Reacția este efectuată pentru a detecta antigenii patogeni din materialul de testat prin adăugarea de ser imun la acesta. În prezența unui antigen omolog, anticorpii se leagă, prin urmare, după adăugarea eritrocitelor sensibilizate de antigen, aglutinarea acestora nu are loc, ceea ce este evaluat ca un rezultat pozitiv. Pentru a face reacția mai sensibilă, la materialul de testat se adaugă ser imun specific într-o cantitate minimă (2 unități hemaglutinante). Titrul serului imun este determinat mai întâi utilizând RNGA. O unitate de hemaglutinare este diluția maximă a serului care face ca celulele roșii din sânge să se lipească între ele.

Metodologie. Adăugați 0,025 ml dintr-o soluție 1% de ser normal de iepure în godeurile plăcilor de polistiren sau tuburilor de aglutinare și faceți diluții în serie de 2 ori ale materialului de testat. Apoi se adaugă 0,025 ml de ser imun în toate godeurile, placa este agitată și lăsată timp de 30 de minute la o temperatură de 37ºC sau timp de 1 oră la temperatura camerei. Apoi, se adaugă 0,025 ml de diagnosticum antigenic în toate godeurile, se agită și se lasă timp de 2 ore, după care se iau în considerare rezultatele.

La efectuarea acestei reacții, la controlul pentru RNHA se adaugă un control al specificității serului imun, constând dintr-un antigen specific, ser imun (2, 1, 0,5 unități hemaglutinante) și o suspensie de eritrocite sensibilizate.

RTNGA este, de asemenea, utilizat pentru a detecta anticorpi specifici (compleți și blocanți), pentru care se adaugă o cantitate dozată de antigen în serul de testare. Dacă conține anticorpi, atunci aceștia sunt legați de antigen, prin urmare, după adăugarea eritrocitelor sensibilizate de anticorpi (etapa a 2-a a RTNGA), eritrocitele nu se lipesc între ele.

Datorită utilizării unei cantități minime de antigen (2 doze de neutralizare), reacția este foarte sensibilă. Numărul de doze de neutralizare din preparatul de antigen este determinat utilizând RNGA, în timp ce diluțiile seriale de 2 ori ale antigenului sunt făcute într-o soluție 1% de ser normal de iepure și se adaugă în godeuri un anticorp eritrocitar diagnosticum. Doza de neutralizare a antigenului este considerată a fi diluția sa maximă, care dă aderența completă a eritrocitelor sensibilizate.

Înainte de reacție, serurile de testat sunt diluate 1:5-1:10 și inactivate la o temperatură de 56°C timp de 30 de minute. Pentru a adsorbi hemaglutininele, se adaugă în ser o suspensie 50% de eritrocite de oaie formalinizate sau proaspăt spălate, în proporție de 0,1 ml suspensie la 1 ml de ser diluat. Amestecul este agitat și incubat timp de 30 de minute la 37ºC sau 1 oră la temperatura camerei, după care globulele roșii sunt precipitate prin centrifugare. Puteți lăsa serul la frigider până a doua zi pentru a sedimenta globulele roșii.

Când se efectuează un experiment, materialul de testat este diluat într-o soluție 1% de ser normal de iepure într-un volum de 0,025 ml în godeurile unui panou de microtitrare. Apoi se adaugă în fiecare godeu 2 doze neutralizante de antigen într-un volum de 0,025 ml. Plăcile sunt agitate și lăsate timp de 30 de minute la 37 °C sau timp de 1 oră la temperatura camerei. Apoi se adaugă în toate godeurile 0,025 ml de anticorp erythrocyte diagnosticum. Plăcile se agită și se incubează timp de 1,5-2 ore la temperatura camerei, după care se iau în considerare rezultatele reacției. Contabilitatea se poate face si a doua zi. Titrul serului de testat este considerat a fi diluția maximă la care celulele roșii din sânge nu se lipesc între ele.

Experimentul este însoțit de următoarele tipuri de control:

1) stabilitatea eritrocitelor sensibilizate (eritrocite + soluție 1% de ser normal de iepure);

2) completitatea epuizării hemaglutininei în fiecare ser de testare (ser de testare la cea mai mică diluție + eritrocite formalinizate);

3) corectitudinea determinării dozei minime de neutralizare a antigenului (2, 1 și 0,5 doze de neutralizare a antigenului + anticorp eritrocitar diagnosticum).

