Мокрота - патологическое отделяемое органов дыхания, выбрасываемое при кашле и отхаркивании (нормальный секрет бронхов настолько незначителен, что устраняется без отхаркивания). В состав мокроты могут входить слизь, серозная жидкость, клетки крови и дыхательных путей, элементы распада тканей, кристаллы, микроорганизмы, простейшие, гельминты и их яйца (редко). Исследование мокроты помогает установить характер патологического процесса в органах дыхания, а в ряде случаев определить его этиологию.

Мокроту для исследования лучше брать утреннюю, свежую, по возможности до еды и после полоскания рта. Однако для обнаружения микобактерий туберкулеза мокроту, если больной выделяет ее мало, нужно собирать в течение 1-2 суток. В несвежей мокроте размножается сапрофитная флора, разрушают форменные элементы.

Суточное количество мокроты колеблется в широких пределах - от 1 до 1000 мл и более. Выделение сразу большого количества мокроты, особенно при перемене положения больного, характерно для мешотчатых бронхоэктазов и образования бронхиального свища при эмпиеме плевры. Изучение мокроты начинают с ее осмотра (т.е. макроскопического исследования) сначала в прозрачной банке, а затем в чашке Петри, которую ставят попеременно на черный и белый фон. Отмечают характер мокроты, понимая под этим различимые на глаз основные ее компоненты. От последних зависит и цвет мокроты, и ее консистенция.

Слизистая мокрота обычно бесцветная или слегка беловатая, вязкая; отделяется, например, при остром бронхите. Серозная мокрота тоже бесцветная, жидкая, пенистая; наблюдается при отеке легкого. Слизисто-гнойная мокрота желтого или зеленоватого цвета, вязкая; образуется при хроническом бронхите, туберкулезе и т. д. Чисто гнойная , однородная, полужидкая, зеленовато-желтая мокрота характерна для абсцесса при его прорыве. Кровянистая.мокрота может быть как чисто кровяной при легочных кровотечениях (туберкулез, рак, бронхоэктазы), так и смешанного характера, например слизисто-гнойная с прожилками крови при бронхоэктазах, серозно-кровянистая пенистая при отеке легкого, слизисто-кровянистая при инфаркте легкого или застое в малом круге кровообращения, гнойно-кровянистая, полужидкая, коричневато-серая при гангрене и абсцессе легкого. Если кровь выделяется небыстро, гемоглобин ее превращается в гемосидерин и придает мокроте ржавый цвет, характерный для крупозной пневмонии.

При стоянии мокрота может расслаиваться. Для хронических нагноительных процессов характерна трехслойная мокрота: верхний слой слизисто-гнойный, средний - серозный, нижний- гнойный. Чисто гнойная мокрота разделяется на 2 слоя-серозный и гнойный.

Запах у мокроты чаще отсутствует. Зловонный запах свежевыделенной мокроты зависит либо от гнилостного распада ткани (гангрена, распадающийся рак, либо от разложения ободков мокроты при задержке ее в полостях (абсцесс, бронхоэктазы).

Из отдельных элементов, различимых простым глазом, в мокроте могут быть обнаружены спирали Куршмана в виде небольших плотных извитых беловатых нитей; сгустки фибрина - беловатые и красноватые древовидно разветвленные образование встречаемые при фибринозном бронхите, изредка при пневмонии; чечевицы - небольшие зеленовато-желтые плотные комочки, состоящие из обызвествленных эластических волокон, кристаллов, холестерина и мыл и содержащие микобактерий туберкулеза; пробки Дитриха , сходные с чечевицами по виду и составу, но не содержащие МБТ и издающие при раздавливании зловонный запах (встречаются при гангрене, хроническом абсцессе, гнилостном бронхите); зерна извести , обнаруживаемые при распаде старых туберкулезных очагов; друзы актиномицетов в виде мелких желтоватых зернышек, напоминающих манную крупу; некротизированные кусочки ткани легкого и опухолей; остатки пищи.

Реакция среды в мокроте, как правило, щелочная, кислой она становится при разложении и от примеси желудочного сока, что помогает дифференцировать кровохарканье от кровавой рвоты.

Микроскопическое исследование мокроты производится как в нативных, так и в окрашенных препаратах. Для первых из налитого в чашку Петри материала отбирают гнойные, кровянистые, крошковатые комочки, извитые белые нити и переносят их на предметное стекло в таком количестве, чтобы при накрывании покровным стеклом образовался тонкий полупрозрачный препарат. Последний просматривают сначала при малом увеличении для первоначальной ориентировки и поисков спиралей Куршмана, а затем при большом увеличении для дифференцирования форменных элементов. Спирали Куршмана представляют собой тяжи слизи, состоящие из центральной плотной осевой нити и спиралеобразно окутывающей ее «мантии», в которую бывают вкраплены лейкоциты (часто эозииофильные) кристаллы Шарко-Лейдена. Спирали Куршмана появляются в мокроте при спазме бронхов, чаще всего при бронхиальной астме, реже при пневмонии, раке легкого.

При большом увеличении в нативном препарате можно обнаружить лейкоциты, небольшое количество которых имеется в любой мокроте, а большое - при воспалительных и, в частности, нагноительных процессах; эозинофильные лейкоциты можно отличить в нативном препарате по однородной крупной блестящей зернистости, но легче их узнать при окраске. Эритроциты появляются при разрушении ткани легкого, при пневмонии, застое в малом круге кровообращения, инфаркте легкого и т. Плоский эпителий попадает в мокроту преимущественно из полости рта и не имеет диагностического значения. Цилиндрический мерцательный эпителий в небольшом количестве присутствует в каждой мокроте, в большом - при поражениях дыхательных путей (бронхит, бронхиальная астма). Альвеолярные макрофаги - крупные клетки (в 2-3 раза больше лейкоцитов) ретикулоэндотелиального происхождения. Цитоплазма их содержит обильные включения. Последние могут быть бесцветными (миелиновые зерна), черными от частиц угля (пылевые клетки) или желто-коричневыми от гемосидерина («клетки сердечных пороков», сидерофаги). Альвеолярные макрофаги в небольшом количестве имеются в каждой мокроте, их больше при воспалительных заболеваниях; клетки сердечных пороков встречаются при попадании эритроцитов в полость альвеол; при застое в малом круге кровообращения, особенно при митральном стенозе; при инфаркте легкого, кровоизлияниях, а также при пневмонии. Для более достоверного их определения производят так называемую реакцию на берлинскую лазурь: немного мокроты помещают на предметное стекло, добавляют 1-2 капли 5 % раствора желтой кровяной соли, через 2-3 минуты столько же 2% раствора хлористоводородной кислоты, перемешивают и накрывают покровным стеклом. Через несколько минут зерна гемосидерина окрашиваются в синий цвет.

Клетки злокачественных опухолей нередко попадают в мокроту особенно если опухоль растет эндобронхиально или распадается. В нативном препарате эти клетки выделяются своим атипизмом: большими размерами, различной,. часто уродливой формой, крупным ядром, иногда многоядерноствю. Однако при хронических воспалительных процессах в бронхах выстилающий их эпителий метаплазируется, приобретает атипические черты, мало отличающиеся от таковых при опухолях. Поэтому определить клетки как опухолевые можно только в случае нахождения комплексов атипических и притом полиморфных клеток, особенно если они располагаются на волокнистой основе или совместно с эластическими волокнами. К установлению опухолевой природы клеток следует подходить очень осторожно и искать подтверждения в окрашенных препаратах.

Эластические волокна появляются в мокроте при распаде легочной ткани: при туберкулезе, раке, абсцессе. При гангрене они чаще отсутствуют, так как растворяются ферментами анаэробной флоры. Эластические волокна имеют вид тонких двухконтурных изогнутых волоконец одинаковой на всем протяжении толщины, дихотомически ветвящихся, сохраняющих альвеолярное расположение. Так как они обнаруживаются далеко не в каждой капле мокроты, для облегчения поисков прибегают к методике их концентрации. Для этой цели к нескольким миллилитрам мокроты прибавляют равное или двойное количество 10% едкого натра и нагревают до растворения слизи. При этом растворяются и все форменные элементы мокроты, кроме эластических волокон. После охлаждения жидкость центрифугируют, прибавив к ней 3-5 капель 1% спиртового раствора эозина, осадок микроскопируют. Эластические волокна сохраняют описанный выше характер и хорошо выделяются ярко-красным цветом.

Актиномицеты отыскивают, выбирая из мокроты мелкие плотные желтоватые крупинки. У раздавленной под покровным стеклом в капле глицерина или щелочи друзы под микроскопом видна центральная часть, состоящая из сплетения мицелия, и окружающая ее зона лучисто расположенных колбовидных образований. При окрашивании раздавленной друзы по Граму мицелий приобретает фиолетовую, а колбочки розовую окраску.

