Bezpośredni test Coombsa. Test ten służy do wykazania obecności przeciwciał blokujących, utrwalonych w czerwonych krwinkach dziecka. Pozytywny wynik testu bezpośredniego wskazuje na uczulenie i stanowi przekonujący objaw choroby hemolitycznej noworodka jeszcze przed pojawieniem się innych objawów klinicznych. W drodze wyjątku i tylko w bardzo ciężkich przypadkach bezpośredni test Coombsa może dać wynik negatywny ze względu na zachodzącą już, prawie całkowitą hemolizę uczulonych krwinek czerwonych.
Bezpośredni test Coombsa wykonuje się w następujący sposób: do probówki umieszcza się 5 kropli krwi pobranej z pięty dziecka i dodaje się 5 ml soli fizjologicznej. Dobrze wymieszaj i wiruj przez 10 minut. Klarowny płyn znajdujący się nad osadem czerwonych krwinek zostaje oddzielony. Następnie ponownie dodać 5 ml soli fizjologicznej, wymieszać i odwirować. Po trzykrotnym zmieszaniu z solą fizjologiczną czerwone krwinki są dobrze umyte. Po ostatnim oddzieleniu supernatantu osad erytrocytów w ilości 0,1 ml miesza się z 0,9 ml roztworu fizjologicznego. Nałóż 2-3 krople tej mieszaniny na szkiełko i dodaj jedną kroplę serum Coombs. Obecność aglutynacji wskazuje, że reakcja jest dodatnia (dodatni bezpośredni test Coombsa). Badanie należy przeprowadzić w temperaturze pokojowej powyżej 16°C, aby uniknąć działania zimnych aglutynin.
Pośredni test Coombsa służy jako dowód na obecność wolnych przeciwciał w surowicy matki i przeprowadza się je na surowicy matki.
Choroba hemolityczna u noworodka z niezgodnością Rh zwykle objawia się po drugiej ciąży. Pierwsze dziecko rodzi się zdrowe, drugie z objawami łagodnej anemii, a dopiero po trzeciej ciąży rodzą się dzieci z wyraźnymi objawami choroby hemolitycznej. Tylko kobiety wstępnie uczulone mogą urodzić dziecko z objawami choroby hemolitycznej podczas pierwszej ciąży. W niektórych przypadkach szczepienie powoduje aborcję i poród martwego dziecka. Dla początku i ciężkości choroby ważny jest stan łożyska i czas ekspozycji matczynych aglutynin na płód. Kiedy aglutyniny pojawiają się 10-14 tygodni przed urodzeniem, u dziecka zwykle występują formy subkliniczne. Wczesne pojawienie się aglutynin, 15–26 tygodni przed urodzeniem, powoduje ciężkie postacie choroby. We wszystkich postaciach choroby głównym procesem jest hemoliza. Konsekwencją reakcji antygen-przeciwciało jest hemoliza, uszkodzenie wątroby i naczyń włosowatych mózgu. W zależności od tego, która zmiana dominuje, obserwuje się różne postacie choroby. Niebezpieczne są także niektóre zjawiska anafilaktyczne. Prowadzą do tworzenia substancji histaminopodobnych, powodując poważne uszkodzenia komórek wątroby, a zwłaszcza komórek zwojowych zwojów podstawy mózgu, rogu Ammona, rdzenia przedłużonego, a nawet kory mózgowej. W przypadku uszkodzenia komórek wątroby do żółtaczki pozawątrobowej dołącza się żółtaczka wątrobowa. Dzieci umierają z powodu ciężkich objawów kernicterus. Jeśli przeżyją, pozostają objawy uszkodzenia układu nerwowego (zaburzenia układu pozapiramidowego z ruchami choreoatetotycznymi, specyficzny chód taneczny, wymuszone ruchy głowy, czasami zaburzenie koordynacji ruchów dobrowolnych z częstymi upadkami, wzmożone napięcie mięśniowe, zaburzenia psychiczne upośledzenie umysłowe, czyli z objawami tzw. encefalopatii posticteria infantum).
Test Coombsa
Bezpośredni test Coombsa to test antyglobulinowy (aglutynacja w żelu pozwalający na wykrycie pełnych przeciwciał dwuwartościowych), który wykrywa przeciwciała klasy IgG i składnik C3 dopełniacza na powierzchni czerwonych krwinek. Zazwyczaj przeciwciała wykryte za pomocą bezpośredniego testu Coombsa mają szeroką specyficzność, która nie jest powiązana z dobrze ugruntowanym antygenem. Dodatni bezpośredni test Coombsa jednoznacznie wskazuje, że pacjent ma niedokrwistość hemolityczną, chociaż nie wszyscy pacjenci z dodatnim bezpośrednim testem antyglobulinowym cierpią na tę chorobę. U około 10% pacjentów za pomocą bezpośredniego testu Coombsa nie można określić przeciwciał lub składników dopełniacza na błonie krwinek czerwonych (test jest negatywny), mimo to cierpią oni na autoimmunologiczną niedokrwistość hemolityczną. Aby wyjaśnić specyficzność przeciwciał, w takich przypadkach stosuje się testy z ich elucją. Bezpośredni test Coombsa, dodatni tylko dla dopełniacza, zwykle odnosi się do zimnych przeciwciał typu IgM. W tym przypadku przeciwciała IgM nie są obecne na czerwonych krwinkach w podstawowej temperaturze ciała. Jednakże, ze względu na fakt, że przeciwciała IgM aktywnie wiążą dopełniacz, a dopełniacz pozostaje na czerwonych krwinkach, w przypadku tej postaci autoimmunologicznej niedokrwistości hemolitycznej (choroba zimnych agutynin), test Coombsa będzie dodatni tylko dla dopełniacza.