Reacția de hemaglutinare indirectă inversă (ronga) este utilizată pentru a indica antigenele bacteriene și virale din materialele de testare, precum și pentru diagnosticarea rapidă a unui număr de infecții.

Spre deosebire de RNGA, în această reacție, globulele roșii sunt sensibilizate nu de antigen, ci de anticorpi, a căror aglutinare are loc atunci când se adaugă antigenul.

Celulele roșii din sânge sunt prefixate cu formaldehidă sau glutaraldehidă și apoi legate de gama globulină, care este izolată din serul imun și purificată din alte proteine ​​​​serice. Legarea gammaglobulinei de suprafața globulelor roșii are loc cu ajutorul clorurii de crom. Pentru a face acest lucru, adăugați 1 volum de imunoglobuline izolate din serul imun, 1 volum dintr-o suspensie 50% de eritrocite formalinizate și 1 volum de soluție de clorură de crom 0,1-0,2% la 8 volume de apă distilată. Amestecul se lasa 10-15 minute la temperatura camerei, apoi globulele rosii sunt tratate ca in reactia de hemaglutinare pasiva.

Specificitatea diagnosticului anticorpului este verificată în reacția de inhibare a hemaglutinării pasive de către un antigen omolog. Reacția trebuie să fie inhibată de un antigen omolog de cel puțin 16 ori și nu inhibată de unul heterolog. Un control este utilizat pentru a asigura absența hemaglutinării spontane.

Folosind această reacție, agenții patogeni sunt indicați în materialul prelevat din organele oamenilor și animalelor morți, de exemplu, din creier, splina și ficatul plămânilor. Se prepară o suspensie 10% din aceste organe într-o soluție izotonă de clorură de sodiu, se centrifughează timp de 30-60 de minute la 10.000 rpm și se folosește supernatantul ca antigen.

Metodologie. Se prepară diluții de două ori ale materialului de testat (antigen) într-o soluție de stabilizare. Se adaugă 1 picătură din fiecare diluție de antigen în 3 godeuri adiacente ale micropanelului (reacția ocupă 3 rânduri paralele de godeuri). Se adaugă 1 picătură de soluție de stabilizare în fiecare godeu din primul rând, 1 picătură de ser imun omolog diluat 1:10 în godeurile celui de-al doilea rând, 1 picătură de ser imun heterolog pe al treilea rând. Al doilea și al treilea rând servesc drept controale pentru specificitatea reacției. Amestecul se lasă timp de 20 de minute la temperatura camerei.

Adăugați 1 picătură de suspensie 1% de eritrocite sensibilizate (diagnostic de anticorpi eritrocitari) în toate godeurile și agitați bine plăcile. Rezultatele reacției sunt luate în considerare după 30-40 de minute. În prezența unui antigen specific, hemaglutinarea se observă în primul și al treilea rând (cu ser heterolog) și este absentă în al doilea rând, unde antigenul este neutralizat în prealabil cu ser omolog.

Reacția este însoțită de controale ale eritrocitelor sensibilizate pentru aglutinare spontană.

Reacția inversă de inhibare a hemaglutinării indirecte (RTONGA) vă permite să determinați prezența anticorpilor în serurile oamenilor și animalelor.

Metodologie. Serurile sunt diluate de 10 ori cu o soluție izotonică de clorură de sodiu, încălzite timp de 20 de minute la o temperatură de 65 ° C pentru a distruge inhibitorii nespecifici, apoi se prepară diluții de două ori ale serurilor într-o soluție de stabilizare și o doză de lucru de antigen conţinând 4 unităţi aglutinante. Se adaugă 1 picătură din fiecare diluție de ser în godeurile micropanelului și se adaugă 1 picătură de antigen la acestea, a cărei diluție corespunde dozei de lucru. După contactarea componentelor amestecului timp de 20 de minute la temperatura camerei, adăugați 1 picătură de diagnostic de anticorpi eritrocitari în toate godeurile și agitați bine. După 1,5-2 ore de incubare la temperatura camerei, rezultatele reacției sunt luate în considerare pentru hemaglutinare. Titrul seric este cea mai mare diluție a sa, care inhibă complet reacția de hemaglutinare cu patru unități de antigen aglutinant.

Reacția este însoțită de controale ale eritrocitelor sensibilizate pentru aglutinare spontană în prezența: a) unei soluții stabilizatoare; b) antigen normal (din material care nu conține virus); c) ser de testare. Avantajul reacției este versatilitatea și capacitatea de a o utiliza pentru a detecta diferite antigene.

