Os estudos bacteriológicos são uma das formas mais populares de testar vários fluidos biológicos. Se se trata de hemocultura, então estamos falando de um teste que ajuda a identificar infecções bacterianas em corpo humano. Um tanque de cultura é necessário quando exames de sangue de rotina não conseguem determinar a presença de bacteremia. Um tanque de semeadura envolve pegar o material e colocá-lo em um meio nutriente que contém componentes que permitem que as bactérias se multipliquem muito rapidamente.
Um exame de sangue bacteriológico sugere pré-cultivo culturas em meio nutriente. Portanto, os médicos chamam esses testes de estudos culturais. Quando, após vários dias, as bactérias começam a crescer ativamente, a amostra resultante é enviada para exame microscópico. Uma vez que as culturas tenham crescido suficientemente, não é mais difícil determinar a bacteriúria. No entanto, esta não é toda a análise. Neste caso, apenas uma avaliação preliminar é feita. Para identificar bactérias com mais precisão, a etapa a seguir é executada. Este é um tanque que inocula amostras de cultura líquida em um meio denso em uma placa de Petri. Este teste ajuda a identificar colônias bacterianas em crescimento. Testes químicos agora podem ser realizados com suas amostras, o que permitirá uma determinação mais precisa do tipo final de microrganismo.
Todas essas etapas são preparatórias para testar espécies bacterianas quanto à sensibilidade a vários tipos de antibióticos. Isto é necessário para encontrar o medicamento mais adequado para combater a infecção.
Fazendo análise bacteriológica sangue pode ser detectado:
- estafilococos;
- estreptococos;
- enterobactérias;
- fungos de levedura.
Exames de sangue para infecção bacteriana V obrigatório realizado em pacientes com imunidade reduzida. Por exemplo, as bactérias da tuberculose são frequentemente encontradas em pessoas com VIH. Tal exame ajuda a eliminar resultados incorretos.
Nas doenças infecciosas, bactérias e microrganismos têm a oportunidade de penetrar na corrente sanguínea e entrar em outros sistemas do corpo localizados próximos à própria fonte. Se o exame de hemocultura apresentar resultado positivo, significa que a infecção já progrediu. Isto pode ser acompanhado por um aumento da temperatura, um aumento dos glóbulos brancos e interrupções na função cardíaca.
Características da análise
O método de pesquisa bacteriológica, como qualquer outro teste, tem seus prós e contras. Entre as vantagens está a alta especificidade do método. Isso evita reações falsas cruzadas. Qualquer fluido biológico é adequado para pesquisa. Uma baciloscopia, exame de urina, exame de sangue, etc. podem ser realizados. Finalidade terapêuticaé determinar a sensibilidade do micróbio identificado a um agente terapêutico específico. Isso permite destruir rapidamente microorganismos sem perder tempo com tratamentos desnecessários.
Claro, existem algumas desvantagens. Dentre eles, pode-se notar que a semeadura bacteriana leva tempo para ser concluída. Normalmente, o material em estudo é mantido no laboratório por pelo menos uma semana. Existem requisitos sérios para a coleta de material; é importante seguir todas as regras de coleta de material para pesquisa bacteriológica. Além disso, o pessoal do laboratório deve possuir qualificações especiais.
Normalmente, os resultados de um estudo bacteriológico são obtidos a partir de amostras de qualquer fluido biológico humano: do muco da nasofaringe ao líquido cefalorraquidiano. A hemocultura, como qualquer outro líquido, não requer preparo especial para análise. Durante dois ou três dias, é recomendável abandonar alimentos gordurosos e fritos e não ingerir bebidas alcoólicas. Se você doar sangue, deverá fazer sua última refeição pelo menos 12 horas antes. Esse recurso de entrega é chamado estritamente com o estômago vazio. É proibido fumar várias horas antes do teste.
O sangue para cultura, quando se trata de esterilidade, é colhido diversas vezes em um determinado período de tempo. Isso se deve ao fato de que nem sempre é possível contrair a infecção meio nutriente uma amostra de cada vez, portanto uma única amostragem não é considerada eficaz. É possível dizer que um determinado microrganismo foi o provocador de uma determinada infecção somente após um estudo seriado ter sido realizado pelo menos duas vezes. Como resultado de testes repetidos, as bactérias suspeitas devem ser identificadas. É possível realizar testes simultâneos não apenas de sangue, mas também de outros fluidos biológicos.
O sangue deve ser coletado no máximo Temperatura alta. Ao mesmo tempo, preliminar tratamento com antibióticos pode confundir os resultados. EM como último recurso, devem decorrer pelo menos 24 horas desde a última dose de antibiótico. A coleta de sangue é realizada pela manhã.
Após a coleta, a semeadura é realizada em meio nutriente favorável ao crescimento bacteriano. Essas amostras são mantidas a uma temperatura de 37 a 38 graus por vários dias.
Atualmente são realizados dois tipos de semeadura. É sobre na cultura para determinar a sensibilidade ao principal espectro antibiótico e na cultura para determinar a sensibilidade ao ampla variedade medicação. Geralmente leva pelo menos três dias para obter os primeiros resultados. Às vezes, o estudo dura até duas semanas.
Infecção viral
Quando um vírus entra no corpo, a presença ou ausência pode ser diagnosticada usando análise geral sangue. Normalmente, até o próprio paciente pode determinar a presença de infecção sem problemas, tendo recebido o resultado do exame em mãos. No entanto, isso não significa que você deva excluir a consulta com um especialista.