Bezpośredni test Coombsa daje wynik pozytywny w kierunku autoimmunologicznej niedokrwistości hemolitycznej spowodowanej ciepłymi przeciwciałami, autoimmunologicznej niedokrwistości polekowej (podczas przyjmowania metyldopy nawet 20% pacjentów ma reakcję dodatnią), niedokrwistości hemolitycznej typu adsorpcyjnego, niedokrwistości hemolitycznej typu kompleksów immunologicznych niedokrwistość (test pozytywny tylko dla C3), z autoimmunologiczną niedokrwistością hemolityczną spowodowaną zimnymi przeciwciałami - choroba zimnych aglutynin (test jest pozytywny tylko dla C3). W napadowej zimnej hemoglobinurii bezpośredni test Coombsa daje wynik ujemny.
W ostrym okresie choroby, w związku z zniszczeniem czerwonych krwinek, na których wykryto dużą liczbę przeciwciał, podczas przełomu hemolitycznego, a także przy niewystarczającej liczbie przeciwciał w przewlekłym przebiegu choroby, wynik negatywny można zaobserwować bezpośredni test Coombsa.
| : | ||
|---|---|---|
- Istotnym warunkiem zapewnienia jakości laboratoryjnych badań krwi jest pobranie materiału na czczo, rano (przed godziną 12:00).
- Na 12 godzin przed badaniem należy unikać spożywania alkoholu, palenia tytoniu, jedzenia i ograniczania aktywności fizycznej.
- Rano w dniu badania krwi możesz pić wodę.
- Unikaj przyjmowania leków; Jeżeli nie ma możliwości odstawienia leku, należy poinformować o tym laboratorium.
- Wskazane jest pobranie materiału przed wykonaniem jakichkolwiek medycznych zabiegów diagnostycznych.
- Oceniając poziom hormonów u kobiet, należy wziąć pod uwagę dzień cyklu miesiączkowego, w którym najlepiej jest zmierzyć określone hormony. Informacje te można uzyskać od swojego lekarza.
| Indeks | Charakterystyka |
|---|---|
| Analizator i system testowy | Karty żelowe; DiaMed AG (Szwajcaria) |
| Wartości referencyjne | Wynik negatywny / Wynik pozytywny |
| Czynniki zakłócające. Leki | |
| Dodatni wynik testu możliwy jest przy przyjmowaniu następujących leków: acetaminofen, kwas salicylowy, aminopiryna, leki przeciwhistaminowe, karbromal, cefalosporyny, chloropromazyna, chlorpropamid, cisplatyna, klonidyna, dipyron, etosuksymid, fenfluramina, fuadyna, hydralazyna, hydrochlorotiazyd, ibuprofen, insulina, izoniazyd, wodospad, kwas mefenamowy, melfalan, metadon, metylodopa, metylosergid, nomifenzyna, penicylamina, penicyliny, fenacetyna, fenylobutazon,probenecyd, prokainamid, chinidyna, chinina, ryfampicyna, streptomycyna, sulfonamidy, sulfonylomoczniki, tetracyklina, triamteren, bezwodnik trimelitowy | |
| Wskazania do stosowania | |
|
|
| Interpretacja wyników | |
|
Zwykle bezpośredni test Coombsa daje wynik negatywny. Pozytywny test Coombsa dla:
|
|
Test Coombsa
Test Coombsa– test antyglobulinowy mający na celu wykrycie we krwi Rh ujemnej niekompletnych przeciwciał antyerytrocytowych przeciwko czynnikowi Rh – specyficznemu białku znajdującemu się na powierzchni erytrocytów krwi Rh dodatniej. Wyróżnia się dwa rodzaje tego badania: bezpośredni – wykrywanie przeciwciał na powierzchni czerwonych krwinek, pośredni – wykrywanie przeciwciał w surowicy krwi. Badania bezpośrednie przeprowadza się w diagnostyce i monitorowaniu leczenia chorób krwi: niedokrwistości hemolitycznej, choroby hemolitycznej noworodków i innych. Badanie pośrednie przeprowadza się w celu oceny zgodności krwi dawcy i biorcy podczas transfuzji, a także określenia obecności i ryzyka konfliktu Rh podczas planowania i prowadzenia ciąży. Materiałem do testu Coombsa jest krew żylna; badanie przeprowadza się metodami opartymi na reakcji aglutynacji. Zwykle oba testy dają wynik negatywny. Analiza kończy się w ciągu jednego dnia.
Test Coombsa jest badaniem klinicznym krwi Rh-ujemnym, mającym na celu wykrycie przeciwciał przeciwko czynnikowi Rh. Test służy do określenia ryzyka wystąpienia konfliktu Rh i reakcji hemolitycznych. U każdej osoby powierzchnia czerwonych krwinek zawiera pewien zestaw antygenów lub aglutynogenów - związków o różnym charakterze, których obecność lub brak służy do określenia grupy krwi i współczynnika Rh. Istnieje wiele rodzajów antygenów, w praktyce lekarskiej największe znaczenie praktyczne mają aglutynogeny A i B, które określają grupę krwi, oraz aglutynogen D, czyli czynnik Rh. Przy dodatnim współczynniku Rh antygeny D są wykrywane na zewnętrznej błonie erytrocytów, ale przy ujemnym czynniku nie są one wykrywane.