Evaluarea rezultatelor hemaglutinarii. Rezultatele RNGA, RONGA și RTONGA sunt luate în considerare în funcție de gradul de aglutinare eritrocitară: (++++) – aglutinare completă; (+++) – aglutinare mai puțin completă; (++) – aglutinare parțială; (+) – urme de aglutinare; (–) – absența aglutinarii.

Reacția este considerată pozitivă dacă aglutinarea este completă (++++) sau aproape completă (+++), diagnosticul nu dă aglutinare spontană în prezența fiecărei componente a reacției și controlul specificității antigenul sau anticorpul este pozitiv.

Reacție de hemaglutinare indirectă sau pasivă (IPHA)

Această reacție este superioară ca sensibilitate la reacția de aglutinare și este utilizată în diagnosticul infecțiilor cauzate de bacterii, rickettsie, protozoare și alte microorganisme.

RPGA vă permite să detectați o concentrație mică de anticorpi.

Aceasta reactie implica eritrocite tanizate de oaie sau eritrocite umane cu sange de grupa I, sensibilizate cu antigeni sau anticorpi.

Dacă în serul de testat sunt detectați anticorpi, atunci se folosesc celule roșii din sânge sensibilizate cu antigeni (eritrocite diagnosticum).

În unele cazuri, dacă este necesară determinarea diverșilor antigeni din materialul de testat, se folosesc eritrocite sensibilizate cu imunoglobuline.

Rezultatele RPGA sunt luate în considerare de natura sedimentului eritrocitar.

Rezultatul unei reacții este considerat pozitiv atunci când globulele roșii acoperă uniform întregul fund al eprubetei (o umbrelă inversată).

Într-o reacție negativă, celulele roșii din sânge sub forma unui disc mic (buton) sunt situate în centrul fundului eprubetei.

Reacția de aglutinare (RA)

Datorită specificității, ușurinței de performanță și demonstrativității, reacția de aglutinare a devenit larg răspândită în practica microbiologică pentru diagnosticul multor boli infecțioase: febra tifoidă și febra paratifoidă (reacția Vidal), tifosul (reacția Weigl) etc.

Reacția de aglutinare se bazează pe specificitatea interacțiunii anticorpilor (aglutinine) cu celule microbiene întregi sau alte celule (aglutinogeni). Ca rezultat al acestei interacțiuni, se formează particule - aglomerate care precipită (aglutinează).

Reacția de aglutinare poate implica atât bacterii vii, cât și moarte, spirochete, ciuperci, protozoare, rickettsia, precum și celule roșii din sânge și alte celule.

Reacția are loc în două faze: prima (invizibilă) - specifică, combinația de antigen și anticorpi, a doua (vizibilă) - nespecifică, lipirea antigenelor, adică. formarea aglutinatului.

Un aglutinat se formează atunci când un centru activ al unui anticorp divalent se combină cu grupul determinant al unui antigen.

Reacția de aglutinare, ca orice reacție serologică, are loc în prezența electroliților.

Pe plan extern, manifestarea unei reacții de aglutinare pozitivă are un dublu caracter. La microbii flagelati care au doar antigen O somatic, celulele microbiene înseși aderă direct. Această aglutinare se numește granulație fină. Apare în 18 - 22 de ore.

Microbii flagelați au două antigene - antigenul O somatic și antigenul H flagelar. Dacă celulele sunt lipite împreună de flageli, se formează fulgi mari, liberi și această reacție de aglutinare se numește granulație grosieră. Apare în 2-4 ore.

Reacția de aglutinare poate fi efectuată atât în ​​scopul determinării calitative și cantitative a anticorpilor specifici în serul sanguin al pacientului, cât și în scopul determinării speciilor de agent patogen izolat. hemaglutinare microbiologică infecţioasă

Reacția de aglutinare poate fi efectuată atât într-o versiune extinsă, care vă permite să lucrați cu ser diluat la un titru de diagnostic, cât și într-o versiune de reacție indicativă, care vă permite, în principiu, să detectați anticorpi specifici sau să determinați specia agentului patogen. .

reacție de hemaglutinare pasivă)

o metodă de detectare și identificare a antigenelor sau anticorpilor, bazată pe fenomenul de aglutinare a globulelor roșii care are loc în prezența acestora, pe suprafața căreia au fost adsorbiți anterior specificul sau antigenele corespunzători.

