119. Reacțiile lui Pandi și Nonne - Apelt
Ca reactiv pentru efectuarea reacției Pandi se folosește un lichid transparent supernatant, care se obține prin agitarea puternică a 100 g de acid carbolic lichid cu 1000 ml apă distilată. Pentru a obţine sedimente şi lichid limpede(reactiv) acest amestec se pune mai întâi într-un termostat timp de 3-4 ore, apoi se păstrează la temperatura camerei timp de 2-3 zile.
Santinela sau diapozitiv se aseaza pe hartie inchisa la culoare si se aplica 2-3 picaturi de reactiv pe ea, apoi 1 picatura fluid cerebrospinal. Dacă picătura devine tulbure sau apare o turbiditate sub formă de fir de-a lungul periferiei sale, reacția este considerată pozitivă.
Pentru a efectua reacția Nonne-Apelt, aveți nevoie de eprubete curate, o soluție saturată de sulfat de amoniu, apă distilată și hârtie de culoare închisă. Se prepară o soluție saturată de sulfat de amoniu în felul următor: 0,5 g de sulfat de amoniu neutru chimic pur se pun într-un balon de 1000 ml, apoi se toarnă 100 ml apă distilată încălzită la 95 ° C, se agită până când sarea este complet dizolvată și se lasă câteva zile la temperatura camerei. După 2-3 zile, soluția se filtrează și se determină pH-ul. Reacția ar trebui să fie neutră.
Se toarnă 0,5-1 ml din soluția rezultată într-o eprubetă și se adaugă cu grijă aceeași cantitate de lichid cefalorahidian de-a lungul peretelui eprubetei. După 3 minute, evaluați rezultatul. Apariția unui inel albicios indică o reacție pozitivă. Apoi se agită conținutul eprubetei, se determină gradul de turbiditate comparându-l cu o eprubetă care conține apă distilată. Rezultatele reacției sunt evaluate pe fundalul hârtiei negre.
120. Bordet - reacția Zhangou
Un test de diagnostic valoros atunci când este detectat gonoree cronică printre persoanele care suferă de boli cronice boli inflamatorii sistemul genito-urinar. Conform literaturii, când utilizarea corectă Această metodă detectează până la 80% din cazurile de gonoree care nu au fost detectate prin metode bacterioscopice sau bacteriologice.
Reacția Bordet-Zhang poate fi o urmă ca urmare a unei boli anterioare sau a utilizării unei gonovaccine pentru diagnostic (metoda de provocare imunobiologică), precum și terapeutic (tratamentul bolilor cronice). procese inflamatorii sistemul genito-urinar la femei conform lui Baksheev) scop. Prin urmare, înainte de a o efectua, este necesar să colectați cu atenție anamneza,
Reacția poate fi, de asemenea, fals pozitivă atunci când se administrează lapte, utilizat în scopuri medicinale pirogenă.
În consecință, o reacție pozitivă Bordet-Giangu nu servește drept dovadă incontestabilă a prezenței infecție gonococică, la fel ca unul negativ, nu poate fi o dovadă a absenței gonoreei. Cu toate acestea, rezultatele pozitive pe o perioadă lungă de timp ar trebui să direcționeze medicul să caute sursa infecției gonococice în organism.
O cultură gonococică ucisă care conține 3-4 miliarde de corpuri microbiene în 1 ml este utilizată ca antigen. Antigenul gonococic se păstrează cu o soluție de formaldehidă și se toarnă în fiole de 1-5 ml. Fiolele nedeschise sunt potrivite timp de 6 luni, cele deschise pot fi păstrate 2-3 zile într-un tub steril la frigider la o temperatură de 3-5 ° C,
Reacția de fixare a complementului Bordet-Giangu se desfășoară în mod similar cu reacția Wasserman (vezi nr. 121). Antigenul gonococic este diluat cu soluție izotonică de clorură de sodiu conform titrului indicat pe eticheta fiolei. Reacția se efectuează cel mai adesea într-un volum de 2,5 ml, prin urmare, la 0,5 ml de ser de testare diluat 1:5, se adaugă 0,5 ml de antigen diluat în fiecare tub. Restul de 1,5 ml reprezintă 1 ml de sistem hemolitic și 0,5 ml de complement.
Reacția este considerată pozitivă dacă este exprimată în în diferite gradeîntârzierea hemolizei în serul de testare. În control (ser de sânge oameni sanatosi) se observă hemoliză completă.
121. Reacția Wasserman
Serul de sânge al pacienților cu sifilis conține reagine și anticorpi. Reaginele au proprietatea de a se combina cu antigenul cardiolipin. Anticorpi specifici împotriva treponema pallidum se leagă de antigene specifice. Complexele antigen-anticorp rezultate sunt absorbite de complementul adăugat în reacție. Indicatia se face prin introducerea unui sistem hemolitic (hematii de oaie + ser hemolitic).
Pentru a efectua reacția aveți nevoie de:
a) soluție izotonică de clorură de sodiu;
b) antigene ultrasonice treponemale (pastrate la frigider la +4 °C) si cardiolipin (pastrate la temperatura camerei);
c) complement, care este serul sanguin obtinut din punctia cardiaca a 5-10 cobai sanatosi. Se poate pastra la frigider timp de 2 luni cu conditia
conservare cu soluţie 4%. acid boricşi soluţie de sulfat de sodiu 5%;
d) hemolizină - ser hemolitic de iepure imunizat cu eritrocite de oaie cu diferite titruri (pastrat la frigider la 4 °C);
e) hematii de oaie obținute prin puncție vena jugulară. Sângele se colectează într-un borcan steril cu bile de sticlă (pentru amestecare), se agită timp de 15 minute. Cheagurile de fibrină sunt separate prin filtrare prin tifon steril. Sângele defibrat poate fi păstrat la frigider până la 5 zile.
