"واکنش حسی حرکتی. واکنش حرکتی یک بوکسور به ظاهر یک محرک خارجی. چگالی محیط تمام شده

119. واکنش های پاندی و نونه - آپلت

به عنوان یک معرف برای انجام واکنش پاندی، از مایع شفاف رویی استفاده می شود که با تکان دادن شدید 100 گرم اسید کربولیک مایع با 1000 میلی لیتر آب مقطر به دست می آید. برای به دست آوردن رسوب و مایع شفاف(معرف) این مخلوطابتدا به مدت 3-4 ساعت در یک ترموستات قرار داده و سپس به مدت 2-3 روز در دمای اتاق نگهداری می شود.

نگهبان یا اسلایدروی کاغذ تیره قرار دهید و 2-3 قطره از معرف را روی آن بمالید و سپس 1 قطره مایع مغزی نخاعی. اگر قطره کدر شود یا کدورت نخ مانند در امتداد حاشیه آن ظاهر شود، واکنش مثبت در نظر گرفته می شود.

برای انجام واکنش Nonne-Apelt، به لوله های آزمایش تمیز، محلول سولفات آمونیوم اشباع، آب مقطر و کاغذ تیره نیاز دارید. محلول اشباع سولفات آمونیوم تهیه می شود به روش زیر: 0.5 گرم از سولفات آمونیوم خنثی خالص شیمیایی را در یک بالن 1000 میلی لیتری قرار داده سپس 100 میلی لیتر آب مقطر را که تا دمای 95 درجه سانتیگراد گرم شده ریخته، تکان داده تا نمک کاملا حل شود و چند روز در دمای اتاق بماند. پس از 2-3 روز، محلول فیلتر شده و pH تعیین می شود. واکنش باید خنثی باشد.

0.5-1 میلی لیتر از محلول به دست آمده را در لوله آزمایش ریخته و به همان میزان مایع مغزی نخاعی با دقت در امتداد دیواره لوله آزمایش اضافه می شود. بعد از 3 دقیقه، نتیجه را ارزیابی کنید. ظاهر یک حلقه سفید رنگ نشان دهنده یک واکنش مثبت است. سپس محتویات لوله آزمایش تکان داده می شود، درجه کدورت با مقایسه آن با لوله آزمایش حاوی آب مقطر مشخص می شود. نتایج واکنش در پس زمینه کاغذ سیاه ارزیابی می شود.

120. واکنش Bordet - Zhangou

یک تست تشخیصی ارزشمند در صورت شناسایی سوزاک مزمندر میان افرادی که از بیماری مزمن رنج می برند بیماری های التهابی سیستم تناسلی ادراری. با توجه به ادبیات، زمانی که استفاده صحیحاین روش تا 80 درصد موارد سوزاک را که با روش های باکتریوسکوپی یا باکتریولوژیکی تشخیص داده نشده اند، شناسایی می کند.

واکنش Bordet-Zhang می تواند ردپایی در نتیجه یک بیماری قبلی یا استفاده از یک گنواکسین برای تشخیص (روش تحریک ایمونوبیولوژیکی) و همچنین درمانی (درمان بیماری های مزمن) باشد. فرآیندهای التهابیسیستم ادراری تناسلی در زنان با توجه به باکشف) هدف. بنابراین، قبل از انجام آن، لازم است به دقت جمع آوری اطلاعات،

هنگامی که شیر مصرف می شود، واکنش ممکن است مثبت کاذب باشد اهداف داروییتب زا.

در نتیجه، یک واکنش مثبت Bordet-Giangu به عنوان شاهد غیرقابل انکار وجود نیست. عفونت گنوکوکیدرست مانند منفی، نمی تواند دلیلی بر عدم وجود سوزاک باشد. با این حال، نتایج مثبت در یک دوره زمانی طولانی باید پزشک را به جستجوی منبع عفونت گنوککی در بدن هدایت کند.

کشت گنوکوک کشته شده حاوی 3-4 میلیارد اجسام میکروبی در 1 میلی لیتر به عنوان آنتی ژن استفاده می شود. آنتی ژن گونوکوکی با محلول فرمالدئید حفظ می شود و در آمپول های 1-5 میلی لیتری ریخته می شود. آمپول های باز نشده برای 6 ماه مناسب است، آمپول های باز شده را می توان به مدت 2-3 روز در یک لوله استریل در یخچال با دمای 3-5 درجه سانتیگراد نگهداری کرد.

واکنش تثبیت مکمل Bordet-Giangu مشابه واکنش واسرمن انجام می شود (به شماره 121 مراجعه کنید). آنتی ژن گونوکوکی با محلول ایزوتونیک کلرید سدیم مطابق با تیتر نشان داده شده در برچسب آمپول رقیق می شود. واکنش اغلب در حجم 2.5 میلی لیتر انجام می شود، بنابراین به 0.5 میلی لیتر سرم آزمایش 1:5 رقیق شده، 0.5 میلی لیتر آنتی ژن رقیق شده به هر لوله اضافه می شود. 1.5 میلی لیتر باقیمانده 1 میلی لیتر سیستم همولیتیک و 0.5 میلی لیتر مکمل است.

واکنش در صورتی مثبت تلقی می شود که در آن بیان شود درجات مختلفتأخیر همولیز در سرم آزمایش در کنترل (سرم خون افراد سالم) همولیز کامل مشاهده می شود.

121. واکنش واسرمن

سرم خون بیماران مبتلا به سیفلیس حاوی ریجین و آنتی بادی است. ریگین ها دارای خاصیت ترکیب شدن با آنتی ژن کاردیولیپین هستند. آنتی بادی های خاص علیه ترپونما پالیدومبه آنتی ژن های خاص متصل می شود. کمپلکس های آنتی ژن-آنتی بادی حاصل توسط مکمل اضافه شده به واکنش جذب می شوند. اندیکاسیون با معرفی یک سیستم همولیتیک (گلبول های قرمز گوسفند + سرم همولیتیک) انجام می شود.

برای انجام واکنش شما نیاز دارید:

الف) محلول ایزوتونیک کلرید سدیم؛

ب) آنتی ژن های ترپونمال اولتراسونیک (ذخیره شده در یخچال در دمای +4 درجه سانتیگراد) و کاردیولیپین (ذخیره شده در دمای اتاق).

ج) مکمل، که سرم خونی است که از سوراخ قلبی 5-10 خوکچه هندی سالم به دست می آید. قابل نگهداری در یخچال به مدت 2 ماه به شرطی
کنسرو کردن با محلول 4 درصد اسید بوریکو محلول سولفات سدیم 5%؛

د) همولیزین - سرم خون همولیتیک خرگوش ایمن سازی شده با گلبول های قرمز گوسفند با تیترهای مختلف (در یخچال در دمای 4 درجه سانتی گراد نگهداری می شود).

ه) گلبول های قرمز گوسفند که از طریق سوراخ به دست می آیند ورید گردنی. خون در یک شیشه استریل با گلوله های شیشه ای (برای مخلوط کردن) جمع آوری می شود، به مدت 15 دقیقه تکان داده می شود. لخته های فیبرین با فیلتراسیون از طریق گاز استریل جدا می شوند. خون دفیبره را می توان تا 5 روز در یخچال نگهداری کرد.