Из других грибков, встречающихся в мокроте, наибольшее значение имеет Candida albicans, поражающий легкие при длительном лечении антибиотиками и у очень ослабленных больных. В нативном препарате обнаруживаются почкующиеся дрожжеподобные клетки и ветвистый мицелий, на котором споры расположены мутовками.

Из кристаллов в мокроте обнаруживаются кристаллы Шарко-Лейдена - бесцветные октаэдры различной величины, напоминающие по форме стрелку компаса. Они состоят из белка, освобождающегося при распаде эозинофилов. Поэтому они встречаются в мокроте, содержащей много эозинофилов; как правило, их больше в несвежей мокроте. После легочных кровотечений, если кровь выделяется с мокротой не сразу, можно обнаружить кристаллы гематоидина - ромбические или игольчатые образования желто-бурого цвета.

Для проведения данных исследований необходимо следующее оснащение рабочего места:

1. Предметные и покровные стекла.
2. Чашки Петри.
3. Зубоврачебные шпатель и игла.
4. Черная и белая бумага.
5. Микроскоп.
6. Газовая или спиртовая горелка.
7. Смесь Никифорова.
8. Краска Романовского.
9. Едкий натр.
10. Эозин.
11. Желтая кровяная соль.
12. Концентрированная соляная кислота.
13. Метиленовая синька.
14. Вода.
15. Спички.

Отбор материала и приготовление препаратов для микроскопического исследования

Мокроту, помещенную в чашку Петри, распластывают с помощью шпателя и иглы до получения полупрозрачного слоя (шпатель и иглу захватывают правой и левой рукой в виде писчего пера); это делают очень осторожно, чтобы не разрушить имеющиеся в мокроте образования. Полупрозрачный слой мокроты изучают с целью выявления в нем линейных и округлых частиц и образований, клочков, отличающихся по цвету и консистенции. Для этого чашку Петри с мокротой располагают попеременно на белом и черном фоне. Найденные образования выделяют из основной массы (слизи, гноя, крови) режущими движениями инструментов, стараясь не повредить выделенные частицы. Полноценным приготовленный препарат будет лишь в том случае, если будут последовательно отобраны все интересующие исследователя частицы и образования. Отобранный материал помещают на предметное стекло. При этом более плотные по консистенции частицы помещают ближе к центру намечаемого препарата, а менее плотные, так же как и слизисто-гнойные, гнойно-слизистые, кровянисто окрашенные образования, — по периферии. Материал покрывают стеклом. Обычно на одном предметом стекле готовят два препарата, что обеспечивает максимальный просмотр отобранного материала. В правильно приготовленных препаратах мокрота не выходит за пределы покровного стекла.

Если мокрота вязкой или тягучей консистенции, то на покровное стекло слегка надавливают, чтобы равномернее распределить материал. Препараты, предназначенные для микроскопического исследования, изучают вначале под малым, а затем под большим увеличением микроскопа при опущенном конденсоре.

Важно уметь находить различные элементы мокроты не только при большом, но и при малом увеличении.

Изучение элементов мокроты, встречающихся в препаратах при микроскопическом исследовании

1. Слизь — волокнистая или сетевидная, вместе с форменными эле¬ментами (лейкоцитами, эритроцитами), сероватого цвета.

2. Эпителий — плоский, круглый (альвеолярные макрофаги), цилиндрический (мерцательный).

Плоский эпителий имеет форму полигональных бесцветных клеток с обильной цитоплазмой и одним ядром.
Эпителий цилиндрический, мерцательный (бронхов) (рис. 51, 3) представляет собой продолговатой формы клетки, один из концов которых сужен, а на другом — тупом — нередко видны реснички; ядро, круглой или овальной формы, расположено эксцентрично в широкой части клетки; цитоплазма содержит мелкую зернистость. Иногда (при бронхиальной астме) эпителий бронхов выявляется в виде железистоподобных образований, которые в свежевыделенной мокроте имеют движущиеся реснички.

Рис. 51. Клеточные элементы в мокроте и эластические волокна: лейкоциты (1), альвеолярные макрофаги (2), эпителий бронхов (3), миелин (4), эластические волокна простые (5), коралловидные (6), обызвествленные (7).

Альвеолярные макрофаги — это круглой формы клетки по размерам в несколько раз больше лейкоцитов, с выраженной зернистостью в цитоплазме, из-за которой в большинстве случаев не видно ядра. Зернистость обычно сероватого цвета. Подвергаясь, жировому перерождению, альвеолярные макрофаги становятся более темными, так как капли жира, накапливающиеся в клетке, сильнее преломляют лучи проходящего через них света.

При наличии угольного пигмента часть зернистости приобретает черный цвет. У курильщиков альвеолярные макрофаги содержат буровато-желтую зернистость. Золотисто-желтая зернистость обусловлена наличием в альвеолярных макрофагах кровяного пигмента, содержащего железо (гемосидерин). С целью обнаружения гемосидерина в мокроте используют химическую реакцию.

С препарата, в котором были обнаружены альвеолярные макрофаги с лимонно-желтой или золотисто-желтой зернистостью, снимают покровное стекло. Мокроту подсушивают на воздухе. На 8-10 минут на препарат наливают реактив (смесь равных объемов 3% раствора соляной кислоты и 5% раствора желтой кровяной соли). Через 8-10 минут реактив сливают. Препарат накрывают покровным стеклом и изучают под большим увеличением.
При наличии гемосидерина альвеолярные макрофаги окрашиваются в синий (голубой) цвет (рис. 52).

Рис. 52. Реакция на гемосидерин в мокроте. 1 - до окраски, 2 - после окраски.

3. Миелин (рис. 51, 4) — различной формы матово-серые образования, которые могут находиться в мокроте внеклеточно, а также внутри альвеолярных макрофагов.

Для отличия миелина от капелек жира используют микрореакцию: к материалу, в котором был обнаружен миелин, осторожно прибавляют одну каплю концентрированной H2SO4; при этом миелин окрашивается в оттенки от фиолетового до красного цвета.

4. Нейтрофилы . Морфологически нейтрофилы напоминают лейкоциты, встречающиеся в моче. В гнойной мокроте происходит разрушение лейкоцитов, поэтому в некоторых местах препарата находят зернистую бесструктурную массу (детрит).

5. Эозинофилы . Имеют ряд отличительных от нейтрофилов признаков. Они несколько больше их по размеру, содержат крупную зернистость, благодаря чему выглядят более темными. Их скопления при малом увеличении имеют желтоватый оттенок. Особенно много эозинофилов содержится в желтоватых рассыпчатых клочках мокроты больных бронхиальной астмой. Иногда среди эозинофилов находят кристаллы Шарко-Лейдена. Для более точного распознавания эозинофилов препарат окрашивают.

Техника окраски эозинофилов. Мокроту распределяют по предметному стеклу. Препарат высушивают на воздухе и фиксируют над пламенем горелки. Теплое стекло помещают на 3 минуты в 0,5% спиртовой раствор эозина, а затем промывают водой и красят в течение нескольких секунд 0,5-1% водным раствором метиленовой синьки. Вновь промывают водой, высушивают и изучают под микроскопом с иммерсией. В эозинофилах выявляют красную зернистость (рис. 53). Окрасить эозинофилы можно также способом Романовского. С этой целью препарат окрашивают точно так же, как мазки крови, но только меньше времени (8-10 минут).

Рис. 53. Эозинофильные лейкоциты в мокроте (масляная иммерсия).

6. Эритроциты — неизмененные выглядят так же, как и в моче. В бурых кровянистых частицах они обычно не обнаруживаются.

7. Жирно-зернистые клетки (рис. 54, 1) — округлой формы, в несколько раз больше лейкоцитов, содержат жировые капельки, сильно преломляющие свет.

8. Клетки злокачественных новообразований (рис. 54, 2) — разных размеров, жиро- и вакуольно-перерожденные. Встречаются отдельно и в виде тесных округлых групп или стержневидных образований, луковиц и пр.

Рис. 54. 1 — жирно-зернистые клетки; 2 — железистоподобная группа из атипического эпителия при железистом раке легкого. Нативный препарат. Увеличение 300х. Микрофотография.

9. Эластические волокна (см. рис. 51, 5, 6, 7):

а) простые эластические волокна — блестящие, тонкие, нежные двуконтурные образования, толщина которых равномерна на всем протяжении. Встречаются скоплениями среди гнойных частиц и в мелких плотноватых клочках, в виде обрывков и единичных волокон среди казеозного распада;

б) коралловидные эластические волокна. Представляют собой простые эластические волокна, покрытые мылами. В связи с этим они лишены блеска, грубее и толще простых эластических волокон;

в) обызвествленные эластические волокна. Они грубее и толще простых эластических волокон, часто фрагментированы, некоторые из них напоминают палочковидные образования. Наиболее часто этот вид волокон располагается среди аморфной массы солей извести и капелек жира, что называют обызвествляющим жировым казеозным распадом. Обызвествляющий жировой казеозный распад, обызвествленные эластические волокна, кристаллы холестерина и микобактерии туберкулеза называют тетрадой Эрлиха.

