119. 판디와 논네의 반응 - 아펠트
판디 반응을 수행하기 위한 시약으로는 액체 카르볼산 100g에 증류수 1000ml를 세게 흔들어 얻은 상등액의 투명한 액체를 사용한다. 침전물과 투명한 액체(시약) 이 혼합물먼저 온도 조절 장치에 3~4시간 동안 놓아둔 다음 실온에서 2~3일 동안 보관합니다.
센티넬 또는 미끄러지 다어두운 종이 위에 놓고 그 위에 시약 2~3방울을 떨어뜨린 후 1방울을 떨어뜨립니다. 뇌척수액. 방울이 흐려지거나 주변에 실 모양의 혼탁이 나타나면 반응은 긍정적인 것으로 간주됩니다.
Nonne-Apelt 반응을 수행하려면 깨끗한 시험관, 포화 황산암모늄 용액, 증류수 및 어두운 종이가 필요합니다. 황산암모늄 포화용액을 제조한다 다음과 같은 방법으로: 화학적으로 순수한 중성황산암모늄 0.5g을 1000ml 플라스크에 넣고 95℃로 가열한 증류수 100ml를 붓고 염이 완전히 녹을 때까지 흔들어 준 후 실온에서 수일간 방치한다. 2~3일 후 용액을 여과하고 pH를 측정합니다. 반응은 중립적이어야 합니다.
생성된 용액 0.5-1ml를 시험관에 붓고 동일한 양의 뇌척수액을 시험관 벽을 따라 조심스럽게 첨가합니다. 3분 후 결과를 평가해 보세요. 흰색 고리 모양은 긍정적인 반응을 나타냅니다. 그런 다음 시험관의 내용물을 흔들어준 후, 증류수를 담은 시험관과 비교하여 탁도의 정도를 판정합니다. 반응 결과는 검정색 종이를 배경으로 평가됩니다.
120. 보르데 - 장고우 반응
감지되면 귀중한 진단 테스트 만성 임질만성질환을 앓고 있는 사람들 사이에서 염증성 질환 비뇨생식기계. 문헌에 따르면, 언제 올바른 사용이 방법은 세균검사나 세균학적 방법으로 발견되지 않은 임질 사례의 최대 80%를 발견합니다.
Bordet-Zhang 반응은 이전 질병이나 진단(면역생물학적 유발 방법) 및 치료(만성 질환 치료)를 위한 고노백신 사용의 결과로 추적될 수 있습니다. 염증 과정 Baksheev에 따른 여성의 비뇨생식기) 목적. 따라서 수행하기 전에 기억 상실을주의 깊게 수집해야하며,
우유를 투여할 때 반응이 위양성일 수도 있습니다. 의약 목적발열성.
결과적으로, 긍정적인 Bordet-Giangu 반응은 존재에 대한 확실한 증거로 작용하지 않습니다. 임균성 감염, 부정적인 것과 마찬가지로 임질이 없다는 증거는 될 수 없습니다. 그러나 장기간에 걸친 양성 결과는 의사가 신체 내 임균성 감염의 원인을 찾도록 지시해야 합니다.
1ml에 30억~40억 개의 미생물이 들어 있는 사멸된 임균 배양물이 항원으로 사용됩니다. 임균성 항원은 포름알데히드 용액으로 보존되고 1-5ml의 앰플에 부어집니다. 미개봉 앰플은 6개월간 보관이 가능하고, 개봉한 앰플은 멸균튜브에 넣어 3~5℃ 냉장고에 2~3일간 보관 가능하며,
Bordet-Giangu 보체 고정 반응은 Wasserman 반응과 유사하게 수행됩니다(No. 121 참조). 임균 항원은 앰플 라벨에 표시된 역가에 따라 등장성 염화나트륨 용액으로 희석됩니다. 반응은 가장 자주 2.5ml의 부피로 수행되므로 1:5로 희석된 시험 혈청 0.5ml에 희석된 항원 0.5ml를 각 튜브에 첨가합니다. 나머지 1.5ml는 용혈 시스템 1ml와 보체 0.5ml입니다.
반응이 다음과 같이 표현되면 긍정적인 것으로 간주됩니다. 다양한 정도로시험 혈청의 용혈 지연. 통제 중 (혈청 건강한 사람들) 완전한 용혈이 관찰됩니다.
121. Wasserman 반응
매독 환자의 혈청에는 레진과 항체가 포함되어 있습니다. Reagins는 카디오리핀 항원과 결합하는 특성을 가지고 있습니다. 에 대한 특정 항체 트레포네마 팔리듐특정 항원에 결합합니다. 생성된 항원-항체 복합체는 반응에 첨가된 보체에 의해 흡수됩니다. 용혈 시스템(양 적혈구 + 용혈 혈청)을 도입하여 적응증을 만듭니다.
반응을 수행하려면 다음이 필요합니다.
a) 등장성 염화나트륨 용액;
b) 초음파 트레포네말(+4°C에서 냉장고에 보관) 및 카디오리핀(실온에서 보관) 항원;
c) 5-10마리의 건강한 기니피그의 심장 천자로부터 얻은 혈청인 보체. 냉장고에 2개월 보관 가능, 제공
4% 용액으로 통조림 만들기 붕산및 5% 황산나트륨 용액;
d) 헤모리신 - 다양한 역가의 양 적혈구로 면역화된 용혈성 토끼 혈청(4°C에서 냉장고에 보관);
e) 천자하여 얻은 양 적혈구 경정맥. 유리 볼(혼합용)이 들어 있는 멸균 용기에 혈액을 수집하고 15분 동안 흔들어 줍니다. 피브린 응고물은 멸균 거즈를 통해 여과하여 분리됩니다. 제세동된 혈액은 냉장고에 최대 5일 동안 보관할 수 있습니다.