گاهی اوقات نیاز به ذخیره طولانی تری خون گوسفند وجود دارد و بنابراین با نگهدارنده مخصوص (6 گرم گلوکز، 4.5 گرم اسید بوریک، 100 میلی لیتر محلول کلرید سدیم ایزوتونیک) نگهداری می شود که در حمام آب جوشانده می شود. 20 دقیقه در روز به مدت 3 روز برای 100 میلی لیتر خون دفیبرینه شده گوسفند، 15 میلی لیتر نگهدارنده لازم است. خون دفیبره نگهداری شده به این روش در یخچال نگهداری می شود.

آزمایش اصلی با چندین مرحله انجام می شود.

10-5 میلی لیتر خون از ورید کوبیتال بیمار گرفته می شود و سرم پردازش می شود. در کودکان می توان خون گرفت ورید تمپورالیا بریدگی در پاشنه پا سوراخ با ابزار استریل، سرنگ و سوزن انجام می شود.
از قبل با محلول ایزوتونیک کلرید سدیم شسته شده است.

خون برای تحقیق با معده خالی گرفته می شود. 3-4 روز قبل از مطالعه، بیمار از مصرف منع می شود مواد مخدر، آماده سازی دیژیتال، مصرف الکل.

مطالعه نباید در بیماران مبتلا به درجه حرارت بالابدن، پس از آسیب، جراحی، بیهوشی، اخیراً انجام شده است بیماری های عفونیدر زنان در دوران قاعدگی، در زنان باردار (در 10 روز آخر بارداری)، زنان در حال زایمان (در 10 روز اول پس از تولد) و همچنین نوزادان (در 10 روز اول زندگی).

خون به دست آمده در یک لوله استریل در ترموستات با دمای 37 درجه سانتیگراد به مدت 30-15 دقیقه قرار می گیرد. لخته به دست آمده با یک میله شیشه ای استریل از دیواره های لوله آزمایش جدا شده و به مدت یک روز در یخچال قرار می گیرد. آب پنیر شفاف جدا شده (در بالای لخته) با پیپت پاستور مکیده می شود. لامپ لاستیکییا با دقت در لوله استریل دیگری بریزید و در حمام آب به مدت 30 دقیقه در دمای 56 درجه سانتیگراد غیرفعال کنید. سرم تهیه شده به این روش برای آزمایش تا 5-6 روز در یخچال قابل نگهداری است.

آنتی ژن ها بر اساس روش و تیتر مشخص شده روی برچسب رقیق می شوند.

یک سیستم همولیتیک آماده کنید. برای انجام این کار، خون گوسفند دفیبرینه شده یا گلبول های قرمز خون به مقدار لازم برای واکنش سانتریفیوژ می شود، پلاسما به دقت جدا می شود و رسوب با 6-5 حجم محلول کلرید سدیم ایزوتونیک شسته می شود تا مایع رویی کاملاً بی رنگ شود. از رسوب، یک سوسپانسیون 3٪ از گلبول های قرمز خون در یک محلول ایزوتونیک کلرید سدیم با تیتر سه برابر تهیه می شود.

محلول سرم همولیتیک و سوسپانسیون گلبول های قرمز گوسفند به سرعت مخلوط می شوند و به مدت 30 دقیقه در ترموستات قرار می گیرند.

مکمل خشک با محلول کلرید سدیم ایزوتونیک به نسبت 1:10 رقیق می شود، سرم طبیعی غیرفعال انسانی - 1:5.

کمپلمان در 30 لوله که در یک قفسه 10 تیوبی در 3 ردیف قرار گرفته اند تیتر می شود. در دو ردیف در حضور دو آنتی ژن، در سوم - با محلول کلرید سدیم ایزوتونیک تیتر می شود. پنج لوله، لوله های کنترل هستند: دو تا برای دو آنتی ژن مربوطه و یکی برای نظارت بر کمپلمان، سرم همولیتیک و محلول ایزوتونیک کلرید سدیم برای سمیت خون. آنها را به صورت زیر پر کنید:

معرف ها، میلی لیتر	ردیف لوله های آزمایش

3% تعلیق گلبول های قرمز گوسفند

سرم همولیتیک، در تیتر سه گانه رقیق شده است
مکمل 1:10
آنتی ژن تریپونمال بر اساس تیتر رقیق می شود
آنتی ژن کاردیولیپین بر اساس تیتر رقیق شد
محلول ایزوتونیک کلرید سدیم

لوله های آزمایش به مدت 45 دقیقه در ترموستات قرار می گیرند و پس از آن بررسی می شوند. در هیچ لوله آزمایشی نباید همولیز وجود داشته باشد.

مکمل با رقت 1:10 در 10 لوله از ردیف اول قفسه در دوزهای 0.1، 0.16، 0.2، 0.24، 0.3، 0.36، 0.4، 0.44، 0.5 و 0.55 میلی لیتر ریخته می شود. به محتویات هر لوله آزمایش محلول ایزوتونیک کلرید سدیم تا 1 میلی لیتر اضافه کنید و کاملاً مخلوط کنید. 0.25 میلی لیتر از مخلوط هر لوله آزمایش به لوله های آزمایش مربوطه ردیف 2 و 3 منتقل می شود. قفسه با لوله های آزمایش تکان داده می شود، 0.5 میلی لیتر سیستم همولیتیک به ردیف سوم لوله های آزمایش اضافه می شود، دوباره تکان داده می شود و به مدت 45 دقیقه در ترموستات با دمای 37 درجه سانتیگراد قرار می گیرد. سرم خون طبیعی انسان، رقیق شده با محلول کلرید سدیم ایزوتونیک به نسبت 1:5، در هر 30 لوله آزمایش، هر کدام 0.25 میلی لیتر ریخته می شود.

آنتی ژن I (التراسونیک ترپونمال)، با تیتر با محلول کلرید سدیم ایزوتونیک رقیق شده، 0.25 میلی لیتر به 10 لوله آزمایش ردیف 1 اضافه می شود. آنتی ژن II (کاردیولیپین در رقت یکسان و به همان مقدار) - در 10 لوله از ردیف 2. 0.25 میلی لیتر محلول ایزوتونیک کلرید سدیم در 10 لوله آزمایش ردیف 3 ریخته می شود و 0.25 میلی لیتر باقی مانده ریخته می شود. پس از انکوباسیون در ترموستات، 0.5 میلی لیتر از سیستم همولیتیک به 20 لوله (ردیف 1 و 2) اضافه می شود، تکان داده می شود و دوباره به مدت 45 دقیقه در ترموستات قرار می گیرد.

پس از 45 دقیقه، دوز کاری مکمل تعیین می شود، یعنی تیتر آن با افزایش 15-20٪.

عنوان مکمل در نظر گرفته می شود حداقل مقدار، باعث همولیز کامل گلبول های قرمز گوسفند در حضور آنتی ژن و سرم خون طبیعی انسان می شود.

