Микроскопическое исследование нативного и окрашенного препаратов мокроты должен проводить врач. Клеточные и неклеточные элементы в мокроте всегда распределяются неравномерно, поэтому необходимо исследовать несколько нативных препаратов или два, составленных из всех частей мокроты. Если приготовление комплексных нативных препаратов вызывает затруднения, следует приготовить нативные препараты из каждой составной части мокроты, а из нативного препарата, в котором обнаружены клеточные элементы, вызвавшие интерес микроскописта, приготовить препарат для окраски азур-эозином и по Цилю-Нильсену.
КЛЕТОЧНЫЕ ЭЛЕМЕНТЫ МОКРОТЫ Нейтрофилы
В препаратах мокроты лейкоциты могут быть хорошо сохранившимися и на различных стадиях дегенерации, поэтому типы лейкоцитов, их морфология определяются в препаратах, окрашенных азур-эозином. Нейтрофилы всегда содержатся в мокроте в большем или меньшем количестве.
Чем больше гноя в мокроте, тем больше нейтрофилов. Нейтрофилы могут сочетаться с другими типами лейкоцитов. При воспалительных неспецифических процессах нейтрофилы в густом по консистенции гное, выглядят как бесцветные, мелкозернистые, четко контурированные объемные клетки с некоторым блеском. В жидкой серозной мокроте нейтрофилы - крупные клетки (в 2,5 раза больше эритроцита) с хорошо определяемыми фрагментированными ядрами.
Эозинофилы
Эозинофилы - клетки размером 10-12 мкм. Ядро обычно состоит из двух сегментов. При большом увеличении в их цитоплазме видна желтоватая равномерная сферическая зернистость. Распознаются эозинофилы по способности этой специфической зернистости преломлять проходящий свет. В препаратах, окрашенных азур-эозином, у эозинофилов на фоне голубой цитоплазмы четко визуализируется ядро с тяжистой хроматиновой структурой, состоящее обычно из 2, реже 3-4 сегментов, окруженное равномерной сферической зернистостью.
Основные характеристики эозинофилов при заболеваниях бронхолегочной системы:
в цитоплазме эозинофилов содержатся гранулы с большим количеством щелочного белка и перекисей, обладающих бактерицидной активностью;
в гранулах эозинофилов определяются кислая фосфатаза, акрилсульфатаза, коллагеназа, эластаза, глюкуронидаза, катепсинмиелопероксидаза и другие ферменты, обладающие литической активностью;
эозинофилы обладают слабой фагоцитарой активностью и обусловливают внеклеточный цитолиз, участвуя в противогельминтном иммунитете, а также принимая активное участие в аллергических реакциях;
появлению эозинофилов в мокроте способствуют заболевания аллергического характера:
- бронхиальная астма;
- экзогенный аллергический альвеолит;
- эозинофильная пневмония Лефлера;
- гранулематоз из клеток Лангерганса;
- лекарственный токсикоз;
- поражение легких простейшими;
- гельминтозы легких;
- эозинофильный инфильтрат.
Эозинофилы обнаруживают в мокроте при злокачественных новообразованиях легких.
Тучные клетки
Единичные тканевые базофилы можно обнаружить в гнойной мокроте среди нейтрофилов, лимфоцитов и эозинофилов.
Тканевые базофилы обладают гомеостатической функцией, оказывают влияние на проницаемость и тонус сосудистой стенки, поддерживают баланс жидкостей в тканях. Защитная функция этих клеток заключается в выделении медиаторов воспаления и хемотаксических факторов. Базофилы участвуют в аллергических реакциях.
Тканевые базофилы - клетки размером 10-15 мкм. Ядро занимает большую часть клетки и практически неразличимо под полиморфной плоской зернистостью черного, темно-коричневого или фиолетового цвета. Зернистость расположена в цитоплазме и на ядре. Гранулы тучных клеток содержат гистамин, хондроитин-сульфаты А и С, гепарин, серотонин, различные протеолитические ферменты (трипсин, хемотрипсин, пероксидазу, РНКазу). На клеточной мембране тучных клеток отмечается высокая плотность рецепторов IgE, обеспечивающих не только связывание IgE, но и высвобождение гранул, содержимое которых участвует в развитии аллергических реакций. Тканевые базофилы обладают способностью к фагоцитозу. Количество тканевых базофилов резко увеличивается в мокроте и бронхолегоч-ном лаваже у больных с экзогенным аллергическим альвеолитом.
Моноциты
Диаметр моноцита составляет 14-20 мкм, ядро бобовидной, подковообразной формы или многолопастное. Иногда в углублении «подковы» визуализируется выступающий округлый фрагмент ядра. Хроматин ядра нежной рыхлой структуры, ядрышек нет. Цитоплазма относительно широкая, серо-голубая, может содержать мелкую азурофильную зернистость и вакуоли вокруг ядра. Моноцит, попав в ткань легких, в зависимости от микроокружения трансформируется в макрофаг с преобладанием той или иной функциональной активности. В зависимости от выполняемой функции образовавшаяся клетка имеет отличительные морфологические особенности. В процессе дифференцировки моноцита в макрофаг исчезает азурофильная зернистость, содержащая пероксидазу, а активность кислой фосфатазы возрастает.
Лимфоциты
Лимфоциты - основные эффекторные клетки иммунного ответа, участвуют во всех иммунологических реакциях, высокочувствительны к воздействию различных физических, химических факторов. Большое количество лимфоцитов появляется при активации иммунологической реактивности организма. Появление плазматических клеток характерно для процесса образования антител. Лимфоциты в большом количестве обнаруживают в мокроте при туберкулезе, саркоидозе, экзогенном аллергическом альвеолите, парагонимозе, аскаридозе, амебной пневмонии.
Эритроциты
Эритроциты имеют вид желтоватых дисков диаметром 7-8 мкм. Единичные эритроциты могут встречаться в любой мокроте. В большом количестве эритроциты обнаруживают в мокроте, окрашенной кровью. Такая мокрота характерна для инфаркта легкого, застоя в малом круге кровообращения, туберкулеза, парагонимоза, злокачественных новообразований легких.