Test Coombsa, zwany także testem antyglobulinowym, ma na celu wykrycie we krwi niekompletnych przeciwciał antyerytrocytowych przeciwko układowi czynnika Rh. Przeciwciała przeciwko czynnikowi Rh to specyficzne immunoglobuliny, które powstają we krwi Rh ujemnej po przedostaniu się do niej czerwonych krwinek z aglutynogenami D. Może się to zdarzyć w przypadku zmieszania się krwi płodu i kobiety ciężarnej podczas transfuzji krwi przeprowadzanej bez wcześniejszej krwi pisanie na maszynie. Test Coombsa występuje w dwóch wersjach – bezpośredniej i pośredniej. Podczas wykonywania bezpośredniego testu Coombsa wykrywane są przeciwciała przyczepione do powierzchni czerwonych krwinek. Badanie służy do ustalenia przyczyny reakcji hemolitycznej. Pośredni test Coombsa ma na celu wykrycie przeciwciał przeciwko erytrocytom w osoczu krwi. Konieczne jest określenie zgodności krwi między dawcą a biorcą lub matką a płodem, co pomaga zapobiegać rozwojowi konfliktu Rh i późniejszej hemolizie czerwonych krwinek.
Krew do obu wersji testu Coombsa pobierana jest z żyły. Analizę przeprowadza się metodą aglutynacji z użyciem surowicy antyglobulinowej. Wyniki badania znajdują zastosowanie w hematologii do identyfikacji przyczyn reakcji hemolitycznych, w chirurgii i resuscytacji przy przeprowadzaniu transfuzji krwi, w położnictwie i ginekologii do monitorowania ciąż u kobiet z krwią Rh-ujemną.
Wskazania
Bezpośredni test Coombsa, który wykrywa przeciwciała przyczepione do powierzchni czerwonych krwinek, jest przepisywany w przypadku reakcji hemolitycznych (zniszczenia czerwonych krwinek) różnego pochodzenia. Badanie jest wskazane w przypadku pierwotnej autoimmunologicznej niedokrwistości hemolitycznej, potransfuzyjnej niedokrwistości hemolitycznej, choroby hemolitycznej noworodka, hemolizy czerwonych krwinek spowodowanej chorobami autoimmunologicznymi, nowotworowymi lub zakaźnymi, a także przy przyjmowaniu leków np. chinidyny, metylodopy, prokainamidu . Aby zapobiec rozwojowi konfliktu Rh, stosuje się pośredni test Coombsa, który określa przeciwciała w osoczu krwi. Wskazany jest dla pacjentów przygotowujących się do transfuzji krwi, a także dla kobiet w ciąży z ujemnym czynnikiem Rh, pod warunkiem, że przyszły ojciec dziecka będzie miał dodatni czynnik Rh.
Aby określić zgodność Rh, test Coombsa nie jest przepisywany pacjentom z krwią Rh dodatnią. W takich przypadkach na powierzchni czerwonych krwinek znajdują się już antygeny; wytwarzania przeciwciał nie można wywołać przez transfuzję krwi lub przedostanie się krwi płodu do krwioobiegu kobiety w ciąży. Ponadto badanie nie jest wskazane dla kobiet w ciąży, jeśli oboje rodzice mają ujemny czynnik Rh – cechę dziedziczną recesywną. Dziecko w takich parach zawsze ma krew Rh ujemną, konflikt immunologiczny z matką jest niemożliwy. W patologiach hemolitycznych test antyglobulinowy nie służy do monitorowania powodzenia terapii, ponieważ wyniki nie odzwierciedlają aktywności procesu niszczenia czerwonych krwinek.
Ograniczeniem testu Coombsa jest pracochłonność procedury badawczej – aby uzyskać wiarygodne wyniki, należy przestrzegać warunków temperaturowych i czasowych, zasad przygotowania odczynników i biomateriału. Do zalet testu Coombsa należy jego wysoka czułość. W przypadku niedokrwistości hemolitycznej wyniki tego testu pozostają dodatnie, nawet jeśli poziom hemoglobiny, bilirubiny i retikulocytów jest prawidłowy.
Przygotowanie do analizy i gromadzenia materiału
Materiałem używanym do wykonania testu Coombsa jest krew żylna. Nie ma specjalnych wymagań co do czasu pobrania krwi i przygotowania pacjenta. Podobnie jak w przypadku każdego badania, zaleca się przerwę po jedzeniu na co najmniej 4 godziny, a w ciągu ostatnich 30 minut rzucić palenie, ćwiczyć i unikać stresu emocjonalnego. Warto także wcześniej omówić z lekarzem potrzebę zaprzestania przyjmowania leków – niektóre leki mogą zaburzać wyniki testu Coombsa. Krew pobiera się za pomocą strzykawki z żyły łokciowej lub rzadziej z żyły znajdującej się na grzbiecie dłoni. Materiał trafia do laboratorium w ciągu kilku godzin.
Podczas wykonywania bezpośredniego testu Coombsa do surowicy krwi pacjenta dodaje się surowicę antyglobulinową. Po pewnym czasie mieszaninę bada się na obecność aglutynianów – powstają one, jeśli na czerwonych krwinkach znajdują się przeciwciała. Jeżeli wynik jest pozytywny, oznacza się miano aglutynacji. Pośredni test Coombsa składa się z większej liczby kroków. Po pierwsze, przeciwciała obecne w surowicy są utrwalane na wstrzykniętych czerwonych krwinkach podczas inkubacji. Następnie do próbki dodaje się surowicę antyglobulinową, po pewnym czasie określa się obecność i miano aglutynianów. Okres analizy wynosi 1 dzień.