Элементы тетрады Эрлиха легче обнаружить, если при тщательном макроскопическом исследовании мокроты отобрать беловатые рассыпчатые клочки.

В некоторых случаях для отличия коралловидных волокон от обызвествленных используют микрохимическую реакцию. К исследуемому материалу добавляют 1-2 капли 10-20% раствора NaOH; мыла, покрывающие коралловидные волокна, растворяются, и из-под их покрова освобождаются простые эластические волокна; обызвествленные эластические волокна под влиянием воздействия щелочи не изменяются. При обнаружении в нативном препарате эластических волокон препарат обязательно окрашивают по Цилю-Нильсену. В некоторых случаях прибегают к обработке мокроты с целью обнаружения простых эластических волокон.

Техника обработки мокроты с целью выявления эластических волокон . К небольшому количеству мокроты прибавляют равный объем 10% раствора щелочи; смесь нагревают до растворения, а затем разливают в две центрифужные пробирки и центрифугируют, предварительно добавив по 5-8 капель 1% спиртового раствора эозина. Из осадка готовят препарат и рассматривают под микроскопом. Эластические волокна окрашиваются в оранжево-красный цвет (рис. 55).

Рис. 55. Эластические волокна в мокроте.

10. Фибрин — имеет форму тонких волоконец, расположенных параллельными пучками пли сетевидно.

11. Кристаллы гематоидина — ромбовидные или игольчатые, красновато-оранжевого цвета.

12. Холестерин — бесцветные таблички со ступенчатообразными уступами.

13. Кристаллы Шарко-Лейдена (рис. 56) — ромбовидные, бесцветные кристаллы, напоминающие стрелку магнитного компаса.

Рис. 56. Эозинофилы, кристаллы Шарко-Лейдена, спираль Куршмана.

14. Кристаллы жирных кислот (рис. 57) — имеют вид длинных слегка изогнутых серых игольчатых образований.

15. Спираль Куршмана (см. рис. 56) — слизистое, спиралевидное закругленное образование, имеющее центральную нить и мантию. В некоторых случаях спираль имеет либо центральную нить, либо мантию. Наряду со спиралью часто в одном и том же препарате обнаруживают эозинофилы и кристаллы Шарко-Лейдена.

16. Пробка Дитриха (см. рис. 57) — беловатого или желтовато-сероватого цвета комочки творожистой копсистенции, иногда со зловонным запахом, сходные по форме с зернами чечевицы. Состоят из кристаллов жирных кислот, нейтрального жира, детрита и скоплений бактерий.

Рис. 57. Пробка Дитриха. Иглы жирных кислот; жир нейтральный; детрит. Нативный препарат. Увеличение 280х.

17. Рисовидные тельца — округлые, плотные образования. Содержат скопления коралловидных волокон, продуктов жирового распада, мыла, кристаллы холестерина и большое количество микобактерий туберкулеза.

18. Друзы актином ицетов (рис. 58) — при малом увеличении представляют собой округлые образования с резко очерченными контурами, желтоватого цвета, с аморфной серединой и с более темной окраской по краям; при большом увеличении центр друзы представляет собой скопление лучистого грибка, нити которого на периферии заканчиваются колбовидными вздутиями. При окраске по Граму нити мицелия грибка грамположительны, а колбовидные вздутия грамотрицательны.

Рис. 58. Друзы актиномицетов.

19. (рис. 59) — хитиновая оболочка эхинококкового пузыря (в тонких местах прозрачна и имеет нежную параллельную исчерченность), крючья и сколексы эхинококка.

Рис. 59. Элементы эхинококка. 1 - пленка эхинококкового пузыря, 2 - крючья эхинококка, 3 - сколексы

Для микроскопического исследования мокроты прежде всего готовят неокрашенные (нативные) препараты мокроты. Полноценность исследования зависит от правильного приготов¬ления и количества просмотренных препаратов. Материал для исследования выбирают из разных мест и переносят металлической иглой на предметное стекло, затем покрывают покровным стеклом так, чтобы мокрота не выступала за его края.
Препараты должны быть тонкими, элементы в них должны располагаться однослойно. Микроскопию проводят сначала при малом увеличении микроскопа (объектив 8Х, окуляр 10Х), просмотр с малым увеличением дает представление о качестве выбранного материала, позволяет обнаружить скопление клеток, кристаллических образований, найти эластические волокна, спирали Куршмана, элементы новообразования. Дальнейшее исследование производится при большом увеличении микроскопа (объектив 40Х, окуляр 10Х).
При этом в мокроте можно обнаружить в большем или меньшем количестве лейкоциты и среди них по более темной окраске и наличию в цитоплазме обильной, четкой, преломляющей свет зернистости различить эозинофилы, наличие которых характерно для бронхиальной астмы и других аллергических состояний. Эритроциты в мокроте имеют вид желтоватых дисков. Единичные эритроциты встречаются в каждом виде мокроты, большое же их количество характерно для кровянистой мокроты и встречается при инфаркте легкого, легочных кровотечениях, застое в малом круге кровообращения.

В мокроте всегда можно обнаружить эпителий . Плоский эпителий попадает в мокроту из полости рта и носоглотки. Большое число клеток говорит о недостаточно хорошем туалете полости рта перед взятием мокроты для исследования.
Обнаружение в мокроте цилиндрического мерцательного эпителия, выстилающего слизистую оболочку гортани, трахеи и бронхов, свидетельствует о поражении соответствующих отделов. Клетки имеют удлиненную форму, расширение с одного конца, где расположено округлое ядро, и мерцательные реснички. Располагаются эти клетки группами, и в свежевыделенной мокроте можно наблюдать активное движение ресничек. При воспалительных процессах (бронхиты, пневмонии, профессиональные заболевания легких) в мокроте встречаются альвеолярные макрофаги - клетки гистиоцитарной системы. Это крупные клетки округлой формы с наличием в цитоплазме включений. Если альвеолярные макрофаги содержат гемосидерин, то их называют сидерофагами или образно «клетками сердечных пороков», так как они могут появиться при застое крови в легких, при декомпенсированных пороках сердца. С достоверностью выявить эти клетки можно реакцией обра¬зования берлинской лазури.

Бактериоскопия.

Этот этап исследования мокроты включает в себя микроскопию препаратов, окрашенных по Цилю-Нильсену, для выявления микобактерий туберкулеза и препаратов, окрашенных по Граму, для изучения микрофлоры мокроты. Иногда для выявления микобактерий туберкулеза прибегают к обогащению методом флотации. Препараты мокроты для бактериоскопического исследования, приготовленные на предметном стекле, высушивают, фиксируют над пламенем горелки и затем окрашивают.

Окраска по Цилю-Нильсену.

Реактивы:
Карболовый фуксин: 1 г основного фуксина растворяют в 10мл этилового спирта, раствор выливают в 100мл 5% раствора карболовой кислоты.
3% солянокислого спирта: 3 мл НСl и 97 мл этилового спирта
Водный 0,5% раствор метиленового синего

Ход окраски:

На препарат кладут кусочек фильтровальной бумаги и наливают раствор карболового фуксина, затем препарат нагревают над пламенем горелки до появления паров, охлаждают и снова нагревают (3 раза). После остывания препарата сбрасывают фильтровальную бумагу и опускают его в солянокислый спирт для обесцвечивания. Обесцвечивают до полного удаления краски, промывают водой и докрашивают метиленовым синим 20-30с. Снова промывают водой и высушивают на воздухе. Микроскопируют с иммерсионной системой.
Туберкулезные микобактерий окрашиваются в красный цвет, все остальные элементы мокроты и бактерии - в синий. Туберкулезные микобактерий имеют вид тонких, слегка изогнутых палочек различной длины с утолщениями на концах или посередине, располагаются группами и поодиночке.
При окраске по Цилю-Нильсену в красный-цвет красятся также кислотоупорные сапрофиты. Дифференциальная диагностика туберкулезных микобактерий и кислотоупорных сапрофитов ведется бактериологическими методами исследования

При исследовании следует избегать:
приготовления толстых мазков мокроты;
фиксации плохо высушенных мазков;
недостаточной фиксации;
обугливания препарата при длительной фиксации.

Если микобактерий выделяется мало, то в обычных мазках их не находят и прибегают к методу накопления.

Метод флотации (всплывание) по Поттенджеру.