Цилиндрический реснитчатый эпителий
Цилиндрический реснитчатый эпителий выстилает слизистую оболочку носовых путей, гортани, трахеи, бронхов и бронхиол. В зависимости от того, из какого участка бронхиального дерева слущиваются клетки цилиндрического эпителия, изменяется их размер. Клетки цилиндрического реснитчатого эпителия обнаруживают в препаратах мокроты, приготовленных из белесоватых тяжей, нитей и пленок, лежащих на фоне слизи и представляющих собой отторгнутые при кашлевых толчках участки воспаленной гипертрофированной слизистой оболочки дыхательных путей. Клетки имеют удлиненную форму, расширенную в апикальной части, направленной в просвет бронха, и суженную в основании клетки. На расширенном конце расположена уплотненная оболочка («кутикула», или терминальная полоска), к которой прикрепляются реснички. Реснички сохраняются на терминальной полоске при остром воспалении в свежевыделенной мокроте. Ядра расположены в дистальной части прозрачной цитоплазмы. Клетки цилиндрического реснитчатого эпителия расположены в мокроте неравномерно, группами, в виде скоплений разных размеров. Иногда пласты цилиндрического эпителия образуют при движении по бронхам плотные клеточные комплексы округлой или овальной формы с четкими контурами, по краям которых видны реснички, довольно долго сохраняющие активную подвижность. Эти комплексы получили название телец креола. Наблюдается движение ресничек на тканевых клочках эпителиальной ткани более 8 ч от момента доставки мокроты в лабораторию. Эти образования ошибочно можно принять за комплексы злокачественных клеток или за вегетативные формы простейших.
АЛЬВЕОЛЯРНЫЕ МАКРОФАГИ
Альвеолярные макрофаги образуются из единой полипотентной клетки костного мозга, проходят стадию моноцита, в легких превращаются в альвеолярные макрофаги. Они выполняют фагоцитарную, секреторную и антигенпредставляющую функции. В зависимости от функции альвеолярные макрофаги имеют отличительные морфологические признаки, которые выявляют в нативных и окрашенных азур-эозином препаратах. В слизи они представлены отдельно лежащими клетками, небольшими группами или большими скоплениями. Альвеолярные макрофаги в препаратах, окрашенных азур-эозином, характеризуются полиморфизмом величины и формы клеток, а также формы ядер и их количества. Диаметр клеток колеблется от 18 до 40 мкм, количество ядер - от одного до 3-4 и более. Форма ядер разнообразна: округлая, овальная, с выемкой. Ядерно-цитоплазматическое соотношение резко смещено в сторону цитоплазмы, соблюдается в клетках всегда. Форма альвеолярных макрофагов зависит от вязкости слизи, в которой они рас¬положены. В жидкой, серозной мокроте они имеют круглую форму.
«Клетки курильщика» или «пылевые клетки» (кониофаги)
Кониофаги фагоцитируют пыль, сажу, никотин, краску. Эти включения видны в цитоплазме клеток в нативном препарате в виде желтовато-коричневых, коричневых, черных и цветных гранул различных размеров. Иногда они заполняют практически всю цитоплазму клетки. Альвеолярные макрофаги в мокроте шахтеров черного цвета, заполнены микрочастицами черного угля, у мукомолов - белого цвета, у людей, работающих в красильном производстве, цвет альвеолярных макрофагов зависит от цвета красителя.
Липофаги
Липофаги - альвеолярные макрофаги с каплями жира или ксантомные клетки из очага жировой дегенерации легочной ткани. Цитоплазма липофагов заполнена каплями жира, поэтому их обозначают как жировые или зернистые шары. Эти клетки характерны для хронического воспалительного процесса или злокачественных новообразований легких.
Альвеолярные макрофаги с гемосидерином, сидерофаги, или клетки «сердечных пороков»
Сидерофаги содержат в цитоплазме кристаллы гемосидерина золотисто-желтого или коричневатого цвета. Гемосидерин образуется из гемоглобина внутриклеточно в цитоплазме альвеолярных макрофагов в результате распада эритроцитов при застое в малом круге кровообращения, инфаркте легкого, легочном кровотечении, идиопатическом гемосидерозе легких. В препаратах мокроты, окрашенных азур-эозином, аморфные кристаллы гемосидерина в альвеолярных макрофагах окрашиваются в черный или черно-синий цвет.
Идиопатический гемосидероз легких, или «железное легкое», описали W. Ceelen и N. Gellerstadt, поэтому он получил название синдрома Селена-Геллерстедта. Встречается в юношеском и детском возрасте. Болезнь протекает волнообразно, с двусторонними мелкоочаговыми изменениями в легких, кровохарканьем и спленомегалией. При исследовании мокроты выявляют большое количество аль-веолярных макрофагов с желто-коричневыми включениями. Для подтверждения природы патологического процесса и наличия в мокроте альвеолярных макрофагов с гемосидерином необходимо провести реакцию Перлса (реакцию образования берлинской лазури).
АЛЬВЕОЛЯРНЫЙ ЭПИТЕЛИЙ
Альвеолярный эпителий представлен пневмоцитами II типа, его обнаруживают в препаратах из бронхоальвеолярного лаважа больных с идиопатическим легочным фиброзом (синдромом Хаммена-Рича, прогрессирующим интерстициальным фиброзом легких, склерозирующим альвеолитом). Заболевание характеризуется диффузным, острым очаговым или хроническим негнойным воспалением легких с исходом в фиброз интерстициальной ткани легких. Десквамативная пневмония, или болезнь Либова, - одна из форм данного заболевания, характеризуется обильным слущиванием альвеолярного эпителия. При этой форме в бронхоальвеолярном лаваже общее количество клеток увеличивается до 1х106/мл за счет лимфоцитов, большого количества альвеолярного эпителия, нейтрофилов, эозинофилов и лимфоцитов. В мазках, приготовленных из лаважа и окрашенных азур-эозином, обычно присутствуют пневмоциты II типа - клетки размером с небольшой макрофаг, с ядром округлой или неправильной формы, расположенным центрально и занимающим около трети цитоплазмы. Цитоплазма серо-синего цвета, содержит однотипные вакуоли, придающие ей дырчатый вид. Содержимое вакуолей при фиксации спиртсодержащими красителями разрушается.
ЭЛАСТИЧЕСКИЕ ВОЛОКНА
Эластические волокна - соединительная ткань легочной паренхимы, которая появляется в мокроте в результате распада при туберкулезе, абсцессе легкого, гангрене, абсцедирующей пневмонии, актиномикозе, злокачественных новообразованиях легких.
Неизмененные эластические волокна
Неизмененные эластигеские волокна имеют вид извитых тонких блестящих волокон равномерной толщины на всем протяжении, напоминают ветки дерева, складываются в пучки, при выраженном распаде сохраняют строение альвеол. Расположены на фоне полуразрушенных лейкоцитов или детрита. Эластические волокна легко идентифицируются в нативных препаратах, приготовленных из плотных гнойных частиц или белесоватых крупинок на фоне гноя, представляющих собой некротические массы. Они хорошо различимы в препаратах, окрашенных азур-эозином.