1. Mică enciclopedie medicală. - M.: Enciclopedie medicală. 1991-96 2. Primul ajutor. - M.: Marea Enciclopedie Rusă. 1994 3. Dicţionar enciclopedic de termeni medicali. - M.: Enciclopedia Sovietică. - 1982-1984.

Vedeți ce este „Reacția de hemaglutinare indirectă” în alte dicționare:

reacție indirectă de hemaglutinare- Test de laborator RNGA folosind diagnosticul eritrocitar. [Glosar englez-rus de termeni de bază în vaccinologie și imunizare. Organizația Mondială a Sănătății, 2009] Subiecte vaccinologie, imunizare Sinonime RNGA EN... ... Ghidul tehnic al traducătorului

- (RNHA; sinonim pentru reacția de hemaglutinare pasivă) o metodă de detectare și identificare a antigenelor sau anticorpilor, bazată pe fenomenul de aglutinare a eritrocitelor care are loc în prezența acestora, pe suprafața cărora au fost adsorbite anterior... .. . Dicționar medical mare

- (RPHA) vezi Reacția de hemaglutinare indirectă... Dicționar medical mare

Această pagină este un glosar. # A... Wikipedia

Abrevieri de bază adoptate în Dicționarul enciclopedic veterinar- a., aa, artena, arteriae aa ana (în egală măsură) URSS Academia de Științe Medicale URSS Academia de Științe Medicale URSS Academia de Științe URSS Academia de Științe URSS Bac. Bacil Bact. Bacteria BSSR Bielorusia SSR c., secole. secol, secole v., vv. vena, venae VASKHNIL Ordinul Întregii Uniri al lui Lenin și... ...

Acest termen are alte semnificații, vezi Ciuma. Ciuma carnivoră (boala Kare) este o boală virală acută sau subacută contagioasă manifestată prin febră, inflamație catarrală a mucoaselor, leziuni cutanate, centrale ... ... Wikipedia

- (reni) un organ pereche excretor și endocrin care reglează homeostazia chimică a organismului prin funcția de formare a urinei. SCHITA ANATOMICĂ FIZIOLOGICĂ Rinichii sunt localizați în spațiul retroperitoneal (spațiul retroperitoneal) pe... ... Enciclopedie medicală

I (trichineloză; sinonim: trichineloză, „umflată”) helmintiază din grupul nematozilor, caracterizată prin febră, mialgii, umflături faciale, erupții cutanate, eozinofilie sanguină și, în cazuri severe, afectarea organelor interne și centrale... .. . Enciclopedie medicală

- (nematodoze) helmintiazele cauzate de nematozi, viermi rotunzi din clasa Nematoda. Printre alte helmintiază, N. sunt de cea mai mare importanță în patologia umană, majoritatea fiind geohelmintiază (vezi Helmintiaza); dezvoltarea ouălor sau a larvelor lor... ... Enciclopedie medicală

epididimita infecțioasă- Orez. 1. Mărirea testiculului stâng la o oaie cu epididimită infecțioasă. Orez. 1. Mărirea testiculului stâng la o oaie cu epididimită infecțioasă. epididimita infecțioasă a oilor (Epididymitis infectiosa arietum), infecțioasă cronică... ... Dicționar enciclopedic veterinar

Vezi Reacția de hemaglutinare indirectă... Dicționar medical mare

Testul de hemaglutinare indirectă sau pasivă (IRHA sau RPHA) este mai sensibil și mai specific decât testul de aglutinare. Această reacție este folosită și în două direcții.

1) Pentru a detecta anticorpi în serul sanguin al pacientului, se utilizează diagnosticarea eritrocitară, în care antigenul este adsorbit pe suprafața eritrocitelor tratate cu tanin. În legătură cu această reacție, termenul RPHA este folosit mai des.

Serul de testat este diluat în godeurile plăcilor de plastic și se adaugă diagnosticul de eritrocite. Cu o reacție pozitivă, o peliculă subțire apare de-a lungul pereților găurii sub forma unei „umbrele de dantelă” cu o reacție negativă, apare un sediment dens de globule roșii sub forma unui „buton”.

2) Pentru detectarea toxinelor și antigenelor bacteriene din materialul de testat se utilizează diagnosticul eritrocitelor cu anticorpi, obținute prin adsorbția anticorpilor pe eritrocite. În legătură cu această reacție, termenul RNGA este folosit mai des. De exemplu, cu ajutorul diagnosticului cu anticorpi, sunt detectate antigenul bacilului ciumei, exotoxina difterice și exotoxina botulină.