Ход исследования:

Свежевыделенную мокроту (не более 10----15 мл) помещают в узкогорлую бутылку, приливают двойное количество 0,5% раствора едкой щелочи,-смесь энергично встряхивают 10-15 мин. Затем добавляют 1 мл ксилола (можно бензина, толуола) и около 30 мл дистиллированной воды для разжижения мокроты и снова встряхивают 10- 15 мин. Доливают дистиллированную воду в таком количестве, чтобы уровень жидкости поднялся до горлышка бутылки. Оставляют на 1 - 2 ч для отстаивания. Образовавшийся верхний беловатый слой снимают по каплям пипеткой и наносят на предметные стекла, предварительно подогретые до 60 °С (стекла для подогревания можно положить на металлический подносик и покрыть им водяную баню). Каждую последующую каплю наносят на предыдущую подсушенную. Препарат фиксируют и красят по Цилю-Нильсену.
Наиболее достоверные результаты в обнаружении микобактерий туберкулеза дают бактериологические методы исследования. Другие бактерии, встречающиеся в мокроте, например стрептококки, стафилококки, диплобациллы, палочки Фридлендера и пр., могут быть распознаны только методом посева. Бактериоскопическое исследование препарата в этих случаях имеет только ориентировочное значение. Препараты красят метиленовым синим, фуксином или по Граму.

Окраска по Граму.

Реактивы:
Карболовый раствор генцианового фиолетового: 1 г генцианового фиолетового растворяют в 10 мл 96 % спирта, раствор выливают в 100 мл 1 - 2 % карболовой кислоты, взбалтывают
Ра¬створ Люголя: 1 г йода, 2 г йодида калия и 300 мл дистиллированной воды; йод и йодид калия расстворяют сначала в 5-8 мл воды, а затем: приливают остальную воду
96 % спирт или сырец
10 % раствор карболового фуксина: 10 мл карболового фуксина и 90 мл дистиллированной воды

Ход исследования:

На фиксированный препарат кладут полоску фильтровальной бумаги и наливают раствор генцианового фиолетового. Красят 11/2-2 мин. Бумажку сбрасывают и заливают препарат раствором Люголя на 2 мин, а потом прополаскивают препарат в спирту до сероватого цвета. Промывают водой и окрашивают 10% раствором карболового фуксина 10-15 с. После этого препарат опять промывают водой, высушивают и микроскопируют с иммерсионным объективом.

Исследование мокроты.

У здорового человека за сутки мо жет образовываться до 50-100 мл секрета в трахеобронхиальном дереве. Он выделяется без кашля за счет содружественной работы реснитчатого эпителия и является защитной реакцией организм от вредного воздействия при вдыхании различных газов, пылевых частиц, микроорганизмов. В патологии, во время кашля, у больных может выделяться мокрота, содержащая продукты распада тканей, жизнедеятельности микроорганизмов, клетки крови и другие. Данное исследование имеет важное диагностическое значение для определения этиологии заболевания органов дыхания, характера патологического процесса, определения эффекта от лечения.

Для исследования мокроту собирают, как правило, утром,

до еды, в чистую прозрачную стеклянную посуду с плотнозавинчивающейся крышкой или притертой пробкой после полоскания полости рта кипяченой водой. Не рекомендуется попадание слюны в мокроту. При незначительном количестве мокроты, например, при туберкулезе, мокроту собирают в течение 1-2 суток.Исследование мокроты необходимо проводить как можно раньше(свежую) из-за разрушения клеточных элементов. Проводят макроскопическое, микроскопическое и бактериологическое исследование мокроты.

Макроскопическое исследование мокроты включает определение количества, запаха, цвета, характера, консистенции, слоистости, патологических примесей.

Количество выделяемой мокроты за сутки может колебаться от нескольких миллилитров до 1,5 литра («полным ртом») и зависит от характера патологических изменений, состояния больных,возраста. У детей, тяжелых больных и у лиц пожилого возраста может нарушаться кашлевой рефлекс и снижаться количество выделяемой мокроты. Незначительное количество выделяемой мокроты, до 50-70 мл обычно наблюдается у больных с пневмококковой пневмонией, острым и хроническим бронхитом, бронхиальной астмой. Выделение значительного количества мокроты,более 200 мл и даже 1-1,5 литра наблюдается при крупном абсцессе в стадии опорожнения, крупных бронхоэктазах, гангрен легкого, кавернозном туберкулезе.

Запах мокроты. Как правило, слизистая мокрота запаха не имеет. При распаде легочной ткани и белков мокроты (гангрена,абсцесс в стадии опорожнения, бронхоэктатическая болезнь) выделяемая мокрота обычно имеет неприятный гнилостный запах.

При этом больные, для уменьшения выделения такой мокроты занимают положение на больном боку. Врач должен попросить больного лечь на здоровую сторону для улучшения дренажной функции и более полного отхождения мокроты.

По характеру мокрота бывает слизистая (при бронхитах),серозная (при альвеолярном отеке легких), слизисто-гнойная

(пневмония, бронхоэктатическая болезнь, туберкулез легких),гнойная (абсцесс легких, бронхоэктатическая болезнь) и гнилостная (гангрена легких). Кровянистый характер мокроты может наблюдаться при легочном кровотечении, обильном кровохарканье

(туберкулез, абсцесс легких).

По консистенции мокрота бывает жидкая (при бронхитах,альвеолярном отеке легких), полужидкая (при абсцессе легких), крошковидная (гангрена легких) и вязкая (бронхиальная астма).

Деление на слои. При развитии патологического процесса в бронхолегочном аппарате образующаяся мокрота, помещенная в прозрачную стеклянную емкость, после стояния, может распределяться на три слоя. Однослойная слизистая без запаха мокрота встречается у больных с бронхитами; 2-х слойная, при которой верхний слой серозный, а нижний – гнойный, зеленовато-желтый встречается у больных с абсцессом легких; 3-х слойная мокрота:верхний – слизистый, средний – серозный, нижний – гнойный,состоящий из распадающейся легочной ткани встречается при гангрене легких.

Цвет мокроты зависит от состава, характера мокроты и наличия в ней примесей. Бесцветная (слизистая) мокрота характерна для бронхитов, желто-зеленая – при гнойных заболеваниях легких; алая при кровотечении; бурая, коричневая «ржавого»цвета – при пневмококковой пневмонии из-за появления в альвео-лах эритроцитов; розовая, «пенистая» – при альвеолярном отеке легких. При попадании в мокроту примесей, например, угольной пыли, она может иметь черный цвет.

Патологические примеси. При ряде заболеваний невооруженным взглядом можно обнаружить в мокроте спирали Куршмана (бронхиальная астма) – прозрачные, белого цвета извитые тяжи, чечевицы – плотные, небольшого размера желто-зеленого цвета образования, включающие в себя кристаллы холестерина,эластические волокна (туберкулез легких), пробки Дитриха, похожие на чечевицы, но не содержащие микобактерии туберкулеза и издающие неприятный запах при раздавливании (абсцесс и гангрена легких), друзы актиномицетов – мелкие зерна, как правило, желтого цвета, похожие на манную крупу, сгустки фибрина,участки распадающейся легочной ткани.

Микроскопическое исследование мокроты. Исследование проводится как неокрашенного (нативного), так и окрашенного по Граму или Циль-Нильсену препарата мокроты. Для приготовления нативного препарата берется наиболее измененная часть мокроты (гнойные, кровянистые или слизистые комочки) и помещается равномерно на предметное стекло. Затем материал покрывается покровным стеклом и осматривается сначала под малым, а затем большим увеличением.

В мокроте можно обнаружить:

1. Клеточные элементы:

– эпителиальные клетки из полости рта;

– лейкоциты и их дегенеративные формы при воспалительных заболеваниях, особенно гнойных;

– эритроциты при кровохарканье;

– альвеолярные макрофаги, содержащие в цитоплазме раз-

личные частицы: пыль, лейкоциты, кристаллы гемоси-

дерина (в этом случае они называются сидерофагами –

«клетки сердечных пороков» и встречаются при застое в

малом круге кровообращения);

– эозинофилы – при бронхиальной астме, эозинофильной

пневмонии;

– атипичные клетки – при распадающемся раке бронхов или легких.

2. Волокна:

– спирали Куршмана при бронхиальной астме и представляющие собой различного размера тяжи слизи, состоящие из тонкой и плотной осевой нити, окутанной спиралевидны-

ми извитыми волоконцами и содержащие лейкоциты, эозинофилы, кристаллы Шарко-Лейдена (см. ниже). Встречаются при бронхиальной астме;

– кристаллы Шарко-Лейдена – это бесцветны, белковой

природы продукты распада эозинофилов, имеющих форму октаэдров. Встречаются в основном при бронхиальной

астме. Следует заметить, что наличие эозинофилов, спиралей Куршмана и кристаллов Шарко-Лейдена (триада Эр-

лиха) характерна для бронхиальной астмы;

– эластические волокна, имеющие вид тонких блестящих

извитых нитей, образующиеся в мокроте при распаде легочной ткани (гангрена, абсцесс легких, туберкулез, распадающийся рак легких).

3. Кристаллы:

– Шарко-Лейдена (см. выше);гематоидина, – представляющие собой продукт распада гемоглобина различной формы, образующиеся при некрозе легочной ткани и легочном кровотечении;

– холестерина, образующиеся при распаде жира (абсцесс,туберкулема легких);

– кристаллы жирных кислот при абсцессе и гангрене легких.