آزمایش اصلی این است که هر سرم غیرفعال آزمایشی که به نسبت 1: 5 با محلول ایزوتونیک کلرید سدیم رقیق شده است، در 0.25 میلی لیتر در سه لوله آزمایش ریخته می شود. 0.25 میلی لیتر آنتی ژن I به لوله آزمایش اول، 0.25 میلی لیتر آنتی ژن II به لوله آزمایش دوم و 0.25 میلی لیتر محلول کلرید سدیم ایزوتونیک به لوله آزمایش سوم (شاهد) اضافه کنید. 0.25 میلی لیتر مکمل رقیق شده به دوز کاری نیز به تمام لوله های آزمایش اضافه می شود. تمام لوله های آزمایش به مدت 45 دقیقه در ترموستات قرار می گیرند، سپس 0.5 میلی لیتر سیستم همولیتیک به آنها اضافه می شود، تکان داده می شود و به مدت 45-50 دقیقه در ترموستات قرار می گیرد. نتیجه آزمایش پس از شروع همولیز کامل در لوله های کنترل ثبت می شود.

نتایج واکنش به صورت مثبت ارزیابی می شود: تأخیر کامل همولیز (واکنش به شدت مثبت) ++++، معنی دار (واکنش مثبت) +++، جزئی (واکنش مثبت ضعیف) ++، ناچیز (واکنش مشکوک) - ±، عدم تاخیر در همولیز (واکنش منفی) - .

در روش کمی انجام واکنش Wassermann، آزمایشی با کاهش حجم سرم رقیق شده با محلول ایزوتونیک کلرید سدیم انجام می شود.

طرح آزمایش اصلی واکنش واسرمن

مواد لازم (در میلی لیتر). حجم کل 1.25 میلی لیتر	تعداد لوله ها
مواد لازم (در میلی لیتر). حجم کل 1.25 میلی لیتر
سرم آزمایش غیرفعال می شود و به نسبت 1: 5 رقیق می شود آنتی ژن I (ترپونمال)، رقیق شده توسط تیتر آنتی ژن II (کاردیولیپین)، با تیتر رقیق شده است محلول ایزوتونیک کلرید سدیم مکمل با توجه به دوز کاری رقیق می شود

اهمیت بالینی واکنش واسرمن به سختی قابل برآورد است. قبل از درمان بر روی همه بیماران انجام می شود اما معنی خاصاو در سیفلیس نهفته، شکست اعضای داخلیو سیستم عصبی.

نتایج واکنش Wasserman کیفیت درمان ارائه شده را مشخص می کند، که زمینه را برای حذف بیماران تحت درمان از ثبت در یک دوره زمانی مشخص فراهم می کند.

در سیفلیس اولیهواکنش واسرمن معمولاً در پایان هفته ششم از لحظه عفونت مثبت است. با سیفلیس تازه ثانویه تقریباً در 100٪ موارد مثبت است، با سیفلیس عود کننده ثانویه - در 98-100٪. فعال سوم - در 85٪؛ دوره سوم پنهان - در 60٪ موارد.

واکنش واسرمن دو بار برای همه زنان باردار، بیماران جسمی، عصبی، روانی و بیماری های پوستیو همچنین جمعیت های مصوب. در عین حال، نتایج واکنش مثبت و ضعیف باید به طور جدی درمان شود، زیرا ممکن است در پایان بارداری و پس از زایمان، پرکاری تیروئید، مالاریا، جذام، تجزیه تومور بدخیم، بیماری‌های عفونی، کلاژنوز و غیره رخ دهد. ، اگر تظاهرات بالینیقبل از هر چیز باید بیماری آنها را در کنار داده های باکتریوسکوپی در نظر گرفت.

در عین حال، عواملی وجود دارند که می‌توانند ماهیت واقعی نتایج به‌دست‌آمده از واکنش واسرمن را مخدوش کنند: ظروف شیشه‌ای آزمایشگاهی که شسته نشده‌اند (اثر اسید و قلیایی در لوله‌های آزمایش)، ذخیره طولانی‌مدت خون گرفته‌شده برای تحقیق، مصرف چربی و الکل توسط بیماران قبل از معاینه، دوره قاعدگی و غیره.

در همه موارد، توصیه می شود معاینه جامعبیمار، از جمله، علاوه بر واکنش واسرمن، همچنین RIBT (نگاه کنید به 122، 123، 124)، و غیره.

122. واکنش ساکس ویتبسکی (سیتوکولی)

برای تشخیص سیفلیس استفاده می شود. این بر اساس تشکیل یک رسوب در هنگام مخلوط کردن سرم خون بیمار با یک آنتی ژن است.

برای تهیه آنتی ژن، ماهیچه های چند قلب گاو از تاندون ها، فاسیا و چربی پاک می شوند، در چرخ گوشت چرخ می شوند و با حجم 5 برابری اتیل الکل 96 درصد به مدت 15 روز با تکان دادن روزانه 20 دقیقه ای استخراج می شوند. عصاره به دست آمده در یک حمام آب در یک فنجان چینی تحت خلاء تبخیر می شود. 96% داغ به باقیمانده اضافه می شود (توده زرد روشن لیپوئیدها). اتانولبه مقدار 1/3 حجمی که برای استخراج عضله گرفته می شود.

عصاره به مدت 3 روز در دمای اتاق نگهداری می شود، فیلتر شده (در آب سرد) و بسته به نتایج تیتراسیون با سرم های مثبت و منفی، محلول 0.3-0.6% کلسترول کریستالی اضافه کنید. آنتی ژن سیتوکولیک را در دمای اتاق در آمپول های مهر و موم شده یا لوله های بسته شده نگهداری کنید.

روش شناسی. 1 میلی لیتر آنتی ژن سیتوکولیک به سرعت به 2 میلی لیتر محلول کلرید سدیم ایزوتونیک اضافه می شود و به مدت 15 دقیقه در دمای اتاق قرار می گیرد تا پوسته ها ظاهر شوند. 0.1 میلی لیتر امولسیون آنتی ژن را به 0.2 میلی لیتر سرم غیرفعال داخل لوله آزمایش اضافه کنید، 3 دقیقه تکان دهید و 30 دقیقه بگذارید و پس از آن 1 میلی لیتر محلول کلرید سدیم ایزوتونیک اضافه کنید.

1.2 میلی لیتر محلول کلرید سدیم ایزوتونیک و 0.1 میلی لیتر امولسیون آنتی ژن به لوله کنترل حاوی آنتی ژن اضافه کنید. در کنترل نباید پوسته ای وجود داشته باشد. نتایج واکنش به صورت بصری یا با استفاده از ذره بین در نظر گرفته می شود و بسته به تعداد تکه هایی که می ریزند، با نقاط مثبت (++++، +++، ++) مشخص می شوند. اگر واکنش منفی باشد، هیچ پوسته ای وجود ندارد، اما محتویات لوله ممکن است کمی مادی شود.

در سال 1931، P. Sachs و E. Witebsky اصلاحی در این روش ارائه کردند که شامل رقیق کردن آنتی ژن در دو مرحله است: 2 قسمت محلول ایزوتونیک کلرید سدیم را به 1 قسمت از آنتی ژن اضافه کنید، به مدت 5 دقیقه در دمای اتاق نگه دارید و 9 قسمت دیگر محلول ایزوتونیک کلرید سدیم را اضافه کنید. همچنین توصیه می شود که آنتی ژن را با محلول 2٪ کلرید سدیم رقیق کنید، که به گفته نویسندگان، حساسیت واکنش را افزایش می دهد. اصلاح کمی واکنش با رقت سرم نیز امکان پذیر است (1:4، 1:8، 1:16، 1:32، 1:64، و غیره).