Para determinar se a infecção foi causada por um vírus ou bactéria, é necessário ler atentamente os dados obtidos. O fato é que a composição estrutural do sangue muda de forma diferente, dependendo se a causa da infecção é um vírus ou uma bactéria.
Se o motivo Sentindo mal se tornou um vírus, então os leucócitos ficarão normais ou até um pouco mais baixos, nos casos mais raros há um ligeiro aumento. Os linfócitos estão representados acima do normal, assim como os monócitos. O vírus tem um efeito deprimente sobre os neutrófilos, fazendo com que seu número diminua. A VHS geralmente permanece normal ou aumenta ligeiramente.
Mesmo que tudo o que foi descrito coincida com a sua análise, é importante levar em consideração os sintomas que você desenvolveu. Para infecção viral caracterizado por menor período de incubação. Geralmente não ultrapassa cinco dias. Ao mesmo tempo, deve-se excluir o diagnóstico independente, pois às vezes a manifestação da bactéria ocorre no contexto do desenvolvimento de um vírus, e apenas um especialista terá dificuldade em determinar essa etiologia.
Várias amostras
Na coleta de urina para exame bacteriológico, presume-se a coleta da urina matinal, sua porção média. A higienização da genitália externa é realizada primeiro. A coleta é realizada em recipiente estéril com capacidade de 10 a 15 ml. O teste deve ser entregue ao laboratório no prazo máximo de duas horas.
Se for necessário examinar um cotonete da garganta e do nariz, pela manhã é proibido escovar os dentes, enxaguar a boca e o nariz com soluções desinfetantes. É proibido consumir alimentos e água. Se for necessário realizar cultura bacteriana de fezes, as fezes são coletadas das fezes matinais usando uma espátula estéril em um recipiente estéril; É importante que nenhuma urina entre na amostra.
O teste deve ser entregue em até cinco horas. É proibido armazenar o teste durante a noite ou congelá-lo. A coleta de fezes com enema e laxante também deve ser excluída.
Se for necessário examinar o escarro, a coleta é realizada pela manhã com o estômago vazio em um recipiente estéril durante uma crise de tosse junto com o muco. Antes da coleta é permitido escovar os dentes, mas o enxágue só deve ser usado água fervida. A análise é entregue ao laboratório em uma hora.
Coleção leite materno realizado após preliminar procedimentos de higiene. A área ao redor dos mamilos deve ser tratada com um cotonete umedecido com 70% de Álcool etílico. Os primeiros 15 ml não poderão ser utilizados para doação. 5 ml são decantados da porção média. A entrega da análise deve ser concluída em até duas horas.
Se for realizada uma análise do corrimento genital, para as mulheres é proibido fazer testes durante a menstruação; Se um curso de antibióticos foi administrado anteriormente, um mês deve se passar após a conclusão. A higienização da genitália externa é realizada primeiro. É aconselhável não urinar durante duas horas. Os homens são aconselhados a prolongar o tempo que não vão ao banheiro para cinco horas.
Cultura bacteriológica– método de estudo de material biológico (sangue, urina, fezes, etc.) retirado de um paciente e colocado em meio nutriente artificial que promove o crescimento e a reprodução do patógeno. O estudo pode revelar não só a presença do patógeno, mas também sua concentração. Desta forma, você pode examinar, além do que já foi listado, líquido cefalorraquidiano (LCR), escarro, bile, secreção pela garganta, nariz, olhos, trato respiratório, genitais, feridas. Ou seja, os microrganismos podem ser inoculados em quase qualquer parte do corpo. Tais técnicas são convenientes para encontrar e identificar bactérias e fungos, desta forma é muito mais difícil, devido às peculiaridades da biologia dos vírus;
As culturas bacteriológicas permitem não apenas determinar os tipos de micróbios que provocam uma determinada doença, mas também selecionar antibióticos eficazes(determinar a sensibilidade dos micróbios a eles), o que ajudará na recuperação. Apenas a amostragem do material precisa ser feita antes de iniciar a antibioticoterapia. A cultura bacteriológica pode ser prescrita tanto em uma clínica (por exemplo, o conhecido exame de fezes para disbacteriose) quanto em um hospital (por exemplo, para infecções intestinais, e também se o material biológico for de difícil acesso, como o líquido cefalorraquidiano). Após a retirada do material do paciente, ele é colocado em meio nutriente especial e os resultados são avaliados após 3 a 10 dias. Especialistas de seu laboratório microbiológico podem reconhecer (identificar) um micróbio determinando características morfológicas, culturais e bioquímicas. A morfologia (estrutura) da “praga” é estudada ao microscópio. As propriedades culturais são caracterizadas pelas necessidades, condições e tipo de crescimento dos microrganismos em meio nutriente; Características bioquímicas são determinados por um conjunto de enzimas sintetizadas pelo micróbio no processo da vida. Preste atenção também aos pigmentos que colorem colônias de microrganismos e meios nutrientes, por exemplo, o pigmento dourado forma Staphylococcus aureus.