Бактериологическое исследование мокроты. Это исследование проводится при иммерсионном микроскопировании окрашенного материала мокроты. Сначала мазок окрашивают по Граму, что позволяет выявить в мокроте грамположительную синего цвета (пневмококки, стафилококки, стрептококки) и грамотрицательную, красного цвета (кишечная палочка, амебиаз,палочку Пфейффера и другие) флору. При этом можно подсчитать примерное количество возбудителей. Затем при окраске по Циль-Нильсену можно обнаружить микобактерии туберкулеза,располагающиеся в мазках в виде «кучки» или поодиночке.Для более тонкого исследования инфекционного заболевания легких и определении эффективности лечения пациентов используют посев мокроты на питательные среды. При росте микроорганизмов, в эти среды помещают либо диски с антибиоти ами и по зонам задержки роста определяют эффективность препарата,либо готовят взвесь с культурой микроорганизмов с антибиотиками и определяют минимально подавляющую концентрацию лекарственного препарата.

Исследование плевральной жидкости . В норме в плевральной полости имеется небольшое количество жидкости (50-100мл), необходимое для скольжения листков плевры. В патологии,количество жидкости может увеличиваться. В этом случае применяют плевральную пункцию, как с диагностической, так и лечебной целью.

Техника плевральной пункции – больной обычно сидит на стуле, лицом к спинке в расслабленном состоянии. Предварительно больному проводят УЗИ плевральной полости или рентгеноскопию грудной клетки с целью определения точки для пункции. Обычноэто 7-8 межреберье по срединно-ключичной или заднеподмышечной линиям. Область для пункции обрабатывают спиртовым раствором йода, затем проводится местная анестезия 0,5% раствором лновокаина или лидокаином. Прокол делают по верхнему краю нижележащего ребра, так как по нижнему краю проходит сосудистонервный пучок. Длинную пункционную иглу с надетой на нее резиновой трубкой вводят перпендикулярно к грудной клетке и после попадания в плевральную полость снимают зажим с трубки и эвакуируют плевральную жидкость с помощью специального аппарата или шприцем в зависимости от количества. Извлеченную жидкость отправляют на исследование, а через иглу может быть введен лекарственный препарат с лечебной целью. Затем иглу извлекают,место прокола обрабатывают йодом и накладывают стерильную повязку. Затем проводят повторный рентгенконтроль для оценки не только количества оставшейся жидкости, но и выявления возможной патологии легких, которая была не видна из-за жидкости.Следует помнить, что крови в игле может свидетельствовать о повреждении сосуда или легочной ткани.

Противопоказания для пункции:

1. Выраженное нарушение гемостаза.

2. Портальная гипертензия.

3. Крайне тяжелое состояние больного.

Полученная при плевральной пункции жидкость может быть воспалительного или невоспалительного характера. Для ее анализа проводят определение физико-химических, микроскопических и бактериологических свойств.

Бактериологическое исследование плевральной жидкости проводится с целью определения возбудителя заболевания,а также определения его чувствительности к антибактериальным препаратам . Для этого осадок после центрифугирования плевральной жидкости используют для посева на питательные среды и приготовления мазков. После окрашивания по Граму или ЦильНильсену проводят исследование. Важное диагнос-тическое значение имеет определение микобактерий туберкулеза, которое проводится методом флотации.

При актиномикозе легких в нативных препаратах мокроты кроме друз актиномицетов обычно обнаруживаются крупные ксантомные клетки, иногда в большом количестве. Поэтому при наличии этих клеток необходимо искать друзы актиномицетов.

Б) Дрожжевые грибы рода Candida - почкующиеся клетки и короткие почкующиеся нити псевдомицелия (клетки круглой или овальной формы, псевдомицелий - членистый, ветвистый, споры на нем располагаются мутовками).Встречаются при длительном лечении антибиотиками и у очень ослабленных больных.

Е) Аскариды. Известны случаи выделения с мокротой аскарид. У тяжелобольных аскариды иногда заползают в дыхательные пути. Описаны также единичные случаи нахождения личинок аскарид в мокроте.

Ж) Присутствие в мокроте простейших особенного значения не имеет. По-видимому, они поселяются в полостях, образующихся при гангрене, бронхоэктазе, туберкулезе. В редких случаях простейшие проникают в эти полости из кишечника через печень; встречаются амебы, представители жгутиковых (Trichomonas) и в редких случаях Balantidium coli.

6) Асбестовые тельца

При асбестозе легких (фиброзном воспалении, вызванном длительным вдыханием асбестовой пыли) иногда обнаруживаются тельца золотисто-желтого цвета длиной от 20 до 100 мкм очень своеобразной формы, состоящие как бы из дисков и брусков, нанизанных на ось. Иногда видна и центральная ось - так называемый кристалл. Встречаются также скопления мелких частиц, характеризующиеся резким преломлением света. Тельца представляют изменения асбестового волокна в органической среде.

Мокрота при асбестозе бывает слизистая или гнойная, содержит гигантские полинуклеарные фагоциты. Для нахождения телец ее подвергают следующей обработке: к мокроте приливают равный объем 10% раствори NaOH или Na2CO3, нагретый до 80°, смеси дают постоять до полного растворения слизи, после чего центрифугируют 10-15 минут, сливают жидкость с осадка, осадок взбалтывают с небольшим количеством воды, вторично центрифугируют и исследуют сначала со слабой сухой системой, затем для детального рассмотрения - с сильной сухой или иммерсионной системой. Обычно телец очень мало -1-2 в препарате.

Изучение окрашенных препаратов

Микроскопия окрашенных препаратов имеет целью изучение микробной флоры мокроты и некоторых ее клеток. Из последних наиболее важно определение клеток злокачественных опухолей.

Собранные из 4–6 разных мест гнойные частицы мокроты помещают на стекло, тщательно растирают другим предметным стеклом до гомогенной массы, высушивают на воздухе, фиксируют над пламенем горелки.

Окраска для изучения клеток крови в мокроте – окраска по Романовскому - Гимзе.

Окраска для бактериоскопического исследования – окраска по Граму - для распознования стрептококков, стафилококков, диплококков, диплобацилл, других микроорганизмов.

Грамположительные (синего цвета),

Грамотрицательные (красного цвета)

Для обнаружения атипических клеток используют окраску по Романовскому-Гимзе. Иногда в окрашенном или неокрашенном препарате можно обнаружить грибковую флору.

Для обнаружения микобактерий (КУМ – кислотоустойчивые микобактерии) – окраска по Цилю - Нильсену.

Окраска по Романовскому-Гимзе.

Сложный способ окраски простейших, животных клеток разных типов, а также некоторых бактерий. Краситель состоит из эозина, метиленового синего и азура, растворенных в метаноле или в смеси метанола с глицерином. Обладает полихромным действием, окрашивая ацидофильные структуры в разные тона красного цвета, базофильные - в тона от пурпурового до синего. Перед использованием продажный краситель разводят в дистил. воде или 0,01% фосфатном буфере с рН 7 до 5 - 20% концентрации по объему (чаще 1 -2 капли на 1 мл разбавителя). Для окраски фиксированный в жидком фиксаторе мазок опускают на 40 - 60 мин в бокс с красителем, промывают в стаканчике с буферным р-ром 30 с, тщательно высушивают и микроскопируют.

клеточные элементы

Лейкоциты. В мокроте встречаются те же виды лейкоцитов, что и в крови: нейтрофилы, лимфоциты и т.д. Точное дифференцирование их желательно производить на окрашенных препаратах.

А) Нейтрофилы обычно составляют главную массу клеточных элементов. Они рассеяны по всему препарату. От нейтрофилов крови они отличаются менее правильной формой: могут быть вытянуты, сплющены; соединения между сегментами ядра большей частью нарушены и клетка как бы содержит 3-4 круглых ядра. При деструктивных процессах встречаются настолько дегенерированные нейтрофилы, что их невозможно отличить от других дегенерированных клеток. Протоплазма таких клеток плохо воспринимает окраску. Степень дегенерации тем сильнее, чем тяжелее и длительнее заболевание.

Резко дегенерированные нейтрофилы встречаются при бропхоэктазах, туберкулезных кавернах, абсцессах легкого. Появление их в большом количестве служит указанием на ухудшение процесса, а при пневмонии должно возбуждать подозрение на начинающееся абсцедирование. В противоположность этому увеличение числа хорошо сохранившихся нейтрофилов является благоприятным симптомом и обычно сопутствует клиническому улучшению. В хорошо сохранив¬шихся нейтрофилах зернистость нередко окрашивается азур-эозином в чисто розовый цвет и может давать повод к смешению с эозинофильной зернистостью, отличаясь лишь тем, что она мелкая, точечная.