واکنش کاملا حساس است، زمان کمی (حدود 1 ساعت) طول می کشد و نتایج آن بلافاصله خوانده می شود.

123. واکنش بی حرکتی ترپونما پالیدوم (RIBT)

با استفاده از یک واکنش، آنتی‌بادی‌ها و مکمل‌هایی که ترپونما پالیدوم را بی‌حرکت می‌کنند، در سرم خون بیماران مبتلا به سیفلیس شناسایی می‌شوند.

در سیفلیس اولیه، RIBT عمدتا منفی، در ثانویه - مثبت در 92-96٪ موارد، در سوم - در 92-100٪، در سیستم عصبی و سیفلیس مادرزادی - در 86-89٪ موارد است.

نتایج مثبت RIBT در سارکوئید، اریتماتوز، دیابت، تومورهای بدخیم, هپاتیت ویروسیسیروز کبدی، مالاریا، جذام، مونونوکلئوز عفونی، برخی از بیماری های کشورهای گرم (پینتا، یاوس و غیره).

آنتی ژن سوسپانسیونی از ترپونما رنگ پریده است که از بیضه خرگوش آلوده به سیفلیس با وارد کردن 0.75-1 میلی لیتر از یک سوسپانسیون ترپونما کم رنگ در محلول کلرید سدیم ایزوتونیک (50 حیوان در هر میدان دید) به بیضه گرفته می شود.

مواد از بیضه باید 6-8 روز پس از آلوده شدن حیوان گرفته شود. قبل از مصرف آنتی ژن، خرگوش با خونریزی کشته می شود (پنکسیون قلبی یا شریان کاروتید). بافت بیضه خرد شده و با سرم خون یک خرگوش سالم پر می شود، با محلول کلرید سدیم ایزوتونیک رقیق می شود، به مدت 30 دقیقه تکان داده می شود و سپس به مدت 10 دقیقه (1000 دور در دقیقه) سانتریفیوژ می شود. مایع رویی به صورت میکروسکوپی بررسی می شود. در هر میدان دید باید حداقل 10-15 ترپونما پالیدوم وجود داشته باشد.

مکمل تهیه شده است به روش معمولاز خون خوکچه هندی

برای انجام RIBT شما نیاز دارید: 1.2 میلی لیتر محلول ژلاتین 0.2٪، 2.8 میلی لیتر محلول آلبومین 5٪، 1.6 میلی لیتر سوسپانسیون Treponema pallidum. PH محیط 7.2 است. 0.15 میلی لیتر مکمل (کوکتل) به این مخلوط اضافه می شود. به طور موازی، دو آزمایش انجام می شود: با مکمل های فعال (آزمایش) و واکنشی (کنترل).

ملانژورها با سرم آزمایشی تا علامت "1" و سپس با کوکتل تا علامت "2" پر شده و با یک حلقه لاستیکی استریل بسته می شوند.

در همان زمان، واکنش مشابهی با سرم های آشکارا مثبت و آشکارا منفی انجام می شود.

ملانژورها شماره گذاری شده و به مدت 18-20 ساعت در ترموستات با دمای 35 درجه سانتیگراد قرار می گیرند و پس از آن به صورت جفتی (آزمایش - کنترل) از ترموستات خارج می شوند و محتویات در لوله های آزمایش مناسب ریخته می شود. 2 قطره روی یک اسلاید شیشه ای ریخته می شود: در سمت چپ آزمایش است، در سمت راست کنترل است، با یک شیشه پوشش و میکروسکوپ در یک میدان دید تاریک بپوشانید.

ابتدا نتایج کنترل بررسی می شود: درصد ترپونما پالیدوم متحرک و بی حرکت تعیین می شود. فرمول محاسبه: X = (A - B)/A * 100، که در آن A تعداد ترپونما پالیدوم متحرک در کنترل است. ب - تعداد ترپونمهای متحرک پالیدوم در آزمایش.

مثال: (24 - 19) / 24 * 100 = 21%.

ارزیابی نتایج RIBT: زیر 20٪ - منفی. 21-30٪ - مشکوک، 31-50٪ - ضعیف مثبت، بیش از 50٪ - مثبت.

RSC بسیار حساس و خاص است و برای موارد زیر استفاده می شود:

1) تشخیص سرولوژیکیبیماری های عفونی (رود Wasserman - برای سیفلیس، رودخانه Bordet-Zhangu - برای سوزاک مزمن و غیره)؛

2) شناسایی باکتری ها و سایر میکروب ها.

RSK به عنوان پیچیده طبقه بندی می شود واکنش های سرولوژیکیکه علاوه بر AG و AT، سیستم همولیتیک (سیستم همولیز) را درگیر می کند که نتیجه واکنش را آشکار می کند.

RSK در دو مرحله با مشارکت دو سیستم انجام می شود:

1) سیستم اول - AG + AT + مکمل - اگر AT با AG مطابقت داشته باشد باعث اتصال مکمل می شود. در صورت مغایرت بین AT و AG، مکمل رایگان باقی می ماند.

سیستم دوم (شاخص) - سرم همولیتیک (همولیزین ها) + گلبول های قرمز - نتیجه واکنش را در سیستم اول نشان می دهد: در صورت نتیجه مثبت واکنش در سیستم اول (تشکیل مجتمع AG + AT + مکمل). ) در سیستم دوم به دلیل عدم وجود مکمل (گلبول های قرمز در ته لوله آزمایش ته نشین می شوند) همولیز رخ نخواهد داد. چه زمانی نتیجه منفیدر سیستم اول، سیستم دوم با همولیز همراه است، زیرا مجموعه ای از گلبول های قرمز + همولیزین ها + مکمل تشکیل می شود (پیوست 3، شکل 7 و 8 را ببینید).

اجزای واکنش:

1) سرم آزمایشی (که ابتدا با حرارت دادن در دمای 56 درجه سانتیگراد به مدت 30 دقیقه غیرفعال می شود).

2) آنتی ژن (ساخته شده از سوسپانسیون میکروب های کشته شده، لیزات میکروبی، آنتی ژن های کامل، هاپتن ها، عصاره های چربی بافت).

3) مکمل؛

4) سرم همولیتیک.

5) 3% سوسپانسیون گلبول های قرمز گوسفند.

6) محلول نمک؛

7) سرم کنترل.

متمم. سرم تازه و خشک شده خوکچه هندی به عنوان مکمل در RSC استفاده می شود، زیرا در خون خوکچه هندی، مکمل موجود در بزرگترین عددو دائماً نسبت به سایر حیوانات وجود دارد. قبل از انجام RSC، تیتراسیون مکمل در واکنش همولیز (گلبول های قرمز گوسفند، سرم همولیتیک، مکمل، محلول نمکی) و تعیین دوز کاری باید انجام شود.