Normalne wyniki
Zwykle wynik bezpośredniego testu Coombsa jest ujemny (-). Oznacza to, że we krwi nie ma przeciwciał związanych z czerwonymi krwinkami i nie mogą one powodować hemolizy. Prawidłowy wynik pośredniego testu Coombsa jest również ujemny (-), co oznacza, że w osoczu krwi nie ma przeciwciał przeciwko czynnikowi Rh. Przygotowując się do transfuzji krwi dla biorcy, oznacza to zgodność z krwią dawcy, podczas monitorowania ciąży oznacza to brak uczulenia Rh u matki, niskie ryzyko wystąpienia konfliktu immunologicznego; Czynniki fizjologiczne, takie jak dieta czy aktywność fizyczna, nie mogą mieć wpływu na wynik badania. Dlatego też, jeśli wynik będzie pozytywny, konieczna jest konsultacja lekarska.
Wartość diagnostyczna analizy
Dodatni wynik testu Coombsa wyraża się jakościowo, od (+) do (++++) lub ilościowo, w mianach od 1:16 do 1:256. Oznaczenie stężenia przeciwciał na krwinkach czerwonych i w surowicy krwi przeprowadza się w obu typach próbek. Jeśli bezpośredni test Coombsa jest pozytywny, na zewnętrznej błonie czerwonych krwinek wykrywane są przeciwciała, co prowadzi do zniszczenia tych krwinek. Przyczyną może być transfuzja krwi bez wcześniejszego typowania - reakcja hemolityczna po transfuzji, a także erytroblastoza noworodka, reakcja hemolityczna spowodowana stosowaniem leków, pierwotna lub wtórna niedokrwistość autoimmunologiczna hemolityczna. Wtórne zniszczenie czerwonych krwinek może być spowodowane toczniem rumieniowatym układowym, zespołem Evansa, makroglobulinemią Waldenströma, napadową zimną hemoglobinurią, przewlekłą białaczką limfatyczną, chłoniakiem, mononukleozą zakaźną, kiłą, mykoplazmowym zapaleniem płuc.
Dodatni wynik pośredniego testu Coombsa wskazuje na obecność w osoczu przeciwciał przeciwko czynnikowi Rh. W praktyce oznacza to, że doszło do uczulenia Rh i istnieje możliwość wystąpienia konfliktu Rh po podaniu krwi dawcy w czasie ciąży. Aby zapobiec powikłaniom ciąży, kobiety z pozytywnym wynikiem testu Coombsa umieszczane są w specjalnym rejestrze.
Leczenie nieprawidłowości
Test Coombsa odnosi się do badań izoserologicznych. Jego wyniki pozwalają zidentyfikować reakcję hemolityczną, a także określić zgodność krwi dawcy i biorcy, matki i płodu, aby zapobiec rozwojowi konfliktu Rh. Jeśli wynik testu jest pozytywny, należy zasięgnąć porady lekarza prowadzącego - położnika-ginekologa, hematologa, chirurga.
Reakcja Coombsa
Reakcja Coombsa- badanie antyglobulinowe w celu określenia niekompletnych przeciwciał przeciwko erytrocytom. Test Coombsa służy do wykrywania przeciwciał przeciwko czynnikowi Rh u kobiet w ciąży oraz do określenia niedokrwistości hemolitycznej u noworodków z niezgodnością Rh, która prowadzi do zniszczenia czerwonych krwinek. Metodę tę zaproponował angielski lekarz Robert Coombs w 1945 roku i dlatego nazwano ją później „reakcją Coombsa”.
Bezpośrednia reakcja Coombsa
Przeciwciała znajdujące się na powierzchni czerwonych krwinek mogą być statyczne lub wolne w osoczu krwi. W zależności od stanu przeciwciał przeprowadza się bezpośrednią lub pośrednią reakcję Coombsa. Jeśli istnieją podstawy, aby sądzić, że przeciwciała są utrwalone na powierzchni czerwonych krwinek, przeprowadza się bezpośredni test Coombsa. W tym przypadku badanie odbywa się jednoetapowo – dodaje się surowicę antyglobulinową. Jeśli na powierzchni czerwonych krwinek obecne są niekompletne przeciwciała, następuje aglutynacja czerwonych krwinek.
Reakcja pośrednia
Pośrednia reakcja Coombsa przebiega w 2 etapach. Po pierwsze, konieczne jest sztuczne uwrażliwienie czerwonych krwinek. W tym celu inkubuje się badane krwinki czerwone i surowicę krwi, co powoduje osadzanie się przeciwciał na powierzchni czerwonych krwinek. Następnie przeprowadza się drugi etap testu Coombsa – dodanie surowicy antyglobulinowej.
Notatki
Fundacja Wikimedia. 2010.