Коралловидные эластические волокна
Коралловидные волокна - резко преломляющие свет, грубоветвящиеся образования, напоминающие кораллы. Объемные бугристые наслоения на эластических волокнах состоят из кристаллов и солей жирных кислот, которые образуются в очаге хронического воспаления, каверне при кавернозном туберкулезе. Если мокроту с коралловидными волокнами обработать 10% раствором гидроксида натрия или гидроксида калия, кристаллические образования растворяются, освобождая неизмененные эластические волокна.
Обызвествленные эластические волокна
Обызвествленные эластические волокна грубые, хрупкие, пропитаны солями извести, расположены на фоне грубозернистой массы обызвествленного детрита в виде пунктирных линий, состоящих из сероватых, резко преломляющих свет палочек. При приготовлении нативного препарата они ломаются под покровным стеклом. Их обнаруживают в нативных препаратах мокроты при распаде первичного туберкулезного очага Гона, а также при абсцессе и гангрене легкого, злокачественных новообразованиях легких.
Элементы распада петрифицированного очага называются тетрадой Эрлиха:
обызвествленные эластические волокна;
обызвествленный детрит;
кристаллы холестерина;
микобактерии туберкулеза.
СПИРАЛИ КУРШМАНА
Спирали Кушмана - плотная слизь в виде осевого цилиндра, окруженная рыхлой слизью, называемой мантией. Центральная часть спирали Куршмана (осевой цилиндр) резко преломляет свет и напоминает блестящую объемную нить или спираль. Осевые цилиндры образуются в бронхах и бронхеолах при застое вязкой слизи во время спазма или обструкции. Спираль Куршмана формируется при кашле, во время движения осевого цилиндра по бронхиальному дереву, когда он окутывается рыхлой слизью (мантией). Спирали Куршмана, образовавшиеся в крупных бронхах, могут иметь очень большие размеры, при малом увеличении занимать несколько полей зрения. Они видны при макроскопическом просмотре мокроты, перенесенной в чашку Петри. Очень маленькие, короткие спирали Куршмана, представленные только осевыми цилиндрами, образуются в мелких бронхиолах. Спирали Куршмана встречаются в мокроте при бронхиальной астме, туберкулезе, злокачественных новообразованиях легких, при воспалительных процессах, сопровождаемых спазмом или обструкцией бронхов.
КРИСТАЛЛЫ В ПРЕПАРАТАХ МОКРОТЫ Кристаллы Шарко-Лейдена
Кристаллы Шарко-Лейдена имеют вид вытянутых в длину ромбов различных размеров. Они образуются из эозинофильной зернистости при ее распаде. Их обнаруживают в препаратах мокроты, приготовленных из плотных желтоватых или желтовато-коричневатых комочков, цилиндрических или ветвящихся, объемных образований из мелких бронхов, и они расположены на фоне эозинофилов или эозинофильной зернистости. В холодильнике в мокроте, содержащей эозинофилы, происходит образование кристаллов Шарко-Лейдена. В нативных препаратах они бесцветные, резко преломляют свет, в окрашенных препаратах наблюдается сродство кристаллов к эозинофилам.
Кристаллы гематоидина
Гематоидин - продукт распада гемоглобина, образуется в глубине гематом и обширных кровоизлияний, очагах распада злокачественных новообразований, некротизированной ткани легкого. Кристаллы гематоидина золотисто-желтые, имеют форму ромба, вытянутого в длину, разрозненно лежащих игл или складывающихся в пучки или звезды. В препаратах мокроты кристаллы гематоидина расположены на фоне детрита, эластических волокон, злокачественных клеток или в очагах некроза легочной ткани либо распада гематомы.
Кристаллы холестерина
Кристаллы холестерина - бесцветные тонкие пластинки четырехугольной формы с обломанным в виде ступени углом. Они образуются при застое мокроты в полостях, в очагах жировой дегенерации легочной ткани, при злокачественных новообразованиях, абсцессе легкого. Расположены на фоне макрофагов с каплями жира, обызвествленных эластических волокон и обызвествленного детрита.
ПРОБКИ ДИТРИХА
При макроскопическом исследовании жидкости, полученной из полости абсцесса легкого, в гное на дне сосуда видны мелкие желтовато-серые зернышки. При микроскопическом исследовании зернышки представляют собой детрит, нафаршированный макрофагами, содержащими жирные кислоты в виде игл или капель. Кристаллы жирных кислот превращаются в капли при подогревании нативного препарата на пламени спиртовки (препарат не должен закипеть!). Капли жирных кислот окрашиваются в синий цвет при добавлении к препарату мокроты капли 0,5% раствора метиленового синего. Пробки Дитриха расположены в нижнем гнойном слое трехслойной мокроты, образовавшейся в полостях при абсцессе легкого и бронхоэктатической болезни.
Миелин
Миелин - конечный продукт аутолиза клеток и слизи, представляет собой некротический детрит, состоящий из фосфолипидов. Миелин, как и альвеолярные макрофаги, - неотъемлемая часть слизистой мокроты. Миелиновые образования встречаются в слизистой мокроте или слизистой части гнойно-слизистой мокроты, лежат свободно или являются фоном для альвеолярных макрофагов, которые их фагоцитируют, превращаясь в белые, бесцветные клетки. Миелиновые образования имеют нежный контур, иногда концентрическую исчерченность, овальную, круглую, каплевидную или почкообразную форму и различные размеры.
Мокрота – отделяемый из легких и дыхательных путей (трахеи и бронхов) патологический секрет. Общий анализ мокроты – лабораторное исследование, которое позволяет оценить характер, общие свойства и микроскопические особенности мокроты и дает представление о патологическом процессе в дыхательных органах.
Для чего используется этот анализ?
- Для диагностики и оценки патологического процесса в легких и дыхательных путях.
- При заболеваниях органов дыхания, которые сопровождаются кашлем и выделением мокроты.
Синонимы русские
Клинический анализ мокроты.
Синонимы английские
Sputum analysis.
Метод исследования
Микроскопия.
Единицы измерения
Мг/дл (миллиграмм на децилитр).
Какой биоматериал можно использовать для исследования?
Как правильно подготовиться к исследованию?
Общая информация об исследовании
Мокрота – это патологический секрет легких и дыхательных путей (бронхов, трахеи, гортани), который отделяется при откашливании. У здоровых людей мокрота не выделяется. В норме железы крупных бронхов и трахеи постоянно образовывают секрет в количестве до 100 мл/сут., который проглатывается при выделении. Трахеобронхиальный секрет представляет собой слизь, в состав которой входят гликопротеины, иммуноглобулины, бактерицидные белки, клеточные элементы (макрофаги, лимфоциты, слущенные клетки эпителия бронхов) и некоторые другие вещества. Данный секрет обладает бактерицидным эффектом, способствует выведению вдыхаемых мелких частиц и очищению бронхов. При заболеваниях трахеи, бронхов и легких усиливается образование слизи, которая отхаркивается в виде мокроты. У курильщиков без признаков заболеваний органов дыхания также обильно выделяется мокрота.