تیتر مکمل- بیشترین رقت کمپلمان که باعث لیز کامل گلبول های قرمز در حضور سرم همولیتیک می شود.

دوز کاری مکمل– مقدار مکملی که 25 درصد بیشتر از محدوده تیراندازی است.

سرم همولیتیکتهیه شده توسط ایمن سازی خرگوش ها با سوسپانسیون 50٪ از گلبول های قرمز گوسفند. سرم حاصل با حرارت دادن در دمای 56 درجه سانتیگراد غیرفعال می شود. تیتر و دوز کاری تعیین می شود.

تیتر سرم- حداکثر رقت سرم که باعث لیز کامل گلبول های قرمز در حضور مکمل می شود. به عنوان دوز کاری، سرم همولیتیک را در تیتر سه گانه مصرف کنید.

RSC Bordet-Gangu

این واکنش برای تشخیص سوزاک مزمن به منظور شناسایی آنتی بادی های گنوکوکی انجام می شود.

دو سیستم در RSC دخیل هستند: سیستم اصلی - سرم آزمایش، آنتی ژن، مکمل و سیستم کمکی، نشانگر یا همولیتیک - سرم همولیتیک و گلبول های قرمز گوسفند.

اگر در سیستم اول یک کمپلکس اختصاصی آنتی ژن + آنتی بادی تشکیل شود، مکمل جذب می شود (با این کمپلکس ترکیب می شود) و در سیستم دوم همولیز رخ نمی دهد.

واکنش مستلزم:

1. سرم آزمایش که از خون گرفته شده با سوراخ کردن ورید اولنار بیمار به دست می آید. پس از لخته شدن خون، سرم در یک لوله جداگانه مکیده شده و به مدت 30 دقیقه در دمای 56 درجه سانتیگراد در حمام آب غیرفعال می شود.

2. آنتی ژن - تعلیق گونوکوک کشته شده.

3. گلبول های قرمز گوسفند از خون دفیبرینه استریل جمع آوری شده به دست می آید. آنها با سانتریفیوژ کردن 3 بار با بخش های جدید محلول نمک شسته می شوند. این واکنش از یک تعلیق 3 درصدی گلبول های قرمز استفاده می کند.

4. سرم همولیتیک از قبل با ایمن سازی خرگوش با گلبول های قرمز گوسفند تهیه می شود. قبل از استفاده، سرم تیتر می شود.

5. مکمل - سرم تازه خوکچه هندی. خون از قلب خوکچه هندی با سرنگ مکیده شده و پس از لخته شدن، سرم جدا می شود. قبل از آزمایش، دوز کاری مکمل تیتر می شود. برای این کار رقت پایه مکمل 1:10 را گرفته و در لوله های آزمایش از 0.1 تا 0.5 بریزید و پس از آن حجم در هر لوله آزمایش با محلول نمکی به 1.5 میلی لیتر تنظیم می شود.

در همان زمان، یک سیستم همولیتیک تهیه می شود - سرم همولیتیک رقیق شده در تیتر سه گانه + سوسپانسیون 3٪ گلبول های قرمز گوسفند. هر دو ماده در حجم های مختلف هستند و به مدت 30 دقیقه در ترموستات نگهداری می شوند (حساس شدن مخلوط) پس از آن مخلوط 1 میلی لیتر در لوله های آزمایش اضافه شده و به مدت 30 دقیقه در ترموستات قرار می گیرد. 3 لوله آزمایش به عنوان کنترل عمل می کنند:

1. 1 میلی لیتر سیستم همولیتیک + 1.5 میلی لیتر محلول فیزیولوژیکی.

2. 0.5 میلی لیتر مکمل 1:10 + 0.5 میلی لیتر سوسپانسیون گلبول قرمز + 1.5 میلی لیتر محلول فیزیولوژیکی.

تیتر کمپلمان حداقل مقداری است که هنوز همولیز در آن رخ می دهد. برای ایجاد یک واکنش، دوز کاری مکمل را مصرف کنید که در برابر تیتر 20-25٪ افزایش یافته است، یعنی معمولاً مقدار مکملی که در لوله آزمایش ماقبل آخر با همولیز وجود دارد. افزایش دوز مکمل ضروری است زیرا در واکنش ممکن است فعالیت مکمل تا حدودی توسط سایر اجزای واکنش (آنتی ژن، سرم) سرکوب شود.

راه اندازی آزمایش اصلی RSC Bordet - Zhangou.

ابتدا سرم آزمایش غیرفعال و رقیق شده 1:5 در 2 لوله آزمایش ریخته می شود. سپس آنتی ژن در لوله اول و محلول فیزیولوژیکی در لوله دوم ریخته می شود. پس از این، دوز کاری مکمل به تمام لوله ها اضافه می شود.

پس از مخلوط کردن مواد، قفسه با لوله های آزمایش به مدت 30 دقیقه در ترموستات با دمای 37 درجه سانتیگراد قرار می گیرد (صحافی داغ). هنگام اتصال سرد، یک قفسه با لوله های آزمایش در یک جعبه یخ در دمای -4 درجه سانتیگراد به مدت 18 ساعت قرار می گیرد. پس از نگهداری در ترموستات، سیستم همولیتیک به تمام لوله های آزمایش اضافه می شود. واکنش در حجم 0.5 میلی لیتر داده می شود. لوله ها دوباره به مدت 2 ساعت در ترموستات قرار می گیرند و پس از آن نتایج از قبل ثبت می شود. لوله ها در دمای اتاق رها می شوند و نتیجه نهایی روز بعد مشخص می شود.

درجه شدت واکنش مثبت ارزیابی می شود. تاخیر کامل همولیز - چهار مثبت (++++)، ناقص - سه و یک مثبت. همولیز کامل با منهای (-) نشان داده می شود.

RSK Wasserman

برای تشخیص سیفلیس به منظور شناسایی آنتی بادی ها و همچنین تعیین اثربخشی قرار داده شده است درمان خاص. این بر اساس اصل واکنش تثبیت مکمل Bordet-Gengou است. تفاوت قابل توجهی بین واکنش Wasserman عدم اختصاصی بودن آنتی ژن است: عصاره لیپوئیدی از اندام های طبیعیحیوانات

برای انجام واکنش واسرمن، داشتن سرم بیمار، آزمایش‌های تشخیصی آنتی‌ژن‌های واکنش متقابل شماره 1 و 2، مکمل، سرم همولیتیک، گلبول‌های قرمز گوسفند و محلول نمک ضروری است.

Diagnosticum شماره 1 - اختصاصی، ترپونمال.

Diagnosticum شماره 2 - آنتی ژن کاردیولیپین غیر اختصاصی که یک عصاره بسیار خالص است. قلب گاو نر، داشتن ترکیب شیمیایی ثابت لیپوئیدها. لیپوئیدهای استخراج شده از قلب ترکیب شیمیایینزدیک به لیپوئیدهای ترپونما پالیدوم هستند، بنابراین، اگرچه اختصاصی نیستند، آنتی بادی هایی را علیه اسپیروکت تثبیت می کنند. این آنتی ژن ها به صورت مرکزی تولید می شوند و در واکنش استفاده می شوند و طبق تیتر نشان داده شده در برچسب رقیق می شوند.