Uneori este nevoie de o păstrare mai lungă a sângelui de oaie și, prin urmare, este conservat cu un conservant special (6 g glucoză, 4,5 g acid boric, 100 ml soluție izotonică de clorură de sodiu), care se fierbe într-o baie de apă pentru 20 de minute pe zi timp de 3 zile Pentru 100 ml de sânge defibrinat de oaie sunt necesari 15 ml de conservant. Sângele defibrat conservat în acest fel este păstrat la frigider.
Experimentul principal este precedat de mai multe etape.
Se prelevează 5-10 ml de sânge din vena cubitală a pacientului și se prelucrează serul. La copii se poate preleva sânge din vena temporală sau o tăietură pe călcâi. Puncția se face cu instrumente sterile, o seringă și un ac.
prespălată cu soluție izotonică de clorură de sodiu.
Sângele pentru cercetare se ia pe stomacul gol; Cu 3-4 zile înainte de studiu, pacientului i se interzice consumul droguri narcotice, preparate digitalice, luați alcool.
Studiul nu trebuie efectuat la pacienții cu temperatură ridicată organism, dupa accidentare, interventie chirurgicala, anestezie, recent supus boli infecțioase, la femeile în timpul menstruației, la femeile însărcinate (în ultimele 10 zile de sarcină), la femeile aflate în travaliu (în primele 10 zile după naștere), precum și la nou-născuți (în primele 10 zile de viață).
Sângele rezultat într-un tub steril este plasat într-un termostat la o temperatură de 37 °C timp de 15-30 de minute. Cheagul rezultat este separat de pereții eprubetei cu o tijă de sticlă sterilă și plasat la frigider pentru o zi. Zerul transparent separat (de deasupra cheagului) este aspirat cu o pipetă Pasteur folosind bec de cauciuc sau se toarnă cu grijă într-un alt tub steril și se inactivează într-o baie de apă timp de 30 de minute la 56 °C. Serul preparat în acest mod pentru experiment poate fi păstrat la frigider până la 5-6 zile.
Antigenele sunt diluate conform metodei și titrului indicate pe etichetă.
Pregătiți un sistem hemolitic. Pentru a face acest lucru, sângele de oaie sau globulele roșii defibrinate în cantitatea necesară pentru reacție sunt centrifugate, plasma este separată cu grijă, iar sedimentul este spălat cu 5-6 volume de soluție izotonă de clorură de sodiu până când lichidul supernatant devine complet incolor. Din sediment, se prepară o suspensie 3% de globule roșii într-o soluție izotonă de clorură de sodiu la titru triplu.
O soluție de ser hemolitic și o suspensie de eritrocite de oaie se amestecă rapid și se pun într-un termostat timp de 30 de minute.
Complementul uscat este diluat cu soluție izotonică de clorură de sodiu într-un raport de 1:10, ser uman normal inactivat - 1:5.
Complementul este titrat în 30 de tuburi plasate într-un rack de 10 tuburi pe 3 rânduri. Pe două rânduri se titrează în prezența a două antigene, în al treilea - cu soluție izotonică de clorură de sodiu. Cinci tuburi sunt tuburi de control: două pentru cei doi antigeni corespunzători și câte unul pentru monitorizarea complementului, a serului hemolitic și a soluției izotonice de clorură de sodiu pentru hemotoxicitate; completați-le după cum urmează:
Reactivi, ml | Rând de eprubete |
||||
3% suspensie de globule roșii de oaie | |||||
ser hemolitic, diluat la titru triplu | |||||
Complement 1:10 | |||||
Antigenul triponemal diluat în funcție de titru | |||||
Antigenul cardiolipin diluat în funcție de titru | |||||
Soluție izotonică de clorură de sodiu | |||||
Eprubetele se pun într-un termostat timp de 45 de minute, după care se verifică. Nu ar trebui să existe hemoliză în nicio eprubetă.
Complementul la o diluție de 1:10 se toarnă în 10 tuburi din primul rând al rackului în doze: 0,1, 0,16, 0,2,0,24, 0,3, 0,36,0,4,0,44, 0,5 și 0,55 ml. Se adaugă o soluție izotonică de clorură de sodiu până la 1 ml la conținutul fiecărei eprubete și se amestecă bine. 0,25 ml de amestec din fiecare eprubetă se transferă în eprubetele corespunzătoare din rândurile 2 și 3. Se agită grătarul cu eprubete, se adaugă 0,5 ml de sistem hemolitic la al 3-lea rând de eprubete, se agită din nou și se pune într-un termostat la 37 °C timp de 45 de minute. Ser de sânge uman normal, diluat cu soluție izotonică de clorură de sodiu în raport de 1:5, este turnat în toate cele 30 de eprubete, câte 0,25 ml fiecare.
Antigenul I (ultrasunemic treponemic), diluat prin titru cu soluție izotonică de clorură de sodiu, se adaugă 0,25 ml la 10 eprubete de pe primul rând; antigenul II (cardiolipină în aceeași diluție și în aceeași cantitate) - în 10 tuburi din al 2-lea rând. Se toarnă 0,25 ml soluție izotonică de clorură de sodiu în 10 eprubete de pe al 3-lea rând, restul de 0,25 ml se toarnă. După incubarea într-un termostat, se adaugă 0,5 ml de sistem hemolitic în 20 de tuburi (primul și al doilea rând), se agită și se pune la loc în termostat timp de 45 de minute.
După 45 de minute, se determină doza de lucru de complement, adică titrul acestuia cu o creștere de 15-20%.
Este considerat titlul de complement cantitate minimă, provocând hemoliza completă a globulelor roșii de oaie în prezența antigenului și a serului sanguin uman normal.