때로는 양혈을 장기간 보관할 필요가 있으므로 특수 방부제(포도당 6g, 붕산 4.5g, 등장성 염화나트륨 용액 100ml)를 사용하여 보존하고 수욕에서 끓여서 보존합니다. 3일 동안 하루 20분씩 섬유소 제거된 양혈 100ml에는 방부제가 15ml 필요합니다. 이렇게 보존된 제세동 혈액은 냉장고에 보관됩니다.
주요 실험은 여러 단계로 진행됩니다.
환자의 팔뚝 정맥에서 5-10ml의 혈액을 채취하여 혈청을 처리합니다. 어린이의 경우 혈액을 채취할 수 있습니다. 측두정맥아니면 발뒤꿈치에 상처가 났거나. 천자는 멸균 도구, 주사기 및 바늘을 사용하여 이루어집니다.
등장성 염화나트륨 용액으로 사전 세척되었습니다.
연구용 혈액은 공복에 채취됩니다. 연구 3-4일 전부터 환자는 섭취를 금지합니다. 마약, 디지탈리스 준비, 술을 마시세요.
이 연구는 다음과 같은 환자에게 수행되어서는 안 됩니다. 온도 상승신체, 부상 후, 수술, 마취, 최근에 받은 전염병, 월경 중 여성, 임산부(임신 마지막 10일 이내), 분만 중인 여성(출생 후 첫 10일 이내), 신생아(생후 첫 10일 이내).
멸균 튜브에 담긴 혈액을 37°C의 온도 조절 장치에 15~30분 동안 놓아둡니다. 생성된 응고물을 멸균 유리 막대를 사용하여 시험관 벽에서 분리하고 하루 동안 냉장고에 보관합니다. 분리된 투명한 유청(혈전 위)을 파스퇴르 피펫으로 빨아들입니다. 고무 전구또는 조심스럽게 다른 멸균 튜브에 붓고 수조에서 56°C에서 30분간 비활성화합니다. 이렇게 준비된 실험용 혈청은 냉장고에 5~6일 정도 보관 가능하다.
항원은 라벨에 표시된 방법과 역가에 따라 희석됩니다.
용혈 시스템을 준비합니다. 이를 위해 반응에 필요한 양만큼의 탈섬유화된 양혈액 또는 적혈구를 원심분리하여 혈장을 조심스럽게 분리한 후, 등장액이 완전히 무색이 될 때까지 5~6 부피의 등장성 염화나트륨 용액으로 침전물을 세척한다. 침전물로부터 3배 역가의 등장성 염화나트륨 용액에 적혈구 3% 현탁액을 제조합니다.
용혈혈청 용액과 양 적혈구 현탁액을 빠르게 혼합하고 항온조에 30분간 놓아둔다.
건조 보체는 등장성 염화나트륨 용액으로 1:10, 정상 비활성화 인간 혈청 - 1:5의 비율로 희석됩니다.
보체는 3열에 10개의 튜브로 구성된 랙에 배치된 30개의 튜브에서 적정됩니다. 두 줄에서는 두 개의 항원이 있을 때 적정되고, 세 번째는 등장성 염화나트륨 용액으로 적정됩니다. 5개의 튜브는 대조 튜브입니다. 2개는 상응하는 2개의 항원용이고 1개는 보체, 용혈성 혈청 및 혈액 독성에 대한 등장성 염화나트륨 용액을 모니터링하기 위한 것입니다. 다음과 같이 작성하세요.
시약, ml | 테스트 튜브의 행 |
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양 적혈구 3% 현탁액 | |||||
용혈 혈청, 3배로 희석 | |||||
보완 1:10 | |||||
역가에 따라 희석된 삼중항원 | |||||
역가에 따라 희석된 카디오리핀 항원 | |||||
등장성 염화나트륨 용액 | |||||
시험관을 항온조에 45분 동안 놓은 후 점검합니다. 모든 시험관에는 용혈이 없어야 합니다.
1:10으로 희석된 보체를 랙 첫 번째 줄의 10개 튜브에 0.1, 0.16, 0.2,0.24, 0.3, 0.36,0.4,0.44, 0.5 및 0.55ml의 용량으로 붓습니다. 각 시험관의 내용물에 등장성 염화나트륨 용액을 1ml까지 첨가하고 잘 섞는다. 각 시험관의 혼합물 0.25ml를 두 번째와 세 번째 줄의 해당 시험관으로 옮깁니다. 시험관이 들어 있는 랙을 흔들고 세 번째 줄의 시험관에 용혈계 0.5ml를 첨가한 후 다시 흔들어 37℃ 항온조에 45분간 놓아둔다. 등장성 염화나트륨 용액으로 1:5 비율로 희석한 정상 인간 혈청을 각각 0.25ml씩 30개의 시험관 모두에 붓습니다.
등장성 염화나트륨 용액으로 적정하여 희석한 항원 I(트레포네말 초음파) 0.25ml를 첫 번째 줄의 10개 시험관에 첨가합니다. 항원 II(동일한 희석 및 동일한 양의 카디오리핀) - 두 번째 줄의 10개 튜브에 들어 있습니다. 등장성 염화나트륨 용액 0.25ml를 세 번째 줄의 시험관 10개에 붓고 나머지 0.25ml를 따른다. 항온조에서 배양한 후 용혈시스템 0.5ml를 20개의 튜브(1, 2열)에 첨가하고 흔들어 흔들어 항온조에 다시 넣어 45분간 방치한다.
45분 후에 보체의 작업 용량, 즉 15-20% 증가한 역가가 결정됩니다.
보체 역가로 간주됩니다. 최소한의 금액, 항원과 정상 인간 혈청의 존재 하에서 양 적혈구의 완전한 용혈을 유발합니다.
주요 실험은 등장성 염화나트륨 용액으로 1:5의 비율로 희석된 각 테스트 비활성화 혈청을 3개의 시험관에 0.25ml 붓는 것입니다. 첫 번째 시험관에는 항원 I 0.25ml, 두 번째 시험관에는 항원 II 0.25ml, 세 번째 시험관(대조군)에는 등장성 염화나트륨 용액 0.25ml를 첨가한다. 작업 용량으로 희석된 보체 0.25ml도 모든 시험관에 첨가됩니다. 모든 시험관을 항온조에 45분 동안 둔 후, 용혈 시스템 0.5ml를 첨가하고 흔든 다음 항온조에 45-50분 동안 두었다. 실험 결과는 대조 튜브에서 완전한 용혈이 시작된 후에 기록됩니다.