Tipos de análises
Exame de sangue bacteriológico
Indicações: suspeita de envenenamento do sangue; por muito tempo temperatura elevada, cuja causa não pode ser determinada; suspeita de certas doenças infecciosas (por exemplo, infecções intestinais, meningite epidêmica, estafilococos e infecções estreptocócicas). O sangue é coletado no momento do aumento máximo da temperatura (durante este período a concentração de microrganismos no sangue é especialmente alta), antes de tomar antibióticos (se o diagnóstico ainda não tiver sido estabelecido) ou após tomar antibióticos 10-14 dias depois (para monitorar os resultados do tratamento). O sangue é coletado à beira do leito do paciente ou no vestiário e imediatamente inoculado em meio nutriente. Um exame de sangue único é ineficaz se for detectado condicionalmente patógenos, vivendo na pele humana, e quando certas condições(com diminuição forças protetoras organismo) que pode causar doenças, sem estudos repetidos é difícil compreender a veracidade dos resultados. Portanto, uma série de 3 ou mais estudos pode ser realizada durante um determinado período de tempo. Para afirmar isso em nesse caso o agente causador é qualquer microrganismo, permite a detecção rápida (dentro de 48 horas) do microrganismo, isolamento repetido do sangue ou isolamento simultâneo de outros tipos de material de teste (sangue e urina, sangue e escarro, etc.), além de sua detecção simultaneamente em diferentes meios nutrientes.
Descarga, esfregaços do trato respiratório superior
Indicações: doenças inflamatórias trato respiratório superior e pneumonia sem expectoração, diagnóstico doenças infecciosas trato respiratório (difteria, tosse convulsa, escarlatina), diagnóstico de transporte bacteriano em meningococo, difteria e infecções estafilocócicas. O material é coletado das fossas nasais com um swab estéril seco e da faringe com um cotonete estéril umedecido. Os cotonetes do nariz e da garganta são coletados com cotonetes diferentes. O material da faringe e das amígdalas é retirado com o estômago vazio antes dos procedimentos de higiene ou não antes de 3–4 horas após a alimentação. Ao colher esfregaços da parte posterior da faringe e amígdalas, não se deve tocar a língua, a mucosa da bochecha ou os dentes com o cotonete, por isso os pais devem criar condições para que enfermeira foi conveniente trabalhar com o bebê - é melhor avisar com antecedência que o procedimento será muito curto, mas será possível pegar o micróbio que vive na boca do bebê, mas para isso ele deve abrir a boca e não se mover por vários segundos (algumas contagens).
Exame bacteriológico da urina
Indicações: doenças inflamatórias dos rins e bexiga e controle após tratamento, diagnóstico de doenças infecciosas (febre tifóide, leptospirose). Um teste de flora urinária é realizado antes de iniciar a antibioticoterapia. Uma porção média de urina liberada livremente (3–5 ml) é coletada em um recipiente estéril. A porção intermediária da urina é a menos contaminada com micróbios que podem estar na genitália externa. Seu estudo fornece uma imagem mais objetiva da condição dos rins; trato urinário. Melhor para usar urina matinal contendo maior número bactérias. Antes de retirar o material, é necessária uma higienização completa da genitália externa. Os meninos devem expor a cabeça do pênis (a menos que sejam circuncidados) e liberar uma pequena quantidade de urina; em seguida, solte uma porção da urina em um recipiente estéril (não colete a última parte), feche o recipiente e transfira para o laboratório. Para as meninas, lave os órgãos genitais com água morna. água ensaboada, no sentido da frente para trás; enxágue os órgãos genitais novamente água morna e limpe com um pano estéril. Colete uma amostra média de urina em um recipiente estéril (deve ser coletada no laboratório). A urina pode ser armazenada antes do estudo por não mais que 1–2 horas em temperatura ambiente e não mais que um dia na geladeira, pois há risco de crescimento bacteriano e distorção dos resultados do estudo.
Descarga da ferida
Indicações: sinais de processo inflamatório purulento na ferida. O material é levado por um médico. A pele ao redor da ferida é tratada com um anti-séptico e o pus é removido com um guardanapo estéril. O material é retirado com um cotonete estéril. Se houver drenagens na ferida (tubos por onde flui o conteúdo da ferida), a secreção deles é aspirada com uma seringa na quantidade de 1–2 ml e colocada em um tubo estéril.
Exame bacteriológico de fezes
Indicações: diagnóstico de infecções intestinais, controle na alta de pacientes com quadro agudo infecções intestinais(disenteria, salmonelose, etc.) do hospital, diagnóstico disfunções crônicas intestinos, diagnóstico de disbiose intestinal, identificação de portadores de bactérias. O material a ser testado pode ser fezes obtidas durante a defecação natural ou por meio de tampões especiais (alças). Para coleta de material por defecação natural, utilizar bem lavado e livre de vestígios. desinfetantes recipientes ou potes. Uma folha de papel limpo pode ser colocada no fundo do recipiente para proteger o material de vestígios do desinfetante. Uma amostra de fezes é coletada imediatamente após a defecação usando uma haste de vidro estéril, uma alça de arame, uma espátula de madeira ou uma colher especial montada na tampa de um recipiente estéril, que pode ser obtida no laboratório. Se houver muco, pus ou outras inclusões, é necessário selecionar áreas que contenham essas impurezas, mas que estejam livres de sangue. A obtenção de material do reto por meio de tampões retais (alças) é realizada por uma enfermeira. A criança é solicitada a deitar-se de lado, com os quadris puxados até a barriga e as nádegas afastadas com as palmas das mãos. Um laço (tampão) é inserido em ânus a uma profundidade de 5–6 cm. O material é coletado em recipientes estéreis vazios ou tubos de ensaio com conservante. Se não for utilizado conservante, o tempo antes do início do exame bacteriológico não deve, em hipótese alguma, ultrapassar 2 horas. A detecção mesmo de microrganismos patogênicos nas fezes nem sempre indica a presença de uma doença, mas pode ser devido ao transporte bacteriano. Portanto, a avaliação dos resultados deve ser realizada levando em consideração as manifestações da doença. Para avaliar corretamente os resultados, recomenda-se a realização de 2 a 3 estudos com intervalo de 1 a 2 dias. O diagnóstico da disbiose intestinal é realizado com base na avaliação das alterações qualitativas e quantitativas na composição da microflora do intestino grosso. Deve-se notar que não apenas o estado da flora microbiana intestinal em um determinado momento é importante, mas também as alterações que ocorrem no intestino. Portanto, para uma avaliação mais precisa da condição microflora intestinal o estudo também precisa ser repetido várias vezes. A confiabilidade do resultado obtido é muito influenciada pelo cumprimento dos prazos de transporte do material. Em alguns casos, quando o cumprimento destes prazos não for realista, deve recusar-se a determinar o número de bactérias ou abordar as informações sobre a redução do seu número com cautela.