Б) Эозинофилы. Клетки сплошь заполнены крупной зернистостью. Клетки эти преломляют свет и кажутся светящимися. В отличие от эозинофилов крови в мокроте нередко встречаются эозинофилы с одним круглым ядром.

Эозинофилы в мокроте обычно распределены очень неравномерно. Местами они лежат кучками или тяжами, которые могут тянуться на несколько полей зрения. Вокруг клеток часто рассыпаны эозинофильные зерна. В других местах при просмотре ряда полей зрения не удается найти ни одного эозинофила. Поэтому, чтобы их найти, необходимо тщательно выбирать материал и исследовать весь препарат, а иногда и не один.

Содержание большого количества эозинофилов характерно для бронхиальной астмы, при которой они могут составлять до 60-90% всех лейкоцитов. Они встречаются также при так называемом эозинофильном бронхите, геморрагическом инфаркте легкого, иногда при туберкулезе, раковых метастазах в легком и, как правило, при глистных поражениях легкого (эхинококк, легочная дистома).

В) Лимфоциты в отличие от нейтрофилов и эозинофилов могут быть по только гематогенного, но и тканевого происхождения - из лимфоидной ткани глотки и слизистой бронхов. Те и другие морфологически тождественны с лимфоцитами крови. При острых легочных заболеваниях лимфоциты в мокроте почти не встречаются; при туберкулезе их также очень небольшое количество. В большом количество их находили при коклюше.

Г) Базофилы, моноциты встречаются изредка в единичных экземплярах.

Атипические клетки

Представляют собой крупные клетки необычной уродливой формы, содержащие одно или несколько ядер. Они выявляются в мокроте при злокачественных опухолях , свидетельствуя о распаде опухоли и ее эндобронхиальном росте, хотя частота их обнаружения при раке легкого невелика. Иногда атипичные клетки можно обнаружить у больных с хроническими формами туберкулеза легких и выраженной пролиферативной реакцией ткани. Следует также помнить, что многоядерные эпителиальные клетки, очень похожие по форме на атипичные клетки, могут выявляться при выраженной метаплазии эпителия бронхов у больных с хроническим бронхитом.

Окраска по Граму

По Граму бактерии окрашивают осно́вными красителями - генциановым или метиловым фиолетовым и др., затем краситель фиксируют раствором йода. При последующем промывании окрашенного препарата спиртом те виды бактерий, которые оказываются прочно окрашенными, называют грамположительными бактериями (обозначаются Грам (+)), - в отличие от грамотрицательных (Грам (−)), которые при промывке обесцвечиваются.

Грамположительные микроорганизмы окрашиваются в фиолетовый или фиолетовый с синим оттенком цвет, грамотрицательные микроорганизмы - в красный цвет.

А) Пневмококк (диплококк Френкеля) (Pneumococcus). Пневмококк. Диплококк ланцетовидной формы. Два кокка, из которых он состоит, обращены друг к другу тупыми концами, тогда как свободные концы их заострены или вытянуты в виде пламени свечи. Иногда встречают диплококки, состоящие из двух правильно овальных или даже круглых кокков. При благоприятных условиях можно обнаружить кап-улу, окружающую каждую пару кокков.

Пневмококк неподвижен, окраска по Граму положительна. Для обнаружения пневмококка в мокроте исследуют тонкий мазок, окрашенный по Граму. Пневмококки в таком мазке окрашены в темно-фиолетовый цвет в отличие от клеточных элементов и фона окрашенных в дополнительный розовый цвет. Бактериоскопическому исследованию можно придавать значение лишь в тех случаях, в которых пневмококк содержится в большом количестве, как в чистой культуре.

Б) Пневмобактерия Фридлендера (Bacterium Friedlanderi, Klebsiella pneumoniae). Пневмобактерии - короткие овоидные палочки, соединенные попарно и большей частью, хотя и не всегда, окруженные капсулой. Как и пневмококк, они неподвижны, но в отличие от него грам-отрицательны. Пневмобактерии Фридлендера могут вызывать пневмонию, сходную по клинической картине с крупозной пневмонией. Однако мокрота при ней не имеет специфического характера, чаще всего она слизисто - гнойная иногда с примесью крови.

В) Стрептококк (Streptococcus). Стрептококк имеет вид цепочек различной длины, состоящих из мелких, большей частью круглых кокков. Как и пневмококк, стрептококк неподвижен и грамположителен, стрептококк также может быть возбудителем пневмонии.

Г) Бактерия инфлюэнцы (Haemophilus influenzae) - один из самых мелких микроорганизмов, какие известны в бактериологии. Бактерия неподвижна, красится всеми анилиновыми красками, по Граму обесцвечивается.

Палочка инфлюэнцы, не являясь возбудителем гриппа, все же играет определенную роль при этом заболевании. По данным ряда авторов, она повышает патогенность гриппозного вируса. Для исследования нужно брать только свежую мокроту, так как при стоянии палочки сравнительно быстро исчезают.

Окраска по Циль-Нильсену

МБТ «кислотоустойчивые». В отличие от других бактерий, микобактерии способны удерживать красители (анилиновый краситель фуксин) даже после обработки обесцвечивающим раствором кислого спирта или 25 % кислоты.

Для проникновения красителя в бактериальную клетку ее клеточную стенку повреждают фенолом. В случае микроскопии по Цилю-Нильсену применяют подогрев мазка.

Для облегчения распознавания кислотоустойчивых бактерий микроскопистом, применяется контрастное по отношению к ним окрашивание фона.

Микобактерии или разбросаны по препарату единичными экземпляра или встречаются небольшими кучками. Длина их различна – от 0,002 до 0,006 мм. Большей частью бактерии прямые, иногда же они изогнуты, как бы надломлены, иногда состоят из отдельных зерен.

прямая (простая) микроскопия (окраской по Цилю – Нильсену) позволяет обнаружить микобактерии при их содержании более 5000-10000 микробных тел в 1мл материала.
Метод: быстрый, простой, эффективный;
позволяет визуализировать возбудителя, но не позволяет дифференцировать МБТ от атипичных микобактерий.

Результаты исследования кислотоустойчивых микобактерий методом простой микроскопии мазка.

Отрицательный - КУМ не обнаружены в 300полях зрения

Результат не оценивается - 1-2 КУМ в 300 полях зрения

Положительный - 1-9 КУМ в 100 полях зрения.

Положительный + - 10-99КУМ в 100 полях зрения

…> Кристаллы холестерина и жирных кислот

3. Детрит

При бронхоэктатической болезни:

1. Пробки Дитриха

2. Кристаллы холестерина, жирных кислот и гематоидина

3. Лейкоциты

При туберкулёзе лёгкого:

1. Тетрада Эрлиха

2. Рисовидные тельца

3. Эластические волокна

4. Различные кристаллы

5. Микобактерии туберкулёза (в окрашенном препарате)

Микроскопическое исследование мокроты.

Микроскопическое исследование мокроты проводят в свежих неокрашенных (нативных)и фиксированных окрашенных препаратах. При приготовлении препаратов необходим тщательный отбор материала. Прокаленной и остуженной лопаточкой или металлической петлёй из мокроты выбирают поочерёдно все подозрительные зёрнышки, кровяные прожилки, комочки и приготавливают из них препараты, помещая на предметное стекло.

Изучение нативного препарата.

Препарат готовят с помощью железных палочек с расплющенными концами.

Делается два нативных препарата на одном предметном стекле, в каждый из них берётся мокрота послепросмотра её попеременно на белом и чёрном фоне из трёх-четырёх мест (комочки, волокна и т.д.). Отобранные частицы мокроты, не размазывая, накрывают покровным стеклом и придавливают ручной лопаточки. Для исследования материал нужно брать в таком количестве, чтобы препарат не был слишком толстым, и чтобы принадавливании на покровное стекло содержимое не выступало за его края. Если это случилось, то рядом с первым покровным стеклом кладут второе, сдвинув первое немного в сторону. Приготовленный препарат исследуют под микроскопом вначале под малым увеличением (10 х 8), а затем под большим увеличением (10 х 40).

Элементы мокроты, которые обнаруживаются в нативном препарате можно разделить на группы: клеточные, волокнистые, кристаллическиеи комбинированные образования.

Клеточные элементы.

1. Плоский эпителий - это слущенный эпителий слизистой оболочки ротовой полости, носоглотки, надгортанника и голосовых связок, имеющий вид плоских тонких клеток с небольшим пикнотическим пузырчатым ядром и гомогенной цитоплазмой. Одиночные клетки плоского эпителия встречаются всегда, в большом количестве - при примеси слюны или воспалительных явлениях в ротовой полости. Диагностическое значение не имеет.