반응 결과는 플러스로 평가됩니다: 용혈의 완전한 지연(강한 양성 반응) ++++, 유의미함(양성 반응) +++, 부분적(약한 양성 반응) ++, 미미함(의심스러운 반응) - ±, 용혈 지연 없음 (음성 반응) - .
Wassermann 반응을 수행하는 정량적 방법에서는 등장성 염화나트륨 용액으로 희석된 혈청의 양을 줄이면서 실험을 수행합니다.
Wasserman 반응의 주요 실험 계획
성분(ml). 총 부피 1.25ml | 튜브 수 |
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시험혈청은 불활성화되어 1:5의 비율로 희석됩니다. 항원 I(트레포네말), 희석 역가에 따라 항원 II(카르디오리핀), 역가에 따라 희석 등장성 염화나트륨 용액 작업량에 따라 희석된 보체 | |||
Wasserman 반응의 임상적 중요성은 과대평가하기 어렵습니다. 치료 전 모든 환자에게 시행되지만, 특별한 의미그녀는 ~에 있다 잠복매독, 패배시키다 내부 장기그리고 신경계.
Wasserman 반응의 결과는 제공된 치료의 품질을 특징으로 하며, 이는 특정 기간 내에 치료받은 환자를 등록부에서 삭제할 근거를 제공합니다.
~에 일차 매독 Wasserman 반응은 일반적으로 감염 순간부터 6주 말에 양성입니다. 2차 신선 매독의 경우 거의 100%의 경우 양성이며 2차 재발 매독의 경우 98-100%입니다. 3차 활성 - 85%; 3차 숨겨진 - 60%의 경우.
Wasserman 반응은 모든 임산부, 신체, 신경, 정신 및 질병 환자를 대상으로 두 번 수행됩니다. 피부병, 법령에 따른 인구도 포함됩니다. 동시에 양성 및 약양성 반응 결과는 임신 말기와 출산 후, 갑상선 기능 항진증, 말라리아, 나병, 악성 종양의 파괴, 전염병, 교원증 등으로 발생할 수 있으므로 비판적으로 치료해야 합니다. , 만약에 임상 증상우선 세균경 검사 데이터와 함께 그들의 질병을 고려해야 합니다.
동시에, Wasserman 반응에서 얻은 결과의 실제 성격을 왜곡할 수 있는 요인이 있습니다: 제대로 세척되지 않은 실험실 유리 제품(시험관의 산 및 알칼리 흔적), 연구를 위해 채취한 혈액의 장기 보관, 소비 검사 전, 월경 전 등 환자의 지방 및 알코올.
모든 경우에 다음을 수행하는 것이 좋습니다. 종합검진 Wasserman 반응 외에도 RIBT(122, 123, 124 참조) 등을 포함한 환자.
122. Sachs-Vitebsky 반응(사이토콜릭)
매독을 탐지하는 데 사용됩니다. 이는 환자의 혈청과 항원을 혼합할 때 침전물이 형성되는 것에 기초합니다.
항원을 준비하기 위해 여러 소 심장의 근육에서 힘줄, 근막 및 지방을 제거하고 고기 분쇄기로 분쇄한 다음 매일 20분 동안 흔들면서 15일 동안 5배 용량의 96% 에틸 알코올로 추출합니다. 생성된 추출물을 진공 상태의 도자기 컵에 담긴 수조에서 증발시킵니다. 뜨거운 96%가 잔류물(밝은 노란색의 리포이드 덩어리)에 첨가됩니다. 에탄올근육 추출에 사용되는 양의 1/3 양.
추출물을 실온에서 3일 동안 보관한 후 여과합니다. 차가운 물) 양성 및 음성 혈청의 적정 결과에 따라 결정질 콜레스테롤 0.3-0.6% 용액을 추가합니다. 밀봉된 앰플이나 마개를 갖춘 튜브에 세포성 항원을 실온에서 보관하십시오.
방법론. 시토콜 항원 1ml를 등장성 염화나트륨 용액 2ml에 신속하게 첨가하고 플레이크가 나타날 때까지 실온에서 15분간 방치한다. 시험관에 불활성혈청 0.2ml에 항원유제 0.1ml를 넣고 3분간 흔들어 준 후 30분간 방치한 후 등장성염화나트륨시액 1ml를 가한다.
등장성 염화나트륨 용액 1.2ml와 항원 유제 0.1ml를 항원이 들어 있는 대조 튜브에 첨가합니다. 컨트롤에는 플레이크가 없어야 합니다. 반응 결과는 시각적으로 또는 돋보기를 사용하여 고려되며 떨어지는 플레이크 수에 따라 플러스(++++, +++, ++)로 지정됩니다. 반응이 음성인 경우 플레이크는 없지만 튜브의 내용물이 약간 유백색으로 변할 수 있습니다.
1931년에 P. Sachs와 E. Witebsky는 두 단계로 항원을 희석하는 것으로 구성된 이 기술의 수정을 제안했습니다. 즉, 등장성 염화나트륨 용액 2부분을 항원 1부분에 첨가하고 실온에서 5분간 유지한 다음 등장성 용액 염화나트륨 9부를 더 추가합니다. 또한 저자에 따르면 반응 민감도를 높이는 2% 염화나트륨 용액으로 항원을 희석하는 것이 좋습니다. 혈청 희석을 통한 반응의 정량적 변형도 가능합니다(1:4, 1:8, 1:16, 1:32, 1:64 등).
반응은 매우 민감하고 시간이 거의 걸리지 않으며(약 1시간) 결과가 즉시 판독됩니다.