Zobacz, co oznacza „reakcja Coombsa” w innych słownikach:
REAKCJA COMBESA- (test Coombsa) metoda oznaczania resusantyciał na powierzchni erytrocytów, które powodują wytrącanie się globulin w surowicy krwi. Test ten służy do diagnozowania niedokrwistości hemolitycznej u niemowląt z niezgodnością Rh, które... ... Wyjaśniający słownik medycyny
Metoda oznaczania obecności przeciwciał na powierzchni erytrocytów powodujących wytrącanie się globulin w surowicy krwi. Test ten służy do diagnozowania niedokrwistości hemolitycznej u niemowląt z niezgodnością Rh, u których... ... Terminy medyczne
- (test antyglobulinowy) metoda wykrywania niekompletnych Abs naturalnie lub sztucznie związanych z komórkami (zwykle erytrocytami) przy użyciu antyglobuliny ki (A.s.). A. s., wytrącając niekompletny Abs, włącza w ten proces komórki nośnikowe,... ... Słownik mikrobiologii
REAKCJA COMBESA- (nazwany na cześć brytyjskiego immunologa R. R. A. Coombsa, ur. 1921, synonim - test antyglobulinowy) - reakcja serologiczna polegająca na aglutynacji erytrocytów przez niekompletne auto- i izoprzeciwciała w obecności surowicy antyglobulinowej. Na… … Encyklopedyczny słownik psychologii i pedagogiki
REAKCJA HEMOLITYCZNA TRANSFUZJI- Miód Reakcja hemolityczna transfuzji (THR) to hemoliza czerwonych krwinek biorcy lub dawcy (rzadko), która występuje podczas transfuzji krwi i jej składników. Reakcje mogą mieć charakter immunologiczny lub nieimmunologiczny. Etiologia i patogeneza Reakcje immunologiczne... ... Katalog chorób
- (R. R. A. Coombs, ur. 1921, angielski immunolog) reakcja serologiczna polegająca na aglutynacji erytrocytów przez niekompletne auto i izoprzeciwciała w obecności surowicy antyglobulinowej; stosowany w transfuzjologii, medycynie sądowej, a także... ... Duży słownik medyczny
REAKCJA COMBESA- Reakcja Coombsa, reakcja serologiczna umożliwiająca wykrycie niekompletnych przeciwciał utrwalonych na powierzchni czerwonych krwinek lub zawartych w osoczu krwi. K.r. opiera się na wykorzystaniu surowicy antyglobulinowej uzyskanej w wyniku hiperimmunizacji... Weterynaryjny słownik encyklopedyczny
REAKCJA COMBESA- Stosowany do wykrywania przeciwciał jednowartościowych lub tzw. częściowych, w szczególności do analizy grup krwi świń i niektórych innych zwierząt... Terminy i definicje stosowane w hodowli, genetyce i rozrodzie zwierząt gospodarskich
Zobacz reakcję Coombsa. (
Test antyglobulinowy, przeznaczony do wykrywania niekompletnych przeciwciał przeciwko erytrocytom, został zaproponowany przez Coombsa, Moranta i Reisa w 1945 roku i został później nazwany testem Coombsa. Istotą tej metody jest to, że surowica antyglobulinowa zawierająca przeciwciała przeciwko immunoglobulinom ludzkim, reagując z krwinkami czerwonymi uczulonymi niepełnymi przeciwciałami, prowadzi do ich aglutynacji.
W zależności od tego, czy przeciwciała są utrwalone na powierzchni czerwonych krwinek, czy też występują w stanie wolnym w osoczu krwi, stosuje się bezpośredni lub pośredni test Coombsa.
Bezpośredni test Coombsa przeprowadza się w przypadkach, gdy istnieją podstawy do przypuszczenia, że badane krwinki czerwone zostały już zbadane na żywo zostały uczulone odpowiednimi przeciwciałami, tj. w organizmie następuje pierwsza faza reakcji – utrwalenie przeciwciał na powierzchni czerwonych krwinek, po czym dodanie surowicy antyglobulinowej powoduje aglutynację uwrażliwionych komórek.
Za pomocą pośredniego testu Coombsa wykrywa się niekompletne przeciwciała obecne w surowicy testowej. W tym przypadku reakcja zachodzi w dwóch etapach. Pierwszym etapem jest inkubacja erytrocytów testowych z surowicą testową, podczas której przeciwciała zawarte w próbce surowicy testowej zostają utrwalone na powierzchni erytrocytów. Drugim krokiem jest dodanie surowicy antyglobulinowej.
Do chwili obecnej test Coombsa jest szeroko stosowany w praktyce laboratoryjnej do diagnostyki stanów immunopatologicznych, w szczególności autoimmunologicznej niedokrwistości hemolitycznej, charakteryzującej się niszczeniem czerwonych krwinek w wyniku wiązania błony komórkowej z przeciwciałami i (lub) składnikami układ dopełniacza. Służy do wykrywania obecności Ig G na błonie erytrocytów (zwykle Ig G1 i Ig G3), które mogą aktywować dopełniacz, a czasami dopełniacz (C3d). Natomiast w ostrym okresie choroby, w związku z zniszczeniem czerwonych krwinek, na których wykryto dużą liczbę przeciwciał, podczas przełomu hemolitycznego, a także w przypadku niedostatecznej liczby przeciwciał w przewlekłym przebiegu choroby, choroby, można zaobserwować ujemny bezpośredni test Coombsa.
Należy podkreślić, że pośredni test Coombsa pozostaje najlepszą metodą indywidualnego doboru środków do transfuzji, gdyż pozwala na najdokładniejsze określenie indywidualnej zgodności dawcy i biorcy pod względem antygenów erytrocytów.
Przy badaniu wszystkich biorców narządów i tkanek w okresie przed przeszczepieniem oraz hematopoetycznych komórek macierzystych również po przeszczepieniu zaleca się wykonanie dodatkowego bezpośredniego testu antyglobulinowego na obecność autoprzeciwciał.