Testul Coombs (testul aptiglobulinei)

Reacția este utilizată pentru a detecta anticorpi incompleti, de exemplu, anticorpi la factorul Rh. Ser de testat este adăugat la eritrocite Rh +, în care se presupune prezența anticorpilor incompleti la factorul Rh. Fiind atașați de celulele roșii din sânge, anticorpii incompleti nu provoacă aglutinare, deoarece au un singur centru activ. Apoi se adaugă ser antiglobulinic care conține anticorpi la globuline umane. În combinație cu anticorpi incompleti, serul antiglobulinic provoacă aglutinarea globulelor roșii.

Reacția de precipitare

Esența reacției este sedimentarea (precipitarea) antigenului sub influența anticorpilor specifici. Pentru a obține o reacție vizibilă este necesară prezența unui electrolit. Antigenul din reacția de precipitare este substanțe dispersate molecular.

Reacția de precipitare inelară plasate în tuburi înguste de precipitare. Serul imunitar este turnat într-o eprubetă, iar materialul de testat este stratificat cu grijă pe acesta. Dacă există un antigen în el, la marginea celor două lichide se formează un inel opac de precipitat.

Reacția este folosită în medicina legală pentru a determina speciile de proteine ​​din petele de sânge, materialul seminal etc.; pentru a determina antigenul în diagnosticul de antrax (reacție Ascoli), meningită și alte infecții; în studii sanitare şi igienice – pentru a determina falsificarea produselor alimentare. Serurile de precipitare imună sunt obținute prin imunizarea animalelor cu antigenul corespunzător. De exemplu, serul care precipita proteinele umane este obţinut prin imunizarea unui iepure cu proteină umană. Titrul serului care precipita este cea mai mare diluție a antigenului cu care reacţionează. Serul este utilizat de obicei nediluat sau într-o diluție de 1:5.

Reacția de precipitare a gelului de agar efectuate folosind mai multe metode. Acestea sunt reacția de imunodifuzie dublă, reacția de imunodifuzie radială și reacția de imunoelectroforeză.

Reacție dublă de imunodifuzie(după Ouchterlony). Gelul de agar topit este turnat într-un vas Petri și după întărire, se decupează godeuri în el. Antigenul este plasat în unele godeuri, iar serurile imune sunt plasate în altele, care difuzează în agar și formează un precipitat sub formă de dungi albe la punctul de întâlnire.

Reacție de imunodifuzie radială(după Mancini). Serul imunitar este adăugat la gelul de agar topit și turnat într-o cană. După ce agar-ul se întărește, godeurile sunt tăiate și antigenele sunt plasate în ele, care, difuzând în agar, formează zone de precipitare în formă de inel în jurul godeurilor. Cu cât concentrația de antigen este mai mare, cu atât diametrul inelului este mai mare. Reacția este utilizată, de exemplu, pentru a determina imunoglobulinele din diferite clase din sânge. Imunoglobulinele din clasele IgG, IgM, IgA acţionează ca antigene în această reacţie, iar anticorpii împotriva lor sunt conţinuţi în seruri monoreceptoare specifice.

Imunoelectroforeza. Electroforeza antigenelor proteice se realizează într-un gel de agar. Serul precipitant este introdus în șanțul, care merge paralel cu direcția de mișcare a proteinelor. Antigenii și anticorpii difuzează în agar și liniile de precipitare se formează acolo unde se întâlnesc.

Reacții de liză imună

Un antigen (eritrocite sau bacterii), care se combină cu anticorpi specifici, formează un complex imun de care se atașează complementul (C1), iar complementul este activat de-a lungul căii clasice. Complementul activat lizează globulele roșii (hemoliză) sau bacteriile (bacterioliza). Reacția de bacterioliză este utilizată pentru a identifica Vibrio cholerae.

Reacția de hemoliză. Antigenul din reacție este eritrocitele, anticorpii (hemolizinele) sunt conținute în serul hemolitic. Hemolizinele se atașează de celulele roșii din sânge, iar complementul este activat, care lizează globulele roșii. Suspensia tulbure de celule roșii din sânge se transformă într-un lichid transparent roșu strălucitor - „sânge lac”. Deoarece reacția de hemoliză are loc numai în prezența complementului, este folosită ca indicator pentru detectarea complementului.