123. 트레포네마 팔리듐(RIBT)의 고정화 반응
매독 환자의 혈청에서 반응을 통해 Treponema pallidum을 고정시키는 항체와 보체를 검출합니다.
1 차 매독에서 RIBT는 주로 음성이며 2 차 매독에서는 92-96 %의 경우 양성, 3 차 매독에서는 92-100 %, 신경계 및 선천성 매독에서는 86-89 %의 경우입니다.
RIBT의 양성 결과는 유육종증, 홍반증, 당뇨병, 악성 종양, 바이러스 성 간염, 간경변, 말라리아, 나병, 전염성 단핵구증, 더운 나라의 일부 질병 (핀타, 요 등).
항원은 등장성 염화나트륨 용액에 담긴 창백한 트레포네마 현탁액 0.75-1ml를 고환에 도입하여 매독에 감염된 토끼의 고환에서 채취한 창백한 트레포네마 현탁액입니다(시야당 50마리 동물).
고환의 물질은 동물이 감염된 후 6-8일 후에 채취되어야 합니다. 항원을 복용하기 전에 토끼는 출혈(심장 천자 또는 경동맥). 고환 조직을 파쇄하여 건강한 토끼의 혈청을 채운 후 등장성 염화나트륨 용액으로 희석하여 ~30분간 흔든 후 10분간 원심분리한다(1000rpm). 상등액을 현미경으로 검사합니다. 각 시야에는 최소한 10-15개의 Treponema pallidum이 있어야 합니다.
보완책이 준비되었습니다 평소대로기니피그의 혈액에서.
RIBT를 수행하려면 다음이 필요합니다: 0.2% 젤라틴 용액 1.2ml, 5% 알부민 용액 2.8ml, Treponema pallidum 현탁액 1.6ml; 환경의 pH는 7.2입니다. 이 혼합물에 보체(칵테일) 0.15ml를 첨가합니다. 병행하여 활성(실험) 보완 요소와 반응(대조) 보완 요소를 사용하여 두 가지 테스트가 수행됩니다.
멜란저에는 "1" 표시까지 테스트 혈청을 채운 다음 "2" 표시까지 칵테일을 채우고 멸균 고무 링으로 닫습니다.
동시에, 명백하게 양성인 혈청과 음성인 혈청에서도 유사한 반응이 수행됩니다.
멜란저에 번호를 매기고 18-20시간 동안 35°C 온도의 온도 조절 장치에 넣은 후 쌍으로(실험 - 대조) 온도 조절 장치에서 꺼내어 내용물을 적절한 시험관에 붓습니다. 유리 슬라이드에 2방울을 떨어뜨립니다. 왼쪽은 실험이고, 오른쪽은 대조군입니다. 어두운 시야에서 커버 유리와 현미경으로 덮습니다.
먼저, 대조 결과를 연구합니다. 이동성 및 고정성 Treponema pallidum의 비율이 결정됩니다. 계산 공식: X = (A - B)/A * 100, 여기서 A는 대조군의 이동성 pallidum treponema의 수입니다. B - 실험에서 이동성 treponemes pallidum의 수.
예: (24 - 19) / 24 * 100 = 21%.
RIBT 결과 평가: 20% 미만 - 부정적. 21~30% - 의심스럽다, 31~50% - 약하게 긍정적, 50% 이상 - 긍정적.
RSC는 매우 민감하고 구체적이며 다음 용도로 사용됩니다.
1) 혈청학적 진단전염병 (Wasserman 강 - 매독, Bordet-Zhangu 강 - 만성 임질 등);
2) 박테리아 및 기타 미생물의 식별.
RSK는 복잡한 것으로 분류됩니다 혈청학적 반응, 이는 AG 및 AT 외에도 반응 결과를 나타내는 용혈 시스템 (용혈 시스템)을 포함합니다.
RSK는 두 시스템의 참여로 두 단계로 수행됩니다:
1) 첫 번째 시스템 – AG+AT+complement – AT가 AG에 해당하는 경우 보체 결합을 유발합니다. AT와 AG 사이에 불일치가 있는 경우 보완은 무료로 유지됩니다.
두 번째 시스템(지표) - 용혈성 혈청(용혈소) + 적혈구 - 첫 번째 시스템의 반응 결과를 보여줍니다. 첫 번째 시스템의 반응 결과가 양성인 경우(AG + AT + 보체 복합체 형성) ), 보체 부족으로 인해 두 번째 시스템에서는 용혈이 발생하지 않습니다(적혈구가 시험관 바닥에 침전됨). 언제 부정적인 결과첫 번째 시스템에서는 적혈구 + 헤모리신 + 보체 복합체가 형성되기 때문에 두 번째 시스템에는 용혈이 동반됩니다 (부록 3, 그림 7 및 8 참조).
반응 구성요소:
1) 시험 혈청(56℃에서 30분간 가열하여 예비 불활성화);
2) 항원(죽은 미생물, 미생물 용해물, 완전 항원, 합텐, 조직 지질 추출물의 현탁액으로 만들어짐);
3) 보완;
4) 용혈성 혈청;
5) 양 적혈구 3% 현탁액;
6) 식염수;
7) 대조군 혈청.
보어. 신선하고 건조된 기니피그 혈청은 RSC의 보체로 사용되는데, 이는 기니피그의 혈액에 보체가 함유되어 있기 때문입니다. 가장 큰 수다른 동물보다 지속적으로 존재합니다. RSC를 수행하기 전에 용혈 반응의 보체(양 적혈구, 용혈 혈청, 보체, 식염수)의 적정과 작업 용량 결정을 수행해야 합니다.
보체 역가- 용혈성 혈청이 있을 때 적혈구를 완전히 용해시키는 보체의 최고 희석액입니다.
보체의 작업량– 사격 범위보다 25% 더 높은 보완량.
용혈혈청양 적혈구 50% 현탁액으로 토끼를 면역화하여 제조되었습니다. 생성된 혈청을 56℃에서 가열하여 불활성화시킨다. 역가 및 작업 용량을 결정한다.