Experimentul principal este că fiecare ser test inactivat, diluat într-un raport de 1: 5 cu soluție izotonică de clorură de sodiu, este turnat în 0,25 ml în trei eprubete. Se adaugă 0,25 ml de antigen I în prima eprubetă, 0,25 ml de antigen II în a doua și 0,25 ml de soluție izotonică de clorură de sodiu în a treia (martor). În toate eprubetele se adaugă, de asemenea, 0,25 ml de complement diluat la doza de lucru. Toate eprubetele sunt plasate într-un termostat timp de 45 de minute, apoi se adaugă 0,5 ml de sistem hemolitic, se agită și se pun într-un termostat timp de 45-50 de minute. Rezultatul experimentului este înregistrat după debutul hemolizei complete în tuburile de control.
Rezultatele reacției sunt evaluate ca plusuri: întârzierea completă a hemolizei (reacție puternic pozitivă) ++++, semnificativă (reacție pozitivă) +++, parțială (reacție slab pozitivă) ++, nesemnificativă (reacție îndoielnică) - ±, fără întârziere a hemolizei (reacție negativă) - .
În metoda cantitativă de realizare a reacției Wassermann, se efectuează un experiment cu volume descrescătoare de ser diluat cu o soluție izotonică de clorură de sodiu.
Schema experimentului principal al reacției Wasserman
Ingrediente (în ml). Volum total 1,25 ml | Nr tuburi |
||
Serul de testat este inactivat, diluat într-un raport de 1: 5 Antigenul I (treponemal), diluat după titru Antigenul II (cardiolipină), diluat după titru Soluție izotonică de clorură de sodiu Complement diluat în funcție de doza de lucru | |||
Semnificația clinică a reacției Wasserman este greu de supraestimat. Se efectuează la toți pacienții înainte de tratament, dar sens special ea are la sifilis latent, înfrângere organe interneȘi sistem nervos.
Rezultatele reacției Wasserman caracterizează calitatea tratamentului acordat, ceea ce dă temei pentru a scoate din registru pacienții tratați într-o anumită perioadă de timp.
La sifilisul primar Reacția Wasserman este pozitivă de obicei la sfârșitul săptămânii a 6-a din momentul infecției; cu sifilis secundar proaspăt este pozitiv în aproape 100% din cazuri, cu sifilis secundar recurent - în 98-100%; terțiar activ - în 85%; terțiar ascuns – în 60% din cazuri.
Reacția Wasserman este efectuată de două ori pentru toate femeile însărcinate, pacienții cu probleme somatice, nervoase, mentale și boli de piele, precum și populațiile decretate. În același timp, rezultatele reacțiilor pozitive și slab pozitive trebuie tratate critic, deoarece acestea pot apărea la sfârșitul sarcinii și după naștere, cu hipertiroidism, malarie, lepră, defalcarea unei tumori maligne, boli infecțioase, colagenoză etc. , dacă manifestari clinice Bolile lor trebuie luate în considerare, împreună cu datele bacterioscopice, în primul rând.
În același timp, există factori care pot distorsiona adevărata natură a rezultatelor obținute în urma reacției Wasserman: sticlă de laborator prost spălată (urme de acid și alcali în eprubete), depozitarea pe termen lung a sângelui prelevat pentru cercetare, consumul de grăsimi și alcool de către pacienți înainte de examinare, perioada de menstruație etc.
În toate cazurile, este recomandabil să examinare cuprinzătoare pacient, incluzând, pe lângă reacția Wasserman, și RIBT (vezi 122, 123, 124) etc.
122. Reacția Sachs-Vitebsky (citocolică)
Folosit pentru a detecta sifilisul. Se bazează pe formarea unui precipitat la amestecarea serului sanguin al pacientului cu un antigen.
Pentru a pregăti antigenul, mușchii mai multor inimi de bovine sunt curățați de tendoane, fascie și grăsime, măcinați într-o mașină de tocat carne și extrași cu un volum de 5 ori de alcool etilic 96% timp de 15 zile cu agitare zilnică de 20 de minute. Extractul rezultat este evaporat într-o baie de apă într-o cană de porțelan sub vid. La reziduu se adaugă 96% fierbinte (masă galben strălucitor de lipoide). etanolîn cantitate de 1/3 din volumul luat pentru extracţia musculară.
Extractul se păstrează timp de 3 zile la temperatura camerei, se filtrează (in apă rece) si se adauga o solutie 0,3-0,6% de colesterol cristalin, in functie de rezultatele titrarii cu ser pozitiv si negativ. Depozitați antigenul citocolic la temperatura camerei în fiole sigilate sau tuburi închise.
Metodologie. La 2 ml soluție izotonică de clorură de sodiu se adaugă rapid 1 ml de antigen citocolic și se lasă la temperatura camerei timp de 15 minute până când apar fulgi. Se adaugă 0,1 ml de emulsie antigenică la 0,2 ml de ser inactivat într-o eprubetă, se agită timp de 3 minute și se lasă timp de 30 de minute, după care se adaugă 1 ml soluție izotonică de clorură de sodiu.
Se adaugă 1,2 ml de soluție izotonică de clorură de sodiu și 0,1 ml de emulsie de antigen în tubul de control cu antigen. Nu ar trebui să existe fulgi în control. Rezultatele reacției se iau în considerare vizual sau cu ajutorul lupei și se desemnează, în funcție de numărul de fulgi care cad, cu plusuri (++++, +++, ++). Dacă reacția este negativă, nu există fulgi, dar conținutul tubului poate deveni ușor opalescent.