Oprócz immunohematologii i transfuzjologii, testy antyglobulinowe znajdują szerokie zastosowanie w diagnostyce szeregu stanów patologicznych: chorób hematologicznych, w tym chorób limfoproliferacyjnych, układowych chorób tkanki łącznej, choroby Sjogrena, przewlekłego czynnego zapalenia wątroby itp.
Testy Coombsa są aktywnie wykorzystywane w genetyce medycznej i medycynie sądowej do oznaczania antygenów powierzchniowych erytrocytów.
Test Coombsa jest metodą badawczą dość pracochłonną i wymaga szczególnej staranności w jej realizacji. Podczas jego stosowania pojawiają się pewne trudności, zwłaszcza związane z interpretacją reakcji słabo pozytywnych. Wiadomo, że fałszywie słabo dodatnie lub ujemne reakcje podczas wykonywania testu Coombsa mogą być konsekwencją niewystarczająco skutecznego przemywania czerwonych krwinek, neutralizacji odczynnika antyglobulinowego przez ślady surowicy, a także kontaktu z nietłustą powierzchnią, na której znajduje się antyglobulina można naprawić, tracąc w ten sposób swoją aktywność. Kolejną wadą testu Coombsa jest niestabilność odczynnika antyglobulinowego, którego przygotowanie i przechowywanie ma pewne cechy, co również utrudnia ilościowe określenie reakcji hemaglutynacji z surowicą antyglobulinową.
Ponadto badania przeprowadzone przez A. Holburna, D. Voaka i in. wykazały, że przyczyną wyników fałszywie ujemnych może być nadmierne wstrząsanie podczas ponownego zawieszania zawiesiny czerwonych krwinek. Błędne wyniki przy wykonywaniu testów antyglobulinowych mogą być również spowodowane obecnością w odczynniku antyglobulinowym domieszki przeciwciał antykomplementarnych, w szczególności przeciwko składnikom dopełniacza C3d, C3c, C4c i C4d, które są adsorbowane na powierzchni badać czerwone krwinki podczas inkubacji i sprawiać wrażenie pozytywnego wyniku.
Wady te można łatwo wyeliminować poprzez dokładne mycie badanych próbek i monitorowanie warunków reakcji.
W ostatniej dekadzie zastosowano izotoniczną sól fizjologiczną o niskiej sile jonowej (LISS), aby skrócić czas wymagany do wykonania pośredniego testu Coombsa i zwiększyć jego czułość.
Niezaprzeczalną zaletą testów antyglobulinowych, zdaniem wielu autorów, jest ich wysoka czułość, znacznie przewyższająca rozdzielczość alternatywnych metod badawczych stosowanych do wykrywania przeciwciał nieaglutynujących.
Porównaliśmy rozdzielczość metod badania surowic na obecność niekompletnych przeciwciał przy użyciu poliglucyny, żelatyny i surowicy antyglobulinowej. W trakcie badania monitorowano miano niekompletnych przeciwciał anty-D w 140 próbkach surowicy krwi od dawców izoimmunologicznych za pomocą żelatyny, poliglucyny i pośredniego testu antyglobulinowego. Opracowanie tych metod przeprowadzono zgodnie z ogólnie przyjętymi metodami.
Stwierdzono, że pod względem rozdzielczości metody wykrywania uczulenia erytrocytów przez przeciwciała anty-D układają się następująco: najbardziej czuły jest pośredni test Coombsa, następnie test żelatynowy, a najmniej informatywny test poliglucynowy. Wyniki uzyskane w tej serii doświadczeń są w pełni zgodne z danymi literaturowymi, co pozwala stwierdzić, że czułość testu Coombsa jest dość wysoka, co pozwala z dużym stopniem wiarygodności określić obecność przeciwciał antyerytrocytowych w organizm, który nie powoduje aglutynacji czerwonych krwinek.
Jednak w praktyce wykonywania testów Coombsa zdarzają się przypadki, gdy niekompletne przeciwciała nie są wykrywane, chociaż obraz kliniczny choroby lub wcześniejsze szczepienia wskazują na ich możliwą obecność. W takich przypadkach można przypuszczać, że ilość przeciwciał jest niewystarczająca, aby mogły zostać wytrącone przez przeciwciała surowicy antyglobulinowej.
Wniosek ten potwierdziło nasze doświadczenie własne, w którym metodą analitycznej mikroelektroforezy komórek stwierdzono obecność na testowych erytrocytach przeciwciał anty-D, których nie wykryto w pośrednim teście Coombsa. W tej serii doświadczeń surowicę antyglobulinową dodawano do erytrocytów preinkubowanych z surowicami pobranymi z krwi immunizowanych dawców w okresie postępującej przeciwciałogenezy, tj. w okresie, gdy nie wykryto w nich przeciwciał znanymi metodami, w tym testem Coombsa.
W przeprowadzonych badaniach dowodem na obecność niepełnych przeciwciał na powierzchni erytrocytów była istotna statystycznie zmiana ruchliwości elektroforetycznej uczulonych krwinek czerwonych po dodaniu surowicy antyglobulinowej. Należy zaznaczyć, że u wszystkich zaszczepionych dawców oznaczono następnie przeciwciała anty-D w pośrednim teście Coombsa w surowicy krwi.
Gilleranda i in. wykazano również, że testy antyglobulinowe charakteryzują się pewnym progiem czułości: wynik pozytywny stwierdza się dopiero wtedy, gdy na powierzchni jednej czerwonej krwinki zostanie zarejestrowanych co najmniej 500 cząsteczek Ig G.