همزمان با آزمایش اصلی، 2 کنترل قرار می گیرد: با سرم های آشکار منفی و با سرم های مثبت.

واکنش بورده-جانگو(Bordet-Gen-gou)، تثبیت الکسین (واکنش تثبیت مکمل به گفته ارلیچی)، توسط نویسندگان در سال 1901 کشف شد. این واکنش بر این واقعیت استوار است که آنتی ژن (میکروب، پروتئین خارجیو غیره)، ترکیب با سرم ایمنی مربوطه، که قبلاً با حرارت دادن به مدت نیم ساعت در دمای 56 درجه غیرفعال شده بود، با سرم دومی ترکیبی را تشکیل می دهد که حریصانه الکسین را جذب (جذب) می کند (نگاه کنید به. آنتی ژن ها، الکسین).به عنوان الکسین (مکمل ارلیخ) برای B.-J. در واکنش‌ها، از سرم‌های نرمال تازه حیوانات مختلف، معمولاً خوکچه هندی استفاده می‌شود. B.-J. آر. در دو مرحله رخ می دهد. نمودار جریان آن را می توان نشان داد مثال زیرسیستم اول - ویبریو کلرا (آنتی ژن) + سرم ضد کلرا که با حرارت غیر فعال می شود - مجموعه ای را تشکیل می دهد که قادر به جذب حریصانه الکسین است. سیستم دوم - گلبول های قرمز گوسفند (آنتی ژن) + + ایمن نسبت به آنها، سرم همولیتیک خرگوش غیرفعال شده با حرارت - همچنین مجموعه ای را تشکیل می دهد که قادر به جذب حریصانه الکسین است که با کمک آن انحلال گلبول های قرمز - همولیز - در اینجا اتفاق می افتد. اگر الکسین ابتدا با سیستم اول مخلوط شود، آن را به طور کامل جذب می کند. بدیهی است که دومین سیستم همولیتیک اضافه شده پس از این، بدون یافتن الکسین آزاد، واکنش همولیز ایجاد نخواهد کرد. این یک مورد مثبت B.-J خواهد بود. r.، زمانی که همولیز به دلیل عدم وجود الکسین آزاد وجود ندارد. اگر در آزمایش مشخص شد که اولین سیستم شامل یک آنتی ژن و یک سرم ایمنی است که با DRU GU همخوانی ندارند (مثلاً ویبریوکلرا + سرم ضد تیفوئید)، آنگاه ترکیبی (کمپلکس) که الکسین را جذب می کند. بین آنها تشکیل نمی شود، و دومی، آزاد باقی می ماند، سپس به دومین سیستم همولیتیک می پیوندد و در نتیجه سیستم اول وبا ایجاد می شود. ویبریو + ضد کولرنا syv. سیستم دوم الکسیا - گلبول های قرمز + همولیت سرم برای آنها واکنش مثبت- بدون همولیز سیستم هولرن اول وی بریون + ضد تب تیفوئید syv.گلبول های قرمز سیستم دوم الکسین + همولیت. سرم برای آنها واکنش منفی-همولیز نمایش شماتیک واکنش Bordet-Gengou. ویروس "و پریپنومونی گاو. آثار متعدد ب. که بسیاری از آنها کلاسیک شدند، عمدتاً در Annales de lnstitut Pasteur منتشر شد. "Traite de I" که گلبول های قرمز گوسفند در آن حل می شود. این یک مورد منفی B.-J خواهد بود. آر. از مطالب بالا مشخص می شود که هنگام صحنه سازی B.-Zh. آر. لازم است یک ترتیب دقیق در مخلوط کردن مواد رعایت شود، یعنی ابتدا اولین سیستم را آماده کرده، به آن اضافه کنید. وه. t.sh. 739 بور; الکسین و این مخلوط را به مدت 1 ساعت در دمای 37 درجه بگذارید تا واکنش جذب الکسین در اینجا کامل شود و تنها پس از آن یک سیستم همولیتیک دوم را اضافه کنید، که به عنوان نشانگر جذب الکسین عمل می کند، یعنی اینکه آیا جذب شده است یا خیر. آنتی ژن و سرم ایمنی در سیستم اول، یا نه. B.-J. این واکنش به شما امکان می دهد مشکلات را در دو جهت حل کنید: 1. با داشتن سرم های ایمنی در برابر آنتی ژن های مختلف، می توانید ماهیت آنتی ژن ناشناخته را به دقت تعیین کنید: کشت میکروبی، پروتئین خارجی و غیره. کشت یا پروتئین خارجی مورد مطالعه بدیهی است که یک B.-G مثبت بدهید. آر. فقط با سرم های ایمنی مربوط به طبیعت آنها (به عنوان مثال، پروتئین از یک لکه خون انسان - با سرم ایمنی در برابر پروتئین انسان، و نه در برابر پروتئین اسب، گاو، خوک، و غیره) -2. با داشتن آنتی ژن هایی که برای ما شناخته شده است (کشت های میکروبی، آماده سازی پروتئین و غیره) می توانیم منشا سرم آزمایشی را که برای ما ناشناخته است تعیین کنیم. بنابراین، سرم حصبه یا نقاهت یک B.-F مثبت می دهد. آر. نه با وبا، نه با اسهال خونی و غیره، بلکه فقط با کشت تیفوئید، و برعکس، سرم یک بیمار وبا یا اسهال خونی - فقط با کشت میکروبی مربوطه آنها، و نه با کشت میکروبی. تب حصبه. B.-J. آر. این دارد میدان وسیعبرنامه های کاربردی نه تنها در میکروبیولوژی، بلکه در بهداشت (Schutze) و در دادگاه. پزشکی (نایسر، ساکس، براک). علاوه بر این، با در نظر گرفتن جنبه کمی واکنش، می توان از آن برای مطالعه برخی مسائل بیولوژیکی عمومی استفاده کرد، به عنوان مثال، سوال ارتباط خانوادگیبین انواع خاصیمیمون ها، نژادهای مختلف مردم (بروک، نایزر) و غیره. - برای جزئیات در مورد ماهیت و مکانیسم واکنش Bordet-Gengou، نگاه کنید به مصونیت. V. Barykin.