Licor
Indicações: suspeita de meningite (inflamação das partes moles meninges). O LCR (líquido cefalorraquidiano) é obtido por punção lombar(obtenção de líquido cefalorraquidiano do canal medula espinhal), menos frequentemente com punção dos ventrículos laterais do cérebro (neste caso, o líquido cefalorraquidiano é obtido dos chamados ventrículos do cérebro, fazendo uma punção atrás do exterior canal do ouvido). O líquido cefalorraquidiano é retirado por um médico; esse procedimento é sempre realizado apenas em ambiente hospitalar. O licor normalmente é estéril, portanto o fato de encontrar algum microrganismo pode ser significativo. Em crianças, a meningite é frequentemente acompanhada de bacteremia - a presença de um patógeno no sangue, portanto, é realizado um estudo simultâneo do sangue e do líquido cefalorraquidiano.
Resultados da pesquisa bacteriológica
Somente um médico pode ler o resultado do teste corretamente. Em alguns casos, o que importa não é o fato da detecção de determinados microrganismos, mas sim a sua quantidade. Freqüentemente, a quantidade desempenha um papel no prognóstico da doença e na natureza do tratamento. Assim, por exemplo, em bexiga Normalmente a urina é estéril, mas durante a passagem pelo terço inferior da uretra entra em contato com microflora normal e disponibilidade processo patológico dizem apenas quando o título do patógeno (sua quantidade) é superior a 10 4 UFC/ml. Avaliar o número de microrganismos na secreção da ferida é importante para prever o curso do processo. Foi estabelecido que quando o nível de contaminação microbiana da ferida é superior a 105 células ( células microbianas) por 1 g de tecido (por 1 ml de secreção), a supuração se desenvolve mesmo em tecidos viáveis. Se houver tecido morto na ferida, hematomas, corpos estrangeiros desenvolvimento processo purulento possível com mais níveis baixos contaminação. Além disso, em níveis de contaminação de feridas superiores a 105 células por 1 g de secreção da ferida, a ameaça de desenvolvimento de sepse aumenta acentuadamente. Com base nos resultados do exame, os regimes de tratamento são alterados de uma forma ou de outra. Concluindo, notamos que o resultado de qualquer análise, inclusive bacteriológica, pode ser errôneo, portanto o médico pode prescrever estudos confirmatórios ou esclarecedores, por exemplo, reação em cadeia da polimerase (PCR) para determinar o DNA do patógeno, etc.
O exame bacteriológico clássico é o padrão “ouro” para diagnóstico microbiológico.
O objetivo da pesquisa bacteriológica é isolar uma cultura pura do patógeno e identificá-lo.
Algoritmo para pesquisa bacteriológica:
Microscopia primária do material em estudo (etapa opcional, dependendo da natureza do material);
Semeadura primária para isolar uma cultura pura;
Acúmulo de cultura pura;
Estudo do complexo propriedades biológicas cultura selecionada;
Identificação final do patógeno.
1º dia de estudo
1. Microscopia primária
O resultado da microscopia primária dá uma ideia aproximada da presença de vários formas morfológicas microorganismos, e também permite sua identificação primária pelas propriedades morfológicas e tintoriais e a seleção de meios para inoculação primária.
Descarga purulenta - é necessária microscopia primária.
Líquido cefalorraquidiano- é necessária microscopia primária de sedimentos.
Escarro - a microscopia primária é realizada a partir de diluições de 10 4 -10 5.
Cotonetes da garganta e do nariz - a microscopia primária não é realizada.
Sangue - a microscopia primária não é realizada.
Fezes - a microscopia primária não é realizada.
2. Semeadura primária
O material de teste após microscopia primária ou sem ela (fezes, urina, esfregaços nasais e de garganta, sangue) é inoculado em meio apropriado para isolar uma cultura pura:
Caldo de açúcar, ágar sangue - para estreptococos;
Ágar gema-sal, ágar sangue - para estafilococos;
Meio Endo - para bactérias da família Enterobacteriaceae;
MPA (ágar peptona de carne) - para bactérias gram-negativas;
MPA (semeadura segundo o método Shukevich) - para isolamento de Proteus;
Meio Kitta-Tarozzi - para isolamento de anaeróbios;
Meio de Sabouraud - para isolamento de fungos.
A semeadura é a primeira etapa do exame bacteriológico (se a microscopia primária não for realizada).