Клинический анализ мокроты является лабораторным исследованием, которое позволяет оценить характер, общие свойства и микроскопические особенности мокроты. На основании данного анализа судят о воспалительном процессе в органах дыхания, а в некоторых случаях ставят диагноз.
Мокрота по составу неоднородна. Она может содержать слизь, гной, серозную жидкость, кровь, фибрин, причем одновременное присутствие всех этих элементов не обязательно. Гной образуют скопления , возникающие в месте воспалительного процесса. Воспалительный экссудат выделяется в виде серозной жидкости. Кровь в мокроте появляется при изменениях стенок легочных капилляров или повреждениях сосудов. Состав и связанные с ним свойства мокроты зависят от характера патологического процесса в органах дыхания.
Микроскопический анализ дает возможность под многократным увеличением рассмотреть присутствие различных форменных элементов в мокроте. Если микроскопическое исследование не выявило наличия патогенных микроорганизмов, это не исключает присутствия инфекции. Поэтому при подозрении на бактериальную инфекцию одновременно рекомендуется выполнять бактериологическое исследование мокроты с определением чувствительности возбудителей к антибиотикам.
Материал для анализа собирается в стерильный одноразовый контейнер. Пациенту необходимо помнить, что для исследования нужна мокрота, выделенная при откашливании, а не слюна и слизь из носоглотки. Собирать мокроту нужно утром до приема пищи, после тщательного полоскания рта и горла, чистки зубов.
Результаты анализа должны оцениваться врачом в комплексе с учетом клиники заболевания, данных осмотра и результатов других лабораторных и инструментальных методов исследования.
Для чего используется исследование?
- Для диагностики патологического процесса в легких и дыхательных путях;
- для оценки характера патологического процесса в дыхательных органах;
- для динамического наблюдения за состоянием дыхательных путей пациентов с хроническими заболеваниями органов дыхания;
- для оценки эффективности проводимой терапии.
Когда назначается исследование?
- При заболеваниях легких и бронхов ( , бронхоэктатической , грибковой или глистной инвазии легких, интерстициальных заболеваниях легких);
- при наличии кашля с выделением мокроты;
- при уточненном или неясном процессе в грудной клетке по данным аускультации или рентгенологического обследования.
Что означают результаты?
Референсные значения
Количество мокроты при разных патологических процессах может составлять от нескольких миллилитров до двух литров в сутки.
Незначительное количество мокроты отделяется при:
- острых бронхитах,
- пневмониях,
- застойных явлениях в легких, в начале приступа бронхиальной астмы.
Большое количество мокроты может выделяться при:
- отеке легких,
- нагноительных процессах в легких (при абсцессе, бронхоэктатической болезни, гангрене легкого, при туберкулезном процессе, сопровождающемся распадом ткани).
По изменению количества мокроты иногда можно оценить динамику воспалительного процесса.
Цвет мокроты
Чаще мокрота бесцветная.
Зеленый оттенок может свидетельствовать о присоединении гнойного воспаления.
Различные оттенки красного указывают на примесь свежей крови, а ржавый – на следы распада .
Ярко-желтая мокрота наблюдается при скоплении большого количества эозинофилов (например, при бронхиальной астме).
Черноватая или сероватая мокрота содержит угольную пыль и наблюдается при пневмокониозах и у курильщиков.
Мокроту могут окрашивать и некоторые лекарственные средства (например, рифампицин).
Запах
Мокрота обычно не имеет запаха.
Гнилостный запах отмечается в результате присоединения гнилостной инфекции (например, при абсцессе, гангрене легкого, при гнилостном бронхите, бронхоэктатической болезни, раке легкого, осложнившемся некрозом).
Своеобразный "фруктовый" запах мокроты характерен для вскрывшейся .
Характер мокроты
Слизистая мокрота наблюдается при катаральном воспалении в дыхательных путях, например, на фоне острого и хронического бронхита, трахеита.
Серозная мокрота определяется при отеке легких вследствие выхода плазмы в просвет альвеол.
Слизисто-гнойная мокрота наблюдается при бронхите, пневмонии, бронхоэктатической болезни, туберкулезе.
Гнойная мокрота возможна при гнойном бронхите, абсцессе, актиномикозе легких, гангрене.
Кровянистая мокрота выделяется при инфаркте легких, новообразованиях, травме легкого, актиномикозе и других факторах кровотечения в органах дыхания.
Консистенция мокроты зависит от количества слизи и форменных элементов и может быть жидкой, густой или вязкой.
Плоский эпителий в количестве более 25 клеток указывает на загрязнение материала слюной.
Клетки цилиндрического мерцательного эпителия – клетки слизистой оболочки гортани, трахеи и бронхов; их обнаруживают при бронхитах, трахеитах, бронхиальной астме, злокачественных новообразованиях.
Альвеолярные макрофаги в повышенном количестве в мокроте выявляются при хронических процессах и на стадии разрешения острых процессов в бронхолегочной системе.
Лейкоциты в большом количестве выявляются при выраженном воспалении, в составе слизисто-гнойной и гнойной мокроты.
Эозинофилы обнаруживаются при бронхиальной астме, эозинофильной пневмонии, глистных поражениях легких, инфаркте легкого.
Эритроциты . Обнаружение в мокроте единичных эритроцитов диагностического значения не имеет. При наличии свежей крови в мокроте выявляются неизмененные эритроциты.
Клетки с признаками атипии присутствуют при злокачественных новообразованиях.
Эластические волокна появляются при распаде ткани легкого, которое сопровождается разрушением эпителиального слоя и освобождением эластических волокон; их обнаруживают при туберкулезе, абсцессе, эхинококкозе, новообразованиях в легких.
Коралловидные волокна выявляют при хронических заболеваниях (например, при кавернозном туберкулезе).
Обызвествленные эластические волокна – эластические волокна, пропитанные солями . Их обнаружение в мокроте характерно для туберкулеза.
Спирали Куршмана образуются при спастическом состоянии бронхов и наличии в них слизи; характерны для бронхиальной астмы, бронхитов, опухолей легких.
Кристаллы Шарко – Лейдена – продукты распада эозинофилов. Характерны для бронхиальной астмы, эозинофильных инфильтратов в легких, легочной двуустки.
Мицелий грибов появляется при грибковых поражениях бронхолегочной системы (например, при легких).