واکنش بورده - جنگو

واکنش Bordet Zhangu (واکنش تثبیت مکمل، RSK) - واکنش ایمونولوژیکبر اساس خاصیت کمپلکس آنتی ژن-آنتی بادی برای تثبیت مکمل آزاد. RSC در دو مرحله انجام می شود: 1) جذب آنتی بادی بر روی آنتی ژن. 2) بیان واکنش در حضور یک سیستم همولیتیک (همولیز). برای مرحله RSC، اشیاء مورد مطالعه (آنتی بادی ها و آنتی ژن ها) در شرایطی قرار می گیرند که تعامل آنها را در حضور مکمل تضمین می کند. سپس به مورد تجزیه و تحلیل شده سیستم ایمنییک "شاخص" اضافه می شود - سیستم همولیتیک. اگر مکمل توسط سیستم ایمنی ثابت شود، همولیز رخ نمی دهد ( RSC مثبت; شکل، الف)؛ اگر سیستم ایمنی مکمل را ثابت نکند و اجزای آن با یکدیگر مطابقت نداشته باشند، همولیز رخ می دهد (RSC منفی؛ شکل، b). مواد تشکیل دهنده واکنش: 1) سرم آزمایش، با حرارت دادن به مدت 30 دقیقه غیرفعال می شود. در دمای 56 درجه؛ 2) آنتی ژن (تعلیق باکتری ها، عصاره اندام ها و بافت ها، ویروس ها)؛ 3) مکمل (سرم خوکچه هندی تازه)؛ 4) سیستم همولیتیک (گلبول های قرمز حساس شده گوسفند با سرم همولیتیک به مدت 30 دقیقه در دمای 37 درجه انکوبه شدند). برای رقیق کردن مواد، از محلول ایزوتونیک کلرید سدیم استفاده کنید. مرحله اول RSC 60 دقیقه طول می کشد. در دمای 37 درجه یا 18-20 ساعت. در دمای 4-6 درجه (RSC حساس تر)، مرحله دوم - 60 دقیقه. در درجه 37 درجه

در عمل تشخیصی و پزشکی قانونیاز اصلاحات مختلف RSC - کیفی و کمی استفاده کنید. واکنش واسرمن را نیز ببینید، مطالعات سرولوژیکی.

واکنش Bordet Zhangu یک واکنش ایمونولوژیک مبتنی بر ویژگی کمپلکس آنتی ژن-آنتی بادی برای تثبیت مکمل آزاد است. RSC در 2 فاز رخ می دهد: 1) جذب آنتی بادی ها روی آنتی ژن ها، 2) بیان واکنش (باکتریولیز یا همولیز)، که نیاز به حضور مکمل دارد. وابستگی واکنش های باکتریولیتیک به حضور مکمل، شناسایی تعامل آنتی بادی ها با آنتی ژن ها در واکنش Bordet Zhangou را ممکن می سازد. یک شاخص انطباق آنتی بادی ها در این واکنش تثبیت مکمل توسط سیستم ایمنی مربوطه است که با افزودن یک سیستم همولیتیک "شاخص" به مخلوط واکنش تشخیص داده می شود.

واکنش Bordet Zhangou در دو مرحله انجام می شود: ابتدا آنتی ژن ها و آنتی بادی های مورد مطالعه در شرایطی قرار می گیرند که برهمکنش آنها را در حضور مکمل تضمین می کند و پس از تکمیل جذب، سیستم همولیتیک (همولیزین + گلبول های قرمز) به آن اضافه می شود. سیستم ایمنی در حال تجزیه و تحلیل هنگامی که آنتی ژن ها و آنتی بادی ها مطابقت دارند، برهمکنش آنها رخ می دهد و مکمل موجود در مخلوط واکنش دهنده توسط سیستم ایمنی ثابت می شود. در این مورد، هنگام اضافه کردن یک سیستم نشانگر، همولیز به دلیل عدم وجود مکمل رخ نمی دهد (واکنش مثبت است). اگر آنتی بادی های تجزیه و تحلیل شده روی آنتی ژن ها جذب نشوند، مکمل در مخلوط واکنش آزاد می ماند و هنگامی که یک سیستم همولیتیک اضافه می شود، همولیز رخ می دهد (واکنش منفی).

اصل روش تجزیه و تحلیل سرولوژیکی توسعه یافته توسط Bordet و Zhang اساس تغییرات متعدد واکنش مورد استفاده در عمل تشخیصی و کار تحقیقاتی را تشکیل داد.

RSC معمولی که در آن 100% لیز گلبول های قرمز ثبت می شود، نیاز به تیتراسیون اولیه مکمل دارد. دومی در دوز بیش از مقدار لازم به سیستم ایمنی اضافه می شود واکنش همولیتیک. طرح های تنظیم یک واکنش با هدف آن تعیین می شود. در یک آزمایش، دوزهای مختلف آنتی ژن را می توان در محتویات ثابت سرم و مکمل، رقت های مختلف سرم در دوزهای ثابت آنتی ژن و مکمل و غیره آزمایش کرد. در 56 درجه به منظور غیرفعال کردن مکمل موجود در آن؛ 2) آنتی ژن ها (که از سوسپانسیون باکتری ها، پروتئین های استخراج شده از آنها، پلی ساکاریدها و غیره استفاده می کنند)، عصاره های سلول های گیاهی و حیوانی، ویروس ها و غیره، 3) مکمل - سرم تازه خوک گینه، 4) سیستم همولیتیک (گلبول های قرمز حساس شده گوسفند) - 5% سوسپانسیون گلبول های قرمز در تماس با سرم همولیتیک به مدت 30 دقیقه. در درجه 37 درجه

برای رقیق کردن مواد، از محلول فیزیولوژیکی NaCl استفاده کنید. ضد مکمل بودن مواد تشکیل دهنده فردیدر نمونه های کنترل تست شده است. مرحله اول واکنش (جذب آنتی بادی) در دمای 37 درجه به مدت 60 دقیقه انجام می شود. یا در دمای 4-6 درجه به مدت 18-20 ساعت. (RSK در سرما). در حالت دوم، تثبیت کامل‌تر مکمل اتفاق می‌افتد که حساسیت روش را افزایش می‌دهد. در مرحله دوم، مخلوط های واکنش در دمای 37 درجه نگهداری می شوند. نتیجه در لحظه همولیز 100% در نمونه های شاهد ثبت می شود.

در عمل تشخیصی، از روش‌های فعال و غیرمستقیم واکنش تثبیت کمپلمان استفاده می‌شود که اصلاحات واکنش Bordet Zhangou است. در اولین مورد، نشانگر واکنش تغییر در محتوای مکمل در سرم آزمایش است. مورد دوم مبتنی بر این واقعیت است که برای برخی از بیماری‌ها، سرم‌ها حاوی آنتی‌بادی‌های تثبیت‌کننده مکمل نیستند، اما می‌توانند از واکنش‌هایی با سرم‌هایی که فعالیت تثبیت‌کننده مکمل دارند، جلوگیری کنند.

بیشترین حساسیت و دقت ذاتی در RSC کمی است که همولیز را در ناحیه لیز جزئی ثبت می کند. حساسیت این اصلاح واکنش Bordet Zhangou به این دلیل است که منطقه میانیلیز (20-80%)، نسبت مقدار مکمل به مقدار گلبول های قرمز لیز شده خطی است. اساس این واکنش است روش خاصتیتراسیون مکمل که مقدار آن بر حسب 50 درصد واحد (CH50) بیان می شود و بر اساس معادله کروگ محاسبه می شود که نشان دهنده پیشرفت همولیز در ناحیه لیز جزئی است.

درجه همولیز با استفاده از اسپکتروفتومتر یا فوتوالکترورنگ سنج تعیین می شود.

RSC کمی به نوبه خود دارای تعدادی اصلاحات است. به طور خاص، میکرو متد دقت بیشتری در تعیین با مصرف کم مواد تشکیل می دهد.

; 2) بیان واکنش در حضور سیستم همولیتیک ().