A semeadura é realizada Da seguinte maneira:
Semeando com raia e disparando o laço. O material é retirado com alça bacteriológica calcinada e a área superior do copo é densamente inoculada com uma estria. Em seguida, o laço é novamente calcinado e trazido para um setor densamente semeado e 2-3 linhas verticais são desenhadas em todo o copo. Depois disso, o copo é virado, o setor densamente semeado permanece na parte inferior do copo. O laço é aquecido novamente e a sementeira é espalhada pelo copo em 2-3 movimentos horizontais.
Semeando com espátula. O material é aplicado na superfície do meio com espátula ou pipeta e depois espalhado por toda a superfície com espátula.
Semeando com cotonete. Para a inoculação, um cotonete com o material de teste é colocado em um copo e seu conteúdo é esfregado no meio nutriente em movimentos circulares.
Semeadura por setores. Com esta semeadura, o fundo do copo é dividido em setores, a semeadura é realizada com movimentos tracejados da borda do copo para o centro e ao longo dos setores.
Dia 2 do estudo
1. Registre o crescimento em meio nutriente como homogêneo ou heterogêneo.
2. Realizar uma descrição dos bens culturais.
Algoritmo para descrever colônias
Como resultado do crescimento em meio nutriente, formam-se colônias (descendentes de uma célula). Colônias isoladas são selecionadas e estudadas - inicia-se a segunda etapa do estudo, que visa estudar as propriedades culturais das bactérias. O conhecimento dessas propriedades é necessário para identificar a cultura pura resultante, pois cada tipo de microrganismo, ao crescer em determinado meio nutriente, corresponde a determinadas propriedades culturais.
Estudo de colônias:
Macroscopicamente: a olho nu em luz transmitida e refletida;
Microscopicamente: em baixa ampliação de um sistema de microscópio seco.
Na luz transmitida eles estudam:
O tamanho das colônias (grandes, médias, pequenas, anãs);
Formato da colônia (regular, irregular, redondo);
Transparência da colônia (transparente, opaca).
Na luz refletida determine:
Cor (incolor ou colorida);
A natureza da superfície (lisa, acidentada, brilhante, áspera);
A altura das colônias acima da superfície do meio (deprimida, plana, elevada).
Avaliar microscopicamente:
Borda (lisa, irregular);
Estrutura (homogênea, não homogênea).
O estudo das colônias termina com a preparação de esfregaço, coloração de Gram e microscopia.
Ao retirar material de uma colônia para preparar um esfregaço, avalia-se sua consistência (macia, viscosa, seca).
Se a cultura estiver limpa ao microscópio, ela será subcultivada em ágar inclinado para acumulação.
Dia 3 do estudo
1. Descrição do padrão de crescimento em ágar inclinado:
Homogêneo, heterogêneo;
Ao longo do curso, contínuo, contínuo.
2. Verificação da pureza da cultura acumulada. Os esfregaços são preparados, corados por Gram e examinados microscopicamente. Se uma cultura pura foi acumulada, ela passa por identificação adicional. A identificação de bactérias em gênero e espécie é baseada no estudo de características metabólicas - identificação bioquímica e estrutura antigênica - identificação sorológica.
3. Estudo das propriedades bioquímicas. Propriedades bioquímicas – a capacidade das bactérias de quebrar certos substratos através da produção de enzimas apropriadas. Para estudar as propriedades bioquímicas, são utilizados meios de diagnóstico diferencial contendo vários substratos (séries variadas). Eles incluem meio Hiss com carboidratos, leite tornassol, gelatina, meio com aminoácidos, MPB (caldo de peptona de carne) com indicadores de sulfeto de hidrogênio e indol.
As propriedades sacarolíticas são estudadas em meio Hiss. Eles contêm água peptonada, substrato de carboidrato (vários mono e polissacarídeos), álcoois poli-hídricos e um indicador.
Se as bactérias possuem enzimas que decompõem o substrato de carboidratos, elas liberam produtos metabólicos (ácido ou ácido e gás). Quando o ácido se forma, o indicador muda a cor do meio; quando o gás se forma, são registradas quebras no meio.
As propriedades proteolíticas são estudadas por cultura em gelatina e leite tornassol. Se as bactérias tiverem proteases, a gelatina se liquefaz. Um coágulo de cor creme aparece no leite e um líquido acima dele - peptonização do leite (devido ao fato de que as proteases bacterianas decompõem a caseína do leite em peptona).
Propriedades peptolíticas. Mais frequentemente, as bactérias são capazes de quebrar produtos intermediários da degradação de proteínas - peptonas. Os produtos deste processo: aminas (escatol, indol), aminoácidos, gases (sulfeto de hidrogênio, amônia, dióxido de carbono). Eles podem ser detectados usando papel indicador:
Teste decisivo - para detectar amônia;
Umedecido com ácido oxaloacético - para detectar indol;
Umedecido com acetato de chumbo - para detectar sulfeto de hidrogênio. Os produtos de desaminação e descarboxilação de aminoácidos são detectados por meio de tiras de teste que mudam de cor quando o pH do meio muda.
Dia 4 do estudo
1. Registre os resultados dos testes bioquímicos. Após a identificação de uma cultura para sua espécie, uma série de características adicionais são estudadas, como sensibilidade a antibióticos, toxigenicidade, presença de fatores de virulência, perfil plasmidial e também é realizada diferenciação intraespecífica.
2. Os resultados da identificação bioquímica servem de base para a identificação serológica. A identificação sorológica da cultura isolada é realizada em reação de aglutinação em vidro utilizando soros imunoadsorvidos apropriados, cuja escolha é determinada pelos resultados da identificação bioquímica.