Прочая флора. Обнаружение бактерий (кокков, бацилл), особенно в больших количествах, указывает на наличие бактериальной инфекции.
Что может влиять на результат?
Результаты анализа будут недостоверными при:
- неправильном сборе материала (например, сборе слюны, а не мокроты);
- попадании в материал посторонних веществ и биоматериалов.
Прием антибактериальных, противогрибковых или противогельминтных препаратов, влияющих на возбудителей инфекционного процесса в легких, изменяет характер мокроты.
Важные замечания
- При трудно отделяемой мокроте перед сдачей анализа могут быть назначены отхаркивающие препараты, обильное теплое питье, ингаляции с физиологическим раствором.
- Лабораторные и инструментальные исследования в диагностике: Справочник / Пер. с англ. В. Ю. Халатова; под. ред. В. Н. Титова. – М.: ГЭОТАР-МЕД, 2004. – С. 960.
- Назаренко Г. И., Кишкун А. Клиническая оценка результатов лабораторных исследований. – М.: Медицина, 2000. – С. 84-87.
- Ройтберг Г. Е., Струтинский А. В. Внутренние болезни. Система органов дыхания. М.: Бином, 2005. – С. 464.
- Kincaid-Smith P., Larkins R., Whelan G. Problems in clinical medicine. – Sydney: MacLennan and Petty, 1990, 105-108.
Литература
Включает изучение нативных и окрашенных препаратов.
Подготовка к исследованию: Узким шпателем или иглой выбрать кусочек величиной с булавочную головку →на предметное стекло, накрыть покровным стеклом (материал не должен выходить за пределы покровного стекла).
Микроскопия:
под малым увеличением (7х8) – обнаружение элементов, встречающихся в мокроте в небольшом количестве (эластические волокна, спирали Куршмана и т.д.)
под большим (7х40) - детальное исследование мазка. При необходимости окрашивания покровное стекло сдвигают, отмечают на предметном интересующее место, затем препарат высушивают и окрашивают.
N.B! Необходимо исследовать все частицы, отличающиеся от фона мокроты.
Элементы нативного препарата мокроты
волокнистые образованиякристаллические образования
Клеточные элементы нативного препарата мокроты
Эпителиальные клетки
Плоский эпителий – из полости рта.
Единичный встречается всегда. Большое количество - примесь слюны.
Диагностического значения не имеет.Цилиндрический мерцательный эпителий
Эпителий слизистой оболочки бронхов и трахеи - в больших количествах при бронхиальной астме и остром бронхите.
Клеточные элементы нативного препарата мокроты (продолжение)
Лейкоциты -встречаются в любой мокроте. В слизистой мокроте - едининичные, а в гнойной -сплошь покрывают поле зрения.
Эритроциты - единичные в любой мокроте, в большом количестве в кровянистой мокроте при застое, инфаркте легких.
Альвеолярные макрофаги - при бронхитах, пневмониях и профессиональных заболеваниях легких (пылевые клетки - кониофаги), застойных явлениях в легких (сидерофаги – Мф, содержащие гемосидерин, определяют реакцией на берлинскую лазурь). пороках сердца.
Опухолевые клетки попадают в мокроту при распаде опухоли в бронхах.
Волокнистые образования в нативном препарате мокроты
Эластические волокна – элементы соединительной ткани. Следствие деструкции ткани. Имеют вид извитых, блестящих, тонких волокон. Обнаруживаются при
туберкулезе, абсцессе, гангрене, новообразованиях.
Обызвествленные эластические волокна – грубые, толстые, пропитанные солями палочковидные образования - при распаде петрифицированного туберкулезного очага.
Спирали Куршмана –образуются при спастическом состоянии бронхов и наличии в них слизи. Во время кашлевого толчка вязкая слизь выбрасывается в просвет более крупного бронха, закручиваясь спиралью.
Появляются при БА, бронхитах, иногда при опухолях легкого, сдавливающих бронхи.
образованиявнативномпрепарате мокроты
Кристаллы Шарко-Лейдена – образуются из распадающихся эозинофилов. Для выявления необходимо выдерживание мокроты в течение 24 часов. Встречаютсяпри БА (и на высоте приступа и в межприступном периоде)., при глистных поражениях легких.
Кристаллы гематоидина – продукт распада гемоглобина. Образуются в глубине гематом и обширных кровоизлияний, в некротизированной ткани.
Кристаллы холестерина – образуются при распаде жироперерожденных клеток, при задержке мокроты в полостях - при туберкулезе, новообразованиях, абсцессе.
Тетрада Эрлиха – обызвествленный детрит, обызвествленные эластические волокна, кристаллы холестерина, микобактерии туберкулеза – при распаде обызвествленного первичного туберкулезного очага.
Окрашенные препараты мокроты
Приготовление: При необходимости
окрашивания покровное стекло после микроскопии нативного препарата
сдвигают, отмечают на предметном стекле интересующее место, затем препарат высушивают, окрашивают
по Романовскому или Папенгейму.
Окрашенныепрепаратымокроты (продолжение)
Элементы окрашенных препаратов:
Нейтрофилы составляют основную массу лейкоцитов в окрашенном мазке. Могут быть дегенеративные - в гнойной мокроте.
Эозинофилы отдельные или скоплениями, сособенно при БА.Лимфоциты единичные.
Гистиоциты встречаются постоянно в различных количествах.
Эпителиоидные клетки - клетки туберкулезной гранулемы - при туберкулезе, саркоидозе.
Клетки Пирогова-Ланхганса – гигантские многоядерные клетки, входят в состав туберкулезной гранулемы. В мокроте встречаются редко.
Плоский эпителий, эпителий бронхов, реснитчатые клетки, бокаловидные клетки – единичные.
Бактериоскопическое исследование мокроты
по Циль-Нильсену - для выявления микобактерий туберкулеза
микроскопия препаратов, окрашенных
по Граму - для изучения микрофлоры
мокроты (стрептококки, стафилококки и т.д.).
микобактерии
туберкулеза
Три пробы мокроты:
1-через 1-2 часа после сна (под наблюдением медицинского работника).
2 – в тот же день через несколько часов после
взятия первой пробы. 3- утром следующего дня.
Необходимое количество материала - 3-5 мл мокроты,мокроту откашливать из глубоких отделов легких!
Полученный нативный препарат просматривают с опущенным конденсором сухими системами микроскопа при малом увеличении (объектив 10х), продвигая его, пока не будет просмотрен весь препарат. Для уточнения элементов, обнаруживаемых под малым увеличением, меняют объектив 40х. Подсчет найденных элементов ведется под большим увеличением по полям зрения.