برای مرحله RSC، اشیاء مورد مطالعه (آنتی بادی ها و آنتی ژن ها) در شرایطی قرار می گیرند که تعامل آنها را در حضور مکمل تضمین می کند. سپس یک "شاخص" - سیستم همولیتیک - به سیستم ایمنی در حال تجزیه و تحلیل اضافه می شود. اگر مکمل توسط سیستم ایمنی ثابت شده باشد، همولیز رخ نمی دهد (RSC مثبت؛ شکل، a). اگر سیستم ایمنی مکمل را ثابت نکند و اجزای آن با یکدیگر مطابقت نداشته باشند، همولیز رخ می دهد (RSC منفی؛ شکل، b). مواد تشکیل دهنده واکنش: 1) موضوع آزمایش، با حرارت دادن به مدت 30 دقیقه غیرفعال می شود. در دمای 56 درجه؛ 2) آنتی ژن (تعلیق باکتری ها، عصاره اندام ها و بافت ها)؛ 3) مکمل (سرم خوکچه هندی تازه)؛ 4) سیستم همولیتیک (گوسفند حساس شده با سرم همولیتیک به مدت 30 دقیقه در دمای 37 درجه انکوبه شده است). برای رقیق کردن مواد، از محلول ایزوتونیک کلرید سدیم استفاده کنید. مرحله اول RSC 60 دقیقه طول می کشد. در دمای 37 درجه یا 18-20 ساعت. در دمای 4-6 درجه (RSC حساس تر)، مرحله دوم - 60 دقیقه. در درجه 37 درجه

طرح واکنش تثبیت مکمل: الف - مثبت. ب - منفی. 1 - مکمل؛ 2 - سرم بیمار; 3 - سرم سالم 4 - آنتی ژن; 5 - سرم همولیتیک; 6- گلبول های قرمز گوسفند.

واکنش Bordet-Giang یک واکنش ایمونولوژیک مبتنی بر خاصیت کمپلکس آنتی ژن-آنتی بادی برای تثبیت مکمل آزاد است. RSC در 2 فاز رخ می دهد: 1) جذب آنتی بادی ها روی آنتی ژن ها، 2) بیان واکنش (باکتریولیز یا همولیز)، که نیاز به حضور مکمل دارد. وابستگی واکنش های باکتریولیتیک به حضور مکمل، شناسایی تعامل آنتی بادی ها با آنتی ژن ها در واکنش Bordet-Zhangu را ممکن می سازد. یک شاخص انطباق آنتی بادی ها در این واکنش تثبیت مکمل توسط سیستم ایمنی مربوطه است که با افزودن یک سیستم همولیتیک "شاخص" به مخلوط واکنش تشخیص داده می شود.

واکنش Bordet-Giangou در دو مرحله انجام می شود: ابتدا آنتی ژن ها و آنتی بادی های مورد مطالعه در شرایطی قرار می گیرند که برهمکنش آنها را در حضور مکمل تضمین می کند و پس از تکمیل جذب، سیستم همولیتیک (همولیزین + گلبول های قرمز) اضافه می شود. به سیستم ایمنی تجزیه و تحلیل شده هنگامی که آنتی ژن ها و آنتی بادی ها مطابقت دارند، برهمکنش آنها رخ می دهد و مکمل موجود در مخلوط واکنش دهنده توسط سیستم ایمنی ثابت می شود. در این مورد، هنگام اضافه کردن یک سیستم نشانگر، همولیز به دلیل عدم وجود مکمل رخ نمی دهد (واکنش مثبت است). اگر آنتی بادی های تجزیه و تحلیل شده روی آنتی ژن ها جذب نشوند، مکمل در مخلوط واکنش آزاد می ماند و هنگامی که یک سیستم همولیتیک اضافه می شود، همولیز رخ می دهد (واکنش منفی).

RSC معمولی که در آن 100% لیز گلبول های قرمز ثبت می شود، نیاز به تیتراسیون اولیه مکمل دارد. دومی با دوز بیش از مقدار مورد نیاز برای واکنش همولیتیک به سیستم ایمنی اضافه می شود. طرح های تنظیم یک واکنش با هدف آن تعیین می شود. در تجربه ممکن است تجربه کنند دوزهای مختلفآنتی ژن با محتوای ثابت سرم و مکمل، رقت های مختلف سرم در دوزهای ثابت آنتی ژن و مکمل و غیره. در 56 درجه به منظور غیرفعال کردن مکمل موجود در آن؛ 2) آنتی ژن ها (که از سوسپانسیون باکتری ها، پروتئین های استخراج شده از آنها، پلی ساکاریدها و غیره استفاده می کنند)، عصاره های سلول های گیاهی و حیوانی، ویروس ها و غیره، 3) مکمل - سرم تازه خوکچه هندی، 4) سیستم همولیتیک (گوسفند حساس شده). گلبول های قرمز) - 5% سوسپانسیون گلبول های قرمز در تماس با سرم همولیتیک به مدت 30 دقیقه. در درجه 37 درجه

برای رقیق کردن مواد، از محلول فیزیولوژیکی NaCl استفاده کنید. ضد مکمل بودن اجزای جداگانه در نمونه های کنترل آزمایش می شود. مرحله اول واکنش (جذب آنتی بادی) در دمای 37 درجه به مدت 60 دقیقه انجام می شود. یا در دمای 4-6 درجه به مدت 18-20 ساعت. (RSK در سرما). در حالت دوم، تثبیت کامل‌تر مکمل اتفاق می‌افتد که حساسیت روش را افزایش می‌دهد. در مرحله دوم، مخلوط های واکنش در دمای 37 درجه نگهداری می شوند. نتیجه در لحظه همولیز 100% در نمونه های شاهد ثبت می شود.

در عمل تشخیصی، از روش‌های فعال و غیرمستقیم واکنش تثبیت مکمل استفاده می‌شود که اصلاحات واکنش Bordet-Giangou است. در اولین مورد، نشانگر واکنش تغییر در محتوای مکمل در سرم آزمایش است. مورد دوم مبتنی بر این واقعیت است که برای برخی از بیماری‌ها، سرم‌ها حاوی آنتی‌بادی‌های تثبیت‌کننده مکمل نیستند، اما می‌توانند از واکنش‌هایی با سرم‌هایی که فعالیت تثبیت‌کننده مکمل دارند، جلوگیری کنند.

بیشترین حساسیت و دقت ذاتی در RSC کمی است که همولیز را در ناحیه لیز جزئی ثبت می کند. حساسیت این اصلاح واکنش Bordet-Giangou به این دلیل است که در ناحیه میانی لیز (20-80%) نسبت مقدار مکمل به تعداد گلبول های قرمز لیز شده خطی است. این واکنش بر اساس روش خاصی از تیتراسیون مکمل است که مقدار آن بر حسب 50% واحد (C H50) بیان می شود و بر اساس معادله کروگ محاسبه می شود که نشان دهنده پیشرفت همولیز در ناحیه لیز جزئی است. با توجه به معادله، جایی که ایکس- مقدار مکمل گرفته شده، yدرجه همولیز به صورت کسری از یک بیان می شود، k دز مکملی است که 50% لیز می دهد و 1/n درجه شیب منحنی همولیتیک را بیان می کند.

درجه همولیز با استفاده از اسپکتروفتومتر یا فوتوالکترورنگ سنج تعیین می شود.