째 행의 각 웰에 야토병 항원(농도는 1ml당 5억 야토병 박테리아) 25μl를 첨가하고, 두 번째 행에는 희석액 25μl를 첨가합니다. 플레이트를 실온에서 1시간 동안 방치한 후, 25μl의 항원성 zritrocytic Diagnosticum(0.5% 농도)을 두 줄의 모든 웰에 첨가합니다. 결과의 회계 및 평가는 대규모 볼륨의 반응과 유사하게 수행됩니다.