În 1931, P. Sachs și E. Witebsky au propus o modificare a acestei tehnici, care constă în diluarea antigenului în două faze: se adaugă 2 părți soluție izotonică de clorură de sodiu la 1 parte din antigen, se păstrează la temperatura camerei timp de 5 minute și adăugați încă 9 părți soluție izotonă de clorură de sodiu. De asemenea, se recomandă diluarea antigenului cu o soluție de clorură de sodiu 2%, care, conform autorilor, crește sensibilitatea reacției. Este de asemenea posibilă modificarea cantitativă a reacției cu diluarea serului (1:4, 1:8, 1:16, 1:32, 1:64 etc.).
Reacția este destul de sensibilă, durează puțin timp (aproximativ 1 oră), iar rezultatele ei sunt citite imediat.
123. Reacția de imobilizare a Treponema pallidum (RIBT)
Folosind o reacție, anticorpii și complementul care imobilizează Treponema pallidum sunt detectați în serul sanguin al pacienților cu sifilis.
În sifilisul primar, RIBT este predominant negativ, în secundar - pozitiv în 92-96% din cazuri, în terțiar - în 92-100%, în sistemul nervos și sifilisul congenital - în 86-89% din cazuri.
Au fost observate rezultate pozitive ale RIBT în sarcoid, eritematoză, diabet, tumori maligne, hepatita virala, ciroză hepatică, malarie, lepră, mononucleoza infectioasa, unele boli ale tarilor fierbinti (pinta, iaca, etc.).
Antigenul este o suspensie de treponem pal prelevat din testiculele unui iepure infectat cu sifilis prin introducerea în testicul a 0,75-1 ml dintr-o suspensie de treponem pal într-o soluție izotonică de clorură de sodiu (50 animale pe câmp vizual).
Materialul din testicul trebuie luat la 6-8 zile după ce animalul este infectat. Înainte de a lua antigenul, iepurele este ucis prin sângerare (puncție cardiacă sau artera carotida). Țesutul testicular este zdrobit și umplut cu ser de sânge al unui iepure sănătos, diluat cu soluție izotonică de clorură de sodiu, agitat timp de -30 de minute și apoi centrifugat timp de 10 minute (1000 rpm). Lichidul supernatant este examinat microscopic. Ar trebui să existe cel puțin 10-15 Treponema pallidums în fiecare câmp vizual.
Complementul este pregătit în mod obișnuit din sângele porcușoarelor de Guineea.
Pentru a efectua RIBT aveți nevoie de: 1,2 ml de soluție de gelatină 0,2%, 2,8 ml de soluție de albumină 5%, 1,6 ml de suspensie de Treponema pallidum; pH-ul mediului este de 7,2. La acest amestec se adaugă 0,15 ml de complement (cocktail). În paralel, se efectuează două teste: cu complemente active (experiment) și reactive (de control).
Melangerii sunt umpluți cu serul de testare până la semnul „1”, apoi cu un cocktail până la marcajul „2” și se închid cu un inel de cauciuc steril.
În același timp, se realizează o reacție similară cu seruri evident pozitive și evident negative.
Melangherii se numerotează și se pun într-un termostat la o temperatură de 35 °C timp de 18-20 ore, după care se scot din termostat în perechi (experiment - control) iar conținutul se toarnă în eprubetele corespunzătoare. Se aplică 2 picături pe o lamă de sticlă: în stânga este experimentul, în dreapta este controlul, acoperiți cu un capac de sticlă și microscop într-un câmp vizual întunecat.
În primul rând, se studiază rezultatele controlului: se determină procentul de Treponema pallidum mobil și imobil. Formula de calcul: X = (A - B)/A * 100, unde A este numărul de treponeme mobile pallidum din martor; B - numărul de treponeme pallidum mobile din experiment.
Exemplu: (24 - 19) / 24 * 100 = 21%.
Evaluări rezultate RIBT: sub 20% - negativ. 21-30% - îndoielnic, 31-50% - slab pozitiv, peste 50% - pozitiv.
RSC este foarte sensibil și specific și este utilizat pentru:
1) diagnostic serologic boli infecțioase (râul Wasserman - pentru sifilis, râul Bordet-Zhangu - pentru gonoreea cronică etc.);
2) identificarea bacteriilor și a altor microbi.
RSK este clasificat ca complex reacții serologice, care implică, pe lângă AG și AT, sistemul hemolitic (sistemul de hemoliză), care relevă rezultatul reacției.
RSK se desfășoară în două etape cu participarea a două sisteme:
1) primul sistem – AG + AT + complement – provoacă legarea complementului dacă AT corespunde cu AG. În caz de discrepanță între AT și AG, complementul rămâne liber;
al doilea sistem (indicator) - ser hemolitic (hemolisine) + eritrocite - arată rezultatul reacției în primul sistem: în cazul unui rezultat pozitiv al reacției în primul sistem (formarea complexului AG + AT + complement ), hemoliza nu va apărea în cel de-al doilea sistem din cauza lipsei de complement (eritrocitele se instalează pe fundul eprubetei). Când rezultat negativîn primul sistem, al doilea este însoțit de hemoliză, deoarece se formează un complex de globule roșii + hemolisine + complement (vezi Anexa 3, Fig. 7 și 8).
Componente de reacție:
1) ser de testare (inactivat preliminar prin încălzire la 56 0 C timp de 30 de minute);
2) antigen (facut din suspensii de microbi uciși, lizate microbiene, antigene complete, haptene, extracte lipidice tisulare);
3) complement;
4) ser hemolitic;
5) 3% suspensie de eritrocite de oaie;
6) soluție salină;
7) ser de control.
Completa. Serul de cobai proaspăt și uscat este utilizat ca complement în RSC, deoarece în sângele unui cobai, complementul este conținut în cel mai mare numărși este prezent în mod constant decât la alte animale. Înainte de efectuarea RSC, trebuie efectuată titrarea complementului în reacția de hemoliză (eritrocite de oaie, ser hemolitic, complement, soluție salină) și determinarea dozei de lucru.