혈청 역가– 보체 존재 하에서 적혈구를 완전히 용해시키는 혈청의 최대 희석입니다. 작업 용량으로 용혈 혈청을 3배 역가로 복용하십시오.
RSC 보르데-강구
이 반응은 임균에 대한 항체를 검출하기 위해 만성 임질을 진단하기 위해 수행됩니다.
RSC에는 두 가지 시스템이 관련됩니다: 주 시스템 - 시험 혈청, 항원, 보체 및 보조, 지표 또는 용혈 시스템 - 용혈 혈청 및 양 적혈구.
특정 항원 + 항체 복합체가 첫 번째 시스템에서 형성되면 보체는 흡착되고(이 복합체와 결합) 두 번째 시스템에서는 용혈이 발생하지 않습니다.
반응에는 다음이 필요합니다.
1. 환자의 척골 정맥을 천자하여 채취한 혈액에서 채취한 시험 혈청. 혈액 응고 후, 혈청을 별도의 튜브에 흡입하고 수조에서 56℃에서 30분간 비활성화시킨다.
2. 항원 - 죽은 임균의 정지.
3. 양의 적혈구는 무균적으로 수집된 섬유소 제거된 혈액에서 채취됩니다. 새로운 식염수로 3회 원심분리하여 세척합니다. 이 반응에는 3% 적혈구 현탁액이 사용됩니다.
4. 토끼에 양의 적혈구를 면역시켜 용혈혈청을 미리 준비합니다. 사용하기 전에 혈청을 적정합니다.
5. 보완 - 신선한 기니피그 혈청. 기니피그의 심장에서 주사기로 혈액을 흡입하고 응고시킨 후 혈청을 분리합니다. 실험 전에 보체의 작업 용량이 적정됩니다. 이렇게하려면 보체를 1:10으로 기본 희석하여 0.1에서 0.5까지 시험관에 부은 다음 각 시험관의 부피를 식염수로 1.5ml로 조정합니다.
동시에, 용혈 시스템이 준비됩니다 - 삼중 역가로 희석 된 용혈 혈청 + 양 적혈구 3 % 현탁액. 두 성분의 용량이 서로 다르며 항온 장치에 30분간 보관한 후(혼합물의 감작), 혼합물 1ml를 시험관에 넣고 항온 장치에 30분간 두었습니다. 3개의 시험관이 대조군 역할을 합니다:
1. 용혈 시스템 1ml + 생리용액 1.5ml;
2. 1:10 보체 0.5ml + 적혈구 현탁액 0.5ml + 생리용액 1.5ml.
보체 역가는 용혈이 여전히 발생하는 최소량입니다. 반응을 확립하려면 역가에 대해 20-25% 증가한 보체의 작업량을 섭취하십시오. 즉, 일반적으로 용혈이 있는 끝에서 두 번째 튜브에 존재하는 보체의 양입니다. 반응에서 보체의 활성이 반응의 다른 성분(항원, 혈청)에 의해 다소 억제될 수 있으므로 보체의 용량을 늘리는 것이 필요합니다.
RSC Bordet - Zhangou의 주요 실험 설정.
먼저, 불활성화되어 1:5로 희석된 시험 혈청을 2개의 시험관에 붓습니다. 그런 다음 항원을 첫 번째 시험관에 붓고 생리 용액을 두 번째 시험관에 붓습니다. 그 후, 작업량의 보체를 모든 튜브에 첨가합니다.
재료를 혼합한 후, 시험관이 있는 랙을 37℃ 온도 조절 장치에 30분 동안 두었습니다(핫 바인딩). 냉간 제본 시 시험관이 있는 랙을 -4 0 C의 온도에서 18시간 동안 아이스박스에 넣습니다. 온도 조절 장치에 보관한 후 모든 시험관에 용혈 시스템을 추가합니다. 반응은 0.5 ml의 부피로 제공됩니다. 튜브를 다시 온도 조절 장치에 2시간 동안 놓아둔 후 결과를 사전 등록합니다. 튜브를 실온에 방치하고 다음날 최종 결과를 기록합니다.
반응 강도의 정도는 긍정적으로 평가됩니다. 용혈의 완전한 지연 - 4개의 플러스(++++), 불완전한 - 3개, 1개의 플러스. 완전한 용혈은 마이너스(-)로 표시됩니다.
RSK Wasserman
항체를 검출하고 효과를 확인하기 위해 매독 진단에 사용됩니다. 특정 치료법. 이는 Bordet-Gengou 보체 고정 반응의 원리를 기반으로 합니다. Wasserman 반응의 중요한 차이점은 항원의 비특이적입니다. 정상 기관동물.
Wasserman 반응을 수행하기 위해서는 환자의 혈청, 교차반응항원 1호, 2호 진단검사, 보체, 용혈혈청, 양적혈구, 식염수 등이 필요하다.
Diagnosticum No. 1 - 특정, treponemal.
Diagnosticum No. 2 - 고도로 정제된 추출물인 비특이적 카디오리핀 항원 황소의 심장, 리포이드의 화학적 조성이 일정합니다. 심장에서 추출한 리포이드 화학적 구성 요소 Treponema pallidum의 지질에 가깝기 때문에 특이적이지는 않지만 스피로헤타에 대한 항체를 고정시킵니다. 이들 항원은 중앙에서 생산되어 반응에 사용되며 라벨에 표시된 역가에 따라 희석됩니다.
주요 실험과 동시에 2개의 대조군(명백한 음성 혈청 및 양성 혈청)을 배치했습니다.