Reacție locală de hemoliză în gel(reacția Erne) - o variantă a reacției de hemoliză. Servește la determinarea numărului de celule formatoare de anticorpi (AFC) din splină și ganglioni limfatici.

Gelul de agar topit este amestecat cu o suspensie de celule spline și globule roșii, iar după ce agarul s-a solidificat, se adaugă complement. În jurul fiecărei celule producătoare de hemolizină se formează o zonă de hemoliză. Numărul de celule producătoare de hemolizină este determinat de numărul de astfel de zone.

Utilizează celule roșii din sânge sau materiale sintetice neutre (de exemplu, particule de latex), pe suprafața cărora sunt absorbiți antigene (bacteriene, virale, tisulare) sau anticorpi. Aglutinarea lor are loc atunci când se adaugă seruri sau antigene adecvate. Globulele roșii sensibilizate cu antigeni se numesc diagnosticul de eritrocite antigenice și sunt folosite pentru a detecta și titra anticorpii. Eritrocitele sensibilizate cu anticorpi. se numesc imunoglobuline erythrocyte diagnosticums și sunt utilizate pentru identificarea antigenelor.

Reacția de hemaglutinare pasivă este utilizată pentru diagnosticarea bolilor cauzate de bacterii (febră tifoidă și paratifoidă, dizenterie, bruceloză, ciuma, holeră etc.), protozoare (malaria) și viruși (gripa, infecții adenovirale, hepatită virală B, rujeolă, căpușe). encefalită transmisă, febră hemoragică din Crimeea etc.), precum și pentru determinarea anumitor hormoni, pentru a identifica hipersensibilitatea pacientului la medicamente și hormoni, cum ar fi penicilina și insulina.

Reacția de hemaglutinare pasivă (RPHA). Testul de hemaglutinare pasivă este o metodă sensibilă de diagnostic serologic și este utilizat atât pentru diagnosticul precoce, cât și pentru diagnosticul retrospectiv, precum și pentru a determina starea imunopogică a persoanelor vaccinate. La pacientii cu tularemie, anticorpii sunt de obicei detectati la sfarsitul saptamanii 1 sau a 2-a de boala dupa 1-1,5 luni, titrurile de RPHA ating niveluri maxime (1: 100.000-1: 20.000, mai rar mai mare); scăderea la nivelul 1:100-1:200 sunt stocate pentru o perioadă lungă de timp.

La persoanele vaccinate, anticorpii sunt de asemenea detectați în mod constant, totuși, la titruri mai mici, care nu depășesc 1:2000-1:5000 la 1-1,5 luni de la vaccinare și rămân câțiva ani la un nivel scăzut de 1:20-1:80.

Antigenul pentru stadializarea RPHA este tularemia erythrocyte diagnosticum (antigenic). Medicamentul este formalinizat de globule roșii de oaie, sensibilizate cu antigen tularemie, disponibil sub formă lichidă și uscată. Preparat lichid - o suspensie 10% de globule roșii într-o soluție de formaldehidă cu o concentrație de 10%. Preparatul liofilizat uscat este o suspensie 10% de globule roșii, uscată în vid, fără conservant. Înainte de utilizare, se diluează conform instrucțiunilor de pe etichetă. Pentru a configura reacția în plăci de polistiren, ambele medicamente sunt utilizate într-o concentrație de 2,5%, iar la configurarea reacției în microvolume - la o concentrație de 0,5%.

Tehnica de configurare a RPGA. Serurile de testat sunt diluate cu soluție fiziologică 1:5 (1:10) și încălzite la 56 grade C timp de 30 de minute. După aceasta, pentru a elimina anticorpii eterogene la eritrocite de oaie, serurile sunt tratate cu o suspensie 50% de eritrocite de oaie formalinizate. Pentru a face acest lucru, adăugați globule roșii în proporție de 2 picături (0,05 ml) la 1 ml de ser și amestecați bine prin agitare. Serul se lasă până când eritrocitele s-au depus complet, sau se centrifug după o oră la temperatura camerei, după care este gata de examinare.