Diferenciação intraespecífica - determinar se uma cepa pertence a um determinado fagovar, bacteriocinogenovavar, bacteriocinovar, biovar, resistovar, etc. Permite-nos identificar ligações epidemiológicas entre estirpes da mesma espécie.
A identificação da cultura isolada permite concluir sobre qual microrganismo serve fator etiológico doenças. Ao isolar condicionalmente bactéria patogênicaé necessário cumprir os critérios de significância etiológica:
A presença de bactérias no material do foco patológico em quantidade de pelo menos 10 5 UFC ml/g;
Isolamento repetido de material da mesma cultura;
Um aumento no título de anticorpos no soro sanguíneo do paciente para auto-estirpe em 4 vezes ou mais.
Determinação de fagos bacterianos (tipagem de fagos)
A identificação do fagovar é realizada de acordo com indicações epidemiológicas para estabelecer conexões epidemiológicas entre pessoas doentes. Para realizar o estudo, pegue placas de Petri com MPA, seque a superfície, desenhe o fundo em quadrados e marque-os. Em seguida, uma cultura de 3-4 horas em caldo é semeada com um gramado, seca e uma gota do fago padrão correspondente em uma diluição de trabalho é aplicada em cada quadrado. As colheitas são colocadas em termostato por um dia. Após 24 horas, é levado em consideração o espectro de sensibilidade da cultura a determinados fagos por ação lítica.
determinação de bacteriocinovar
Para determinar o bacteriocinovar, é determinada a sensibilidade das cepas estudadas ao bacteriocinovar de referência. Assim como a fagotipagem, é realizada de acordo com indicações epidemiológicas.
Para realizar o estudo, as culturas padrão correspondentes de bacteriocinas típicas são semeadas em meio nutriente. As colheitas são colocadas num termóstato a 37 °C durante 48 horas.
As colônias cultivadas de culturas indicadoras são inativadas com clorofórmio, após o que 2-4 ml de ágar fundido são derramados sobre a superfície, à qual são adicionados primeiro 0,2 ml do caldo de cultura de 4 horas em estudo. Após o endurecimento do ágar, as culturas são novamente colocadas em termostato por 18-24 horas. Após o tempo especificado, é levada em consideração a presença de zonas de inibição de crescimento ao redor das culturas indicadoras, determinando assim o bacteriocinovar da bactéria estudada.
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Data de criação da página: 27/04/2016
Para conseguir resultado confiável a análise deve ser realizada pelo menos 2 semanas após a última dose de antibióticos e (ou) antibacterianos.
- Raspar de uretra Recomenda-se fazer o teste 2 horas após a última micção, a partir de faringe e nasofaringe – com o estômago vazio (4-5 horas após a última refeição, neste caso é necessário excluir escovar os dentes e enxaguar a boca), para outros loci treino especial não requerido.
- Urina. O objeto de estudo é uma porção média de urina liberada livremente, na quantidade de 3-5 ml em recipiente plástico estéril descartável (o recipiente pode ser obtido na recepção) após higienização minuciosa da genitália externa sem o uso de antissépticos . O prazo de entrega ao laboratório à temperatura ambiente é de 1-2 horas, a uma temperatura de 2-8°C – 5-6 horas.
- Esperma para pesquisas bacteriológicas, é coletado em recipiente plástico estéril descartável de gargalo largo por masturbação (o recipiente pode ser obtido na recepção). O prazo de entrega do material ao laboratório em temperatura ambiente é de 1 a 2 horas.
- Escarro Recomenda-se coletar pela manhã, com o estômago vazio após a higienização cavidade oral, em um recipiente plástico estéril. O prazo de entrega do material ao laboratório em temperatura ambiente é de 1 a 2 horas, em temperatura de 2 a 8°C - de 5 a 6 horas.
- Cerca segredo próstata realizada por urologista após massagem preliminar da próstata (esta manipulação é realizada apenas no Gabinete Central). Antes de coletar as secreções da próstata, recomenda-se abstinência sexual por pelo menos 2 dias.
- Pesquisa bacteriológica leite materno . O leite materno é coletado somente antes de o bebê ser alimentado ou duas horas após a amamentação. O paciente sendo examinado lava a esquerda e a direita glândula mamáriaágua morna e sabão e seque com uma toalha limpa. Trate a superfície dos mamilos e pontas dos dedos com algodão moderadamente umedecido em álcool etílico 70%. A primeira porção do leite materno, aproximadamente 0,5 ml, é descartada. A seguir, sem tocar o mamilo com as mãos, a mulher extrai 0,5 - 1 ml de leite de cada glândula em um recipiente estéril separado (os recipientes podem ser adquiridos na recepção). O prazo de entrega ao laboratório à temperatura ambiente é de 1-2 horas, a uma temperatura de 2-8°C – 5-6 horas.
- Cerca com fluido inovial para o exame bacteriológico, é realizado por um médico em recipiente plástico estéril (o recipiente pode ser obtido na recepção). Este procedimento não é realizado em laboratório. O prazo de entrega do material ao laboratório em temperatura ambiente é de 1 a 2 horas, em temperatura de 2 a 8°C - de 5 a 6 horas.
- Cerca secreção da ferida o exame bacteriológico é realizado por médico, em recipiente descartável com meio de Ames (o recipiente pode ser adquirido na recepção). O prazo de entrega do material ao laboratório em temperatura ambiente é de 6 horas, em temperatura de 2 a 8°C - até 2 dias.