Titrul de complement- cea mai mare diluție a complementului care provoacă liza completă a globulelor roșii în prezența serului hemolitic.
Doza de lucru de complement– cantitatea de complement care este cu 25% mai mare decât raza de tragere.
Ser hemolitic preparat prin imunizarea iepurilor cu o suspensie 50% de eritrocite de oaie. Serul rezultat este inactivat prin încălzire la 56 0 C. Se determină titrul şi doza de lucru.
Titrul seric– diluția maximă a serului care provoacă liza completă a globulelor roșii în prezența complementului. Ca doză de lucru, luați ser hemolitic în titru triplu.
RSC Bordet-Gangu
Reacția este efectuată pentru a diagnostica gonoreea cronică pentru a detecta anticorpi împotriva gonococului.
Există 2 sisteme implicate în RSC: sistemul principal - serul de testare, antigenul, complementul și sistemul auxiliar, indicator sau hemolitic - serul hemolitic și hematiile de oaie.
Dacă în primul sistem se formează un complex specific antigen + anticorp, atunci complementul este adsorbit (se combină cu acest complex) și hemoliza nu are loc în al doilea sistem.
Reacția necesită:
1. Ser de testare, care este obținut din sângele prelevat prin puncția venei ulnare a pacientului. După coagularea sângelui, serul este aspirat într-un tub separat și inactivat timp de 30 de minute la 56 0 C într-o baie de apă.
2. Antigen - o suspensie de gonococi uciși.
3. Globulele roșii de oaie sunt obținute din sânge defibrinat colectat steril. Se spală prin centrifugare de 3 ori cu porții noi de soluție salină. Reacția folosește o suspensie de 3% de globule roșii.
4. Serul hemolitic se prepară în prealabil prin imunizarea iepurilor cu hematii de oaie. Înainte de utilizare, serul este titrat.
5. Complement – ser proaspăt de cobai. Sângele este aspirat din inima cobaiului cu o seringă, iar după coagulare, serul este separat. Înainte de experiment, doza de lucru de complement este titrată. Pentru a face acest lucru, luați diluția de bază a complementului 1:10 și turnați-o în eprubete, de la 0,1 la 0,5, după care volumul din fiecare eprubetă este ajustat la 1,5 ml cu soluție salină.
În același timp, se prepară un sistem hemolitic - ser hemolitic diluat în titru triplu + 3% suspensie de eritrocite de oaie. Ambele ingrediente sunt în volume diferite și ținute într-un termostat timp de 30 de minute (sensibilizarea amestecului), după care amestecul se adaugă 1 ml în eprubete și se pune într-un termostat timp de 30 de minute. 3 eprubete servesc drept control:
1. 1 ml sistem hemolitic + 1,5 ml soluție fiziologică;
2. 0,5 ml complement 1:10 + 0,5 ml suspensie de globule roșii + 1,5 ml soluție fiziologică.
Titrul de complement este cantitatea minimă la care mai are loc hemoliza. Pentru a stabili o reacție, se ia o doză de lucru de complement, crescută față de titrul cu 20-25%, adică, de obicei, cantitatea de complement care este prezentă în penultimul tub cu hemoliză. Creșterea dozei de complement este necesară deoarece în reacție activitatea complementului poate fi oarecum suprimată de alte ingrediente ale reacției (antigen, ser).
Înființarea experimentului principal al RSC Bordet - Zhangou.
Mai întâi, serul de testare inactivat și diluat 1:5 este turnat în 2 eprubete. Apoi antigenul este turnat în prima eprubetă, iar soluția fiziologică în a doua. După aceasta, în toate tuburile se adaugă o doză de lucru de complement.
După amestecarea ingredientelor, grătarul cu eprubete se pune într-un termostat la 37 0 C timp de 30 de minute (legare la cald). La legare la rece, un suport cu eprubete este plasat într-o cutie de gheață la o temperatură de -4 0 C timp de 18 ore. După păstrarea într-un termostat, sistemul hemolitic este adăugat în toate eprubetele. Reacția se dă într-un volum de 0,5 ml. Tuburile se pun din nou în termostat timp de 2 ore, după care rezultatele sunt preînregistrate. Tuburile sunt lăsate la temperatura camerei și rezultatul final se notează a doua zi.
Gradul de intensitate al reacției este evaluat pozitiv. Întârzierea completă a hemolizei - patru plusuri (++++), incompletă - trei și un plus. Hemoliza completă este indicată prin minusuri (-).
RSK Wasserman
Plasat pentru diagnosticul de sifilis pentru a detecta anticorpi, precum și pentru a determina eficacitatea terapie specifică. Se bazează pe principiul reacției de fixare a complementului Bordet-Gengou. O diferență semnificativă între reacția Wasserman este nespecificitatea antigenului: extracte lipoide din organe normale animalelor.
Pentru a efectua reacția Wasserman, este necesar să aveți serul pacientului, teste de diagnostic pentru antigenele cu reacție încrucișată nr. 1 și nr. 2, complement, ser hemolitic, globule roșii de oaie și soluție salină.
Diagnosticum Nr. 1 - specific, treponemic.
Diagnosticum No. 2 - antigen nespecific, cardiolipin, care este un extract foarte purificat inima de taur, având o compoziție chimică constantă a lipoidelor. Lipoizi extrași din inimă compoziție chimică sunt apropiate de lipoizii lui Treponema pallidum, prin urmare, deși nu sunt specifici, fixează anticorpi împotriva spirochetei. Acești antigeni sunt produși central și sunt utilizați în reacție, diluați conform titrului indicat pe etichetă.
Concomitent cu experimentul principal se plasează 2 martori: cu ser evident negativ și cu ser pozitiv.