2. Цилиндрический эпителий - эпителий слизистой оболочки гортани, трахеи и бронхов, имеет вид удлинённых клеток с заострённым и вытянутым нижним концом, в котором расположено овальное ядро и тупым верхним концом. Более широкая часть клетки обращена в просвет бронха и снабженаресничками. Отторгнутые от слизистой оболочки клетки иногда видоизменяется (деформируются), приобретают грушевидную иливеретенообразную форму, при этом один из концов вытягивается в длинную нить, реснички сохраняются редко. Цилиндрический эпителий встречается в мокроте в виде скоплений в больших количествах при остром приступе бронхиальной астмы, остром бронхите, острых катаральных поражениях дыхательных путей, злокачественных новообразованиях.

3. Альвеолярный эпителий - круглые клетки, в 2-3 раза больше по диаметру, чем лейкоциты, и внешне сходны с ним (зернистая цитоплазма, округлое ядро, центрально расположенное ядро).

4. Альвеолярные макрофаги - клетки ретикулогистиоцитарного происхождения, имеют овальную или округлую форму, размер от 15 до 20-25 мкм, обычно одно (иногда больше) эксцентрично расположенное ядро, вакуолизированную цитоплазму, содержащую различные включения тёмно-бурого цвета. Они свободно передвигаются и обладают способностью к фагоцитозу. Макрофаги захватывают частички пыли, лейкоциты, эритроциты. Встречаются при различных воспалительных процессах в бронхах и лёгочной ткани (пневмонии, бронхиты, профессиональные заболевания лёгких). При хронических воспалительных заболеваниях выявляются жироперерождённые макрофаги (клетки с жировой дистрофией, липофаги ). Это клетки округлой формы, цитоплазма которых заполнена каплями жира (зернистые шары). Жир может быть окрашен суданом III в оранжевый цвет. Скопления таких клеток встречаются при злокачественных новообразованиях, туберкулёзе, актиномикозе. При застойных явлениях в лёгких, нарушение кровообращения в малом круге, инфаркте лёгкого, кровоизлиянияхпоявляютсямакрофаги, содержащие гемосидерин (сидерофаги) в виде золотисто-жёлтых включений в цитоплазме (старое название "клетки сердечных пороков"). Разрушаясьв ткани лёгкого, гемоглобин превращается в тканевой пигмент гемосидерин, который поглощают альвеолярные макрофаги. Ониопределяются реакцией на берлинскую лазурь, макрофаги окрашиваются в сине-зелёный (голубой) цвет.

5. Пылевые клетки (кониофаги)- это клетки с фагоцитированными частицами пыли, угля часто выявляются у людей с профессиональными заболеваниями лёгких (у курильщиков, работников табачной, мукомольной промышленности).

6. Гигантские клетки - овальные или круглые диаметром до 60 мкм, содержащие от 5 до 15 ядер, встречаются очень редко при туберкулёзе лёгких.

7. Опухолевые клетки - обычно крупные с одним или несколькими ядрами с ясной хроматиновой сетью или фигурами кариокинеза с вакуолизированной цитоплазмой. Встречаются в мокроте в виде одиночных клеток или конгломератов (комплексов). При обнаружении таких клеток препарат и остальную мокроту подвергают специальному тщательному цитологическому исследованию.

8. Лейкоциты - круглые клетки диаметром от 10-12 до 15 мкм с плохо различимым ядром, одинаковой обильной зернистостью, сероватого цвета. Встречаются почти в каждой мокроте; в слизистой - единичные, а в гнойной (при абсцессе лёгкого, туберкулёзе, бронхоэктазах) сплошь покрывают всё поле зрения

*Эозинофилы - крупные лейкоциты с отчётливой и тёмной, преломляющей свет зернистостью. Эозинофилы появляются при аллергических состояниях (бронхиальная астма, эозинофильный бронхит).

9. Эритроциты - круглой или слегка овальной формы клетки, желтоватого цвета (свежие) или бесцветные (изменённые и потерявшие пигмент), диаметром меньше лейкоцитов, иногда не имеют зернистости в протоплазме, двухконтурные (клетка-мишень), несколько преломляющие свет. Единичные эритроциты в мокроте могут встречаться в любой мокроте; в большом количестве обнаруживаются в мокроте, окрашенной кровью (лёгочное кровотечение, инфаркт лёгкого, застойные явления в лёгких).

Волокнистые образования.

1. Эластические волокна - имеют вид извитых, блестящих, преломляющих свет тонких нитей, складывающихся в пучки, иногда повторяющих строение альвеолярной ткани. Эластические волокна указывают на распад лёгочной ткани и обнаруживаются при туберкулёзе, абсцессе, новообразованиях лёгких.Так как стенки альвеол состоят из однослойного альвеолярного эпителия, окутанного тонкими прослойками соединительной ткани, содержащей эластические волокна. Распад лёгочной ткани сопровождается разрушением эпителиального слоя с освобождением эластических волокон, которые выделяются с мокротой.

2. Коралловидные волокна - грубые, ветвящиеся образования с бугристыми утолщениями вследствие отложения на волокнах жирных кислот и мыл. Выделяются при хронических заболеваниях лёгких, кавернозном туберкулёзе.

3. Обызвествлённые эластические волокна - грубые, пропитанные слоями извести (кальция) палочковидные образования. Они теряют свою эластичность, становятся хрупкими. Выделяются с мокротой при распаде обызвестлённого участка лёгкого.

4. Фибринозные волокна - тонкие волоконца в виде беловатой бесструктурной массы. Встречаютсяпри фибринозном бронхите, туберкулёзе, актиномикозе, крупозной пневмонии.

5. Спирали Куршмана - уплотнённые закрученные в спираль образования из слизи. Наружная рыхлая часть называется мантией, внутренняя, плотно закрученная часть - центральной осевой нитью. Изредка обнаруживаются отдельно только тонкие центральные нити без мантии и спирально извитые волоконца без центральной нити. Спирали образуются при спастическом состоянии бронхов и наличии в них слизи. Во время кашлевого толчка вязкая слизь выбрасывается в просвет более крупного бронха, закручиваясь спиралью. Спирали Куршмана наблюдаются при лёгочной патологии, сопровождающейся бронхоспазмом (бронхиальная астма, астмоидные бронхиты, опухоли бронхов).

Кристаллические образования.

1. Кристаллы Шарко-Лейдена -встречаются в мокроте вместе с эозинофилами и имеют вид блестящих, гладких, бесцветных различной величины ромбов, иногда с тупо обрезанными концами. Образования кристаллов Шарко-Лейдена связывают с распадом эозинофилов, считают их продуктом кристаллизации белков. Часто свежевыделенная мокрота не содержит кристаллов Шарко-Лейдена, они образуются в ней в закрытой посуде через 24-48 часов. Характерно присутствие этих кристаллов в мокроте при бронхиальной астме, эозинофильном бронхите, глистных поражениях лёгких, реже при крупозной пневмонии, различных бронхитах.

2. Кристаллы гематоидина - имеют форму ромбов и иголок (иногда пучков и звёзд) золотисто-жёлтого цвета. Эти кристаллы являются продуктом распада гемоглобина, образуются в глубине гематом и обширных кровоизлияниях, в некротизированной ткани.

3. Кристаллы холестерина - бесцветные, четырёхугольной формы таблички с обломанным ступенеобразным углом, образуются при распаде жира ижироперерождённых клеток, задержке мокроты в полостях (туберкулёз, новообразования, абсцесс и др.).

4. Кристаллы жирных кислот - в виде длинных тонких игли капельки жира содержатся часто в гнойной мокроте (пробка Дитриха), образуются при застое мокроты в полостях (абсцесс, бронхоэктазы).

Комбинированные и другие образования в мокроте.

1. Пробки Дитриха – комочки желтовато-серого цвета, имеющие неприятный запах. Состоят из детрита, бактерий.Обнаруживаются при застое мокроты в полостях при туберкулёзе, абсцессе лёгкого, бронхоэктазах.

2. Тетрада Эрлиха -состоит из четырёх элементов: обызвествлённого детрита, обызвествлённых эластических волокон, кристаллов холестерина и микобактерий туберкулёза. Появляется при распаде обызвествлённого первичного туберкулёзного очага. Причиной такого распада может быть пневмония, новообразование.

3. Рисовидные тельца – округлые, беловатые плотные образования, содержащие скопления коралловидных волокон, продуктов жирового распада, мыла, иногда кристаллы холестерина и большое количество микобактерий туберкулёза. Встречаются при туберкулёзе.

4. Суфрактант – это фосфолипопротеин, предотвращающий склеивание альвеол. Бывает различной формы и величины матово-серого цвета. При исследование суфрактанта можно определить бактериальную флору, степень активности воспалительного процесса.

6. Грибы – при грибковых поражениях лёгких в мокроте можно выявить возбудителя заболевания. Микроскопически видны сплетения нитей мицелия.

7. Бактерии – в окрашенных мазках обнаруживаются разнообразныемикроорганизмы, которые в небольшом количестве всегда находятся в дыхательных путях здорового организма. При неблагоприятных условиях эта флора, усиленно размножаясь, становится патогенной и вызывает заболевание. Встречаются микобактерии туберкулёза (туберкулёз), пневмококкии (крупозная пневмония и хронический бронхит). Стрептококки и стафилококки обнаруживают в гнойной мокроте приабсцессе лёгкого, бронхитах и пневмониях.