В лабораторной диагностике микроскопическое исследование является процессом целенаправленным. Это значит, что при микроскопии происходит активный поиск тех структурных образований, которые несут диагностическую информацию. Таковыми при исследовании мокроты являются: цилиндрический мерцательный эпителий, лейкоциты, кристаллы Шарко-Лейдена, спирали Куршмана, альвеолярные макрофаги, эритроциты, эластические волокна, атипичные клетки.
Цилиндрический мерцательный эпителий. Клетки его имеют удлиненную форму с вытянутым концом. Небольшое овальное ядро расположено ближе к широкому концу. Цитоплазма содержит мелкую зернистость. На широком конце клетки видны мерцательные реснички.
Мерцательный эпителий выстилает весь дыхательный тракт, за исключением передних отделов носа, задней стенки носоглотки и голосовых связок. Он выполняет главную роль в очищении бронхов от микроорганизмов, инородных частиц, клеточного детрита путем переноса их ресничками вместе с поверхностным слоем слизи из периферических отделов бронхиального дерева по направлению к трахее и гортани (мукоцилиарный транспорт).
Клиническая оценка. Единичные клетки мерцательного эпителия можно найти в любой мокроте. Диагностическое значение имеет нахождение этих клеток большими скоплениями, что характерно: для начала воспалительного процесса, когда происходит десквамация мерцательного эпителия; при разрешении приступа удушья по типу бронхиальной астмы, когда при надсадном кашле «вырываются» целые фрагменты слизистой оболочки.
Плоский эпителий. Крупные, плоские, бесцветные клетки округлой или полигональной формы с небольшим круглым, центрально расположенным ядром.
Клиническая оценка. Клетки плоского эпителия попадают в мокроту из полости рта со слюной или при воспалительных процессах носоглотки и гортани. В диагностике бронхо-легочной патологии нахождение клеток плоского эпителия значения не имеет.
Лейкоциты в мокроте представлены нейтрофилами и эозинофилами.
Нейтрофилы – округлой формы клетки диаметром 9-12 мкм. Ядро фрагментировано. Цитоплазма содержит мелкую зернистость.
Нейтрофилы обладают противоинфекционным действием. Они являются макрофагами, выделяют бактерицидные вещества.
Клиническая оценка. Присутствие нейтрофилов в мокроте указывает на наличие воспалительного процесса в бронхо-легочном аппарате. Особенно много нейтрофилов бывает при гнойном воспалении. При этом они часто подвергаются жировой дистрофии, когда отдельные клетки наполнены мелкими жировыми капельками, и распаду, образуя при этом сплошную массу распавшихся клеток (детрит).
Эозинофилы – округлой формы клетки, несколько крупнее нейтрофилов. Ядро сегментировано. Цитоплазма сплошь заполнена крупной, однородной. Блестящей зернистостью, благодаря чему они легко идентифицируются уже в нативном препарате. Кроме того, под малым увеличением скопление эозинофилов, в отличие от нейтрофилов, имеет более темный, иногда желтоватый оттенок. В сомнительных случаях для идентификации эозинофилов прибегают к окраске мазков. Нередко, в больших скоплениях, эозинофилы распадаются и дают массу однотипных, крупных зерен.
Клиническая оценка. Присутствие в мокроте эозинофилов является отражением аллергического состояния дыхательной системы, т.к. функциональная активность эозинофилов направлена на ограничение аллергической реакции.
Среди скопления эозинофилов и в эозинофильном распаде могут обнаруживаться кристаллы Шарко-Лейдена – бесцветные, блестящие, похожие на стрелку компаса, ромбовидные образования разной величины.
Клиническая оценка. Кристаллы Шарко-Лейдена являются продуктом кристаллизации белка, освобождающегося при распаде эозинофилов. Их больше в фазе ремиссии аллергического процесса, а также в несвежей мокроте.
В комплексе с эозинофилами и кристаллами Шарко-Лейдена принято описывать спирали Куршмана – штопорообразно закрученные тяжи слизи. Они состоят из центральной блестящей плотной осевой нити, вокруг которой имеется мантия – слизистое завихрение.
Клиническая оценка. Спирали Куршмана образуются в тех случаях, когда вследствие нарушения оттока (спазм, сдавление, отечность слизистой) слизь в бронхах скапливается, застаивается, уплотняется. Выталкиваясь при сильном кашле, уплотненная слизь закручивается, образуя центральную нить спирали, которая, проходя через более крупные бронхи, обволакивается рыхлой слизью, образующей мантию. Спирали Куршмана указывают на бронхиальную обструкцию. В зависимости от локализации процесса они могут быть разной величины – от очень мелких, микроскопических, до гигантских, определяемых уже при макроскопическом обследовании. Они могут быть представлены только одной центральной нитью или только мантией.
Эозинофилы, кристаллы Шарко-Лейдена и спирали Куршмана объединяются в т.н. «элементы бронхиальной астмы» (триада бронхиальной астмы).
Альвеолярные макрофаги – клетки ретикуло-гистиоцитарного происхождения, которым принадлежит важное место в защитных механизмах на уровне периферических отделов бронхиального дерева и альвеол. Они фагоцитируют поступающие с вдыхаемым воздухом вредные примеси и микроорганизмы, а также клеточный детрит и патологические продукты обмена.
Альвеолярные макрофаги – крупные клетки, в 2-3 раза больше лейкоцитов, овальной или круглой формы с одним эксцентрично расположенным ядром и пенистой цитоплазмой. Последняя обычно содержит различные включения (фагоцитированные частицы), в связи с чем альвеолярные макрофаги названы разными именами:
«Пылевые клетки» - черного цвета, содержащие частицы пыли, копоти, угля и т.д.
Сидерофаги («клетки сердечных пороков») – золотисто-желтого цвета, содержащие кровяной пигмент гемосидерин.
Клиническая оценка. Единичные клетки альвеолярных макрофагов имеются в любой мокроте. Больше их при воспалительных процессах. Значительное увеличение альвеолярных макрофагов наблюдается в стадии разрешения острого воспалительного процесса (выздоровления). При хронических процессах определенное количество альвеолярных макрофагов всегда присутствуют в мокроте. При обострении воспалительного процесса их количество резко уменьшается и вновь увеличивается по мере ликвидации обострения.
Обнаружение в мокроте сидерофагов указывает на попадание эритроцитов в полость альвеол.
Ксантомные клетки появляются в мокроте при хронических воспалительных процессах, при грибковых заболеваниях легких.
Эритроциты в мокроте встречаются, главным образом, в неизмененном виде.
Неизмененные эритроциты имеют вид дисков желтого цвета.
Клиническая оценка. Отдельные эритроциты встречаются в любой мокроте. Особенно их много в кровянистой мокроте.