Ponadto w literaturze można znaleźć dowody, że ewentualny negatywny wynik testu Coombsa może być związany z niskim powinowactwem przeciwciał uwrażliwiających krwinki czerwone, w wyniku czego łatwo ulegają one elucji z powierzchni krwinek czerwonych w procesie przemywania .
Biorąc pod uwagę powyższe, można stwierdzić, że w niektórych przypadkach negatywny wynik testu Coombsa nie jest jeszcze dowodem na brak przeciwciał utrwalonych na powierzchni czerwonych krwinek.
Wiadomo, że reakcje Coombsa są wysoce specyficzne i pozwalają wykryć większość typów niekompletnych przeciwciał. Jednakże, jak pokazują niektóre dane eksperymentalne, testy antyglobulinowe mogą być dodatnie również w stanach nieimmunologicznych. E. Muirhead i in. w drugiej dobie po podaniu psom fenylohydrazyny zaobserwowano dodatni wynik testu Coombsa. Tak szybkie pojawienie się reakcji pozytywnej przemawia przeciwko jej naturze immunologicznej, a raczej wiąże się z niespecyficzną adsorpcją białka na powierzchni erytrocytów.
M. Williams i in. odkryli, że kwas klawulanowy może powodować także reakcję dodatnią, co zdaniem autorów wiąże się z nieswoistą adsorpcją białek osocza na powierzchni erytrocytów. Podobny efekt zaobserwowano podczas leczenia antybiotykami cefalosporynowymi.
Autorzy powyższych badań podkreślają nieimmunologiczny charakter pozytywnych wyników testu Coombsa i podkreślają, że substancje te mogą powodować modyfikację błon czerwonych krwinek, w wyniku czego czerwone krwinki mogą adsorbować białka (w w szczególności albumina), które normalnie występują w osoczu krwi i nie mają właściwości przeciwciał. Ponadto możliwe jest, że ksenobiotyk zaadsorbowany na powierzchni komórki służy jako łącznik pomiędzy błoną komórkową a białkami osocza.
Aby prawidłowo zinterpretować wyniki badań antyglobulinowych, należy również wziąć pod uwagę stosunek ilościowy młodych i dojrzałych czerwonych krwinek we krwi obwodowej. Stwierdzono, że retikulocyty wyizolowane z organizmu w okresie wzmożonej regeneracji erytronu mogą ulegać aglutynacji z surowicą antyglobulinową.
Dodatni wynik bezpośredniego testu antyglobulinowego Występuje także w różnych stanach patologicznych, którym towarzyszą zaburzenia układu odpornościowego, procesy zapalne prowadzące do nieswoistej adsorpcji przeciwciał o różnej swoistości na błonach erytrocytów. Sugeruje to, że cząsteczki Ig G nie oddziałują ze specyficznymi antygenami erytrocytów, a jedynie utrwalają się na powierzchni badanych komórek.
Należy wziąć pod uwagę, że wykonując test Coombsa w przypadkach chorób charakteryzujących się rozwojem dysproteinemii lub pojawieniem się paraprotein, wynik dodatni wynika z obecności na powierzchni erytrocytów białek, które nie mają właściwości przeciwciał, co wskazuje również na brak swoistości testów antyglobulinowych w odniesieniu do charakteru wykrywanego za ich pomocą białka.
Zatem, jak wykazały liczne badania, pozytywne wyniki bezpośrednich i pośrednich testów antyglobulinowych nie są absolutnym dowodem na obecność przeciwciał, gdyż pozytywne reakcje można zaobserwować także w różnych stanach patologicznych niezwiązanych z izosensybilizacją lub autouczuleniem organizmu. Dlatego dopiero porównanie wyników kilku metod immunoserologicznych z obrazem klinicznym choroby pozwala w pełni ocenić rozwijający się proces patologiczny.
Dodatni pośredni test antyglobulinowy z ujemnym testem bezpośrednim zwykle wskazuje na obecność wolnych alloprzeciwciał w surowicy testowej, związanych z wcześniejszymi transfuzjami krwi lub ciążami.
W przypadku zaostrzenia napadowej nocnej hemoglobinurii często wynik testu Coombsa jest dodatni; dodatni wynik testu Coombsa z anty-C3 i anty-C3dg jest markerem choroby zimnej aglutyniny.
W przypadkach, gdy istnieje duże ryzyko rozwoju choroby hemolitycznej noworodka, wyniki bezpośrednich i pośrednich testów antyglobulinowych mają ogromne znaczenie dla postawienia diagnozy (najczęściej w czasie ciąży) i, w razie potrzeby, dynamicznego monitorowania wyglądu i zmian w mianie przeciwciał. Najczęściej choroba hemolityczna noworodków wiąże się z niezgodnością matki i płodu w zakresie antygenu D, rzadziej w przypadku antygenów układu ABO, a jeszcze rzadziej w przypadku innych antygenów (C, c, K itp.). Podczas tego procesu powstają przeciwciała La, będące z reguły niekompletnymi przeciwciałami klasy Ig G, są wyraźnie wykrywane w pośrednim teście antyglobulinowym. W przypadku tej choroby prawidłowo ustalone miano i swoistość zidentyfikowanych przeciwciał mają ogromne znaczenie, ponieważ istnieje pewna korelacja między poziomem przeciwciał przeciw erytrocytom we krwi kobiety w ciąży a możliwym rokowaniem ciężkości hemolizy choroba.
Pośredni test Coombsa jest niezbędny także w praktyce klinicznej, aby zapewnić bezpieczną transfuzję terapii. Jego wdrożenie jest obowiązkowym elementem badań immunohematologicznych dawców i różnych kategorii biorców, a także rutynowych badań wszystkich pacjentów w placówkach medycznych, którzy mogą wymagać transfuzji krwi i jej składników.