보르데-장구 반응알렉신 고정(Ehrlich'y에 따른 보체 고정 반응)인 (Bordet-Gen-gou)은 1901년 저자에 의해 발견되었습니다. 이 반응은 항원(미생물, 외부 단백질등)은 이전에 56°에서 30분 동안 가열하여 비활성화된 해당 면역 혈청과 결합하여 알렉신을 탐욕스럽게 흡수(흡수)하는 후자와 복합체를 형성합니다(참조. 항원, 알렉신). B.-J.의 알렉신(에를리히 보수)으로서 반응이 나타나면 다양한 동물의 신선한 정상 혈청이 사용되며, 가장 일반적으로 기니피그가 사용됩니다. B.-J. 아르 자형. 두 단계로 발생합니다. 흐름도를 표현할 수 있습니다. 다음 예: 첫 번째 시스템 - 비브리오 콜레라(항원) + 가열에 의해 비활성화된 항콜레라 혈청 - 알렉신을 탐욕스럽게 흡착할 수 있는 복합체를 형성합니다. 두 번째 시스템-양 적혈구 (항원) + + 면역, 가열에 의해 비활성화 된 토끼 용혈 혈청-또한 알렉신을 탐욕스럽게 흡착 할 수있는 복합체를 형성하여 적혈구 용해-용혈-가 여기에서 발생합니다. 알렉신을 첫 번째 시스템과 먼저 혼합하면 완전히 흡수됩니다. 유리 알렉신을 발견하지 못한 채 추가된 두 번째 용혈 시스템은 용혈 반응을 일으키지 않을 것이 분명합니다. 이는 양성 B.-J의 사례가 될 것입니다. r. 유리 알렉신이 없어 용혈이 없을 때. 실험에서 첫 번째 시스템이 서로 일치하지 않는 항원과 면역 혈청으로 구성된 것으로 밝혀지면 DRU G U(예: 비브리오 콜레라 + 항장티푸스 혈청), 알렉신을 흡착하는 화합물(복합체)은 다음과 같습니다. 그들 사이에 형성되지 않고 후자는 자유롭게 남아 있으면 두 번째 용혈 시스템에 합류하여 콜레라의 첫 번째 시스템이 됩니다. 비브리오 + 항콜레르나. syv. 알렉시아 2차 시스템 - 적혈구 + 헤모리스. 그들을 위한 혈청. 긍정적인 반응- 용혈이 없습니다. 1차 홀렌 시스템. 비 브리옹 + 장티푸스 예방 syv.알렉신 2차 시스템 적혈구 + .혈액염. 그들을 위한 혈청. 부정적인 반응-용혈. Bordet-Gengou 반응의 도식적 표현. 바이러스 "및 폐렴 가축. B.의 수많은 작품은 주로 "Annales de l"Institut Pasteur"에 출판되었습니다. B.는 특별 논문의 형태로 면역 분야에 대한 그의 견해를 완전히 이론적으로 완성했습니다. 양의 적혈구가 용해되는 불변의 "Traite de I". 이것은 부정적인 B.-J의 경우입니다. 아르 자형. 위에서 보면 B.-Zh를 준비할 때 분명합니다. 아르 자형. 즉, 먼저 첫 번째 시스템을 준비하고 추가하는 것입니다. 그리고.이자형. t.sh. 739 붕소; 알렉신 흡착 반응이 여기에서 완료될 시간을 주기 위해 이 혼합물을 37°에서 Vs ~ 1시간 동안 방치한 다음에만 알렉신이 흡착되었는지 여부, 즉 첫 번째 시스템의 항원과 면역 혈청. B.-J. 반응을 통해 두 가지 방향으로 문제를 해결할 수 있습니다. 1. 다양한 항원에 대한 면역 혈청을 보유하고 있으면 미지의 항원(미생물 배양, 외래 단백질 등)의 특성을 정확하게 확인할 수 있습니다. 연구 중인 배양 또는 외래 단백질은 분명히 긍정적인 B.-G를 제공합니다. 아르 자형. 성격에 맞는 면역 혈청만 사용합니다(예: 인간 혈액 반점의 단백질 - 인간 단백질에 대한 면역 혈청이 있고 말, 소, 돼지 등의 단백질에 대한 면역 혈청이 아님) -2. 우리에게 알려진 항원(미생물 배양, 단백질 제제 등)을 사용하면 우리에게 알려지지 않은 테스트 혈청의 출처를 확인할 수 있습니다. 따라서 장티푸스나 회복기의 혈청에서는 양성 B.-F가 나올 것입니다. 아르 자형. 콜레라, 이질 등이 아닌 장티푸스 배양에서만, 그 반대의 경우 콜레라 또는 이질 환자의 혈청-해당 미생물 배양에서만 가능하고 미생물 배양에서는 사용하지 않음 장티푸스. B.-J. 아르 자형. 그것은 가지고있다 넓은 들판미생물학뿐만 아니라 위생(Schutze) 및 법정에서도 적용됩니다. 의학 (Neisser, Sachs, Brack). 또한 반응의 정량적 측면을 고려하면 다음과 같은 일반적인 생물학적 문제를 연구하는 데 사용할 수 있습니다. 가족관계~ 사이 특정 유형원숭이, 다양한 인종(브룩, 네이저) 등 - Bordet-Gengou 반응의 성격과 메커니즘에 대한 자세한 내용은 다음을 참조하십시오. 면역. V. Barykin.보데 - 장구 반응
Bordet Zhangu 반응(보체고정반응, RSK) - 면역학적 반응, 자유 보체를 고정하는 항원-항체 복합체의 특성을 기반으로 합니다. RSC는 두 단계로 진행됩니다: 1) 항원에 대한 항체의 흡착; 2) 용혈 시스템이 있을 때 반응의 발현(용혈). RSC 단계를 수행하기 위해 연구 대상 개체(항체 및 항원)를 보체 존재 하에서 상호작용을 보장하는 조건에 배치합니다. 그런 다음 분석 된 것 면역 체계"지표"(용혈 시스템)를 추가하십시오. 보체가 면역 체계에 의해 고정되면 용혈이 발생하지 않습니다( 양성 RSC; 그림, a); 면역 체계가 보체를 고정하지 않고 그 구성 요소가 서로 일치하지 않으면 용혈이 발생합니다(음성 RSC, 그림, b). 반응성분: 1) 시험용 혈청, 30분간 가열하여 불활성화. t° 56°에서; 2) 항원(박테리아 현탁액, 장기 및 조직 추출물, 바이러스); 3) 보체(신선한 기니피그 혈청); 4) 용혈 시스템(t° 37°에서 30분 동안 용혈 혈청과 함께 배양된 감작된 양 적혈구). 성분을 희석하려면 등장성 염화나트륨 용액을 사용하십시오. RSC의 첫 번째 단계는 60분 동안 지속됩니다. t° 37° 또는 18-20시간. t° 4-6°(보다 민감한 RSC), 두 번째 단계 - 60분. t° 37°에서.