При длительном пребывании в дыхательных путях, а также под влиянием бактериальных процессов, эритроциты разрушаются и могут отсутствовать даже в кровянистых частях мокроты. При этом обнаруживаются продукты распада эритроцитов в виде дериватов гемоглобина-гемосидерина и гематоидина.
Гемосидерин – железосодержащий дериват гемоглобина встречается в виде зерен желтоватого цвета, которые фагоцитируются макрофагами, образуя сидерофаги.
Гематоидин – в отличие от гематосидерина, не содержит железа и не фагоцитируется макрофагами. Обнаруживается в виде игольчатых и ромбических кристаллов золотисто-желтого или буро-красного цвета. Игольчатые кристаллы располагаются звездообразными пучками.
Клиническая оценка. Гематоидин образуется в анаэробных условиях в глубине гематом и в некротизированной ткани. И тогда в мокроте с окраской, подозрительной на наличие крови, не удается обнаружить эритроцитов и дериватов гемоглобина. В таких случаях необходимо ставить химическую реакцию на выявление кровяного пигмента.
Обнаружение в мокроте эритроцитов и продуктов их распада свидетельствует о наличии геморрагического синдрома.
Эластические волокна являются элементами соединительнотканной стромы легких. Они могут быть свежие, коралловые и обызвествленные.
Свежие эластические волокна представляют собой тонкие, длинные, двуконтурные, извитые нити, толщина которых равномерна на всем протяжении. Расположение эластических волокон зависит от структуры ткани, из которых они происходят. При разрушении альвеолярной стенки эластические волокна повторяют альвеолярное строение. При разрушении стенки бронха или сосуда они располагаются сетевидными скоплениями.
Клиническая оценка. Нахождение эластических волокон указывает на разрушение (деструкцию) легочной паренхимы.
Наиболее частыми процессами, приводящими к деструкции легочной ткани, являются: а) выраженный бактериальный воспалительный процесс – специфический (туберкулез), неспецифический (абсцесс, гангрена), б) опухолевый процесс.
Коралловидные эластические волокна покрыты жирными кислотами и мылами.
Клиническая оценка. Они обнаруживаются часто при вскрытии старой туберкулезной каверны.
Обызвествленные эластические волокна пропитаны солями извести и имют вид пучков пунктирных линий.
Клиническая оценка. Обнаружение в мокроте обызвествленных эластических волокон указывает на вскрытие гоновского очага.
При приготовлении нативного препарата эластические волокна могут не попасть в исследуемую каплю мокроты. Учитывая важность обнаружения их в мокроте, при отрицательных результатах многократного исследования нативных препаратов и при соответствующих клинических данных, прибегают к концентрации эластических волокон с последующей окраской их эозином.
Обнаружение элемента деструкции требует дальнейшего исследования мокроты для выявления причин деструкции.
Поиск атипичных клеток ведется при обследовании нативных препаратов любой мокроты (общеонкологическая настороженность).
Особенностями атипичных клеток являются: полиморфизм (многообразие) величины и форм, наличие отдельных очень крупных клеток, многоядерность, крупный размер ядер с фигурами митоза, многочисленность ядрышек, вакуолизированная цитоплазма, нередко содержащая фагоцитированные целые клетки, гигантские вакуолы и т.д.
При нахождении подозрительного материала готовят мазки, фиксируют и окрашивают их для дальнейшего изучения найденных клеток.
Клиническая оценка. Нахождение атипичных клеток характерно для опухолей. Они попадают в мокроту при эндобронхиальном росте опухоли или при ее распаде.
Исследование мокроты предусматривает определение физических свойств мокроты, ее микроскопическое исследование в нативном мазке и бактериологическое исследование в окрашенных препаратах.
Сбор материала
Мокроту, получаемую при откашливании утром до приема пищи, собирают в чистую сухую склянку. Перед исследованием больной должен почистить зубы и тщательно прополоскать рот водой.
Мокроту помещают в чашку Петри, рассматривают на светлом и темном фоне, описывают ее свойства. Количество мокроты за сутки при различных патологических процессах может быть различно: так например, при бронхите - скудное (5-10 мл), при абсцессе легкого, бронхоэктазах - большое количество (до 200--300 мл).
Деление на слои наблюдается в случаях опорожнения больших полостей в легком, например, абсцесса легкого. В этом случае мокрота образует 3 слоя: нижний слой состоит из детрита, гноя, верхний слой - жидкий, на поверхности его иногда имеется третий - пенистый слой. Такую мокроту называют трехслойной.
Характер: характер мокроты определяет содержание слизи, гноя, крови, серозной жидкости, фибрина. Характер ее может быть слизистый, слизисто-гиойный, слизисто-гнойно-кровянистый и т.п.
Цвет: зависит от характера мокроты, от выдыхаемых частиц, которые могут окрашивать мокроту. Так например, желтоватый, зеленоватый цвет зависит от наличия гноя, "ржавая" мокрота -от распада эритроцитов, встречается при крупозной пневмонии. Прожилки крови в мокроте или красная мокрота может быть при примеси крови (туберкулез, бронхоэктазы). Серый и черный цвет придает мокроте уголь.
Консистенция: зависит от состава мокроты, жидкая - в основном от наличия серозной жидкости, клейкая - при наличии слизи, вязкая - фибрина.
Запах: свежевыделенная мокрота обычно без запаха. Неприятный запах свежевыделенной мокроты обычно появляется при абсцессе легкого, при гангрене легкого - гнилостный.
Микроскопическое исследование
Нативные препараты готовят, выбирая материал из разных мecт мокроты, берут также для исследования все частицы, выделяющиеся окраской, формой, плотностью.
Отбор материала производят металлическими палочками, помещают его на предметное стекло и покрывают покровным. Материал не должен выходить за покровное стекло.
Лейкоциты: всегда содержатся в мокроте, количество их зависит от характера мокроты.
Эозинофилы: распознаются в нативном препарате по более темной окраске и наличию в цитоплазме четкой, одинаковой, преломляющей свет зернистости. Часто располагаются в виде больших скоплений. Эозинофилы встречаются при бронхиальной астме, других аллергических состояниях, гельминтозе, эхинококке легкого, новообразованиях, эозинофильном инфильтрате.
Эритроциты: имеют вид дисков желтого цвета. Единичные эритроциты могут встречаться в любой мокроте, в большом количестве - в мокроте, содержащей примесь крови: новообразованиях легкого, туберкулезе, инфаркте легкого.
Клетки плоского эпителия: попадают в мокроту из полости рта, носоглотки, большого диагностического значения не тлеют.
Цилиндрический мерцательный эпителий: выстилает слизистую оболочку гортани, трахеи, бронхов. В большом количестве обнаруживается при острых катарах верхних дыхательных путей, бронхитах, бронхиальной астме, новообразованиях легкого, пневмосклерозе и др.