Lichidul de diluție se toarnă într-un volum de 0,5 ml într-un rând de godeuri pe o placă de polistiren. În timpul studiului preliminar al serurilor, se recomandă testarea acestora prin așezarea reacției într-un rând scurt al plăcii (6 godeuri). Dacă anticorpii sunt detectați într-o serie scurtă, serurile sunt retestate într-o serie lungă de diluții (12 godeuri). După vărsarea lichidului de diluție, adăugați 0,5 ml de ser de testare într-o diluție 1:5 în primul godeu al fiecărui rând (scurt sau lung). Apoi aceleași volume de ser sunt titrate cu diluții duble. Astfel, se obțin diluții de ser în seria scurtă de la 1:10 la 1:320, iar în seria lungă de la 1:10 la 1:20480. După titrarea serurilor, în fiecare godeu se adaugă o picătură (0,05 ml) dintr-o suspensie de lucru 2,5% de eritrocite sensibilizate. Conținutul plăcilor se agită bine până se obține o suspensie omogenă. Plăcile sunt lăsate la temperatura camerei pe o suprafață staționară a mesei. Înregistrarea preliminară a reacției se efectuează după 2-3 ore, determinarea finală a titrului se face după sedimentarea completă a globulelor roșii în godeuri. Următoarele controale sunt prevăzute pentru reacție: 1) ser test diluat 1:10 într-un volum de 0,5 ml + 1 picătură dintr-o suspensie 2,5% de eritrocite nesensibilizate; 2) lichid de diluare în volum de 0,5 ml + 1 picătură dintr-o suspensie 2,5% de eritrocite nesensibilizate; 3) lichid de diluare în volum de 0,5 ml + 1 picătură dintr-o suspensie 2,5% de eritrocite sensibilizate. Toate controalele ar trebui să dea o reacție clar negativă.

Contabilitatea și evaluarea RPGA. Reacția este evaluată conform următoarei scheme:

1) reacție puternic pozitivă (++++) - globulele roșii cad în fundul găurii într-un strat uniform sub forma unei „umbrele”, care are adesea o topire festonată a marginilor;

2) reacție pozitivă (+++) - globulele roșii acoperă cel puțin 2/3 din fundul puțului;

3) reacție slab pozitivă (++) - aglutinatul este mic și situat chiar în centrul puțului;

4) reacție discutabilă (+) - în jurul sedimentului de eritrocite din centrul puțului există boabe individuale de aglutinat;

5) negativ (-) - în partea de jos a găurii, celulele roșii din sânge se instalează sub forma unui „buton” sau a unui inel mic cu margini netede, bine definite.

Titrul seric se ia in considerare in functie de ultima dilutie a serului, care a dat o reactie foarte clara (cel putin trei plusuri). O diluție de 1:100 sau mai mare este considerată un titru de diagnostic, totuși, la fel ca și în cazul RA, este necesar să se monitorizeze creșterea acesteia;

RPHA pentru tularemie este destul de specific și detectează unele reacții încrucișate doar cu serurile de bruceloză. Diagnosticul diferențial este posibil prin înălțimea titrurilor în RPGA, care sunt semnificativ mai mari cu antigenul omolog.

Tehnica de configurare a RPHA în microvolume. RPGA poate fi realizată în microvolume folosind un microtitrator de tip Takachi (sau microplăci cu fund rotund cu micropipete), care permite titrarea materialului în volume de 25 μl și 50 μl. Tehnica de reacție și succesiunea tuturor operațiilor sunt aceleași ca atunci când se studiază în plăci de polistiren. Cu toate acestea, trebuie avut în vedere faptul că sensibilitatea micrometodei este de obicei cu o diluție (adică, de 2 ori) mai mică decât cea a macrometodei.

Pentru a stabili reacția într-un microtitrator, se adaugă în fiecare godeu un lichid de diluție într-un volum de 50 μl folosind o pipetă picurătoare. Apoi, folosind titratoare cu un cap de 50 μl, serul de testat este colectat prin imersarea capului în el. Asigurați-vă că lichidul a umplut capul titratorului. Titratorul cu ser este transferat în primul godeu și, ținându-l în poziție verticală, se fac mai multe mișcări de rotație în ambele sensuri. Apoi titratorul este transferat în următorul godeu și manipularea se repetă. Titrarea poate fi efectuată simultan pe mai multe rânduri. După titrarea întregii serii, titratorul se spală cu apă distilată (schimbând 2 porții) prin mișcări de rotație, apa se îndepărtează de pe cap cu ajutorul unui tampon și se arde pe flacăra arzătorului.