진단 실습에서는 법의학 RSC의 다양한 수정(정성적 및 정량적)을 사용합니다. Wasserman 반응도 참조하세요. 혈청학적 연구.
Bordet Zhangu 반응은 항원-항체 복합체의 자유 보체 고정 특성에 기초한 면역학적 반응입니다. RSC는 2단계로 발생합니다: 1) 항원에 대한 항체의 흡착, 2) 보체의 존재를 요구하는 반응의 발현(세균 분해 또는 용혈). 보체 존재에 대한 세균분해 반응의 의존성은 Bordet Zhangu 반응에서 항원과 항체의 상호작용을 확인하는 것을 가능하게 합니다. 이 반응에서 항체 순응도의 지표는 반응 혼합물에 "지표" 용혈 시스템을 추가하여 감지되는 해당 면역 시스템에 의한 보체의 고정입니다.
Bordet Zhangou 반응은 두 단계로 수행됩니다. 첫째, 연구 중인 항원과 항체를 보체 존재 하에서 상호 작용을 보장하는 조건에 놓고 흡착이 완료된 후 용혈 시스템(용혈소 + 적혈구)을 추가합니다. 면역 체계를 분석하고 있습니다. 항원과 항체가 일치하면 상호 작용이 일어나고 반응 혼합물에 존재하는 보체는 면역 체계에 의해 고정됩니다. 이 경우 지시약을 첨가하면 보체가 없어 용혈이 일어나지 않는다(반응은 양성이다). 분석된 항체가 항원에 흡착되지 않으면 반응 혼합물의 보체는 유리 상태로 유지되며 용혈 시스템이 추가되면 용혈이 발생합니다(음성 반응).
Bordet과 Zhang이 개발한 혈청학적 분석 방법의 원리는 진단 실습과 연구 작업에 사용되는 반응의 수많은 변형의 기초를 형성했습니다.
적혈구의 100% 용해가 기록되는 기존 RSC에는 보체의 예비 적정이 필요합니다. 후자는 필요한 양을 초과하지 않는 용량으로 면역 체계에 추가됩니다. 용혈반응. 반응 설정 계획은 목적에 따라 결정됩니다. 실험에서는 일정한 함량의 혈청과 보체에서 다양한 용량의 항원을 테스트할 수 있으며, 일정한 용량의 항원과 보체에서 다양한 혈청 희석액 등을 테스트할 수 있습니다. 반응의 성분은 다음과 같습니다. 1) 테스트 혈청, 30분 동안 가열합니다. 그 안에 존재하는 보체를 비활성화하기 위해 56°에서; 2) 항원(박테리아 현탁액, 이들로부터 추출된 단백질, 다당류 등을 사용함), 동식물 세포 추출물, 바이러스 등 3) 보체 - 신선한 혈청 기니피그, 4) 용혈 시스템(감작된 양 적혈구) - 5% 적혈구 현탁액을 용혈 혈청과 30분간 접촉시켰습니다. t° 37°에서.
성분을 희석하려면 생리식염수(NaCl) 용액을 사용하세요. 반상보성 개별 성분대조 샘플에서 테스트되었습니다. 반응의 첫 번째 단계(항체 흡착)는 t° 37°에서 60분 동안 수행됩니다. 또는 4~6°에서 18~20시간 동안. (추위에 RSK). 후자의 경우 보체의 보다 완전한 고정이 발생하여 방법의 민감도가 증가합니다. 두 번째 단계에서 반응 혼합물은 t° 37°로 유지됩니다. 결과는 대조 샘플에서 100% 용혈되는 순간에 기록됩니다.
진단 실습에서는 Bordet Zhangou 반응을 변형한 보체 고정 반응의 "간접" 방법과 활성 방법이 사용됩니다. 첫 번째 반응 지표는 시험 혈청의 보체 함량 변화입니다. 두 번째는 일부 질병의 경우 혈청에 보체 고정 항체가 포함되어 있지 않지만 보체 고정 활성이 있는 혈청과 반응을 예방할 수 있다는 사실에 기초합니다.
부분 용해 영역에서 용혈을 기록하는 정량적 RSC에는 최고의 감도와 정확성이 내재되어 있습니다. Bordet Zhangou 반응의 이러한 변형에 대한 민감도는 다음과 같습니다. 중간 구역용해(20-80%), 용해된 적혈구 양에 대한 보체 양의 비율은 선형입니다. 이 반응의 기초는 특별한 방법보체의 적정량은 50% 단위(CH50)로 표시되며 부분 용해 영역에서 용혈의 진행을 나타내는 Krogh 방정식을 기반으로 계산됩니다.
용혈 정도는 분광 광도계 또는 광전 색도계를 사용하여 결정됩니다.
정량적 RSC에는 여러 가지 수정 사항이 있습니다. 특히, 마이크로법은 낮은 성분 소모로 더 높은 측정 정확도를 제공합니다.
; 2) 용혈 시스템이 있을 때 반응의 발현 ().