Альвеолярные макрофаги: большие клетки различной величины, чаще круглой формы, с наличием в цитоплазме включений черно-бурого цвета. Встречаются чаще в слизистой мокроте с небольшим количеством гноя. Обнаруживаются при различных патологических процессах: пневмонии, бронхитах, профессиональных заболеваниях легких и др. Альвеолярные макрофаги, содержащие гемосидерин, старое название - "клетки сердечных пороков", имеют в цитоплазме золотисто-желтые включения. Для их выявления применяют реакцию на берлинскую лазурь. Ход реакции: кусочек мокроты помещают на предметное стекло, прибавляют 2 капли 5% раствора соляной КИОЛОТЫ и 1-2 капли 5% раствора желтой кровяной соли. Перемешивают стеклянной палочной и по-крывают покровным стеклом. Гемосидерин, лежащий внутриклеточно, окрашивается в голубой или синий цвет. Эти клетки обнаруживаются в мокроте при застойных явлениях в легких, инфарктах легкого.
Жирное перерождение клетки (липофаги, жировые шары): чаще округлые, цитоплазма их заполнена жиром. При прибавлении к препарату судана Ш капли окрашиваются в оранжевый цвет. Группы таких клеток встречаются при новообразованиях легкого, актиномикозе, туберкулезе и др.
Эластические волокна: в мокроте имеют вид извзитых блестящих волокон. Как правило располагаются на фоне лейкоцитов и детрита. Наличие их указывает на распад ткани легкого. Обнаруживаются при абсцессе, туберкулезе, новообразованиях легкого.
Коралловые волокна: Грубые ветвящиеся образования с бугристыми утолщениями вследствие отложения на волокнах жирных кислот и мыл. Их обнаруживают в мокроте при кавернозном туберкулезе.
Обызвествленные эластические волокна - грубые, пропитанные солями извести палочковидные образования. Обнаруживают при распаде петрифицированного очага, абсцессе легкого, новообразованиях, Элемента распада петрифицированнго очага носят название тетрады Эрлиха: I) обызвествленные эластические волокна; 2)аморфные соли извести; 3) кристаллы холестерина; 4) микобактерии туберкулеза.
Спирали Куршма на_- уплотнены, закрученные в спираль слизевые образования. Центральная часть резко преломляет свет и выглядит спиралью, по периферии свободно лежащая слизь образует мантию. Спирали Куршмана образуются при бронхиальной астме.
Кристаллические образования: кристаллы Шарко-Лейдена, вытянутые блестящие ромбы, можно обнаружить в желтоватых кусочках мокроты, содержащих большое количество эозинофилов. Их образование связывают с распадом эозинофилов,
Кристаллы гематоидина: имеют форму ромбов и иголок золотистого цвета. Образуются при распаде гемоглобина при кровоизлияниях, распаде новообразований. В препарате мокроты видны обычно на фоне детирита, эластических волокон.
Кристаллы холестерина: бесцветные четырехугольники с обломанными ступенеобразным углом, обнаруживаются при распаде жирно перерожденных клеток, в полостях. Встречаются при туберкулезе, абсцессе легкого, новообразованиях.
Пробки Дитриха: мелкие желтовато-серые зернышки с неприятным запахом, содержатся в гнойной мокроте. Микроскопически представляют собой детрит, бактерии, кристаллы жирных кислот в виде игл и капелек жира. Образуются при застое мокроты в полостях при абсцессе легкого, бронхоэктазах.
Бактериологическое исследование
Исследование на туберкулезные микобактерии: Препарат готовят из гнойных частиц мокроты, высушивают
на воздухе и фиксируют над пламенем горелки. Окрашивают по
Цилю-Нильсону.
Методика окрашивания: Реактивы:
I) карболовый фуксин,
2) 2% спиртовой раствор соляной кислоты,
3) водный раствор 0,5% метиленового синего.
Ход окраски:
1. На препарат кладут кусочек фильтровальной бумаги и наливают раствор карболового фуксина.
2. Препарат нагревают над пламенем горелки до появления паров, охлаждают и снова нагревают (так 3 раза).
3. С остывшего стекла снимают фильтровальную бумагу. Обесцвечивают мазок в солянокислом спирте до полного отхождения краски.
4. Промывают водой.
5. Докрашивают препарат метиленовнм синим 20-30 секунд.
6. Промывают водой и высушивают на воздухе. Микроскопируют с иммерсионной системой. Туберкулезные микобактерии окрашиваются в красный цвет,
все остальные элементы мокроты и бактерии - в синий. Туберкулезные микобактерии имеют вид тонких, слегка изогнутых палочек с утолщениями на концах или посередине.
При окраске по Цилю-Нильсону в красный цвет красятся также кислотоупорные сапрофиты. Дифференциальная диагностика туберкулезных микробактерий и кислотоупорных сапрофитов ведется методами посева и заражения животных.
Исследование мокроты может проводиться также методом флотации. Метод Потенжера: ход исследования:
1. Свежевыделенную мокроту (не более 10-15 мл) помещают в узкогорлую бутылку, приливают двойное количество едкой щелочи, смесь энергично встряхивают (10-15 мин).
2. Приливают I мл ксилола (можно бензина, толуола) и около 100 мл дистиллированной вода для разжижения мокроты. Снова встряхивают 10-15 мин.
3. Доливают дистиллированную воду до горлышка бутылки и оставляют стоять на 10-50 мин.
4. Образовавшийся верхний слой (беловатый) снимают по каплям пипеткой и наносят на предметные стекла, предварительно нагретые до 60°. Каждую последующую каплю наносят на подсохшую предыдущую.
5. Препарат фиксируют и красят по Цилю-Нильсону.
Исследование на другие бактерии:
Другие бактерии, встречающиеся в мокроте, например, стрептококки, стафилококки, диплобациллы и др. могут быть распознаны только методом посева. Бактериологическое исследование препарата в этих случаях имеет только ориентировочное значение. Препараты красят метиленовым синим, фуксином или по граму. Окраска по Граму: Реактивы: I) карболовый раствор генцианвиолета,
2) раствор Люголя,
3) 96° спирт,
4) 40% раствор карболового фуксина.
Ход исследования:
1. На фиксированный препарат кладут полоску фильтровальной бумаги, наливают раствор генцианвиолета, красят 1-2 мин.
2. Бумажку снимают и препарат заливают раствором Люголя на 2 минуты.
3. Раствор Люголя сливают и прополаскивают препарат в спирте до серого цвета.
4. Промывают водой и окрашивают 10-15 секунд раствором фуксина.