După titrare, adăugați 25 μl de lichid de diagnostic eritrocitar în godeuri. Concentrația de diagnostic pentru RPHA în microvolume ar trebui să fie de 0,5% (adică, o suspensie de 2,5% de globule roșii este diluată suplimentar de 5 ori). După adăugarea globulelor roșii, plăcile trebuie agitate ușor până se obține o suspensie omogenă. Rezultatele pot fi înregistrate în 1-1,5 ore, ceea ce reprezintă un avantaj semnificativ al RPGA într-un microtitru. În plus, această tehnică necesită cantități mici din toate ingredientele de reacție și seruri de testare.

Reacția este luată în considerare conform următoarei scheme:

1) „+” – hemaglutinare completă, în care globulele roșii cad în fundul puțului într-un strat uniform sub formă de „umbrelă”, ocupând cel puțin 2/3 din fund;

2) „+-“ - hemaglutinare parțială, în care celulele roșii din sânge cad la fund sub forma unui inel liber de dimensiuni mici;

3) „-“ – absența hemaglutinării, atunci când celulele roșii din sânge cad la fund sub forma unui mic buton sau inel cu o margine netedă.

Specificitatea unui rezultat pozitiv obținut în RPHA poate fi testată folosind o reacție cu trei componente - reacția pasivă de inhibare a hemaglutinării (PHA).

Tehnica de configurare a RTPGA. Această reacție este utilizată pentru a confirma specificitatea unui rezultat pozitiv RPGA atunci când este în dubiu sau prezintă un interes epidemiologic deosebit. Mecanismul de reacție constă în inhibarea specifică a hemaglutinării atunci când la serul de testare se adaugă o suspensie de bacterii tularemie ucise. Trei componente interacționează în reacție: serul de testare, antigenul specific tularemiei și diagnosticul de eritrocite antigenice RTPHA este de obicei plasat într-un rând de 7-8 godeuri. Este recomandabil să instalați un RPGA repetat în paralel cu RTPGA. Se toarnă 0,25 ml lichid de diluție în două rânduri de godeuri, apoi se adaugă serul de testat într-un volum de 0,25 ml în primele godeuri ale ambelor rânduri și se efectuează titrarea a două rânduri identice de diluții de ser. Se adaugă 0,25 ml de lichid de diluție în toate godeurile din al doilea rând și 0,25 ml dintr-o suspensie de bacterii tularemie în godeurile din primul rând. Se folosește Tularemia diagnosticum (conținând 25 de miliarde de bacterii tularemie în 1 ml), diluat în prealabil de 50 de ori. Această suspensie conține 500 de milioane de bacterii în 1 ml sau 125 milioane într-un volum de 0,25 ml. După adăugarea antigenului, placa este lăsată timp de 1 oră la temperatura camerei, după care se adaugă o picătură (0,05 ml) de diagnostic de eritrocite în toate godeurile ambelor rânduri, placa este agitată și lăsată pe o suprafață plană a mesei. Contabilitatea se efectuează după 2-3 ore.

Contabilitatea și evaluarea RTPGA. Dacă serul de testat conține anticorpi specifici de tularemie, aceștia sunt neutralizați de antigenul adăugat și hemaglutinarea nu va avea loc în primul rând de godeuri sau, la un titru seric ridicat, hemaglutinarea se va observa într-un număr mai mic (2-4) de godeuri. puţuri decât în ​​rândul cu RPHA. În acest caz, specificitatea rezultatelor a fost confirmată. Dacă hemaglutinarea este observată pe ambele rânduri, de exemplu. Dacă rezultatele RTPGA și RPGA coincid, aceasta indică absența anticorpilor de tularemie în serul de testat. În acest caz, rezultatul primar al RPGA este considerat nespecific.

Tehnica de punere în scenă a RTHG în microvolume. RTPGA, ca și RPGA, poate fi realizat în microvolume folosind un microtitru de tip Takachi. Pentru a face acest lucru, adăugați 0,25 μl de lichid de diluare în godeurile microplăcilor în două rânduri a câte 7-8 godeuri fiecare. Apoi, folosind un titrator, se adaugă 0,25 μl din serul de testat și se titratează în ambele rânduri. După aceasta, în fiecare godeu din primul rând se adaugă 25 μl de antigen de tularemie (a cărui concentrație este de 500 de milioane de bacterii tularemie în 1 ml) și se adaugă 25 μl de lichid de diluare în al doilea rând. Plăcile sunt lăsate timp de 1 oră la temperatura camerei, după care se adaugă 25 μl de diagnosticum zritrocytic antigenic (concentrație 0,5%) în toate godeurile ambelor rânduri. Contabilitatea și evaluarea rezultatelor se efectuează în mod similar reacțiilor în macrovolume.