RSC 단계를 수행하기 위해 연구 대상 개체(항체 및 항원)를 보체 존재 하에서 상호작용을 보장하는 조건에 배치합니다. 그런 다음 "지표"(용혈 시스템)가 분석되는 면역 시스템에 추가됩니다. 보체가 면역체계에 의해 고정되면 용혈이 발생하지 않습니다(양성 RSC; 그림, a). 면역 체계가 보체를 고정하지 않고 그 구성 요소가 서로 일치하지 않으면 용혈이 발생합니다(음성 RSC, 그림, b). 반응 성분: 1) 피험자, 30분간 가열하여 비활성화. t° 56°에서; 2) 항원(박테리아 현탁액, 장기 및 조직 추출물); 3) 보체(신선한 기니피그 혈청); 4) 용혈 시스템(t° 37°에서 30분 동안 용혈 혈청과 함께 배양된 감작된 양). 성분을 희석하려면 등장성 염화나트륨 용액을 사용하십시오. RSC의 첫 번째 단계는 60분 동안 지속됩니다. t° 37° 또는 18-20시간. t° 4-6°(보다 민감한 RSC), 두 번째 단계 - 60분. t° 37°에서.
보체 고정 반응 계획 : a - 양성; b - 부정. 1 - 보완; 2 - 환자 혈청; 3 - 건강한 혈청; 4 - 항원; 5 - 용혈성 혈청; 6 - 양 적혈구.
Bordet-Giang 반응은 항원-항체 복합체의 자유 보체 고정 특성에 기초한 면역학적 반응입니다. RSC는 2단계로 발생합니다: 1) 항원에 대한 항체의 흡착, 2) 보체의 존재를 요구하는 반응의 발현(세균 분해 또는 용혈). 보체 존재에 대한 세균분해 반응의 의존성은 Bordet-Zhangu 반응에서 항원과 항체의 상호작용을 확인하는 것을 가능하게 합니다. 이 반응에서 항체 순응도의 지표는 반응 혼합물에 "지표" 용혈 시스템을 추가하여 감지되는 해당 면역 시스템에 의한 보체의 고정입니다.
Bordet-Giangou 반응은 두 단계로 수행됩니다. 첫째, 연구 중인 항원과 항체를 보체 존재 하에서 상호 작용을 보장하는 조건에 놓고 흡착이 완료된 후 용혈 시스템(용혈소 + 적혈구)을 추가합니다. 면역 체계를 분석하고 있습니다. 항원과 항체가 일치하면 상호 작용이 일어나고 반응 혼합물에 존재하는 보체는 면역 체계에 의해 고정됩니다. 이 경우 지시약을 첨가하면 보체가 없어 용혈이 일어나지 않는다(반응은 양성이다). 분석된 항체가 항원에 흡착되지 않으면 반응 혼합물의 보체는 유리 상태로 유지되며 용혈 시스템이 추가되면 용혈이 발생합니다(음성 반응).
Bordet과 Zhang이 개발한 혈청학적 분석 방법의 원리는 진단 실습과 연구 작업에 사용되는 반응의 수많은 변형의 기초를 형성했습니다.
적혈구의 100% 용해가 기록되는 기존 RSC에는 보체의 예비 적정이 필요합니다. 후자는 용혈 반응에 필요한 양을 초과하지 않는 용량으로 면역 체계에 추가됩니다. 반응 설정 계획은 목적에 따라 결정됩니다. 경험상 그들은 경험할 수 있다 다른 복용량일정한 함량의 혈청 및 보체로 항원, 일정한 용량의 항원 및 보체로 혈청을 다양한 희석 등. 반응의 성분은 다음과 같습니다: 1) 시험 혈청, 30분 동안 가열. 그 안에 존재하는 보체를 비활성화하기 위해 56°에서; 2) 항원 (박테리아 현탁액, 그로부터 추출된 단백질, 다당류 등을 사용함), 동식물 세포 추출물, 바이러스 등, 3) 보체 - 기니피그의 신선한 혈청, 4) 용혈 시스템 ( 감작 된 양 적혈구) - 5% 적혈구 현탁액을 용혈성 혈청과 30분간 접촉시켰습니다. t° 37°에서.
성분을 희석하려면 생리식염수(NaCl) 용액을 사용하세요. 개별 성분의 항상보성은 대조 샘플에서 테스트됩니다. 반응의 첫 번째 단계(항체 흡착)는 t° 37°에서 60분 동안 수행됩니다. 또는 4~6°에서 18~20시간 동안. (추위에 RSK). 후자의 경우 보체의 보다 완전한 고정이 발생하여 방법의 민감도가 증가합니다. 두 번째 단계에서 반응 혼합물은 t° 37°로 유지됩니다. 결과는 대조 샘플에서 100% 용혈되는 순간에 기록됩니다.
진단 실습에서는 Bordet-Zhangou 반응을 변형한 보체 고정 반응의 "간접" 방법과 활성 방법이 사용됩니다. 첫 번째 반응 지표는 시험 혈청의 보체 함량 변화입니다. 두 번째는 일부 질병의 경우 혈청에 보체 고정 항체가 포함되어 있지 않지만 보체 고정 활성이 있는 혈청과 반응을 예방할 수 있다는 사실에 기초합니다.
부분 용해 영역에서 용혈을 기록하는 정량적 RSC에는 최고의 감도와 정확성이 내재되어 있습니다. Bordet-Giangou 반응의 이러한 변형의 민감도는 용해의 중간 영역(20-80%)에서 용해된 적혈구 수에 대한 보체 양의 비율이 선형이라는 사실에 기인합니다. 이 반응은 보체 적정의 특별한 방법을 기반으로 하며 그 양은 50% 단위(C H50)로 표시되며 부분 용해 영역에서 용혈의 진행을 나타내는 Krogh 방정식을 기반으로 계산됩니다. 방정식에 따르면, 
어디 엑스- 취해진 보체의 양, 와이는 1의 분수로 표현된 용혈 정도이고, k는 50% 용해를 제공하는 보체의 용량이며, 1/n은 용혈 곡선의 기울기 정도를 나타냅니다.
용혈 정도는 분광 광도계 또는 광전 색도계를 사용하여 결정됩니다.
정량적 RSC에는 여러 가지 수정 사항이 있습니다. 특히, 마이크로법은 낮은 성분 소모로 더 높은 측정 정확도를 제공합니다.