REACȚIA BORDE-JANGU(Bordet-Gen-gou), fixarea alexinei (reacție de fixare a complementului conform lui Ehrlich'y), a fost descoperită de autori în 1901. Reacția se bazează pe faptul că antigenul (microbul, proteine străine etc.), combinându-se cu serul imunitar corespunzător, inactivat în prealabil prin încălzire timp de o jumătate de oră la 56°, formează cu acesta din urmă un complex care absoarbe (adsorbe) cu lăcomie alexina (vezi. Antigene, Aleksin). Ca alexină (complementul lui Ehrlich) pentru B.-J. reactii, se folosesc seruri normale proaspete ale diverselor animale, cel mai frecvent cobai. B J. R. are loc în două etape. Diagrama sa de flux poate fi reprezentată exemplul următor: primul sistem - vibrio cholerae (antigen) + ser anticoleric inactivat prin incalzire - formeaza un complex capabil sa adsorba cu lacomie alexina; cel de-al doilea sistem - eritrocitele de oaie (antigen) + + imune la acestea, ser hemolitic de iepure inactivat prin încălzire - formează, de asemenea, un complex capabil să adsorbie cu lăcomie alexina, cu ajutorul căruia are loc aici dizolvarea eritrocitelor - hemoliza. Dacă alexinul este mai întâi amestecat cu primul sistem, îl va absorbi complet; Este evident că al doilea sistem hemolitic adăugat după aceasta, fără a găsi alexină liberă, nu va da o reacție de hemoliză. Acesta va fi un caz de B.-J pozitiv. r., când nu există hemoliză din cauza absenței alexinei libere. Dacă în experiment primul sistem se dovedește a fi format dintr-un antigen și un ser imunitar care nu corespund unul cu celălalt DRU G U (de exemplu, Vibrio holera + ser anti-tifoid), atunci un compus (complex) care adsorb alexina este neformat între ele, iar acesta din urmă, rămânând liber, se va alătura apoi celui de-al doilea sistem hemolitic, rezultând sistemul I de holeră. vibrion + anticholerna. syv. Alexia al 2-lea sistem- Eritrocite + hemolitul. ser pentru ei. Reacție pozitivă- fara hemoliza. Primul sistem Holern. vi brion + febra antitifoida syv. Aleksin al doilea sistem Eritrocite + .hemolite. ser pentru ei. Reacție negativă-hemoliza. Reprezentarea schematică a reacției Bordet-Gengou. virus „și peripneumonie bovine. Numeroasele lucrări ale lui B., dintre care multe au devenit clasice, au fost publicate în principal în „Annales de l'Institut Pasteur”. „Traite de I” imuat din care se vor dizolva globulele roșii ale oilor. Acesta va fi un caz negativ B.-J. R. Din cele de mai sus este clar că la punerea în scenă a B.-Zh. R. este necesar să se respecte o secvență strictă în amestecarea ingredientelor, și anume, pregătiți mai întâi primul sistem, adăugați-l. și. e. t.sh. 739 bor; alexină și lăsați acest amestec timp de Vs ~ 1 oră la 37° pentru a da timp pentru ca reacția de adsorbție a alexinei să se finalizeze aici, și numai după aceea adăugați un al doilea sistem hemolitic, care servește ca indicator dacă alexina a fost adsorbită, adică dacă antigenul și serul imunitar din primul sistem, sau nu. B J. reacția vă permite să rezolvați probleme în două direcții: 1. Având la dispoziție seruri imune la diverși antigeni, puteți determina cu exactitate natura antigenului necunoscut: cultură microbiană, proteină străină etc. Cultura sau proteina străină studiată va evident da un B.-G pozitiv. R. numai cu seruri imune corespunzătoare naturii lor (de exemplu, proteine dintr-o pată de sânge uman - cu ser imun împotriva proteinelor umane, și nu împotriva proteinelor de la cal, vacă, porc etc.) -2. Avand la dispozitie antigene care ne sunt cunoscute (culturi microbiene, preparate proteice etc.), putem determina originea serului de testare necunoscuta pentru noi. Astfel, serul febrei tifoide sau al convalescentului va da un B.-F pozitiv. R. nu cu holeră, nu cu dizenterie etc., ci numai cu o cultură de tifoidă și invers, serul unui bolnav de holeră sau dizenterie - numai cu culturile microbiene corespunzătoare, și nu cu o cultură microbiană. febră tifoidă. B J. R. Are camp larg aplicații nu numai în microbiologie, ci și în igienă (Schutze) și în instanță. medicina (Neisser, Sachs, Brack). În plus, ținând cont de partea cantitativă a reacției, poate fi folosită pentru a studia unele probleme biologice generale, de exemplu, problema legătura de familieîntre anumite tipuri maimuțe, diverse rase de oameni (Brook, Neiser) etc. - Pentru detalii despre natura și mecanismul reacției Bordet-Gengou, vezi Imunitate. V. Barykin.borde - reacție jangu
Reacția Bordet Zhangu (reacție de fixare a complementului, RSK) - reacție imunologică, pe baza proprietății complexului antigen-anticorp de a fixa complementul liber. RSC se desfășoară în două faze: 1) adsorbția anticorpilor pe antigene; 2) expresia reacţiei în prezenţa unui sistem hemolitic (hemoliză). Pentru a stadializa RSC, obiectele studiate (anticorpi si antigeni) sunt plasate in conditii care sa asigure interactiunea lor in prezenta complementului; apoi la cel analizat sistem imunitar se adaugă un „indicator” - sistemul hemolitic. Dacă complementul este fixat de sistemul imunitar, nu are loc hemoliza ( RSC pozitiv; Fig., a); dacă sistemul imunitar nu fixează complementul și componentele sale nu corespund între ele, apare hemoliză (RSC negativ; Fig., b). Ingrediente de reacție: 1) ser de testare, inactivat prin încălzire timp de 30 de minute. la t° 56°; 2) antigen (suspensii de bacterii, extracte de organe și țesuturi, viruși); 3) complement (ser proaspăt de cobai); 4) sistem hemolitic (eritrocite de oaie sensibilizate incubate cu ser hemolitic timp de 30 minute la t° 37°). Pentru a dilua ingredientele, utilizați o soluție izotonică de clorură de sodiu. Prima etapă a RSC durează 60 de minute. la t° 37° sau 18-20 ore. la t° 4-6° (RSC mai sensibil), a doua etapă - 60 min. la t° 37°.