МОКРОТА ПРИ РАЗЛИЧНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ

ДЫХАТЕЛЬНОЙ СИСТЕМЫ.

Острый бронхит. В начале заболевания выделяется небольшое количество слизистой, вязкой мокроты.В дальнейшем течении болезни количество мокроты увеличивается. Она становится слизисто-гнойной. При микроскопическом исследовании обнаруживается значительное количество цилиндрического эпителия, лейкоциты, эритроциты.

Хронический бронхит. Обычно выделяется много слизисто-гнойной мокроты, нередкос прожилками крови. Микроскопически обнаруживается большое количество лейкоцитов, эритроциты,альвеолярные макрофаги. При фиброзном бронхите встречаются фиброзные слепки бронхиол. Много разнообразных микроорганизмов.

Бронхиальная астма. Выделяется скудное количество слизистой, вязкой, стекловидной мокроты. Макроскопически можно увидеть спирали Куршмана. При микроскопии особенно характерно наличие эозинофилов и цилиндрического эпителия. Встречаются кристаллы Шарко-Лейдена.

Бронхоэктатическая болезнь. Выделяется очень много гнойной мокроты (по утрам до 1 л) зеленовато-сероватого цвета. При стоянии она делится на три слоя: слизистый, серозный и гнойный. В гное находят пробки Дитриха. Микроскопически обнаруживается большое количество лейкоцитов, кристаллы жирных кислот, иногда кристаллы гематоидина и холестерина, разнообразная микрофлора.

Крупозная пневмония. В начале заболевания отделяется небольшое количество очень вязкой (клейкой) ржавой мокроты. В период разрешения болезни мокрота выделяется обильно, приобретая слизисто-гнойный характер. Ржавая мокрота содержит свёртки фибрина и изменённую кровь, придающую ей буроватый оттенок. Микроскопически в начале заболеванияобнаруживаются эритроциты, зёрна гемосидерина, кристаллы гематоидина, небольшое количество лейкоцитов, много пневмококков. В конце заболевания количество лейкоцитов нарастает, а эритроцитов уменьшается, много альвеолярных макрофагов.

Абсцесс лёгкого. В момент прорыва абсцесса в бронх выделяется большое количество гнойной, зловонной мокроты (до 600 мл). при стоянии жидкая мокрота становится двухслойной. Микроскопически обнаруживается много лейкоцитов, эластические волокна, обрывки лёгочной ткани, кристаллы жирных кислот, гематоидина и холестерина, разнообразная микрофлора.

Туберкулёз лёгких. Количество мокроты зависит от стадии заболевания. При наличии каверн в лёгких оно может быть значительным. Характер мокроты слизисто-гнойный, нередко она содержит примесь крови. Макроскопическив мокроте можно обнаружить рисовидные тельца (линзы Коха), состоящие из элементов распада лёгочной ткани. Под микроскопом находят эластические волокна, кристаллы жирных кислот,гематоидина. При распаде старого обызвествленного туберкулёзного очага обнаруживается тетрада Эрлиха. Для диагностики заболевания наибольшее значение имеет наличие в мокроте микобактерий туберкулёза.

Рак лёгкого. Количество мокроты может быть различным. При распаде опухоли - значительным.Характер - слизисто-гнойно-кровянистый. При осмотре могут быть замечены обрывки ткани. Микроскопически обнаруживаются атипические клетки и их комплексы.

Таблица №3. МОКРОТА ПРИ РАЗЛИЧНОЙ ЛЁГОЧНОЙ ПАТОЛОГИИ.

Нозологическая форма	Количество мокроты	Характер мокроты	Макроскопическое изучение	Микроскопическое изучение
Острый бронхит	Скудное, в поздних стадиях - большое количество	Слизистая, слизисто-гнойная	______	Цилиндрический эпителий, лейкоциты - умеренное количество, при затяжном течении - макрофаги.
Хронический бронхит	Различное	Продолжение »

Включает изучение нативных и окрашенных препаратов.

Подготовка к исследованию: Узким шпателем или иглой выбрать кусочек величиной с булавочную головку →на предметное стекло, накрыть покровным стеклом (материал не должен выходить за пределы покровного стекла).

Микроскопия:

под малым увеличением (7х8) – обнаружение элементов, встречающихся в мокроте в небольшом количестве (эластические волокна, спирали Куршмана и т.д.)

под большим (7х40) - детальное исследование мазка. При необходимости окрашивания покровное стекло сдвигают, отмечают на предметном интересующее место, затем препарат высушивают и окрашивают.

N.B! Необходимо исследовать все частицы, отличающиеся от фона мокроты.

Элементы нативного препарата мокроты

волокнистые образованиякристаллические образования

Клеточные элементы нативного препарата мокроты

Эпителиальные клетки

Плоский эпителий – из полости рта.

Единичный встречается всегда. Большое количество - примесь слюны.

Диагностического значения не имеет.Цилиндрический мерцательный эпителий

Эпителий слизистой оболочки бронхов и трахеи - в больших количествах при бронхиальной астме и остром бронхите.

Клеточные элементы нативного препарата мокроты (продолжение)

Лейкоциты -встречаются в любой мокроте. В слизистой мокроте - едининичные, а в гнойной -сплошь покрывают поле зрения.

Эритроциты - единичные в любой мокроте, в большом количестве в кровянистой мокроте при застое, инфаркте легких.

Альвеолярные макрофаги - при бронхитах, пневмониях и профессиональных заболеваниях легких (пылевые клетки - кониофаги), застойных явлениях в легких (сидерофаги – Мф, содержащие гемосидерин, определяют реакцией на берлинскую лазурь). пороках сердца.

Опухолевые клетки попадают в мокроту при распаде опухоли в бронхах.

Волокнистые образования в нативном препарате мокроты

Эластические волокна – элементы соединительной ткани. Следствие деструкции ткани. Имеют вид извитых, блестящих, тонких волокон. Обнаруживаются при

туберкулезе, абсцессе, гангрене, новообразованиях.

Обызвествленные эластические волокна – грубые, толстые, пропитанные солями палочковидные образования - при распаде петрифицированного туберкулезного очага.

Спирали Куршмана –образуются при спастическом состоянии бронхов и наличии в них слизи. Во время кашлевого толчка вязкая слизь выбрасывается в просвет более крупного бронха, закручиваясь спиралью.

Появляются при БА, бронхитах, иногда при опухолях легкого, сдавливающих бронхи.

образованиявнативномпрепарате мокроты

Кристаллы Шарко-Лейдена – образуются из распадающихся эозинофилов. Для выявления необходимо выдерживание мокроты в течение 24 часов. Встречаютсяпри БА (и на высоте приступа и в межприступном периоде)., при глистных поражениях легких.

Кристаллы гематоидина – продукт распада гемоглобина. Образуются в глубине гематом и обширных кровоизлияний, в некротизированной ткани.

Кристаллы холестерина – образуются при распаде жироперерожденных клеток, при задержке мокроты в полостях - при туберкулезе, новообразованиях, абсцессе.

Тетрада Эрлиха – обызвествленный детрит, обызвествленные эластические волокна, кристаллы холестерина, микобактерии туберкулеза – при распаде обызвествленного первичного туберкулезного очага.

Окрашенные препараты мокроты

Приготовление: При необходимости

окрашивания покровное стекло после микроскопии нативного препарата

сдвигают, отмечают на предметном стекле интересующее место, затем препарат высушивают, окрашивают

по Романовскому или Папенгейму.

Окрашенныепрепаратымокроты (продолжение)

Элементы окрашенных препаратов:

Нейтрофилы составляют основную массу лейкоцитов в окрашенном мазке. Могут быть дегенеративные - в гнойной мокроте.

Эозинофилы отдельные или скоплениями, сособенно при БА.Лимфоциты единичные.

Гистиоциты встречаются постоянно в различных количествах.

Эпителиоидные клетки - клетки туберкулезной гранулемы - при туберкулезе, саркоидозе.

Клетки Пирогова-Ланхганса – гигантские многоядерные клетки, входят в состав туберкулезной гранулемы. В мокроте встречаются редко.

Плоский эпителий, эпителий бронхов, реснитчатые клетки, бокаловидные клетки – единичные.

Бактериоскопическое исследование мокроты

по Циль-Нильсену - для выявления микобактерий туберкулеза

микроскопия препаратов, окрашенных

по Граму - для изучения микрофлоры

мокроты (стрептококки, стафилококки и т.д.).

микобактерии

туберкулеза

Три пробы мокроты:

1-через 1-2 часа после сна (под наблюдением медицинского работника).

2 – в тот же день через несколько часов после

взятия первой пробы. 3- утром следующего дня.

Необходимое количество материала - 3-5 мл мокроты,мокроту откашливать из глубоких отделов легких!