- Bile para pesquisas bacteriológicas, é coletado durante a sondagem, separadamente, nas porções A, B e C em três tubos estéreis, ou durante a cirurgia com seringa em um tubo, observando as regras de assepsia (este procedimento não é realizado em laboratório). O prazo de entrega do material ao laboratório em temperatura ambiente é de 1 a 2 horas, em temperatura de 2 a 8°C - de 5 a 6 horas.
A pesquisa bacteriológica é um estudo que visa isolar e estudar suas propriedades para fazer um diagnóstico microbiológico.
O material de teste deve ser coletado sob condições assépticas em recipientes estéreis e entregue ao laboratório o mais rápido possível. Se necessário, as amostras devem ser armazenadas refrigeradas. A técnica de amostragem depende do objeto, da natureza da doença e das propriedades do microrganismo. Um dos métodos comuns de pesquisa bacteriológica é a bacterioscopia.
Para estudar bactérias não fixadas, são utilizados dois métodos: uma gota triturada (entre a lâmina e a lamínula) e . Deve ser lembrado que as preparações de bactérias não fixadas são infecciosas.
Para bacterioscopia de preparações fixas, são utilizados esfregaços. Para prepará-los, uma gota do líquido teste é distribuída sobre a superfície de uma lâmina de vidro e depois seca. O método mais comum de fixação do medicamento é passá-lo pela chama de um queimador de gás. Em alguns casos, são utilizados compostos de fixação. As preparações fixas são geralmente coradas (ver Coloração de microrganismos). Para o número elementos essenciais A pesquisa bacteriológica inclui inoculações e subculturas realizadas com alça bacteriana ou pipeta Pasteur. A alça é esterilizada por recozimento em chama e depois resfriada tocando uma área de ágar não inoculado ou enxaguando em líquido estéril. Ao usar uma pipeta Pasteur, quebre a ponta com uma pinça, passe a pipeta várias vezes pela chama do queimador e deixe esfriar. Na semeadura, utilizam-se meios nutritivos líquidos e sólidos. Quando semeada em ágar inclinado, a cultura bacteriana é esfregada com uma alça sobre a superfície do ágar. Ao semear na espessura de uma coluna de ágar ou gelatina, o meio nutriente é perfurado no fundo do tubo com uma alça ou agulha especial. Ao semear em meio líquido, deve-se ter cuidado para que o líquido não escorra e molhe as bordas dos tubos e rolhas. As inoculações e subculturas devem ser realizadas próximas à chama de um queimador de gás, os tubos de ensaio não devem permanecer abertos por muito tempo, a alça ou pipeta Pasteur com a cultura não deve tocar em nada; Antes de fechar o tubo de ensaio, as bordas devem ser queimadas. Os tubos inoculados devem ser rotulados imediatamente.
A etapa mais importante da pesquisa bacteriológica é a identificação - determinação da espécie ou tipo de bactéria obtida na forma de cultura pura. Ao identificar bactérias, são estudadas suas propriedades fisiológicas e bioquímicas e a formação de toxinas. Métodos sorológicos para identificação de bactérias (reações e) são amplamente utilizados. Em muitos casos, um método biológico para identificação de microrganismos é eficaz, baseado na infecção de animais de laboratório com o material em estudo ou na cultura bacteriana resultante e na identificação de alterações patológicas características nos animais.
Métodos mecânicos e biológicos são usados para isolar culturas puras. Um exemplo de método mecânico: uma gota do material de teste é moída com a mesma espátula estéril ou alça bacteriana sobre a superfície de um meio nutriente denso, sucessivamente no primeiro, segundo e terceiro. O isolamento de uma cultura pura é feito a partir de colônias individuais cultivadas e consiste em seu exame e triagem em meio nutriente fresco. Os métodos biológicos de isolamento de culturas puras baseiam-se na consideração de uma ou outra propriedade do micróbio isolado, que o distingue de outros micróbios encontrados no material em estudo.
Com o método biológico, são utilizados meios nutrientes nos quais são criadas condições favoráveis ao desenvolvimento. certo tipo micróbios Os métodos biológicos também incluem a infecção de animais de laboratório sensíveis às espécies isoladas de bactérias.
Pesquisa bacteriológica - um conjunto de métodos para identificar microorganismos patogênicos no paciente, no transportador ou em objetos ambiente externo. Os estudos bacteriológicos também são utilizados para detectar micróbios oportunistas e sanitários que caracterizam o grau de poluição do ambiente externo, para estudar a paisagem microbiana de um determinado ambiente (objeto). A pesquisa bacteriológica pode ser utilizada para diagnóstico, prevenção de doenças infecciosas, para características sanitárias e higiênicas do ambiente humano, para pesquisa científica.
O material e método da pesquisa bacteriológica dependem da finalidade da análise, das condições ambientais, da patogênese e do curso da doença. Se houver bacteremia, o micróbio é detectado por meio de hemocultura. Nos casos de lesões locais pronunciadas, o patógeno deve ser procurado nas secreções ou secreções do órgão afetado (difteria, disenteria, gonorreia, etc.). Finalmente, em doenças de curso complexo, quando (como, por exemplo, na febre tifóide) a bacteremia é substituída por lesões intestino delgado, em cada etapa é utilizado um método de pesquisa adequado: na primeira semana da doença são realizadas hemoculturas, na segunda, de forma mais confiável teste sorológico, a partir da terceira semana, obtém-se resultado positivo pela coprocultura; Este último método também é utilizado como estudo de controle para detectar portadores de bactérias entre convalescentes e monitorá-los.