Pośredni test antyglobulinowy stosuje się w następujących przypadkach:
W celu dokładniejszego określenia przynależności Rh (antygen D) w przypadku niejasnych wyników oznaczania czynnika Rh innymi metodami (poliglucyna, żelatyna itp.);
Identyfikacja słabych antygenów erytrocytów (układy Kell, Duffy, Kidd, Lewis itp.) i przeciwciał przeciwko tym antygenom;
Do wykrywania i identyfikacji alloimmunologicznych przeciwciał przeciwko erytrocytom, w tym przeciwciał wywołujących hemolityczne reakcje potransfuzyjne;
Aby określić obecność przeciwciał immunologicznych układu AB0 podczas powikłań hemolitycznych po przetoczeniu;
Jako test zgodności do indywidualnego doboru przetaczanej krwi i jej składników.
Tym samym test Coombsa jest ważnym testem diagnostycznym stosowanym w różnych dziedzinach medycyny (hematologia, położnictwo, reumatologia, transfuzjologia, diagnostyka kliniczna i laboratoryjna itp.). Znajomość specyfiki wykonywania testu Coombsa pomoże zwiększyć wiarygodność uzyskanych wyników i przyczyni się do prawidłowej interpretacji danych laboratoryjnych.
Literatura
1. Przeciwciała. Metody / wyd. D. Katie. - M.: Mir, 1991.
2. Bayramalibeyli I.E., Ragimov A.A., Gadzhiev A.B.. // Terapia transfuzyjna niedokrwistości: podręcznik. podręcznik dla lekarzy. — M.: Prakt. Medycyna, 2005. - s. 105-106.
3. Volkova O.Ya., Fregatova L.M., Levchenko L.B.// Transfuzjologia. - 2006. - nr 2. - s. 39-62.
4. Donskov S.I.// Grupy krwi układu Rh: teoria i praktyka. - M.: VINITI RAS, 2005. - s. 180-186, 195.
5.Immunoserologia (dokumenty regulacyjne) / komp. A.G. Bashlay, S.I. Donskow. - M.: VINITI RAS, 1998.
6.Badanie układu krwionośnego w praktyce klinicznej / wyd. ŻOŁNIERZ AMERYKAŃSKI. Kozinets, V.A. Makarowa. - M.: Triada-X, 1997.
7. Levin V.I.. O mechanizmie erytrodieriezy i erytropoezy w okresie ostrej niedokrwistości pokrwotocznej: streszczenie. dis. ...cad. Miód. Nauka. - Mińsk, 1968.
8. Ragimov A.A., Bayramalibeyli I.E.. // Podstawy diagnostyki, zapobiegania i leczenia anemii. - M.: GOU VUNMC MH RF, 2002. - s. 204-209.
9. Chumakova E.D.. // Aktualne problemy hematologii i transfuzjologii: obrady VI Kongresu Hematologów i Transfuzjologów Republiki Białorusi, Mińsk, 24-25 maja 2007 / wyd. sztuczna inteligencja Svirnovsky, M.P. Potapniewa. - Mińsk: Republikańskie Centrum Naukowo-Praktyczne Hematologii i Transfuzjologii, 2007. - s. 50.
10. Coombs R., Mourant A., Race R. // Lancet. - 1945. - Cz. 2. - s. 15.
11. Freedman J. // J. Clin. Patol. - 1979. - Cz. 32. - s. 1014-1018.
12. Holburn AM. Kontrola jakości. Metody w hematologii / wyd. I. Cavill. - Edynburg: Churchill Livingstone, 1982. - Cz. 4. - s. 34-50.
13. Khan S.//CMAJ. - 2006. - Cz. 175, N 8. – s. 919.
14. Komatsu F.// Nippon Rinsho. - 2005. - Cz. 63 (uzupełnienie 7). - s. 719-721.
15. Komatsu F.// Nippon Rinsho. - 2005. - Cz. 63 (uzupełnienie 7). — s. 716—718.
16. Molthan L., Reidenberg M.M., Eihman M.F.// Nowy ang. J. Med. —1976. - Tom. 277. - s. 123-125.
17. Muirhead E.E., GajeM., Brian S. // J.Lab. Clin. Med. —1954. - Tom. 44. - s. 902-903.
18. Rosse W.F.//Hosp. Prac. - 1995. - N 105.
19. Voak D., Downie D., Moore'aB. i in. //Biotesty Bull. - 1986. - Cz. 1. - s. 41-52.
20. Voak D., Haigh T., Downie D. i in. Maszyny do mycia komórek do testów antyglobulinowych. Testy replikacyjne – nowa metoda wykazująca nieefektywność jednej powszechnie stosowanej maszyny – Sorvall CW1-AF2: raport dla Oddziału Technicznego DHSS, luty 1991.
21. Williams ME, Thomas D., Harman C.P.. i in. //Środki przeciwdrobnoustrojowe i chemioterapia. —1985. - s. 125-127.
22. Zarandona J.M., Yazer M.H.. //CMAJ. - 2006. - Cz. 174, N 3. – s. 305-307.
Wiadomości medyczne. - 2008. - nr 3. - s. 33-36.
Uwaga! Artykuł adresowany jest do lekarzy specjalistów. Przedruk tego artykułu lub jego fragmentów w Internecie bez hiperłącza do źródła jest uważany za naruszenie praw autorskich.