În practica diagnosticului și medicina legala utilizați diverse modificări ale RSC - calitative și cantitative. Vezi și reacția Wasserman, Studii serologice.
Reacția Bordet Zhangu este o reacție imunologică bazată pe proprietatea complexului antigen-anticorp de a fixa complementul liber. RSC are loc în 2 faze: 1) adsorbția anticorpilor pe antigene, 2) exprimarea reacției (bacterioliză sau hemoliză), care necesită prezența complementului. Dependența reacțiilor bacteriolitice de prezența complementului face posibilă identificarea interacțiunii anticorpilor cu antigenele în reacția Bordet Zhangou. Un indicator al conformității anticorpilor în această reacție este fixarea complementului de către sistemele imunitare corespunzătoare, detectată prin adăugarea unui sistem hemolitic „indicator” la amestecul de reacție.
Reacția Bordet Zhangou se desfășoară în două etape: în primul rând, antigenele și anticorpii studiati sunt plasați în condiții care să asigure interacțiunea lor în prezența complementului, iar după finalizarea adsorbției, sistemul hemolitic (hemolizină + eritrocite) este adăugat la sistemul imunitar fiind analizat. Când antigenele și anticorpii se potrivesc, interacțiunea lor are loc și complementul prezent în amestecul de reacție este fixat de sistemul imunitar. În acest caz, la adăugarea unui sistem indicator, hemoliza nu are loc din cauza absenței complementului (reacția este pozitivă). Dacă anticorpii analizați nu sunt adsorbiți pe antigeni, atunci complementul din amestecul de reacție rămâne liber și atunci când se adaugă un sistem hemolitic are loc hemoliză (reacție negativă).
Principiul metodei de analiză serologică dezvoltat de Bordet și Zhang a stat la baza numeroaselor modificări ale reacției utilizate în practica de diagnostic și munca de cercetare.
RSC convențional, în care se înregistrează liza 100% a globulelor roșii, necesită titrarea preliminară a complementului; acesta din urmă se adaugă sistemului imunitar într-o doză care nu depășește cea necesară pt reacție hemolitică. Schemele de stabilire a unei reacții sunt determinate de scopul acesteia. Într-un experiment, se pot testa diferite doze de antigen la conținut constant de ser și complement, diferite diluții de ser la doze constante de antigen și complement etc. Ingredientele reacției sunt: 1) ser de testare, încălzit timp de 30 de minute. la 56° pentru a inactiva complementul prezent în acesta; 2) antigene (care folosesc suspensii de bacterii, proteine extrase din acestea, polizaharide etc.), extracte din celule vegetale și animale, viruși etc., 3) complement - ser proaspăt porcușori de Guineea, 4) sistem hemolitic (eritrocite de oaie sensibilizate) - suspensie 5% de eritrocite contactate cu ser hemolitic timp de 30 de minute. la t° 37°.
Pentru a dilua ingredientele, utilizați soluție fiziologică de NaCl. Anti-complementaritate ingrediente individuale testat în probe de control. Prima etapă a reacției (adsorbția anticorpului) se efectuează la t° 37° timp de 60 de minute. sau la 4-6° timp de 18-20 ore. (RSK la frig). În acest din urmă caz, are loc o fixare mai completă a complementului, ceea ce crește sensibilitatea metodei. În a doua etapă, amestecurile de reacţie sunt menţinute la t° 37°. Rezultatul este înregistrat în momentul hemolizei 100% în probele martor.
În practica diagnosticului, se folosesc metode active, precum și „indirecte” ale reacției de fixare a complementului, care sunt modificări ale reacției Bordet Zhangou. În primul dintre ele, indicatorul de reacție este o modificare a conținutului de complement din serul de testare. Al doilea se bazează pe faptul că pentru unele boli, serurile nu conțin anticorpi de fixare a complementului, dar sunt capabili să prevină reacțiile cu serurile care au activitate de fixare a complementului.
Cea mai mare sensibilitate și acuratețe este inerentă RSC cantitativ, care înregistrează hemoliza în zona de liză parțială. Sensibilitatea acestei modificări a reacției Bordet Zhangou se datorează faptului că în zona de mijloc liză (20-80%), raportul dintre cantitatea de complement și cantitatea de eritrocite lizate este liniar. Baza acestei reacții este metoda speciala titrarea complementului, a cărui cantitate este exprimată în unități de 50% (CH50) și se calculează pe baza ecuației Krogh, care reprezintă progresul hemolizei în zona de liză parțială.
Gradul de hemoliză este determinat cu ajutorul unui spectrofotometru sau fotoelectrocolorimetru.
RSC cantitativ, la rândul său, are o serie de modificări. În special, micrometoda asigură o mai mare precizie de determinare cu un consum redus de ingrediente.
; 2) expresia reacției în prezența sistemului hemolitic ().