Qualquer uma destas tarefas é realizada utilizando métodos concebidos para o isolamento e determinação de microrganismos. Dependendo das características do micróbio, todo o conjunto de métodos ou partes dele são utilizados.
A bacterioscopia é a técnica mais acessível, baseada no exame microscópico do material. Ao microscopiar preparações frescas, você pode usar algumas reações microquímicas (por exemplo, coloração de bactérias iodofílicas com solução de Lugol) ou coloração seletiva de diferentes partes estruturais das bactérias.
As bactérias podem ser identificadas mais claramente numa preparação colorida. O material de teste é aplicado em deslizar camada fina e o mais uniforme possível. Deixe o preparo secar ao ar e fixe-o por um dos métodos geralmente aceitos, mas na maioria das vezes por flambagem, ou seja, passando rapidamente o preparo sobre a chama do queimador duas ou três vezes para que o vidro fique quente, mas não quente. A preparação, resfriada após a fixação, é corada com uma coloração simples ou diferencial (ver Coloração de microrganismos). Para microscopia de fluorescência, são utilizadas preparações nativas e secas. Nesse caso, o tratamento com certos corantes faz com que as estruturas do corpo microbiano ou de todo o micróbio brilhem em raios ultravioleta ou azuis curtos. Em outra modificação, os micróbios são tratados com soros específicos marcados com fluorescentes (corantes). As bactérias correspondentes ao soro brilharão à medida que o soro rotulado for depositado sobre elas. Bactérias heterólogas não brilharão.
O método de bacterioscopia é amplamente utilizado para diagnóstico bacteriológico de algumas doenças infecciosas (gonorreia, tuberculose, Febre Relapsa), bem como no estudo de todo o complexo da microflora de um órgão (amígdalas, vagina), produto ou outro objeto.
O método de semeadura, ou seja, o isolamento de uma cultura pura do microrganismo desejado, é um método de diagnóstico bacteriológico mais preciso e confiável do que a bacterioscopia. O material fresco é espalhado sobre a superfície de um meio nutriente denso e colocado em placas de Petri. A semeadura primária é realizada em meios comuns favoráveis para um determinado micróbio, em meios diferenciais ou seletivos. A escolha do meio nutriente (ver), bem como o método de pré-tratamento do material fresco para semeadura, depende do grau de sua contaminação com a microflora estranha que o acompanha. Em 24-48 horas. mantidos em um termostato na temperatura ideal para um determinado micróbio, os copos são examinados e as colônias suspeitas são subcultivadas em meios que promovem a proliferação desse patógeno. Obtém-se assim uma cultura de bactérias homogêneas, que devem ser identificadas.
A identificação de um micróbio começa com o estudo de sua morfologia em uma preparação colorida e em uma gota triturada (ver) para determinar a forma dos micróbios e sua mobilidade. O próximo passoé um estudo da capacidade enzimática das bactérias de quebrar carboidratos, aminoácidos e uréia em combinações específicas para cada tipo. Nas bactérias, o açúcar e as enzimas proteolíticas são as mais estudadas.
A identificação de um micróbio deve ser complementada pelo estudo de outras propriedades características de cada gênero e tipo de microrganismo. Essas propriedades incluem a capacidade de dissolver seletivamente glóbulos vermelhos de diferentes animais (hemólise), coagular plasma sanguíneo (coagulação plasmática), dissolver um coágulo de fibrina (fibrinólise), etc. .
A identificação definitiva de algumas espécies microbianas, principalmente bactérias coliformes patogênicas, envolve a identificação sorológica (ver Identificação Microbiana). Normalmente, para esse fim, é realizada uma reação de aglutinação, ou seja, é detectada a aglomeração de bactérias sob a influência do soro imunológico de mesmo nome. A aglutinação de micróbios no soro contra uma espécie específica indica pertencimento a essa espécie. Normalmente, a reação de aglutinação é realizada aproximadamente em vidro e para determinação final em tubos de ensaio com diluições de soro.
Vários micróbios não podem ser totalmente identificados da maneira descrita. Então a identificação deve ser complementada pela infecção de animais de laboratório, uma vez que algumas bactérias são caracterizadas pela patogenicidade ou toxigenicidade, que é revelada quando os animais são infectados. Em alguns casos, a infecção de animais também serve como método para o acúmulo de micróbios patogênicos.
Somente a comparação de todas as características de uma cultura coletadas durante o estudo de sua morfologia, propriedades bioquímicas, sorológicas e, quando necessário, biológicas pode fornecer bases para a identificação. Responda quando resultado positivo a pesquisa não é difícil se o micróbio isolado for típico. Neste caso, indicar o gênero, a espécie e, se determinado, o tipo de bactéria. Quando é isolado um micróbio que se desvia em algumas propriedades de uma característica típica, é dada uma resposta indicando a característica desviante. Nesse caso, é útil repetir o estudo se o curso da doença ou as condições de coleta do material permitirem. Também é útil submeter a cultura de micróbios atípicos a estudos adicionais utilizando outros métodos mais complexos.
Os resultados negativos de um estudo bacteriológico são de relativa importância e mostram apenas que a porção testada do material não continha os micróbios necessários ou era inviável. No entanto, eles podem estar presentes em outra porção. Portanto, por exemplo, ao examinar o transporte de bacilos ( febre tifóide, disenteria, difteria) são necessários estudos repetidos.