Pentru a stadializa RSC, obiectele studiate (anticorpi si antigeni) sunt plasate in conditii care sa asigure interactiunea lor in prezenta complementului; apoi un „indicator” - sistemul hemolitic - i se adaugă sistemului imunitar analizat. Dacă complementul a fost fixat de sistemul imunitar, nu are loc hemoliză (RSC pozitivă; Fig., a); dacă sistemul imunitar nu fixează complementul și componentele sale nu corespund între ele, apare hemoliză (RSC negativ; Fig., b). Ingrediente de reacție: 1) subiectul de testat, inactivat prin încălzire timp de 30 de minute. la t° 56°; 2) antigen (suspensii de bacterii, extracte de organe și țesuturi); 3) complement (ser proaspăt de cobai); 4) sistem hemolitic (oaie sensibilizată incubată cu ser hemolitic timp de 30 minute la t° 37°). Pentru a dilua ingredientele, utilizați o soluție izotonică de clorură de sodiu. Prima etapă a RSC durează 60 de minute. la t° 37° sau 18-20 ore. la t° 4-6° (RSC mai sensibil), a doua etapă - 60 min. la t° 37°.
Schema reacţiei de fixare a complementului: a - pozitivă; b - negativ. 1 - complement; 2 - ser pacient; 3 - ser sănătos; 4 - antigen; 5 - ser hemolitic; 6 - globule roșii de oaie.
Reacția Bordet-Giang este o reacție imunologică bazată pe proprietatea complexului antigen-anticorp de a fixa complementul liber. RSC are loc în 2 faze: 1) adsorbția anticorpilor pe antigene, 2) exprimarea reacției (bacterioliză sau hemoliză), care necesită prezența complementului. Dependența reacțiilor bacteriolitice de prezența complementului face posibilă identificarea interacțiunii anticorpilor cu antigenele în reacția Bordet-Zhangu. Un indicator al conformității anticorpilor în această reacție este fixarea complementului de către sistemele imunitare corespunzătoare, detectată prin adăugarea unui sistem hemolitic „indicator” la amestecul de reacție.
Reacția Bordet-Giangou se desfășoară în două etape: în primul rând, antigenele și anticorpii studiati sunt plasați în condiții care să asigure interacțiunea lor în prezența complementului, iar după finalizarea adsorbției se adaugă sistemul hemolitic (hemolizină + eritrocite). la sistemul imunitar analizat. Când antigenele și anticorpii se potrivesc, interacțiunea lor are loc și complementul prezent în amestecul de reacție este fixat de sistemul imunitar. În acest caz, la adăugarea unui sistem indicator, hemoliza nu are loc din cauza absenței complementului (reacția este pozitivă). Dacă anticorpii analizați nu sunt adsorbiți pe antigeni, atunci complementul din amestecul de reacție rămâne liber și atunci când se adaugă un sistem hemolitic are loc hemoliză (reacție negativă).
Principiul metodei de analiză serologică dezvoltat de Bordet și Zhang a stat la baza numeroaselor modificări ale reacției utilizate în practica de diagnostic și munca de cercetare.
RSC convențional, în care se înregistrează liza 100% a globulelor roșii, necesită titrarea preliminară a complementului; acesta din urmă se adaugă sistemului imunitar într-o doză care nu depășește cea necesară unei reacții hemolitice. Schemele de stabilire a unei reacții sunt determinate de scopul acesteia. Din experiență, ei pot experimenta diferite doze antigen la un continut constant de ser si complement, diverse dilutii de ser la doze constante de antigen si complement etc. Ingredientele reactiei sunt: 1) ser test, incalzit timp de 30 de minute. la 56° pentru a inactiva complementul prezent în acesta; 2) antigene (care folosesc suspensii de bacterii, proteine extrase din acestea, polizaharide etc.), extracte din celule vegetale și animale, viruși etc., 3) complement - ser proaspăt de cobai, 4) sistem hemolitic ( oaie sensibilizată). eritrocite) - suspensie 5% de eritrocite contactate cu ser hemolitic timp de 30 de minute. la t° 37°.
Pentru a dilua ingredientele, utilizați soluție fiziologică de NaCl. Anticomplementaritatea ingredientelor individuale este testată în probele de control. Prima etapă a reacției (adsorbția anticorpului) se efectuează la t° 37° timp de 60 de minute. sau la 4-6° timp de 18-20 ore. (RSK la frig). În acest din urmă caz, are loc o fixare mai completă a complementului, ceea ce crește sensibilitatea metodei. În a doua etapă, amestecurile de reacţie sunt menţinute la t° 37°. Rezultatul este înregistrat în momentul hemolizei 100% în probele martor.
În practica diagnosticului, se folosesc metode active, precum și „indirecte” ale reacției de fixare a complementului, care sunt modificări ale reacției Bordet-Giangou. În primul dintre ele, indicatorul de reacție este o modificare a conținutului de complement din serul de testare. Al doilea se bazează pe faptul că pentru unele boli, serurile nu conțin anticorpi de fixare a complementului, dar sunt capabili să prevină reacțiile cu serurile care au activitate de fixare a complementului.
Cea mai mare sensibilitate și acuratețe este inerentă RSC cantitativ, care înregistrează hemoliza în zona de liză parțială. Sensibilitatea acestei modificări a reacției Bordet-Giangou se datorează faptului că în zona de mijloc a lizei (20-80%) raportul dintre cantitatea de complement și numărul de eritrocite lizate este liniar. Această reacție se bazează pe o metodă specială de titrare a complementului, a cărei cantitate este exprimată în unități de 50% (C H50) și este calculată pe baza ecuației Krogh, care reprezintă progresul hemolizei în zona de liză parțială. Conform ecuației, 
Unde X- cantitatea de complement luată, y este gradul de hemoliză exprimat ca fracțiune de unu, k este doza de complement care dă liză de 50%, iar 1/n exprimă gradul de pantă a curbei hemolitice.
Gradul de hemoliză este determinat cu ajutorul unui spectrofotometru sau fotoelectrocolorimetru.
RSC cantitativ, la rândul său, are o serie de modificări. În special, micrometoda asigură o mai mare precizie de determinare cu un consum redus de ingrediente.